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Methodenartikel

Verbesserung der Entwicklung und des Wachstums von Ratten mit Zerebralparese bei Säuglingen durch selektive Manipulationen der Wirbelsäule

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DOI:

10.3791/65659

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2. Februar 2024

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1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Diese Studie veranschaulicht die Wirkung selektiver Wirbelsäulenmanipulation auf das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese, wobei das spezifische Verfahren und das standardisierte Protokoll hervorgehoben werden. Zur Bewertung des Protokolls wurden Körpergewichtsmessungen, Rotarod-Test, Fußfehler-Score, andere Verhaltenstests und Wachstumshormonnachweise durchgeführt.

Zusammenfassung

Zerebralparese (CP) ist eine refraktäre pädiatrische Erkrankung mit einer hohen Prävalenz, einer hohen Behinderungsrate und einer schwierigen Behandlung. Bei CP wird derzeit eine Vielzahl von Behandlungen eingesetzt. Die Behandlung umfasst eine medikamentöse und nicht-medikamentöse Therapie. In der Traditionellen Chinesischen Medizin ist die externe Therapie eine sehr ausgeprägte Behandlungsmethode in der nicht-medikamentösen Therapie. Als eine der äußeren Therapien der traditionellen chinesischen Medizin wird die Massage bei der Behandlung von Zerebralparese eingesetzt und hat eine gute Wirksamkeit, geringe Nebenwirkungen und eine starke Operabilität. Als Teil der externen TCM-Therapie kann die selektive Manipulation der Wirbelsäule das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese effektiv fördern. Die Operation gliederte sich im Wesentlichen in vier Schritte: Zuerst wurde die Reibemethode für 1 min auf die Wirbelsäule und beide Seiten der Wirbelsäule angewendet. Die Press- und Knetmethode wurde 5 Minuten lang auf die Wirbelsäule und 5 Minuten auf die Muskeln auf beiden Seiten der Wirbelsäule angewendet. Zweitens wurde ein 2-minütiges Drücken und Kneten der empfindlichen lokalen Akupunkturpunkte in der Wirbelsäule durchgeführt. Drittens wurde die betroffene Extremität 1 Minute lang mit der Methode des Verdrehens behandelt. Viertens wurde die Reibemethode 1 Minute lang auf eine Mittellinie von der Stirn bis zum hinteren Teil des Gehirns angewendet. Diese Studie zielte darauf ab, selektive Wirbelsäulenmanipulation zur Behandlung von Säuglingsratten mit Zerebralparese einzusetzen. Das Gewicht, der Rotarod-Test, der Fußfehler-Score und das Wachstumshormon von Säuglingsratten mit Zerebralparese wurden ermittelt, um die Wirkung selektiver Wirbelsäulenmanipulation auf das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese zu verstehen. Die Ergebnisse zeigten, dass es die Gewichtszunahme fördern, die Gleichgewichtsfähigkeit und die motorische Funktion verbessern, das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese fördern, die Sekretion von Wachstumshormonen fördern und die Temperatur empfindlicher Teile des Rückens erhöhen kann.

Einleitung

Zerebralparese (CP), die durch eine nicht fortschreitende Schädigung des Gehirns beim Fötus oder im Säuglingsalter verursacht wird, ist eine Gruppe von Störungen, die durch eine abnormale motorische und posturale Entwicklung1, Entwicklungsstörungen einschließlich langsamer Gewichtszunahme 2,3,4 und motorische Dysfunktion gekennzeichnet sind. Die Inzidenz von Zerebralparese in China beträgt 2,48 % bzw. die Prävalenz 2,46‰ (1-6 Jahre alt)5. Ausländische Studien berichteten von einer Prävalenz von 2,4 % bis 3,6 %6. Zerebralparese ist eine der Hauptursachen für körperliche Verletzungen und Behinderungen bei Kindern, unter denen Gleichgewichts- und Bewegungsstörungen die Aktivitäten des täglichen Lebens erheblich beeinträchtigen1. Zerebralparese kann durch Frühgeburten, Infektionen, Genetik, Ischämie und Hypoxie bei Neugeborenen, Neugeborenengelbsucht und andere komplexe und vielfältige pathogene Faktoren verursachtwerden 7. Das Ziel der Behandlung von Zerebralparese ist es, die körperliche Funktion und die Lebensqualität zu verbessern 8. Zu den Behandlungsmethoden der Zerebralparese gehören derzeit die tiefe Hirnstimulation9, das robotergestützte Gangtraining10, die Handgelenk- und Sprunggelenkakupunktur11 sowie die Meridianakupunktur in Kombination mit Massage12.

Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) wird zunehmend als wirksame Behandlung von CPeingesetzt 13,14. Auch die Massage als Teil davon spielt eine gewisse Rolle. Zum Beispiel kann die selektive Manipulation der Wirbelsäule den Zustand der DNA-Hydroxymethylierung regulieren, um die neuronale Entwicklung zu regulieren und die Lern- und Gedächtnisfunktion zu verbessern15. Bei der Behandlung von Säuglingsratten mit Zerebralparese kann die selektive Manipulation der Wirbelsäule die entzündliche Homöostase der Hirnrinde und des Hippocampus verbessern, indem sie das Methylierungsniveau der entzündlichen Zytokine TNF-α und IL-10-Genpromotorregion16 reguliert und eine positive therapeutische Rolle bei der Gleichgewichtsfähigkeit von Säuglingsratten mit Zerebralparesespielt 16. Selektive Manipulation der Wirbelsäule kann die kognitive Funktion von Rattenbabys mit Zerebralparese verbessern17. Die selektive Manipulation der Wirbelsäule wurde bei der Behandlung von Rattenbabys mit Zerebralparese eingesetzt, und es wurde beobachtet, dass sie auch therapeutische Auswirkungen auf ihr Wachstum und ihre Entwicklung hatte18.

Der Zweck dieser Studie besteht darin, die Wirkung selektiver Wirbelsäulenmanipulation auf das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese durch Messung des Körpergewichts, des Rotarod-Tests19, des Fußfehler-Scores 20,21 und anderer Verhaltenstests und des Nachweises von Wachstumshormonen zu veranschaulichen und Forschungsideen für das zuständige Personal bereitzustellen.

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Protokoll

Diese Studie wurde von der Ethikkommission für Versuchstiere der Yunnan University of Traditional Chinese Medicine genehmigt. Alle Versuchshandlungen an Tieren folgten dem 3R-Prinzip der Reduktion, Optimierung und Ersetzung von Versuchstieren (Nr. R-06202018). In diesem Experiment wurden gesunde Sprague Dawley (SD)-Ratten (14 Männchen und 7 Weibchen) mit dem Grad Spezifisch pathogenfrei (SPF) mit einem durchschnittlichen Körpergewicht von 250-300 g verwendet. Die Ratten wurden im SPF-Tierraum der Yunnan Universität für Traditionelle Chinesische Medizin aufgezogen, Zertifikatsnummer: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Alle Ratten wurden in einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus mit einer natürlichen, lichtgesteuerten Umgebung bei einer Raumtemperatur von 22-26 °C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 40%-50% untergebracht. Nach 1 Woche adaptiver Fütterung wurde das Verhältnis von Männchen zu Weibchen bei 1:2 gehalten. Nach 1 Woche wurden die trächtigen Ratten in einem einzigen Käfig untergebracht, normal gefüttert und fressen und tranken frei. Nach der natürlichen Entbindung wurden die gesunden Säuglingsratten ausgewählt, die von den trächtigen Ratten geboren wurden. Die Säuglingsratten wurden in die Schein-, Kontroll- und Behandlungsgruppen eingeteilt, um die Wirkung selektiver Wirbelsäulenmanipulation auf das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese zu beobachten. Aus jeder Gruppe wurden 6 männliche Welpen für das Experiment ausgewählt. Die Behandlungsgruppe wurde ab dem 5. Tag nach der Geburt mit selektiver Wirbelsäulenmanipulation behandelt, und die Behandlung wurde 6 Tage lang durchgeführt, gefolgt von einer 1-tägigen Ruhe.

