Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Anwendung der Akumotomie in einem Kniearthrosemodell bei Kaninchen

2.3K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/65584

⸱

20. Oktober 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, 2Acupuncture and Moxibustion Department, Beijing Hospital of Traditional Chinese Medicine affiliated with Capital Medical University, 3The Third Affiliated Hospital of Beijing University of Chinese Medicine

In diesem Artikel

Zusammenfassung

In diesem Protokoll wurde ein Kniearthrosemodell mit der modifizierten Videman-Methode erstellt, und die Operationsverfahren und Vorsichtsmaßnahmen der Akupotomie werden detailliert beschrieben. Die Wirksamkeit der Akupotomie wurde durch Tests der mechanischen Eigenschaften von Quadrizeps femoris und Sehne sowie der mechanischen und morphologischen Eigenschaften des Knorpels nachgewiesen.

Zusammenfassung

Kniearthrose (KOA) ist eine der am häufigsten auftretenden Erkrankungen in der orthopädischen Abteilung, die die Lebensqualität von Menschen mit KOA stark beeinträchtigt. Unter mehreren pathogenen Faktoren ist das biomechanische Ungleichgewicht des Kniegelenks eine der Hauptursachen für KOA. Die Akupotomologie glaubt, dass die Wiederherstellung des mechanischen Gleichgewichts des Kniegelenks der Schlüssel zur Behandlung von KOA ist. Klinische Studien haben gezeigt, dass die Akupotomie Schmerzen wirksam lindern und die Beweglichkeit des Knies verbessern kann, indem sie die Adhäsion, die Kontraktur von Weichteilen und die Belastungskonzentrationspunkte in Muskeln und Sehnen um das Kniegelenk reduziert.

In diesem Protokoll verwendeten wir die modifizierte Videman-Methode, um ein KOA-Modell zu erstellen, indem wir die linke Hintergliedmaße in einer geraden Position immobilisierten. Wir haben die Operationsmethode und die Vorsichtsmaßnahmen im Zusammenhang mit der Akupotomie im Detail skizziert und die Wirksamkeit der Akupotomie in Verbindung mit der Theorie der "Modulation von Muskeln und Sehnen zur Behandlung von Knochenerkrankungen" durch die Erkennung der mechanischen Eigenschaften von Quadrizeps femoris und Sehne sowie der Knorpelmechanik und -morphologie bewertet. Die Ergebnisse zeigen, dass die Akupotomie eine schützende Wirkung auf den Knorpel hat, indem sie die mechanischen Eigenschaften der Weichteile um das Kniegelenk herum anpasst, die Knorpelbelastungsumgebung verbessert und die Knorpeldegeneration verzögert.

Einleitung

Kniearthrose (KOA) ist die häufigste Form der Arthrose, die oft als Ganzgelenkserkrankung anerkannt wird, die durch Gelenkknorpeldegeneration gekennzeichnet ist, die sich klinisch als Schmerzen, Schwellungen und Bewegungseinschränkungen der betroffenen Gelenke manifestiert1. Jüngsten epidemiologischen Statistiken zufolge sind bis 2020 weltweit 654,1 Millionen Menschen von KOA betroffen, die 40 Jahre oder älter waren. Die Prävalenz und Inzidenz von KOA steigt mit dem Alter, ist bei Erwachsenen mittleren Alters und älteren Erwachsenen am höchsten und betrifft mehr Frauen als Männer2. Die Prävalenz von KOA wird wahrscheinlich aufgrund der alternden Bevölkerung und der weltweiten Adipositas-Epidemie zunehmen und eine wachsende Bedrohung für die globale öffentliche Gesundheit darstellen. Alter, Geschlecht, Fettleibigkeit, Trauma und andere komplizierte Risikofaktoren im Zusammenhang mit KOA wirken sich direkt auf die Knieinstabilität aus und machen ein biomechanisches Ungleichgewicht in den Kniegelenken zu einer der Hauptursachen für KOA3.

