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Alle Verfahren, die in dieser Studie an den Ratten durchgeführt wurden, entsprachen dem National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018), der offiziell von der Volksrepublik China verabschiedet wurde, und dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren von National Academies Press15. Dieses Protokoll besteht aus drei Hauptschritten. Zum einen werden die Rattenjacken auf die individuellen Körperformen von Ratten mit unterschiedlichem Gewicht zugeschnitten und angepasst. Als nächstes wird die Akupunkturmanipulation nach Standardverfahren durchgeführt. Schließlich werden die Ratten in ihren Jacken aufgehängt, während die Nadeln an Ort und Stelle bleiben, um der Notwendigkeit gleichzeitiger Eingriffe zwischen Ratten innerhalb derselben Gruppe gerecht zu werden.
1. Vorbereitung auf die Vernadelung
- Herstellung der Rattenjacke
- Wiegen Sie die Ratten und messen Sie ihre Körperform, bevor Sie ihre Jacken herstellen. Um die Eignung dieses Protokolls für Ratten mit unterschiedlichem Gewicht zu überprüfen, wählen Sie Ratten mit einem Gewicht von 220 g, 300 g, 400 g und 520 g für unabhängige Messungen ihrer Körpermaße aus, die Messungen von a bis f umfassen, wie in Abbildung 2 dargestellt.
HINWEIS: Die Korrelation zwischen den Körperproportionen von Ratten und ihren entsprechenden Mantelgrößen ist ebenfalls in Abbildung 2 dargestellt. Die relevanten Körperlängenparameter für Ratten unterschiedlichen Gewichts sind in Tabelle 1 aufgeführt.
- Schneide ein rechteckiges Stück dicken, dunklen Stoffes zu, um eine Rattenjacke zu machen. Verwenden Sie den Stoff mit einer ungefalteten Breite, die dem Umfang entspricht, der um die dickste Stelle des Hinterleibs der Ratte gemessen wird. Die Länge des Gewebes entspricht dem Abstand von der Nasenspitze der Ratte bis zum Schwanzansatz (siehe Abbildung 2).
- Falten Sie den Stoff in der Mitte und schneiden Sie die obere linke Ecke in einem Winkel von ca. 45°-65° ab, um ein rechtes Trapez zu bilden (siehe Abbildung 3A).
- Die beiden Seiten links mit Baumwollgarn festnähen. Eine Anleitung finden Sie in Abbildung 1B und Abbildung 3B .
- Schneiden Sie zwei kleine Löcher, eines auf jeder Seite des Stoffes, durch die die oberen und unteren Gliedmaßen der Ratte führen können (siehe Abbildung 3C). Der Abstand zwischen den beiden oberen Gliedmaßen bestimmt den Abstand zwischen den oberen Löchern des Rattenmantels. Der Abstand zwischen den beiden unteren Gliedmaßen bestimmt den Abstand zwischen den unteren Löchern des Rattenmantels.
- Verwenden Sie den Längsabstand zwischen der Achselhöhle der Ratte und der Vorderseite des Darmbeins als Abstand zwischen den oberen und unteren Löchern des Rattenmantels. Verwenden Sie den Umfang des Schultergelenks, um den Umfang des oberen Lochs in der Rattenjacke zu bestimmen. Verwenden Sie den Umfang des Hüftgelenks für den Umfang des unteren Lochs in der Rattenjacke.
- Nähen Sie neben jedem Loch einen langen Stoffriemen, der gekreuzt und vom zu öffnenden Ende der Jacke aus fest um den Körper gewickelt werden kann, um die Ratte zu fixieren.
- Methode zum Tragen von Rattenjacken
- Trage Handschuhe, bevor du der Ratte die Jacke anziehst. Beginne, indem du den mittleren und hinteren Teil der Rattenjacke mit einer Hand auf dem Tisch festhältst. Halten Sie mit der anderen Hand den Schwanz der Ratte aus dem Futterkäfig und legen Sie ihn vorsichtig in die Jacke.
- Wenn sich die Ratte vorwärts bewegt, erreicht ihr Kopf die Kopfbedeckung der Jacke. An dieser Stelle ziehst du mit beiden Händen vorsichtig die linken und rechten oberen Gliedmaßen aus den Löchern in der Jacke.