1. Etablierung eines Zerebralparese-Modells

  1. Sterilisieren Sie das Mikroskop, die Augenschere, die Pinzette, das Nahtmaterial, die chirurgische Platte, die Schere, die Wattestäbchen und die Handschuhe, die für die Operation erforderlich sind, und stellen Sie sie in den Operationssaal.
  2. Trennen Sie einen Welpen am dritten Lebenstag vorübergehend von seiner Mutter, setzen Sie ihn in einen einzigen Rahmen und transportieren Sie ihn in den sterilen Operationssaal.
  3. Messen Sie das Körpergewicht. Nehmen Sie Säuglingsratten mit einem Körpergewicht von 7 bis 9 g in die Studie auf und schließen Sie Ratten aus, die nicht dem Körpergewicht entsprechen. Teilen Sie die Säuglingsratten nach dem Zufallsprinzip in Schein-, Kontroll- und Behandlungsgruppen ein.
  4. Induzieren Sie eine Anästhesie mit Isofluran in einer Konzentration von 2 % und halten Sie die Anästhesie bei 1 % mit einem Inhalationsgasanästhesiegerät für Kleintiere.
    HINWEIS: Dieses Experiment dient hauptsächlich dazu, die Auswirkungen selektiver Wirbelsäulenmanipulation auf das Wachstum und die Entwicklung von Säuglingsratten mit Zerebralparese zu beobachten. Die Anästhesie wurde in Übereinstimmung mit den allgemeinen Anforderungen während des Modellierungsprozesses durchgeführt, und eine zusätzliche Analgesie wird die Beobachtungsergebnisse beeinflussen.
    1. Schließen Sie das Kleintiergasanästhetikum an die Stromversorgung an und öffnen Sie das an die Induktionsbox angeschlossene Ventil.
    2. Legen Sie die Säuglingsratte in die Induktionsbox, drehen Sie den Einstellknopf für die Konzentration und stellen Sie die Konzentration von Isofluran auf 2% ein, um eine Anästhesie einzuleiten.
    3. Wenn das Rattenbaby bewusstlos ist, nehmen Sie es aus der Induktionsbox. Legen Sie es auf die Operationsplatte und schließen Sie Kanal 1 des Anästhesiegeräts.
    4. Legen Sie das Rattenbaby in Rückenlage. Fixieren Sie die Anästhesie-Inhalationsmaske, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten.
    5. Öffnen Sie den Kanal, der mit der Anästhesie-Inhalationsmaske verbunden ist. Halten Sie die Anästhesie aufrecht, indem Sie den Einstellknopf für die Konzentration drehen und die Konzentration von Isofluran auf 1% einstellen.
      HINWEIS: Beurteilen Sie nach der Anästhesie die Anästhesietiefe, indem Sie die Zehen und den Schwanz der Babyratten gewaltsam anheben und einklemmen. Ein Nicht-Ansprechen, wenn die Zehen und der Schwanz angehoben und eingeklemmt wurden, bestätigt, dass die Narkosetiefe erreicht ist.
  5. Desinfizieren Sie die Halshaut des Rattenbabys dreimal mit 75% Alkohol und schneiden Sie einen 1 cm langen Längsschnitt in die Halshaut, um das Unterhautgewebe freizulegen.
    HINWEIS: Ein Längsschnitt der Halshaut verursacht keine Hautdefekte.
  6. Schneiden Sie die Haut des linken Halses unter einem Präpariermikroskop und verwenden Sie eine Augenpinzette, um den M. sternohyoideus und den linken M. sternomastoideus stumpf zu trennen.
    1. Suchen Sie die linke Arteria carotis communis und den Nervus vagus, und trennen Sie die linke Arteria carotis communis und den Nervus vagus.
    2. In der Modellgruppe schnitt man die linke Arteria carotis communis mit einem elektrischen Gerinnungsstift ab. Reinigen und vernähen Sie den Halsschnitt.
    3. Trennen Sie in der Sham-Gruppe die linke Arteria carotis communis vom Nervus vagus.
  7. Legen Sie das Rattenbaby nach der Operation 1 h lang in Bauchlage zur Wiederbelebung in das thermostatische Wasserbad.
    HINWEIS: Nach der natürlichen Genesung war die Hautfarbe der Gliedmaßen und des ganzen Körpers rötlich. Das Rattenbaby konnte seine Gliedmaßen selbstständig bewegen und selbstständig krabbeln.
  8. Die wiederbelebten Ratten der Kontroll- und Behandlungsgruppe werden in einen geschlossenen Inkubator bei 37 °C in Bauchlage gelegt. Führen Sie ein Gemisch aus 5 % Sauerstoff und 95 % Stickstoffgas ein, um Hypoxie zu induzieren, und entfernen Sie die Ratten nach 2 Stunden.
  9. Nehmen Sie das Rattenbaby, das den Hypoxieprozess abgeschlossen hat, aus der Hypoxiebox und legen Sie es in Bauchlage in eine Box mit normalem Luftsauerstoffgehalt. Legen Sie sie für 1 h in ein thermostatisches Wasserbad bei 37 °C. Nach vollständiger Genesung bringen Sie das Rattenbaby zurück in den Käfig der Mutter.
    HINWEIS: Nach der natürlichen Genesung war die Hautfarbe der Gliedmaßen und des gesamten Körpers rot. Säuglinge der Ratte konnten ihre Gliedmaßen selbstständig bewegen und selbstständig krabbeln.
  10. Setzen Sie das Rattenbaby der Sham-Gruppe in eine Box mit normalem Luftsauerstoffgehalt und stellen Sie die Box für 1 h in ein thermostatisches Wasserbad bei 37 °C. Setzen Sie das Rattenbaby nach vollständiger Genesung zur Fütterung zurück in den Käfig der Mutter.
    HINWEIS: Nach der natürlichen Genesung war die Hautfarbe der Gliedmaßen und des gesamten Körpers rot. Säuglinge der Ratte konnten ihre Gliedmaßen selbstständig bewegen und selbstständig krabbeln. Der gesamte Operationsprozess wurde im speziellen Operationssaal des SPF-Tierzimmers der Yunnan Universität für Traditionelle Chinesische Medizin abgeschlossen. Während der Wiederbelebung und Hypoxie beobachtet der Bediener das Rattenbaby ständig, um einen Tod durch falsche Körperhaltung zu verhindern. Säugende weibliche Ratten wurden mit spezifisch pathogenfreiem (SPF) Zuchtfutter gefüttert, und wenn die Jungtiere in der Lage waren, sich selbst zu füttern, wurden die Jungtiere entwöhnt (nach der Geburt 21) und mit SPF-Erhaltungsfutter gefüttert.