Unter normalen physiologischen Bedingungen befindet sich das Kniegelenk in einem Zustand des mechanischen Gleichgewichts, wodurch sichergestellt wird, dass die mechanischen Belastungen im Gelenk gleichmäßig auf den Knorpel verteilt werden. Jedes mechanische Ungleichgewicht im Kniegelenk kann zu einer abnormalen Belastung des Knorpels führen, was zu einer Knorpeldegeneration und dem Auftreten von KOA4 führt. Das Muskel-Sehnen-System ist das wichtigste dynamische System, das das mechanische Gleichgewicht des Kniegelenks aufrechterhält. Durch die koordinierte Bewegung des Streck- und Beugemuskel-Sehnen-Systems kann die durch die Bewegung erzeugte Last gleichmäßig auf die Knorpeloberfläche verteilt werden, wodurch das metabolische Ungleichgewicht lokaler Knorpelbelastungen über die physiologische Belastung hinaus vermieden wird, was zu Knorpelverlust führt5. Verminderte Muskelkraft ist die Hauptursache für intramuskuläre Bewegungsstörungen und Knorpelschäden, die vor symptomatischem KOA auftreten können.

KOA kann auch eine arthrogene Muskelhemmung (AMI) induzieren, die sich als Muskelschwäche und verminderte Muskelkraft um das Knie manifestiert6. Unter diesen Muskeln fungiert die Quadrizeps-femoris-Gruppe als einziger Kniestrecker, eine wichtige Struktur für die Aufrechterhaltung der Kniegelenkstabilität. Studien haben gezeigt, dass eine Abnahme der Querschnittsfläche des Quadrizeps und der Muskelkraft signifikant und positiv mit der KOA-Progression korreliert7. Der Rückgang der Quadrizepskraft wirkt sich auf das Gangbild, die Kniestabilität, die Bewegungsmuster und viele andere Funktionen aus. Darüber hinaus beeinträchtigt der Rückgang der Muskelkraft die Sehnenfunktion, was sich in einer Abnahme der Sehnensteifigkeit, des Elastizitätsmoduls und anderer biomechanischer Eigenschaften äußert8. Bei der langfristigen Belastungsreparatur können Veränderungen wie Adhäsion und Kontraktur in den Muskeln und Sehnen des Kniegelenks auftreten, die ihre mechanischen Eigenschaften beschädigen, Gelenkinstabilität verursachen und letztendlich einen Teufelskreis pathologischer Veränderungen von KOA bilden. Daher ist es für die KOA-Behandlung von entscheidender Bedeutung, die mechanischen Eigenschaften des Muskel-Sehnen-Systems zu verbessern und das mechanische Gleichgewicht der Gelenke wiederherzustellen.

Unter den Ursachen von KOA ist ein biomechanisches Ungleichgewicht der Hauptinduktionsfaktor für Knieschmerzen, Funktionsstörungen, entzündliche Läsionen und Knorpeldegeneration9. Daher liegt der Schlüssel zur Behandlung von KOA in der Wiederherstellung des biomechanischen Gleichgewichts des Kniegelenks. Die Akupotomologie glaubt, dass die Ätiologie und Pathogenese von KOA ein "mechanisches Ungleichgewicht" sind. Wenn sich die mechanischen Eigenschaften der Weichteile um das Knie herum abnormal ändern, verliert das Kniegelenk sein mechanisches Gleichgewicht, und die abnormale mechanische Belastungsumgebung des Gelenks beschleunigt die Degeneration, was zu einer entzündlichen Stimulation führt, die die Weichteiladhäsionen, Kontrakturen und eine weitere Verschlechterung der Gelenkstabilität weiter verschlimmert. Dieser Teufelskreis entwickelt sich schließlich zu KOA. Durch die Lockerung von Weichteiladhäsionen und Kontrakturen sowie die Verringerung der Stresskonzentration in den Muskeln und Sehnen verbessert die Akupotomie in Verbindung mit der Theorie der "Modulation von Muskeln und Sehnen zur Behandlung von Knochenerkrankungen" die Weichteilmechanik und "moduliert Muskeln und Sehnen", wodurch die mechanische Belastung des Gelenks ausgeglichen wird, die Knorpeldegeneration wirksam gelindert und "Knochenerkrankungen behandelt werden"10. In Bezug auf die Auswahl des Tiermodells haben wir das KOA-Modell basierend auf dem Zweck dieser Studie mit der modifizierten Videman-Methode der Immobilisierung der linken Hintergliedmaße hergestellt.