- Nimm das Bindeseil vom Ende der Jacke, kreuze es von links nach rechts und wickle es sicher um den Rumpf der Ratte. Binden Sie es fest auf der gegenüberliegenden Seite des Stammes, um eine ordnungsgemäße Fixierung zu gewährleisten. Nachdem Sie die oberen Gliedmaßen der Ratte gefesselt haben, wiederholen Sie den gleichen Vorgang, um die unteren Gliedmaßen zu fixieren.
- Treffen Sie Vorsichtsmaßnahmen, um zu vermeiden, dass Sie von den Krallen der Ratte gebissen oder gekratzt werden, wenn Sie ihre Gliedmaßen aus den Jackenlöchern ziehen. Stellen Sie sicher, dass die Straffheit des Seils entsprechend eingestellt ist, d. h. nicht zu eng, um bei Ratten eine lokale Ischämie und Hypoxie der Gliedmaßen zu verursachen, und nicht zu locker, damit die Ratte leicht entkommen kann (siehe Video 1).
- Befestigungsgestell und S-förmige Eisenhaken
- Das Fixiergestell besteht aus zwei schweren Eisenschalen (24 cm lang, 12 cm breit und 2 cm hoch) und einer Eisensäule (60 cm lang), die auf jedem Tablett fest verschweißt ist. Befestigen Sie einen massiven Eisenstab (145 cm Länge) auf gleicher Höhe an den beiden Eisensäulen mit einer verschraubbaren Verbindungsstruktur, die sich verstellen und auf einer festen Höhe halten lässt (siehe Abbildung 4A).
- Um die Ratte, die die Jacke trägt, mit dem Eisenstab zu verbinden, verwenden Sie die S-förmigen Haken (11 cm Durchmesser). Wickeln Sie ein Ende des Hakens um den Riemen der Jacke, während das andere Ende an den Eisenstab gehängt wird. Verwende zwei S-förmige Haken, um die Ratte am Stock zu befestigen. Die Gesamtstruktur entnehmen Sie bitte Abbildung 1D und Abbildung 4B .

Abbildung 2: Entsprechendes Diagramm der Körperform der Ratte und der angepassten Größe des Rattenmantels. Im Diagramm stellt der Parameter a den Querabstand an der Rückseite des Gelenks zwischen den oberen Gliedmaßen und dem Rumpf der Ratte dar. Dieser Wert wird als Abstandsmaß zwischen den Eindringlöchern für die oberen Gliedmaßen des Rattenmantels verwendet. In ähnlicher Weise stellt Parameter b den Querabstand auf dem Rücken dar, an dem die bilateralen unteren Gliedmaßen der Ratte mit dem Rumpf verbunden sind. Diese Messung bestimmt den Abstand der Eindringlöcher für die unteren Gliedmaßen des Rattenmantels. Der Parameter c bezeichnet den Umfang des dicksten Teils des Hinterleibs der Ratte, der als Breitenmaß für den Stoff der Rattenjacke verwendet werden kann. Der Parameter d stellt den Abstand von der Achselhöhle der Ratte zur Vorderseite ihres Darmbeins dar und bestimmt den Längsabstand zwischen den oberen und unteren Löchern des Mantels. Der Parameter e entspricht dem Längsabstand von der Nasenspitze der Ratte bis zum Schwanzansatz und dient als Längenmaß für das Manteltuch der Ratte. Der Parameter f bezeichnet den Umfang des Gelenks, das die obere Extremität mit dem Rumpf der Ratte verbindet, und dient als Umfang des Lochs, durch das die oberen Gliedmaßen verlaufen. Der Parameter g stellt den Umfang des Gelenks dar, das die unteren Gliedmaßen mit dem Rumpf der Ratte verbindet, und bestimmt den Umfang des Lochs, durch das die unteren Gliedmaßen verlaufen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
| Körpergewicht (g) | Parameter der Körperform (cm) |
| ein | b | c | d | e | f | g |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabelle 1. Die Messergebnisse von Körperformparametern von Ratten mit unterschiedlichem Körpergewicht.

