Die Moxibustions-Versuchsplattform kann die Ratten ohne Einschränkung fixieren, und die Ratten können sich im wachen Zustand einer Multiakupunktur-Moxibustion unterziehen, um das Wohlergehen der Ratten zu gewährleisten, die Sicherheit der Bediener zu schützen, die therapeutische Wirksamkeit sicherzustellen und die Effizienz des Experiments zu verbessern.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Verwendung von durch Kräuterkuchen getrennter Moxibustion zur Behandlung von Ratten mit chronischer Niereninsuffizienz
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Während des Prozesses der Moxibustion in der klinischen Praxis müssen die Probanden in einer stabilen Stimmung und einer bequemen Haltung sein, um Probleme wie fallende Moxasche, verbrühte Haut und schlechte heilende Wirkung zu vermeiden. Solche Probleme gibt es auch im Moxibustionsexperiment der Ratte. Um die klinische Praxis zu simulieren, ist es notwendig, ein experimentelles Instrument in Tierversuchen einzuführen, dh eine Moxibustionsvorrichtung mit festen Ratten und Moxibustion-Behandlungssynchronisation, die experimentelle Ratten dazu bringen kann, eine Moxibustionsbehandlung ruhig und bequem unter Nichtanästhesie zu erhalten.
Unsere Forschungsgruppe hat eine experimentelle Plattform für die Moxibustion von Ratten entwickelt. Das Gerät wurde von einem Holzbrett mit einer tragenden Grundplatte, mehreren festen Komponenten und unterteilten Komponenten eingerahmt. Das Gerät kann die Funktionsweise der Moxibustion bei Ratten ohne Bindung erreichen, Anästhesie und Verbrühungen vermeiden und gleichzeitig mehrere Akupunkturpunkte auf dem Rücken freilegen. Durch diesen Vorgang können körperliche und geistige Verletzungen von Ratten und Bedienern vermieden werden, was die Forschungseffizienz verbessert und die Entwicklung und Erforschung von Moxibustions-Tierversuchen weiter fördert.
Das Gerät hat einen einfachen Aufbau, ist einfach zu bedienen und zu popularisieren, umfassend und innovativ gestaltet, wiederverwendbar und eignet sich für Rattenexperimente, die hauptsächlich auf Moxibustion basieren. Dieser Artikel stellt hauptsächlich die Struktur der experimentellen Plattformvorrichtung für die Moxibustion von Ratten vor, das grundlegende Verfahren der Kräuterkuchen-getrennten-Moxibustion bei Versuchsratten unter Verwendung des Geräts vor und beschreibt die Etablierung eines Rattenmodells für chronische Niereninsuffizienz (CRF) und repräsentative experimentelle Ergebnisse.
Einleitung
Moxibustion trat unter Anwendung von Feuer auf. Uralte Ärzte fanden zufällig heraus, dass einige Teile des feuerbrennenden Körpers die Symptome von Beschwerden lindern konnten. Nach längerer Praxis wurde nach und nach "Artemisiae Argyi Folium" als Hauptmoxibustionsmaterialausgewählt 1. Die Moxibustion ist einer der wichtigen Bestandteile der traditionellen chinesischen Medizin, und wenn man sie mit der Abkochung der traditionellen chinesischen Medizin und der Akupunktur-Akupunktur vergleicht, werden diese drei wichtigsten Therapien der traditionellen chinesischen Medizin bei vielen Krankheiten eingesetzt.
Chinesische Ärzte setzten Moxibustion oft schon in der Zeit von Huangdi Neijing (Innerer Klassiker des Gelben Kaisers) zur Behandlung von Krankheiten ein. Artemisiae Argyi Folium ist eine Art chinesisches Kräuterheilmittel mit der Funktion, Meridiane zu erwärmen, um Blutungen zu stoppen, Erkältungen zu vertreiben und Schmerzen zu lindern. Es wird häufig in der äußerlichen Behandlung der traditionellen chinesischen Medizin verwendet und kann auch bei der Behandlung der Abkochung der traditionellen chinesischen Medizin verwendet werden. Moxibustion ist eine Art äußere Therapie2 , bei der Moxa oder andere Medikamente auf Akupunkturpunkte auf der Körperoberfläche platziert werden, um die milde Hitze des Moxibustionsfeuers und die Wirkung von Medikamenten zur Behandlung von Krankheiten zu verbrennenund zu nutzen 3.