In diesem Artikel wird die Etablierung des KOA-Modells unter Verwendung der modifizierten Videman-Methode zur Verlängerung der linken Hintergliedmaße, der Immobilisierung und der Operationsmethode und der Vorsichtsmaßnahmen der Akupotomie beschrieben. Wir demonstrieren die Wirksamkeit der Akupotomie, indem wir die mechanischen Eigenschaften von Quadrizeps femoris und Sehne testen und Veränderungen der Gelenkknorpelbelastung und -morphologie erkennen.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

Alle Tierversuche wurden von der Tierethikkommission der Beijing University of Chinese Medicine (Nr. BUCM-4-2022010101-1097). In diesem Protokoll wurden 24 6 Wochen alte männliche neuseeländische Kaninchen unter einer bestimmten Bedingung untergebracht, nämlich 20-25 °C, 50-60 % Luftfeuchtigkeit und einem 12-stündigen hellen/12 Stunden dunklen zirkadianen Zyklus mit freiem Zugang zu einer normalen Futternahrung. Die Kaninchen wurden betäubt und durch eine Kombination aus Tiefenanästhesie und Luftembolisation geopfert. Schmerzen sind eines der typischen pathologischen Merkmale von KOA und auch einer der Schlüsselindikatoren, die zur Bewertung von Tiermodellen von KOA und Interventionsmethoden verwendet werden, so dass Analgetika bei der Modellvorbereitung nicht verwendet werden.

1. Das KOA-Kaninchenmodell

  1. Betäuben Sie Kaninchen mit 3% Pentobarbital-Natrium (30 mg/kg) intravenös am Ohrrand. Um das angemessene Anästhesieniveau zu bestätigen, achten Sie auf einen deutlich geschwächten oder fehlenden Hornhautreflex und das Fehlen von Schmerzen beim Einklemmen der Haut mit einer hämostatischen Pinzette. Geben Sie während der Narkose alle 15 Minuten 2-3 Tropfen Gleitmittel auf die Augen der Kaninchen, um ein Austrocknen der Augen der Kaninchen zu verhindern.
  2. Fixieren Sie nach der Anästhesie jedes Kaninchen in Rückenlage und ziehen Sie die linke Hintergliedmaße in eine vollständig ausgestreckte Position.
  3. Fixieren Sie die linke Hintergliedmaße jedes Kaninchens in der ausgestreckten Position.
    1. Verwenden Sie als erste Schicht medizinisches Klebeband, um die Haut des Kaninchens von der Leiste bis zum Sprunggelenk abzudecken.
    2. Als zweite Schicht wickeln Sie 36 mm breites, doppelseitiges Schaumstoffband über das medizinische Klebeband und wickeln Sie dann einen Polymerverband von der Leiste bis zum Sprunggelenk. Achten Sie darauf, dass das Kniegelenk um 180° gerade und das Sprunggelenk um 60° dorsalflexiert ist.
    3. Als dritte Schicht die Gelenke mit kleinen Schienen an der Vorder- und Rückseite der Knie- und Knöchelgelenke immobilisieren und Stahlgitter um die äußerste Schicht wickeln, um sie vor Bissen zu schützen. Legen Sie die Zehen der Kaninchen frei, um zu beobachten, ob die Durchblutung normal ist.
  4. Immobilisieren Sie die Tiere für 6 Wochen, um das KOA-Modell zu etablieren (Abbildung 1).
    HINWEIS: 1) Überprüfen Sie während der Modellvorbereitung die Formen jeden zweiten Tag. Wenn Schimmelpilze locker oder abgelöst sind, betäuben Sie die Kaninchen und immobilisieren Sie die linken Hinterbeine in einer ausgestreckten Position wieder. 2) Legen Sie Schutzmatten auf den Boden der Käfige, um zu verhindern, dass die Gliedmaßen der Kaninchen stecken bleiben und Verletzungen verursachen.

2. Akototomie-Eingriff

HINWEIS: Betäuben Sie die Kaninchen vor Beginn der Akupotomie-Intervention mit 3% Pentobarbital-Natrium (30 mg/kg) durch intravenöse Injektion am Ohrrand.