Abbildung 3: Diagramm zur Darstellung des physischen Erscheinungsbildes und der Verwendung des Rattenmantels. (A) Ebene: Außenansicht des Rattenmantels. Die Form des Mantels der Ratte ähnelt einem rechtwinkligen Trapez, mit separaten Öffnungen auf der linken und rechten Seite, durch die die oberen und unteren Gliedmaßen der Ratte hindurchgehen können. (B) Ungefaltete Außenansicht des Rattenmantels. Durch den Verschluss der Kopfbedeckung entsteht ein halbgeschlossener Hohlraum, der als entscheidende Komponente dient, um Ratten zum Eindringen zu verleiten. (C) Seitenansicht einer Ratte, die mit der Jacke bekleidet ist. Sobald die Gliedmaßen der Ratte durch die Öffnungen in der Kleidung gehen, werden die Gurte über die Bauchfläche des Rumpfes gekreuzt und am Rücken mit entsprechender Spannung sicher befestigt. Dadurch wird sichergestellt, dass die Ratte relativ bewegungsunfähig ist. (D) Bauchansicht einer Ratte, die mit der Rattenjacke bekleidet ist. Die ventrale Oberfläche des Mantels legt die Bauchhaut der Ratte frei, was einen bequemen Zugang für die Akupunktur an ventralen Punkten ermöglicht. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Video 1: Anziehen der Rattenjacke. Dieses Video zeigt einen typischen Prozess, bei dem die Ratte in die Jacke gekleidet wird. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.

Abbildung 4: Diagramm zur Darstellung des physischen Erscheinungsbildes und der Verwendung des erhöhten Befestigungsgestells (A) Erhöhtes Befestigungsgestell. Dieses Gestell besteht im Wesentlichen aus zwei vertikalen Eisensäulen (60 cm lang), die an jedes Tablett geschweißt sind, sowie einem langen horizontalen Eisenstab (145 cm lang), der parallel zum Boden platziert ist. Schrauben werden verwendet, um den horizontalen Stab auf der gleichen Höhe wie die vertikalen Säulen zu befestigen. (B) Rattenaufhängung auf dem Fixiergestell. Ratten, die die Rattenjacken tragen, werden mit zwei S-förmigen Haken pro Ratte sicher am Fixierungsgestell befestigt. (C) Gleichzeitige Elektroakupunkturbehandlung bei mehreren Ratten. Um mögliche Interferenzen durch Schwanzbewegungen zu vermeiden, war es notwendig, einen angemessenen Abstand zwischen den Ratten einzuhalten, der der Länge des Schwanzes einer Ratte entspricht. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
2. Elektroakupunktur-Verfahren
- Routinemäßige Vorbereitung
- Platzieren Sie das Befestigungsgestell auf einem horizontalen Schreibtisch oder Boden.
- Entfernen Sie vor dem Needling-Verfahren das Fell um die Akupunkturpunkte herum mit einem elektrischen Rasierer, um eine vollständige Belichtung zu gewährleisten. Wenn sich der zu punktierende Akupunkturpunkt am Bauch der Ratte befindet, wie z. B. Guanyuan (CV4, ca. 25 mm unterhalb des Bauchnabels), kürzen Sie die Breite der Rattenkleidung entsprechend, um die abdominalen Akupunkturpunkte freizulegen.
- Lokalisieren Sie den Akupunkturpunkt aus der Lücke auf der Mittellinie des Abdomens, die nicht durch den Rattenmantel bedeckt ist (siehe Abbildung 3D), und injizieren Sie dann die Nadel.
- Wenn sich die zu punktierenden Akupunkturpunkte auf dem Kopf der Ratte befinden, wie z. B. Baihui (GV20, befindet sich in der Mitte des Scheitelknochens), machen Sie einen kleinen Schnitt an der entsprechenden Position am Kopf, um die Haut um GV20 herum vollständig freizulegen (siehe Abbildung 1C).
- Bei der Akupunktur von Akupunkturpunkten an den Gliedmaßen von Ratten, wie z.B. Neiguan (PC6, auf der Innenseite der Vordergliedmaße, zwischen der radialen und ulnaren Naht ca. 3 mm vom Handgelenk entfernt) in der oberen Extremität oder Zusanli (ST36, auf der posterolateralen Seite des Kniegelenks, ca. 2 mm unterhalb des Wadenbeinkopfes) in der unteren Extremität, Aufgrund der offensichtlichen Freilegung der Akupunkturpunkte verwenden Sie eine Hand, um die Gliedmaße zu fixieren, während die andere die Akupunkturoperation direkt durchführen kann.