2. Experiment mit dem Aufrichtreflex

  1. Führen Sie am 4. Tag nach der Geburt (am 2. Tag nach der Modellierung) das Aufrichtreflexexperiment durch, um zu überprüfen, ob das Modell erfolgreich war (Abbildung 1 und Tabelle 1).
    1. Hebe den Schwanz des Rattenbabys an, lege seinen Rücken auf ein horizontales Brett und befestige mit Daumen und Zeigefinger Bauch und Hals. Prüfen Sie, ob die Ratte in ihre normale Position zurückkehren kann. Die Unfähigkeit der Ratte, aufgrund des Verlusts des Aufrichtreflexes aus der abnormalen Position in die normale Position zurückzukehren, wird als erfolgreiches Modell aufgezeichnet 16,22.
    2. Notieren Sie die Zeit, die jede Gruppe von Welpen benötigt, um sich von der Rückenlage in die Bauchlage zu drehen. Beginnen Sie mit der Aufzeichnung der Zeit, in der Daumen und Zeigefinger gleichzeitig in Rückenlage losgelassen werden, lassen Sie das Rattenbaby in die Bauchlage drehen und stoppen Sie die Aufnahme, wenn die Vorder- und Hinterpfoten auf den Boden gelegt werden. Wenn die junge Ratte länger als 20 s nicht in die normale Position zurückkehren konnte, sollte die Aufrichtzeit mit 20 s aufgezeichnet werden.

3. Vorbereitung vor der Operation

  1. Trennen Sie nach dem Modellieren das Rattenbaby mit Zerebralparese von seiner Mutter und bringen Sie es für 2 Minuten in einen Operationssaal mit einer konstanten Raumtemperatur von 22-26 °C, um sich an die Umgebung anzupassen.
  2. Tragen Sie Einweghandschuhe, um die Handfläche mild und weich zu halten und die Temperatur zwischen 36-37 °C zu halten.
  3. Lege die Ratte vorsichtig in die Handfläche der linken Hand. Beugen Sie den linken Daumen, um die Augen der Ratte 2 Minuten lang zu bedecken, um ein dunkles Sichtfeld zu bilden, damit sich die Ratte an die Umgebung der Handfläche des Bedieners anpassen kann. Verwenden Sie den rechten Zeige- und Mittelfinger zur Manipulation.
    HINWEIS: Das Bedecken der Augen des Rattenbabys kann eine dunkle Umgebung schaffen. Dadurch wird verhindert, dass die junge Ratte aufgrund der unsicheren und unsicheren Umgebung, die die Versuchsergebnisse beeinflusst, unruhig wird.