  1. Bestimmen Sie die Behandlungspunkte.
    1. Rasieren Sie das Fell des Kniegelenks der linken Hintergliedmaße des Kaninchens ab.
    2. Berühren Sie den Ansatz der medialen Femurmuskelsehne des Kaninchenkniegelenks, des Ansatzes der geraden Femursehne, des Bizeps femoris-Sehnenansatzes und des Gänsefußschleimbeutels. Markieren Sie pathologische Verhärtungen lokaler Muskeln mit einem sterilen Hautmarker. Desinfizieren Sie das Kniegelenk dreimal abwechselnd mit medizinischem Jodophor und 75% medizinischem Alkohol.
  2. Operation der Akupotomie
    1. Halten Sie die Akupotomieklinge parallel zur Fahrtrichtung parallel zur Sehne und zur Längsachse der Extremität.
    2. Drücken Sie mit dem Daumen der linken Hand auf die Haut, die in den Markierungspunkt eintritt, und bewegen Sie sich seitlich, so dass Blutgefäße und Nerven auf der ventralen Seite des Daumens getrennt sind.
    3. Drücken Sie mit dem Akupotomiegriff in der rechten Hand mit einer kleinen Kraft schnell nach unten, damit die Akupotomieklinge sofort durch die Haut dringt. Schieben Sie die Akupotomieklinge langsam zu den lokalen Muskelverhärtungen vor und machen Sie Längsschnitte und seitliche Schwingungen.
    4. Nach Abschluss der Akupotomie-Operation das Kniegelenk erneut desinfizieren und ein Pflaster anbringen.
  3. Führen Sie diesen Vorgang 4 Wochen lang einmal pro Woche durch (Abbildung 2).
    HINWEIS: 1) Wenn am Sehnenansatz des Vastus medialis, des Vastus lateralis, des Rectus femoris, des Bizeps femoris oder des Anserinschleimbeutels keine Verhärtung oder schnurartiges Gewebe berührt wird, sollte die Akupotomienadel verwendet werden, um die Sehnenansätze direkt zu lösen. 2) Immobilisieren Sie während der Akupotomie-Intervention nicht die linken Hintergliedmaßen von Kaninchen in der Akupotomiegruppe und der Modellgruppe in Streckposition.

3. Elastizitätsmodul des Quadrizeps femoris

HINWEIS: 1) In diesem Experiment wurde das Echtzeit-Scherwellen-Elastographie-Ultraschalldiagnoseinstrument (SWE) verwendet, um den Elastizitätsmodul des Quadrizeps femoris in vivo in jeder Gruppe von Kaninchen zu messen. 2) Der Tester sollte ein erfahrener Sonograph in der Ultraschalldetektion sein. Bei der Messung sollte die Ultraschallsonde sanft auf die Hautoberfläche des Quadrizeps gelegt werden, um lokale Muskelverspannungen zu vermeiden. Die Messungen müssen durchgeführt werden, wenn sich das Tier in einem ruhigen Zustand befindet, ohne zu kämpfen oder zu handeln. Wenn das Tier aktiv ist, warten Sie, bis es ruhig ist, bevor Sie den Test durchführen.

  1. Rasieren Sie das Fell, um die Haut im Quadrizepsbereich der linken Hintergliedmaße freizulegen.
  2. Verwenden Sie herkömmlichen zweidimensionalen Ultraschall, um den Quadrizeps-Muskel-Abdomen zu lokalisieren und die Region of Interest (ROI) zu bestimmen, die auf eine Tiefe von 1-2 cm eingestellt ist.
  3. Starten Sie den SWE-Modus für die Inspektion.
    1. Stellen Sie den interessierenden Bereich gleichmäßig auf einen kreisförmigen Bereich mit einem Durchmesser von 2 mm und den interessierenden Bereich auf ~0,5-1 cm tief von der Hautoberfläche ein.
    2. Verwenden Sie das Ultraschall-Diagnosegerät, um einen akustischen Strahlungskraftimpuls zu erzeugen, um das Muskelgewebe zu stimulieren und eine Gewebe-Elastographie zu erhalten.
    3. Warten Sie 2-3 s, bis sich das Bild stabilisiert hat, und frieren Sie das Bild dann ein. Aktivieren Sie die Q-BOX-Funktion des Instruments, um den Elastizitätsmodul des Quadrizepsmuskels zu messen.
    4. Warten Sie, bis das System automatisch die Maximal-, Minimal- und Durchschnittswerte (Einheit: KPa) des Elastizitätsmoduls des ROI berechnet. Wählen Sie drei ROIs in der gleichen Tiefe für drei Messungen aus und nehmen Sie den Durchschnittswert für die statistische Analyse.
      HINWEIS: Der Tester sollte ein erfahrener Sonograph in der Ultraschalldetektion sein. Bei der Messung sollte die Ultraschallsonde sanft auf die Hautoberfläche des Quadrizeps gelegt werden, um lokale Muskelverspannungen zu vermeiden. Die Messungen müssen durchgeführt werden, wenn sich das Tier in einem ruhigen Zustand befindet, ohne zu kämpfen oder zu handeln. Wenn das Tier aktiv ist, warten Sie, bis es ruhig ist, bevor Sie den Test durchführen.