Als eine der gebräuchlichsten Behandlungsmethoden ist die Moxibustion in der klinischen Praxis weit verbreitet. Mit der kontinuierlichen Ausweitung der Moxibustionstherapie hat eine wachsende Zahl von Studien den Mechanismus der Moxibustion untersucht und viele Tierversuche durchgeführt 4,5.
Die Moxibustionsmethode kann in die direkte Moxibustion und die indirekte Moxibustion eingeteilt werden. Die Methode, Moxibustion auf die Haut des Körpers aufzutragen, wird als direkte Moxibustion bezeichnet. Die indirekte Moxibustion trennt die Oberfläche des Moxakegels und die Akupunkturpunkte mit Medikamenten oder anderen Materialien. Moxibustion kann verschiedene Krankheiten behandeln, wie z. B. das Reizdarmsyndrom6, das chronische Müdigkeitssyndrom7 und die Kniearthrose8.
In diesem Artikel wird hauptsächlich der Mechanismus der Kräuterkuchen-getrennten Moxibustion diskutiert. Die Kräuterkuchen-getrennte Moxibustion gehört zur indirekten Moxibustionsmethode, bei der ein Moxakegel auf den medizinischen Kuchen gelegt wird, um die Moxibustion anzuwenden. Aktuelle Studien haben gezeigt, dass die Infrarot- und Erwärmungseffekte, die durch das Verbrennen von Moxa-Zapfen, die chemische Zusammensetzung des Moxa-Blattteers und die Akupunkturpunktstimulation hervorgerufen werden, eine Krankheitsprävention und -behandlung erreichen können9 , indem sie das Eindringen von Arzneimitteln in die Akupunkturpunkte erhöhen. Daher erzeugt die nach Kräuterkuchen getrennte Moxibustion hauptsächlich eine "umfassende Wirkung" durch Moxibustion, Medikamente und Akupunkturpunkte10.
Frühere Studien zeigen, dass Moxibustion eine wirksame Methode zur Behandlung von CRF 11,12,13,14,15 ist, aber der zugrunde liegende Mechanismus ist noch nicht definiert. Wir haben an klinischen und tierexperimentellen Forschungen zu CNI gearbeitet. Zurzeit führen wir eine experimentelle Moxibustionsstudie an CRF-Ratten durch, die auf dem Signalweg des endoplasmatischen Retikulumstresses basiert. Durch diesen Tierversuch wollen wir den möglichen Mechanismus der Moxibustion bei der Behandlung chronischer Nierenerkrankungen vorläufig erklären. In diesem Experiment ist die Behandlung der durch Kräuterkuchen getrennten Moxibustion bei Ratten eine Schlüsseloperation.
Im vorangegangenen Versuch16 wurde der Deckel des Aufzuchtkäfigs verwendet, um die Ratten zu binden und zu fixieren. Um den Bediener zu schützen, müssen die Ratten vor der Bindung betäubt werden. Sprague-Dawley (SD)-Ratten sind jedoch leicht zu fürchten und zu erschrecken. Die Bindungsoperation kann bei den Ratten leicht zu Unruhe führen. Probleme wie eine schlechte Fixierung der Körperhaltung von Ratten, eine Abweichung der Akupunkturpunktpositionierung, eine längere Versuchszeit und Verletzungen des Bedieners traten häufig auf.