4. Einteilung der Ratten in die Kontroll- und die Behandlungsgruppe

  1. Am zweiten Tag nach der Modellierung (P5) wird das Modell durch den Aufrichtreflextest überprüft und die Säuglingsratten nach dem Zufallsprinzip in die Kontroll- und Behandlungsgruppen eingeteilt. Führen Sie eine selektive Wirbelsäulenmanipulation an den Säuglingsratten der Behandlungsgruppe durch.
  2. Bringen Sie das Rattenbaby in Bauchlage. Achten Sie darauf, dass die Wirbelsäule immer auf einer geraden Höhe gehalten wird (Abbildung 2A).
  3. Massieren Sie die Wirbelsäule und beide Seiten der Wirbelsäule 1 Minute lang mit der Reibemethode und wenden Sie die Druck- und Knetmethode auf die Wirbelsäule und die Muskeln auf beiden Seiten der Wirbelsäule für 5 Minuten an.
    1. Massieren Sie die Wirbelsäule und die Haut auf beiden Seiten mit der Reibemethode, um das Rattenbaby zu entspannen und seine Verspannungen vollständig zu lösen. Stellen Sie sicher, dass die Häufigkeit des Reibens 1 Minute lang 100-120 Mal/min beträgt, nachdem das Rattenkind ruhig und ohne Bewegung ist.
      1. Verwenden Sie den rechten Zeigefinger, Mittelfinger und Ringfinger als Kontaktfläche und führen Sie eine kreisende Reibebewegung auf der Oberflächenhaut der Halswirbelsäule, der Brustwirbelsäule und der Lendenwirbelsäule vom Kopf bis zum Schwanz aus, ohne das Unterhautgewebe zu stören.
      2. Mit dem rechten Zeigefinger, dem Mittelfinger und dem Ringfinger als Kontaktflächen führen Sie kreisende Bewegungen auf der Hautoberfläche des Trapezmuskels, des oberflächlichen Gesäßmuskels, des zervikalen Rautenmuskels, des Brustrautenmuskels, des Musculus latissimus dorsi und des Musculus obliquus externus in der Reihenfolge vom Kopf bis zum Schwanz gemäß dem anatomischen Tierstandard23 aus, ohne das Unterhautgewebe zu stören.
    2. Behandeln Sie die Wirbelsäule zuerst mit Drücken und Kneten für 5 Minuten, gefolgt von Drücken und Kneten der Muskeln auf beiden Seiten der Wirbelsäule für 5 Minuten.
      1. Die Knetmethode mit einer Frequenz von 120 Mal/min für 5 min auf die Wirbelsäule anwenden. Verwenden Sie den rechten Zeige- oder Mittelfinger als Kontaktfläche. Führen Sie vom Kopf bis zum Schwanz ein kreisförmiges Kneten auf der Oberflächenhaut der Hals-, Brust- und Lendenwirbel durch, kombiniert mit einem Abwärtsdruck (1,77 ± 0,54 N). Stellen Sie sicher, dass die Kraft die Halswirbel, Brustwirbel, Lendenwirbel und supraspinösen Bänder erreicht.
      2. Wenden Sie die Press- und Knetmethode auf die Muskeln auf beiden Seiten der Wirbelsäule in einer Häufigkeit von 120 Mal/min für 5 Minuten an. Verwenden Sie den rechten Zeige- oder Mittelfinger als Auflagefläche. Gemäß der tieranatomischen Norm23 drücken Sie die Hautoberfläche des Trapezius, des oberflächlichen Gesäßes, des rhomboiden Halses, des rhomboiden Brustmuskels, des latissimus dorsi und der äußeren schrägen Bauchmuskeln in einer runden Knetbewegung vom Kopf bis zum Schwanz mit einer Kraft von 1,77 ± 0,54 N nach unten, so dass die Kraft den Trapezius, den oberflächlichen Gesäßmuskel, den rhomboiden Hals, den rhomboiden Brustmuskel erreicht. Latissimus dorsi und äußere schräge Bauchmuskeln (Abbildung 2B)23.
  4. Drücken und kneten Sie die empfindlichen Akupunkturpunkte der Wirbelsäule (wie Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu und Feishu24) mit einer Frequenz von 100-120 Mal/min für 2 Minuten. Führen Sie mit dem rechten Zeige- oder Mittelfinger als Kontaktfläche zirkuläres Kneten und Abwärtsdrücken (1,77 ± 0,54 N) auf der Oberflächenhaut von lokalen Akupunkturpunkten (wie Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu und Feishu) bei Rattenbabys mit Zerebralparese durch.
    HINWEIS: Die Akupunkturpunkte wurden gemäß der "Animal Acupuncture Point Map" ausgewählt, die von der Abteilung für experimentelle Akupunkturforschung der Chinesischen Akupunkturgesellschaft formuliert wurde (Abbildung 3)25.
  5. Stimulieren Sie die betroffene Extremität lokal mit der Twisting-Methode mit einer Häufigkeit von 25 Mal/min für 1 min.
    1. Kneifen Sie mit dem rechten Daumen und Zeigefinger die betroffene Gliedmaße des Rattenkindes mit Zerebralparese ein und üben dabei symmetrische Kraft auf die beiden Finger aus. Stellen Sie sicher, dass die Kraft sanft und die Wirkung leicht und sanft ist. Reiben Sie den rechten Extensor carpi radialis, den extensor digitorum common, den Extensor carpi ulnaris, die Phalanx, das Interphalangealgelenk, den Musculus gastrocnemius, den Musculus semitendinosus, den Metatarsalknochen und das Intermetatarsalgelenk der Säuglingsratte hin und her.
  6. Wenden Sie die Reibemethode auf die Mittellinie der Stirn bis zur Rückseite des Gehirns mit einer Frequenz von 100-120 Mal/min für 1 Minute an. Verwenden Sie den rechten Zeigefinger als Kontaktfläche und verwenden Sie die Reibemethode auf einer imaginären Linie von der Stirn bis zur Mitte des hinteren Gehirns des Rattenbabys (nämlich eine Linie von Baihui, Fengfu und Dazhui) (Abbildung 3).
    HINWEIS: Die Massage wird hauptsächlich auf die Haut aufgetragen. Es handelt sich um eine kreisende Bewegung auf der Hautoberfläche des Kopfes eines Rattenbabys mit Zerebralparese. Es muss nicht die subkutane Muskelbewegung eines Rattenkindes mit Zerebralparese antreiben.
  7. Lassen Sie die junge Ratte am Ende des Eingriffs 30 Minuten lang in Ruhe, bevor Sie sie in den Mutterkäfig der Ratte zurückbringen.
    HINWEIS: Mit zunehmendem Alter werden die Haare der Rattenbabys dick, so dass es notwendig ist, die Rückenhaare aller Gruppen von Rattenbabys während der Massageoperation zu entfernen, um eine Beeinträchtigung der experimentellen Wirkung zu vermeiden.