4. Messung der Kontraktionskraft des Quadrizeps femoris

HINWEIS: Nach der Messung der Kontraktionskraft des Quadrizeps femoris wurden die Kaninchen durch Luftembolie unter Narkose eingeschläfert.

  1. Betäuben Sie die Kaninchen mit 3% Pentobarbital-Natrium (30 mg/kg) intravenös am Ohrrand. Um zu bestätigen, dass das angemessene Anästhesieniveau erreicht wurde, achten Sie auf einen deutlich geschwächten oder fehlenden Hornhautreflex und das Fehlen von Schmerzen beim Einklemmen der Haut mit einer hämostatischen Pinzette. Geben Sie während der Narkose alle 15 Minuten 2-3 Tropfen Gleitmittel auf die Augen der Kaninchen, um ein Austrocknen der Augen der Kaninchen zu verhindern.
  2. Legen Sie die Quadrizepsmuskeln frei und befestigen Sie den Zugwandler.
    1. Schneiden Sie die Haut unterhalb der Patella entlang der Längsachse der Extremität nach oben bis zum Oberschenkelansatz und schneiden Sie die Haut weiter um 3-4 cm nach oben. Ziehen Sie die Haut und die Faszien vorsichtig ab und legen Sie den Muskel frei. Durchtrennen Sie das Patellaband und trennen Sie den Quadrizeps vorsichtig vom Beckenübergang, wobei der Quadrizeps in Verbindung mit dem Iliacium bleibt.
    2. Lizieren Sie die chirurgischen Nähte am Sehnenübergang zwischen Patella und Quadrizepsmuskel. Dehnen Sie den Muskel in seinem natürlichen Zustand auf seine volle Länge und befestigen Sie ihn dann am Zugwandler. Halten Sie die Ligaturlinie am Muskel in einer geraden Linie mit der Ligaturlinie auf dem Kraftaufnehmer.
    3. Befestigen Sie den Zugaufnehmer an der Halterung. Verbinden Sie die Signalerfassungsleitung am Zugaufnehmer mit dem Prozessor des Biosignalerfassungssystems.
  3. Messen Sie die kontraktile Leistung des Quadrizepsmuskels.
    1. Führen Sie die Elektroden parallel zum Quadrizeps-Bauch ein und vermeiden Sie jeglichen Kontakt zwischen den Elektroden.
    2. Drücken Sie die Oszilloskoptaste. Passen Sie die Position des Kraftaufnehmers an der Halterung an, um die Basislinie auf Null zu halten. Wählen Sie die Stimulationsparameter des Stimulators mit einer Wellenbreite von 5 ms und einer Verzögerung von 10 ms.
    3. Verwenden Sie zuerst einen einzelnen Stimulus und passen Sie die Stimulusintensität schrittweise von Null an jedes Mal mit einem Schritt von 0,1 V an. Beobachten Sie die Veränderungen der Muskelkontraktionskurve und der Kontraktionsamplitude, bis die maximale Einzelkontraktionsamplitude (Pt) des Quadrizeps bestimmt ist. Notieren Sie es für nachfolgende Statistiken.
    4. Verwenden Sie einen Cluster-Stimulus und verwenden Sie die Stimulusamplitude, die die maximale einzelne Kontraktionsamplitude induziert, als Basislinie, um den Muskel kontinuierlich zu stimulieren und die Stimulusfrequenz allmählich zu erhöhen. Beobachten Sie die Veränderungen in der Muskelkontraktionskurve, bis die maximale Kontraktionsamplitude (Pt) des Quadrizeps bestimmt ist. Notieren Sie es für nachfolgende Statistiken.
      HINWEIS: 1) Nach jeder Muskelkontraktion sollte dem Muskel 30 s Zeit gegeben werden, um sich zu entspannen, wobei die Muskelpufferlösung kontinuierlich auf den Muskel getropft wird. 2) Beurteilen Sie während der Operation den Anästhesiestatus, indem Sie den Augenlidreflex, den Atemrhythmus, die Muskelentspannung und die Reaktion des Einklemmens der Haut überwachen.