Darüber hinaus kann eine zu feste Bindung bei Ratten leicht zu Atembeschwerden führen, was dem Tierwohl nicht zuträglich ist. Wenn die Bindung zu locker ist, neigen die Ratten dazu, sich zu wehren und ihren Körper zu bewegen, was dazu führt, dass Moxibustionskegel herunterfallen und ihre Haut verbrennen, was sich auf die Versuchsergebnisse auswirkt. Basierend auf der Literatur beinhalten Tierversuche immer noch eine Bindung16, 17, 18, und die meisten experimentellen Geräte können nur fixiert werden, was die Umsetzung anderer Techniken wie der Moxibustion19 behindert. Daher ist die Integration von Fixierung und Moxibustion in das Versuchsgerät bei gleichzeitiger Gewährleistung des Tierschutzes, der experimentellen Spezifikationen und der Effizienz zu einem der Schwerpunkte der Forscher geworden.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Der Plan folgt den Tierhaltungsrichtlinien der Yunnan University of Chinese Medicine und wurde von der Tierethikkommission der Yunnan University of Chinese Medicine genehmigt. Die Prüfnummer für den Schutz und die Ethik der Versuchstiere lautet R-062021G098.
1. Moxibustion-Versuchsplattform (Abbildung 1)
HINWEIS: Wir haben das experimentelle Plattformgerät für Ratten-Moxibustion basierend auf dem Abstand zwischen den Hinter- und Vordergliedmaßen von Ratten und ihren Verhaltens- und physiologischen Merkmalen entworfen und gebaut.
- Die Größe des Moxibustionsgeräts
- Stellen Sie das Gerät aus antiklopfem Plattenmaterial und einem Holzbrett her. Die Gesamtgröße beträgt 52 cm L x 23,5 cm B x 64 cm H und die untere Fläche des Geräts beträgt 1222 cm2.
HINWEIS: Die Moxibustionsoperation wird auf der Plattform in dieser Höhe durchgeführt, und die Ratten können ruhig gehalten werden.
- Stellen Sie das Gerät aus antiklopfem Plattenmaterial und einem Holzbrett her. Die Gesamtgröße beträgt 52 cm L x 23,5 cm B x 64 cm H und die untere Fläche des Geräts beträgt 1222 cm2.
- Der Hauptrahmen der Moxibustionsvorrichtung
- Machen Sie die Basis des gesamten Geräts aus Anti-Beaten-Plattenmaterial: Die Grundplatte ist 52 cm L x 23,5 cm B mit einer weißen Oberfläche. Stellen Sie sicher, dass die Unterseite einen großen Teil des Gewichts des Geräts ausmacht, um das gesamte Gerät zu stabilisieren.
- Die erhöhte Plattform des Gerätes aus Massivholz mit einer Höhe von 60 cm herstellen.
HINWEIS: Dies ist der Hauptrahmen des gesamten Instruments, der das gesamte Gerät stabilisiert und die Platzierung der Ratten in einer stehenden Position unterstützt. - Platzieren Sie fünf Platzierungsschlitze mit einer Größe von 10 cm L x 6 cm B x 10 cm H. Verwenden Sie Intervallbretter (10 cm L x 1,3 cm B x 10 cm H), um die Platzierungsschlitze entsprechend dem Abstand zwischen den vorderen und hinteren Gliedmaßen der Ratte im Stand zu trennen.
- Die Komponenten der Moxibustionsvorrichtung
- Befestigen Sie zwei Edelstahlstreifen auf den Platzierungsschlitzen. Jedes feste Band ist ein rechtwinkliger Stahlstab mit gleicher Kante 40 cm L x 1,4 cm B (beide Seiten haben die gleiche Breite) mit 15 Löchern. Jedem Schlitz entsprechen drei Löcher an der festen Leiste, mit denen die Pflaumengriffschraube und der bewegliche Schlauch befestigt werden. Der Abstand zwischen benachbarten Löchern beträgt 7 cm.
- Platzieren Sie die verstellbare Pflaumenblütengriffschraube an beiden Enden des Wärmedämmnetzes aus Edelstahl 304 und verbinden Sie es mit dem festen Wärmedämmnetz und der festen Leiste.