5. Erkennen der Temperatur der lokalen Akupunkturpunkte

  1. Verwenden Sie eine Infrarot-Wärmebildkamera, um die Temperatur des lokalen Akupunkturbereichs vor und nach der Operation zu erfassen.
    1. Verbinden Sie vor der selektiven Wirbelsäulenmassage die Typ-C-Schnittstelle des Mobiltelefons mit der USB-Schnittstelle des Infrarot-Bildgebungsgeräts über ein Datenkabel und schalten Sie die Ein-/Aus-Taste ein.
    2. Klicken Sie auf Analysieren , um das Mobiltelefon-Terminal der Software aufzurufen, wählen Sie Foto , um den Fotomodus aufzurufen, und klicken Sie auf Bild in Bildmodus in der unteren rechten Ecke.
    3. Fokussieren Sie die Kamera auf die Akupunkturpunkte der Akupunkturpunkte Dazhui, Xinshu und Shenshu (Abbildung 3) auf dem Rücken des Rattenbabys, um Temperaturaufnahmen zu machen. Klicken Sie auf Foto , um die Bildaufnahme abzuschließen und im JPG-Format zu speichern .
    4. Schließen Sie den Computer mit einem Datenkabel an und laden Sie das gespeicherte Bild zur Analyse auf einen Computer hoch, auf dem die Fotric-Software installiert ist.
      1. Öffnen Sie die Fotric-Software auf dem PC, öffnen Sie die lokale Datei und suchen Sie den Speicherort des Bildes.
      2. Wählen Sie den Thermogramm-Arbeitsbereich aus, wählen Sie das zu analysierende Bild aus und rufen Sie die Analyseoberfläche auf.
      3. Wählen Sie auf dem Bildschirm Analyse das Bild im Feld Wärmebild auf der rechten Seite aus und öffnen Sie das Schloss.
      4. Wählen Sie die Zoom-Funktion, passen Sie die Größe des Wärmebilds und des linken Felds Hintergrundbild an und deaktivieren Sie die Sperre auf der rechten Seite.
      5. Suchen Sie in der Symbolleiste oben das Messrechteck einstellen und markieren Sie den Akupunkturpunkt, der in der Abbildung erkannt werden soll.
      6. Klicken Sie rechts auf Bericht , um den Temperaturwert aufzuzeichnen.

6. Erkennung der motorischen Gleichgewichtsfunktion von Rattenbabys mit Zerebralparese

  1. Verwenden Sie den Verhaltens-Rotarod-Test19 , um die motorische Funktion von Ratten in den Gruppen Schein, Kontrolle und Behandlung am 61. Tag nach der Geburt zu ermitteln.
    1. Parametereinstellungen: Starten Sie den Netzschalter, wählen Sie Experiment durchführen , um den nächsten Schritt aufzurufen, wählen Sie Positiv, Ratten, Timing 5 min , um den nächsten Schritt aufzurufen, und wählen Sie Acc-Zeit: 10 s, Geschwindigkeit: 10 U/min.
    2. Platzieren Sie dann die Ratten auf der Laufbahn und beginnen Sie den Test, indem Sie auf Ausführen klicken, nachdem sie fest stehen. Passen Sie den Ausführungsstatus jedes Laufs auf EIN an. Trainieren Sie jede Ratte einmal 5 Minuten lang und beginnen Sie dann, den Test dreimal durchzuführen.
    3. Setzen Sie die jungen Ratten nach dem Training auf die Rotarod-Laufbahn. Wenn es stabil ist, klicken Sie auf Ausführen, und stellen Sie den Ausführungszustand auf EIN ein. Wählen Sie nach 5 Minuten Datum , um die Uhrzeit und die Geschwindigkeit jeder Ratte, die zum ersten Mal von der Rotarod-Laufbahn fällt, aufzuzeichnen, d. h. die Laufzeitdaten.
  2. Verwenden Sie den Fußfehlertest20,21, um die Gleichgewichtsmotorik der rechten Vordergliedmaße der Schein-, Kontroll- und Behandlungsgruppe am 61. Tag nach der Geburt zu bewerten.
    1. Platzieren Sie die Rattenbabys am Anfang der horizontalen Leiter und nehmen Sie ein Video auf, wie sie sie zum anderen Ende überqueren (100 cm lang, und der Abstand zwischen den einzelnen Leitern beträgt 2 cm). Führen Sie nach einer Trainingseinheit den formalen Test dreimal für jede Ratte im Abstand von 5 Minuten durch.
    2. Beobachten Sie das rechte Vorderglied, wenn das Tier die Leiter überquert, indem Sie die Wiedergabe mit niedriger Geschwindigkeit verwenden, um eine Punktzahl zu erzielen, wie in der Bewertungsnorm gezeigt (Tabelle 2).