- Wenn sich der Akupunkturpunkt auf dem Rücken oder der Taille einer Ratte befindet, wie z. B. Shenshu (BL23, unterhalb des 2. Lendenwirbels, 6 mm von der Mittellinie des Rückens entfernt), schneiden Sie eine etwa 2 cm breite Öffnung in die Mitte des Mantels der Ratte, um die Haut der entsprechenden Stelle vollständig freizulegen (siehe Abbildung 1C).
- Ziehe der Ratte die Jacke an. Nachdem Sie die lokale Haut von Akupunkturpunkten mit Alkoholtupfern desinfiziert haben, beginnen Sie mit dem Akupunkturverfahren.
- Nadeltechnik: Lokalisieren Sie den Akupunkturpunkt genau. Führen Sie eine sterile Einweg-Akupunkturnadel (0,16 mm x 7 mm) in der entsprechenden Tiefe in den Akupunkturpunkt der Ratte ein.
- Elektroakupunktur-Operation
- Wickeln Sie den Elektrodendraht um die horizontale Eisenstange. Dieser Schritt verringert das Risiko, dass die Nadel aufgrund der auf den Elektroakupunkturclip einwirkenden Schwerkraft herausfällt. Befestigen Sie dann das Ende des Elektrodendrahtes sicher am Nadelgriff.
- Schalten Sie die Stromversorgung ein und wählen Sie die entsprechenden Frequenz-, Strom- und Zeitparameter. In diesem Experiment wurden die Parameter auf 2 Hz, 1 mA und 15 min eingestellt. Sobald die Parameter eingestellt sind, beginnen Sie mit der Elektroakupunkturbehandlung (siehe Video 2 und Video 3).
- Simultane Elektroakupunktur bei Ratten: Während der Behandlung hängen Sie die Ratten in der gleichen Gruppe zusammen mit den S-förmigen Haken am Eisenstab auf und lassen Sie sie gleichzeitig einer Elektroakupunkturintervention unterziehen.
- HINWEIS: Der Eisenstab sollte nicht nur stabil, sondern auch lang genug sein, um eine Gruppe von Ratten gleichzeitig zu behandeln. In diesem Experiment können 3-4 Ratten gleichzeitig behandelt werden, wobei ein angemessener Abstand und keine Interferenzen zwischen den Ratten gewährleistet sind (siehe Abbildung 4C).
- Beobachtung der Reaktionen von Ratten während der Elektroakupunkturbehandlung: Bewerten Sie die Eignung dieser Fixierungsmethode für die Elektroakupunktur bei Ratten auf der Grundlage der folgenden Faktoren, wie z. B. der Anzahl des Personals, das für die Durchführung der Operation erforderlich ist, der Zeit, die für die Fixierung einer Ratte benötigt wird, der Reaktion der Ratten während der Elektroakupunkturbehandlung, der Anzahl der während des Eingriffs fallengelassenen Nadeln und etwaigen versehentlichen Todesfällen, die während der Operation auftreten können.
- Entfernung der Nadeln
- Sobald die voreingestellte Zeit abgelaufen ist, schaltet sich das Elektroakupunkturgerät automatisch ab. Entfernen Sie den kleinen Clip, der mit dem Nadelgriff verbunden ist, und entfernen Sie die Akupunkturnadel vorsichtig unter der Haut der Ratte, um den Prozess der Elektroakupunkturbehandlung abzuschließen.
- Lockern Sie die Gurte, heben Sie die Kopfbedeckung der Rattenjacke an und positionieren Sie die Ratte über dem Käfig. Die Ratte kann sich dann frei aus der Jacke lösen und selbstständig in den Käfig gelangen (siehe Video 4).
Video 2. Nadelung von Akupunkturpunkten im Lendenwirbelbereich. Dieses Video zeigt das umfassende und kohärente Verfahren, das das Einziehen der Ratte in die Jacke, das Einführen von Akupunkturnadeln in Akupunkturpunkte an der Taille und den anschließenden Anschluss eines Elektroakupunkturgeräts umfasst. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.
Video 3. Nadelpunkturpunkte im Bauch und in der unteren Extremität. Dieses Video zeigt das umfassende und kohärente Verfahren, das das Einziehen der Ratte in die Jacke, das Einführen von Akupunkturnadeln in Akupunkturpunkte im Bauch und in der unteren Extremität und den anschließenden Anschluss eines Elektroakupunkturgeräts umfasst. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.
Video 4. Entfernen des Rattenmantels. Dieses Video zeigt die übliche Praxis, der Ratte die Jacke abzunehmen. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.