- Verbinden Sie das obere Ende jedes Platzierungsschlitzes mit einem anhebbaren Wärmedämmnetz, das von einem verzinkten Plattenrahmen umgeben ist. Verbinden Sie diesen Rahmen an beiden Enden mit der Pflaumenblütengriffschraube. Platzieren Sie kreisförmiges Netzmaterial aus Edelstahl 304 in der Mitte des Wärmedämmnetzes, um zu verhindern, dass die Asche herunterfällt und die Ratten verbrüht, und um die Ratten zu fixieren, um die Moxibustion zu erleichtern.
- Befestigen Sie das untere Ende des beweglichen Edelstahlschlauchs (34 cm lang) mit einer festen Edelstahlleiste und das obere Ende mit der Anschlussplatte der Rohrschelle.
HINWEIS: Der bewegliche Schlauch eignet sich zum Einstellen der Position des Moxa-Sticks während des Moxibustionsvorgangs der Aufhängung. - Verwenden Sie die Rohrschelle aus Aluminiumlegierung, um den beweglichen Edelstahlschlauch und den Moxa-Clip zu verbinden.
- Verbinden Sie den Moxa-Clip aus Edelstahl mit der Verbindungsplatte der Rohrschelle und befestigen Sie gleichzeitig 8-10 Moxa-Streifen für die Moxibustion.
HINWEIS: Der bewegliche Schlauch, die Verbindungsplatte der Schlauchschelle und der Moxa-Clip können für den Suspensions-Moxibustionsbetrieb bei Ratten verwendet werden.
2. Etablierung eines Rattenmodells für chronisches Nierenversagen
- Akklimatisieren Sie 24 spezifische pathogenfreie (LSF) männliche männliche Ratten (im Alter von 3-4 Wochen mit einem Gewicht von 180-200 g) für 1 Woche. Halten Sie die Zuführtemperatur bei 18-24 °C; relative Luftfeuchtigkeit bei 40-70%; und ein 12 h Hell- und 12 h Dunkelzyklus. Halten Sie sechs Tiere in jedem Käfig und bieten Sie freien Zugang zu Wasser und gemeinsamem Futter.
- Etablieren Sie das Rattenmodell der CRF. Gemäß der Zufallszahlentabelle und gemäß diesem Protokoll werden sechs Ratten als Kontrollgruppe und die restlichen 18 als Modellgruppe ausgewählt. Die Kontrollgruppe (n = 6) wird 21 Tage lang mit destilliertem Wasser (10 ml∙kg-1∙Tag-1) und normalem Futter behandelt, die Modellgruppe (n = 18) mit Adeninsuspension (150 mg kg-1∙Tag-1) und proteinreichem Futter.
- Beobachten und notieren Sie täglich das Körpergewicht, den mentalen Zustand und die Ernährung. Stellen Sie nach Ablauf von 21 Tagen sicher, dass alle Tiere 12 Stunden lang nüchtern sind, bevor Sie eine orbitale Blutentnahme durchführen.
- Entnehmen Sie die Blutproben aus der Orbita.
- Betäuben Sie die Ratten kurz mit Isofluran. Fassen Sie den Rücken der Ratte mit der nicht dominanten Hand, halten Sie den Kopf und das Gesicht der Ratte symmetrisch zwischen Daumen und Zeigefinger, legen Sie eine Seite des Canthus der Ratte vollständig frei und halten Sie diese Position.
- Halten Sie mit der dominanten Hand 3 cm lange Schmelzpunktkapillaren zwischen Daumen und Zeigefinger und drehen Sie die Kapillare langsam in den inneren Venenplexus canthusus der Ratte in einem Winkel von 45°, bis das Blut langsam aus dem Schlauch fließt.
- Entnehmen Sie 150-200 μl Blutproben in 0,5-ml-Blutentnahme-Antikoagulanzienröhrchen, ziehen Sie die Kapillaren vorsichtig heraus und drücken Sie die Orbita mit Watte.