7. Westliche Blotting

  1. Führen Sie eine Western-Blotting-Analyse der Gewebeproben durch, wie zuvor beschrieben26.
    HINWEIS: Die Lysatmenge wurde entsprechend der Größe des Gewebeblocks bestimmt. Die verwendeten Antikörper waren wie folgt: primärer Anti-Wachstumshormon-Antikörper (0,5 μg [0,5 ng/Bahn]); Anti-Wachstumshormon-Rezeptor-Antikörper (1/1000); interner Referenz-Anti-Beta-Aktin-Antikörper (1/2000) für Primärantikörper; Ziegen-Anti-KaninchenIgG H&L (HRP) (1/10000) für Sekundärantikörper.

8. Erkennen der Stärke der Hand

  1. Tragen Sie das Gerät, mit dem die Manipulationskraft an der Hand für die Massage erkannt wird. Stecken Sie den Finger, mit dem das Rattenbaby massiert wird, mit dem Sensorchip des Geräts an und schalten Sie die Ein-/Aus-Taste ein.
  2. Schließen Sie die Festplattenschnittstelle, auf der die Software für den manuellen Tester gespeichert ist, an den Computer an, und geben Sie die dedizierte IP-Adresse des manuellen Testers in das URL-Eingabefeld ein.
  3. Installieren Sie den SpringVR-Client auf dem Computer, klicken Sie, um die Sammlungsschnittstelle aufzurufen, und wählen Sie das Fingermuster in der unteren rechten Ecke aus, um die Manipulationskraft zu testen.
  4. Wählen Sie die Option Druck und klicken Sie auf Start , um die Aufzeichnung der manuellen Kraft des Bedieners während des Betriebs zu starten. Die Software zeichnet automatisch die Intensität der Manipulation auf und generiert eine Datentabelle auf der lokalen Festplatte, in der sich die Daten mit dem Dateinamen PressureSensor befinden.

9. Datenstatistik

HINWEIS: Für die statistische Analyse wurde die SPSS26.0-Software, für die Erstellung von Balkendiagrammen Graphpad Prism9.0.0 und für die Grauwertanalyse von Proteinbanden Image J verwendet.

  1. Analysieren und präsentieren Sie alle Daten als Mittelwert ± Standardabweichung (Mittelwert ± SD).
    HINWEIS: Der Prüfstandard war α = 0,05, und P ≤ 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen. Der Fisher-Test wurde verwendet, da die Daten durch Varianz- und Normalitätsanalyse analysiert wurden und den Normalverteilungsmerkmalen und der Varianzhomogenität entsprachen.

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Ergebnisse

Selektive Manipulation der Wirbelsäule kann die Körpergewichtszunahme bei Rattenbabys mit Zerebralparese fördern.
Während der Behandlung wurde das Körpergewicht an den postnatalen Tagen 3, 14, 28, 42 und 61 gemessen (Abbildung 4, Tabelle 3). Am dritten Tag nach der Geburt betrug das Körpergewicht der Sham-Gruppe 5,53 ± 0,035 g und das Körpergewicht der Kontrollgruppe 3,15 ± 0,43 g. Das Körpergewicht der Behandlungsgruppe betrug 4,42 ± 0,13 g und unterschi...

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Diskussion

Da Ischämie und Hypoxie wichtige pathogene Faktoren der Zerebralparese sind, wird die international anerkannte Methode zur Etablierung des Zerebralparese-Modells mit Hypoxie kombiniert, um das Zerebralparese-Modellherzustellen 16,28,29,30. Wenn sich eine Zerebralparese entwickelt, führt sie zu einer globalen Entwicklungsverzögerung, einschließlich Gewicht und m...