5. Die mechanische Leistung der Quadrizepssehne

  1. Vorverarbeitung: Messen Sie am Tag der Prüfung die Länge, Breite und Dicke der Quadrizepssehne mit einem Messschieber und installieren Sie eine spezielle Anti-Rutsch-Klemme in der Ermüdungsprüfmaschine. Wiederholen Sie das Be- und Entladen 15x zur Vorverarbeitung.
  2. Spannungsrelaxationstest: Verwenden Sie den Sensor im Bereich von 0 N bis 100 N, dehnen Sie ihn mit einer Geschwindigkeit von 5 mm/min , bis er die erforderliche Länge erreicht hat, und beginnen Sie dann mit der Datenerfassung. Stellen Sie die Computerdatenerfassungszeit von t (0) ein und sammeln Sie alle 0,1 s Daten, die 1.800 s dauern. Nach Erreichen der eingestellten Zeit Daten und Kurven aufzeichnen.
  3. Zugversuch: Verwenden Sie den Sensor im Bereich von 0 N bis 100 N und dehnen Sie ihn mit einer Geschwindigkeit von 5 mm/min bis zur maximalen Belastung, bis die Probe auseinandergezogen wird. Berechnen Sie nach der Prüfung die maximale Verschiebung, die Endlast und die Steifigkeit der Probe.

6. Gelenkkontaktflächendruck und Flächendruck des Knorpels

  1. Befestigen Sie die Femur- und Tibiaproben beidseitig in gerader Position auf der Vorrichtung und führen Sie einen Vorspannungstest durch. Messen Sie den ungefähren Bereich des Kniegelenks, schneiden Sie das druckempfindliche Papier in die gleiche Form und verschließen Sie es mit Plastikfolie.
  2. Legen Sie das versiegelte druckempfindliche Papier zwischen Tibia- und Femurgelenk und führen Sie eine Druckprüfung am Kniegelenk mit einem Druck von 5 mm/min und einem maximalen Druck von 50 N durch. Halten Sie den Druck 2 Minuten lang aufrecht, bis er 50 N erreicht, wenn das druckempfindliche Papier stabil gefärbt ist.
  3. Entfernen Sie nach 2 Minuten das druckempfindliche Papier, fixieren Sie die farbige Oberfläche auf einem A4-Blatt und nehmen Sie Bilder mit beiseite gelegtem Maßstab auf.
  4. Laden Sie das Bild auf den Computer hoch. Verwenden Sie die referenzierte Software für die Flächenmessung und die Mehrsegmentmessung für unregelmäßige Zahlen. Messen Sie den Druck auf die Innen- und Außenseite der Gelenke von Femur und Tibia und notieren Sie die Ergebnisse.

7. Safranin O/Fast Green Verfärbung des Kniegelenkknorpels

  1. Nehmen Sie nach dem Ende des Akupotomie-Eingriffs das Knorpel-subchondrale Knochenkomplexgewebe und betten Sie es in Paraffin ein. Schneiden Sie die vorbereiteten Gewebewachsblöcke in Scheiben und bereiten Sie Objektträger vor. Entparaffinisieren Sie die vorbereiteten Gewebeobjektträger jeweils 15 Minuten lang mit einer Entparaffinierungslösung (I) und einer Entparaffinierungslösung (II). Tauchen Sie sie dann nacheinander in Xylol und wasserfreies Ethanol (1:1), wasserfreies Ethanol (I), 95% Ethanol, 85% Ethanol und 75% Ethanol, 2-5 Minuten pro Schritt; und zum Schluss 15 Minuten in destilliertem Wasser einweichen.
  2. Führen Sie eine Färbung durch.
    1. Färben Sie die Objektträger 1 Minute lang mit Fast Green-Lösung. Nehmen Sie dabei die Objektträger aus der Lösung und beobachten Sie sie unter dem Mikroskop, bis das Gewebe dunkelgrün gefärbt ist.
    2. Farbtrennung: Spülen Sie die überschüssige Fast Green-Lösung mit Reinstwasser ab. Weichen Sie die Objektträger 5 - 10 Sekunden lang schnell in 1%iger Essigsäurelösung ein.  Spülen Sie den Objektträger erneut mit Reinstwasser ab.
    3. Färben Sie die Objektträger 10-15 Minuten lang in Safranine O-Lösung, bis der Knorpel rot gefärbt ist.
  3. Dehydrieren und klären Sie das Gewebe, versiegeln Sie die Objektträger und betrachten Sie sie unter dem Mikroskop.
    1. Weichen Sie die Objektträger nacheinander 3 - 5 Sekunden lang in 75 % Ethanol, 85 % Ethanol, 95 % Ethanol und 100 % Ethanol ein.
    2. Tauchen Sie die Objektträger nacheinander 10 Minuten lang in Umweltentparaffinierungslösung (I) und Umweltentparaffinierungslösung (II). Nehmen Sie die Objektträger heraus und lassen Sie das neutrale harzige Medium auf die Vorderseite der Objektträger fallen, wobei Sie das Gewebe aussparen. Legen Sie den Rand des Deckglases auf den Objektträger und legen Sie ihn dann langsam ab, um den neutralen Balsam zu bedecken. Entfernen Sie die Luft und vermeiden Sie Luftblasen. Wischen Sie das zusätzliche Xylol und den neutralen Balsam ab und lassen Sie es über Nacht bei Raumtemperatur stehen.
    3. Betrachten Sie die Objektträger unter dem Mikroskop und nehmen Sie Bilder auf. Wählen Sie für jede Gruppe sechs Proben von Kaninchenknieknorpel aus und wählen Sie nach dem Zufallsprinzip vier verschiedene Betrachtungsfelder für jede Probe zur Auswertung aus. Bewerten Sie die Knorpelhistologie jeder Gruppe nach der Mankin-Methode (Tabelle 1).