- Schütteln Sie die Antikoagulanstube schnell und gründlich. Messen Sie Plasma-Serumkreatinin (Scr) und Blutharnstoffstickstoff (BUN) mit einem automatischen biochemischen Analysator.
HINWEIS: Der Anstieg von Scr und BUN deutet auf die erfolgreiche Etablierung des CRF-Modells hin. - Teilen Sie die Ratten in vier Gruppen ein: A: sechs Kontrollratten, keine Behandlung; 18 Modellratten, eingeteilt in die Gruppen B: (Modellgruppe: keine Medikation oder Moxibustion), C: (Losartan-Kalium-Gruppe: verabreicht 2,33 mg∙kg-1∙Tag-1 durch Sondennadel 12 G) und D: (Kräuterkuchen-getrennte-Moxibustion-Gruppe: Kräuterkuchen-getrennte-Moxibustion angewendet auf bilaterales Shenshu [B23] und bilaterales Pishu [B20]).
3. Behandlungsphase
HINWEIS: Die Gruppen A und B erhalten keine Behandlung, während die Gruppen C und D 24 Tage lang einmal täglich behandelt werden, mit zwei freien Tagen nach 12 Tagen Behandlung.
- Vorbereitungen vor der Behandlung
- Bereiten Sie 300 g getrocknetes Radix astragali, 300 g getrocknetes Radix Codonopsis, 200 g getrocknetes Radix Rehmanniae Praeparata, 100 g geröstetes Kurzhornkraut Epimedium und 100 g Cornus officinalis vor. Mischen Sie diese Pulver.
- Geben Sie 500 g Artemisiae Argyi Folium für 5 Minuten in den Zerkleinerer der traditionellen chinesischen Medizin (Geschwindigkeit von 34.000 Umdrehungen/min), geben Sie das gemahlene Pulver auf eine Platte und sieben Sie es dann mit einem 600-Mesh-Sieb. Nach zwei Siebrunden wird das grobe Moxa eliminiert und das feine Moxa zur Verwendung in einen Beutel umgefüllt (Abbildung 2).
- Bereiten Sie den Moxa-Kegel vor, indem Sie den feinen Moxa in die Form füllen, um einen kleinen Moxa-Kegel von 0,5 cm Durchmesser und 0,5 cm Höhe zu erhalten. Alternativ können Sie das Moxa zwischen Daumen und Zeigefinger beider Hände malaxieren, um Moxa-Zapfen zu bilden (Abbildung 3A).
- Bereiten Sie die Kräuterkuchenform vor, indem Sie eine 5-ml-Spritze in vier 0,5 cm dicke kreisförmige Kunststoffringe schneiden und die vier Ringe auf dieselbe horizontale Ebene kleben (an den Ecken einer quadratischen Ebene mit einer Seitenlänge von 26 mm, Abbildung 3D).
- Machen Sie Medizinkuchen, indem Sie das Pulver und das Wasser im Verhältnis 1:1 mischen und die Mischung in die Kräuterkuchenform füllen (Abbildung 3E). Lass den Medizinkuchen in der Form und bewahre ihn an einem trockenen Ort auf.
- Markierung der Akupunkturpunkte
- Lokalisieren Sie die Akupunkturpunkte wie folgt: Shenshu (B23), beide Seiten des zweiten Lendenwirbels, ein Akupunkturpunkt auf jeder Seite; Pishu (B20), das Interkostal des 11. Brustwirbels auf beiden Seiten, ein Akupunkturpunkt auf jeder Seite (Abbildung 4).
HINWEIS: Für die Position der Akupunkturpunkte siehe Handbuch der Akupunktur für Versuchstiere20. - Tragen Sie einen dicken Gummihandschuh an der nicht-dominanten Hand, um den Kopf der Ratte sanft zu bedecken, lokalisieren Sie die Akupunkturpunkte auf dem Rücken der Ratte mit der dominanten Hand und markieren Sie dann die Akupunkturpunkte mit einem Farbmarker.