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine konkurrierenden finanziellen oder sonstigen Interessenkonflikte im Rahmen dieser Arbeit.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Allgemeine Programm der National Natural Science Foundation of China (82374614), das große biomedizinische Projekt der Abteilung für Wissenschaft und Technologie der Provinz Yunnan (202102AA100016), das gemeinsame große Projekt für angewandte Grundlagenforschung der Abteilung für Wissenschaft und Technologie der Provinz Yunnan -- Yunnan Universität für Traditionelle Chinesische Medizin (201901AI070004), Unterstützt durch das Schlüssellabor für Akupunktur, Moxibustion und Massage zur Vorbeugung und Behandlung von Enzephalopathie an Hochschulen und Universitäten der Provinz Yunnan (2019YGZ04), Abteilung für Wissenschaft und Technologie der Provinz Yunnan -- Jugendprojekt des Grundlagenforschungsprogramms der Provinz Yunnan (202101AU070002), Graduiertenprogramm des Wissenschaftsforschungsfonds des Bildungsministeriums der Provinz Yunnan (2023Y0433); Wissenschaftliche Forschungsstiftung des Bildungsministeriums der Provinz Yunnan, (2023Y0462).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
96-Well-PlattenBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Bestimmung der Proteinkonzentration
Anti-Beta-Aktin-AntikörperAbacmAb8227Verdünnung: 1/2000
Anti-Wachstumshormon-AntikörperAbacmAb1268820,5 &Mikro; g (0,5 ng/Lane)
Anti-Wachstumshormon-Rezeptor-AntikörperAbacmAb202964Verdünnung: 1/1000
Basis-OperationsmikroskopShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101Die Arteria carotis communis wurde während der Modellierung unter dem Mikroskop isoliert
BCA-EntwicklerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Bestimmung der Proteinkonzentration
Chemilumineszenz-BildgebungssystemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein-Banding-Bildgebung
Direct-Load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatische SchneeeismaschineHenan Brothers Instrument Equipment Co., LTDSHDX0023ECL-Lumineszenzsubstrat-Kit
für die EisherstellungBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BWandeln Sie latente Bilder in belichtetem Film in sichtbare Bilder um
Elektrisch beheiztes thermostatisches WasserbadTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIDie jungen Ratten wurden nach dem Modellieren wiederbelebt
Elektronische WaageKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002Das Körpergewicht der jungen Ratten wurde gemessen
Deutscher kleiner weißer elektrischer Gerinnungsstift HämostatHaohangL55&mal; W125&fach; H37Es wurde verwendet, um die linke Halsschlagader zu koagulieren
HandschuhJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LtdQ/320684 YZYL001-2017Für die Massageoperation
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Elektrophoretische Lösung, Konfigurieren Sie die Transferflüssigkeit
Ziege Anti-KaninchenIgG H& L (HRP) AbacmAb6721Verdünnung: 1/10000
Intelligente Labor-ReinstwassermaschineChongqing huachuag water treatment engineering co., Ltdn/aFiltration (15 L)
IsofluranShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. Ltd15198Die Anästhesie wurde durch Induktion bei jungen Ratten aufrechterhalten
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrarot-Bildanalysesoftware
Niedertemperatur-Hochgeschwindigkeits-GewebeschleifmaschineWuhan Servicebio Technology CO., LTDSKZ3F20200191Gewebeschleifen
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Konfigurieren Sie die Transferflüssigkeit
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Elektrophorese
Multiskan Spectrum Mikrotiterplatten-SpektralphotometerTECANSparkDie Absorption und Konzentration von Gewebeprotein wurden nachgewiesen
Druckempfindliche intelligente HandschuheJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveEs wird verwendet, um die manipulative Stärke des Bedieners zu messen
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KühlzentrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RZentrifuge
Forschung Drei-in-Eins-WärmebildkameraFOTIRC226S (384 x 288)Temperaturmessung
RIPA LysatBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytisches Gewebe
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Sechs-Ratten-Müdigkeits-Rotarod-GerätShanghai Duoyi Industry Co., Ltd DO01104RT703CP-Motorfunktion wurde nachgewiesen
MagermilchpulverGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Einschließende Flüssigkeit
SPF ZuchtfutterSPF (Beijing)biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285266Laktierende weibliche Ratten wurden mit
SPF-ErhaltungsfutterSPF (Beijing)biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285267Die Welpen wurden nach der Entwöhnung gefüttert
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ZS-MV Tragbares AnästhesiegerätZHONGSHI SCIENCE & TECHNOLOGIEZS-MV-IDie Anästhesie wurde bei Versuchstieren induziert und aufrechterhalten
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