8. Statistische Auswertung

  1. Expressdaten als Mittelwert ± Standardabweichung (figure-protocol-1 ± s).
  2. Führen Sie eine Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) und einen LSD-Test durch, um die statistische Signifikanz mehrerer Gruppenvergleiche zu bestimmen.
  3. Betrachten Sie Unterschiede als statistisch signifikant, wenn P 0,05 <.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Experimentelle Ergebnisse der mechanischen Eigenschaften von Quadrizeps femoris und Sehne
Um die Wirkung der Akupotomologie auf die mechanischen Eigenschaften des Quadrizeps femoris bei Kaninchen mit KOA zu bewerten, verwendeten wir eine elastische Echtzeit-Scherwellen-Ultraschallbildgebung bzw. einen Muskelspannungswandler. Im Vergleich zur Kontrollgruppe war der Elastizitätsmodul des Quadrizeps femoris in der KOA-Gruppe verringert (P < 0,05). Im Vergleich zur KOA-Gruppe war der Elastizit...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

Ein geeignetes Tiermodell ist einer der Schlüsselfaktoren, um experimentelle Ziele zu erreichen und eine bestimmte wissenschaftliche Fragestellung zu klären. Diese Studie basierte auf den Theorien "Zongjin kontrolliert Knochen und schmiert Gelenke" und "mechanisches Ungleichgewicht" in der Akupotomologie und zielte darauf ab, die wissenschaftliche Konnotation hinter der Behandlung von KOA durch "Modulation von Muskeln und Sehnen zur Behandlung von Knochenerkrankungen" in der Akupotomietherapie zu erklären. Mit anderen Wo...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China unterstützt (Nr. 82074523,82104996).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
AkukotomieBeijing Zhuoyue Huayou Medical Devices Co., Ltd.0,4 x 40 mm
Connect Cast Orthopädisches GipsbandSuzhou Connect Medical Technology Co., Ltd.KCP0615,0 cm x 360 cm
Doppelseitiges SchaumstoffbandDeli Group Co.,Ltd.Nr.3041636 mm x 5 Yard x 2,5 mm
UmweltentparaffinierungslösungWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1128
Ethanol absolutBeijing Hengkangda Medizin Co., Ltd.
Schnelle grüne LösungWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1031
Fast grenn FCFSigma, America2353-45-9
ErmüdungsprüfmaschineBOSE, AmericaBose Electro Force 3300
Vierkanal physiologischer RekorderChengdu Instrumeny FrctoryRM-6420
FPD-305EFuji, Japan
FPD-306EFuji, Japan
Hämatoxylin-LösungWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1005
Medizinisches Iodophor-DesinfektionsmittelShan Dong Lircon Medical Technology Co., Ltd.
Medizinisches KlebebandShandong Rongjian Sanitärprodukte Co., Ltd.2004021,5 x 500 cm
Muskelspannungswandler Chengdu Instrumeny FrctoryJH-2204005, 50 g
PrescaleFuji, Japan
Echtzeit-SWE-Ultraschall-DiagnoseinstrumentSuperSonic Imagine SA, FrankreichSuperSonic Imagine AixPlorer
Rhamsan KaugummiWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.
Safranin OSigma, Amerika477-73-6
Safranin O LösungWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1015
Statistical Package for the Social Sciences (SPSS)IBM, Amerika
Verifizierter Lieferant - WG10004160