- Lokalisieren Sie die Akupunkturpunkte wie folgt: Shenshu (B23), beide Seiten des zweiten Lendenwirbels, ein Akupunkturpunkt auf jeder Seite; Pishu (B20), das Interkostal des 11. Brustwirbels auf beiden Seiten, ein Akupunkturpunkt auf jeder Seite (Abbildung 4).
- Platzierung der Ratten
- Tragen Sie dicke Gummihandschuhe. Kneifen Sie mit dem Daumen und den anderen vier Fingern der dominanten Hand die Haut am Rücken und am Hals der Ratte leicht ein. Benutze den Daumen und Zeigefinger der nicht-dominanten Hand, um den Schwanz der Ratte sanft zu kneifen.
- Hebe die Ratte an, richte den Kopf der Ratte in den Platzierungsschlitz der speziellen Moxibustionsplattform aus und bewege die Ratte langsam nach vorne. Stellen Sie sicher, dass sich die Vorderpfote der Ratte nahe am Rand des Platzierungsschlitzes befindet und dass die Ratte in den Schlitz klettert.
HINWEIS: Desinfizieren Sie die gesamte Moxibustionsplattform, bevor Sie beginnen. Bevor Sie die Ratte fangen, berühren Sie sanft den Rücken der Ratte oder sprechen Sie mit ihr, um sie zu beruhigen. Stellen Sie die Höhe des Isolationsnetzes von einer niedrigen Position (bei Nichtgebrauch) auf die höchste Position ein, die für Ratten bequem ist.
- Fixierung von Ratten
- Legen Sie Daumen und Zeigefinger beider Hände an die Schraube der Pflaumenblütenschraube an beiden Enden des Wärmedämmnetzes. Lösen Sie die Pflaumenblütenschraube, um das Wärmedämmnetz in die entsprechende Position abzusenken, nahe am Rücken der Ratte, aber ohne Kompression, und ziehen Sie dann die Schrauben fest.
- Legen Sie den Moxa-Kegel und den medizinischen Kuchen hinein.
- Legen Sie die vorbereitete Form mit dem Medizinkuchen auf das Wärmeisolationsnetz, das den Akupunkturpunkten von Pishu (B20) und Shenshu (B23) entsprechend den Markierungen der Akupunkturpunkte bei den Ratten entspricht. Es gibt vier Akupunkturpunkte, die jeweils einem Medizinkuchen entsprechen.
- Legen Sie den Moxa-Kegel glatt und gleichmäßig auf den medizinischen Kuchen.
- Moxibustion
- Zünden Sie den Moxa-Kegel mit einem Feuerzeug an und starten Sie die Moxibustion, bis der Moxa-Kegel durchbrennt und die Restwärme auf natürliche Weise abgeführt wird (der nasse medizinische Kuchen trocknet aus).
- Ersetzen Sie den ausgebrannten Moxa-Kegel durch einen neuen Moxa-Kegel und einen medizinischen Kuchen auf demselben Akupunktus und setzen Sie die Moxibustion fort, bis der Moxa-Kegel durchbrennt und der medizinische Kuchen trocknet. Wiederholen Sie dies insgesamt 5x an jedem Akupunkturpunkt.
HINWEIS: Reinigen und desinfizieren Sie das anhebbare Wärmeisolationsnetz, bevor Sie es durch einen neuen Moxa-Kegel und medizinischen Kuchen ersetzen. - Löschen Sie die Moxa-Kegel und die medizinischen Kuchen in einem wasserhaltigen Abfalltank, nachdem Sie an jedem Akupunkturpunkt fünf Moxa-Zapfen verbrannt haben.
HINWEIS: Jeder Akupunkturpunkt erhält fünf Kegel der Moxibustion; Jeder Moxa-Konus kann nach dem Ausbrennen ausgetauscht werden.