Referenzen

  1. Roseti, L., Desando, G., Cavallo, C., Petretta, M., Grigolo, B. Articular cartilage regeneration in osteoarthritis. Cells. 8 (11), 1305(2019).
  2. Cui, A. Y., et al. Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies. EClinicalMedicine. 29-30, 100587(2020).
  3. Miyauchi, A., et al. Alleviation of murine osteoarthritis by deletion of the focal adhesion mechanosensitive adapter, Hic-5. Sci Rep. 9 (1), 15770(2019).
  4. Wright, T. Biomechanical factors in osteoarthritis: the effects of joint instability. HSS J. 8 (1), 15-17 (2012).
  5. Patsika, G., Kellis, E., Kofotolis, N., Salonikidis, K., Amiridis, I. G. Synergetic and antagonist muscle strength and activity in women with knee osteoarthritis. J Geriatr Phys Ther. 37 (1), 17-23 (2014).
  6. Blalock, D., Miller, A., Tilley, M., Wang, J. X. Joint instability and osteoarthritis. Clin Med Insights. Arthritis and Musculoskelet Disord. 8, 15-23 (2015).
  7. Henriksen, M., Christensen, R., Danneskiold-Samsøe, B., Bliddal, H. Changes in lower extremity muscle mass and muscle strength after weight loss in obese patients with knee osteoarthritis: a prospective cohort study. Arthritis Rheum. 64 (2), 438-442 (2012).
  8. Schwartz, A. G., Lipner, J. H., Pasteris, J. D., Genin, G. M., Thomopoulos, S. Muscle loading is necessary for the formation of a functional tendon enthesis. Bone. 55 (1), 44-51 (2013).
  9. Felson, D. T. Osteoarthritis as a disease of mechanics. Osteoarthr Cartil. 21 (1), 10-15 (2013).
  10. Ma, S. N., et al. Effect of acupotomy on FAK-PI3K signaling pathways in KOA rabbit articular cartilages. Evid Based Complement Alternat Med. 2017, 4535326(2017).
  11. Yu, P., et al. Research progress of experimental animal models of knee osteoarthritis. China Medical Herald. 16 (27), 41-44 (2019).
  12. Li, L. H., et al. Research progress of rabbit knee osteoarthritis model. Journal of Jiangxi University of Chinese Medicine. 31 (4), 108-113 (2019).
  13. Zhang, W., Gao, Y., Guo, C. Q., Khattab, I. Z. A., Mokhtari, F. Effect of acupotomy versus electroacupuncture on ethology and morphology in a rabbit model of knee osteoarthritis. J Tradit Chin Med. 39 (2), 229-236 (2019).
  14. An, X. Y., et al. Chondroprotective effects of combination therapy of acupotomy and human adipose mesenchymal stem cells in knee osteoarthritis rabbits via the GSK3 beta-cyclin D1-CDK4/CDK6 signaling pathway. Aging Dis. 11 (5), 1116-1132 (2020).
  15. Guo, C. Q., Liu, N. G. Analysis on the distribution features of Ashi points in Jingjin disorders. Journal of Basic Chinese Medicine. 17 (8), 899-900 (2011).
  16. Guo, C. Q., et al. Effects of acupotomy therapy on tenderness point around knee joint in patients with knee osteoarthritis: a randomized controlled clinical trial. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 33 (3), 3-5 (2010).
  17. Zhao, Y., Dong, F. H., Zhang, K. Analysis of soft tissues mechanical changes and treatment of meridian tendon pain. Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine. (9), 705-707 (2008).
  18. Zhang, L. P., Cheng, F., Liu, D. Y., Zhu, L. G. Application progress of biomechanics in knee osteoarthritis. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 34 (7), 1644-1647 (2016).
  19. Thomas, A. C., Sowers, M., Karvonen-Gutierrez, C., Palmieri-Smith, R. M. Lack of quadriceps dysfunction in women with early knee osteoarthritis. J Orthop Res. 28 (5), 595-599 (2010).
  20. Li, L., et al. Effects of unloaded muscle atrophy on contractile characteristics of hind-limb skeletal muscles in mice. Space Med Med Eng. 25 (5), 322-325 (2012).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Acupotomie-BehandlungKaninchen-KOA-Modellbiomechanische EigenschaftenKnorpelschutzMusculus quadriceps femorisSehnenmechanikKnorpelhistologieMuskelkontraktionGewebefärbung
Anwendung der Akumotomie in einem Kniearthrosemodell bei Kaninchen
Kontaktieren Sie uns
Der Bibliothek empfehlen

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Urheberrecht © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.