- Die Ratte in den Käfig zurückbringen
- Stellen Sie den leeren Aufzuchtkäfig vor die Ratte, nahe am unteren Ende des Platzierungsschlitzes der Moxibustionsplattform, und halten Sie still. Klopfen Sie leicht auf das Gesäß der Ratte, damit sie vom Platzierungsschlitz in den Futterkäfig wandern kann. Nachdem die Ratte eingedrungen ist, lege den Käfig ab. Fassen Sie mit der dominanten Hand das Fell auf dem Rücken der Ratte, halten Sie die Ratte fest und legen Sie sie zur weiteren Beobachtung auf den Boden.
- Beobachten Sie, ob die Ratten Kurzatmigkeit haben, ob die Stimmung stabil ist und ob die Hautoberfläche verbrüht ist. Wenn es keine Anomalie gibt, setzen Sie es wieder in den Käfig. Wenn es sich verbrüht hat, tragen Sie die Brühsalbe sofort auf die Hautoberfläche auf und legen Sie sie in einen einzelnen Käfig.
4. Phase der Probenahme
- Bereiten Sie die Ratten nach 24 Tagen Behandlung auf 12 Stunden Fasten vor, bevor Sie die Probenahme durchführen.
- Gießen Sie Isofluran in das Gasanästhesiegerät und betäuben Sie die Ratten mit 2-3% Isofluran. Stellen Sie nach 2-3 Minuten sicher, dass keine Reflexe vorhanden sind (kneifen Sie den Schwanz mit einer chirurgischen Pinzette zusammen, um zu überprüfen, ob er keinen Reflex hat) und weiterhin ein Herzschlag vorhanden ist, und wechseln Sie zur Erhaltungsanästhesie mit 1-1,5% Isofluran.
- Entnehmen Sie 5 ml Blut aus der Bauchaorta, indem Sie die Nadel in die quasi-abdominale Aorta einführen. Lassen Sie das Blut 2 h lang stehen, zentrifugieren Sie es bei 2490 × g für 10 min bei 4 °C und überführen Sie den Serumüberstand zur weiteren Analyse in ein 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen.
- Betäuben Sie die Ratten über einen längeren Zeitraum tief und entnehmen Sie unter Erhaltungsnarkose Blut aus der Bauchschlagader. Des Weiteren werden die Ratten durch Gebärmutterhalsdislokation eingeschläfert.
- Entnehmen Sie Gewebe aus beiden Nieren, indem Sie die beidseitige Nierenfaszie und das Fett mit einer chirurgischen Schere und Pinzette entfernen und mit 0,9 % normaler Kochsalzlösung spülen. Wiegen Sie die linke und rechte Niere und notieren Sie das Gewicht und die Morphologie.
- Bewahren Sie das Nierengewebe auf, indem Sie die linke Niere in sechs Teile schneiden und diese zum Einweichen, Fixieren und Konservieren in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen mit 4 % Paraformaldehyd geben. Schneiden Sie die rechte Niere mit einem Messer in Längsrichtung und zwei Messern in Querrichtung in sechs Stücke. Legen Sie diese Stücke in sechs 2-ml-Kryoröhrchen und legen Sie sie sofort in flüssigen Stickstoff; Füllen Sie sie zur Lagerung in einen -80 °C-Gefrierschrank.
5. Nachweisphase
- Verwenden Sie das richtige Nierengewebe geeigneter Größe für die Proteinextraktion, die Gelelektrophorese, den Membrantransfer, die Blockierung, die Inkubation von Primärantikörpern, Sekundärantikörpern, Chemilumineszenz, Entwicklung, Fixierung und Filmscans.
- Verwenden Sie ein Gel-Bilddatenanalysesystem (z. B. Image-Pro Plus 6.0), um den Grauwert der Bande zu analysieren und den Gehalt jedes Proteins zu berechnen.
- Das linke Nierengewebe wird dehydriert, gereinigt, in Paraffin eingebettet, geschnitten (Dicke von 4 μm), mit Hämatoxylin-Eosin und Masson-Trichrom-Färbung gefärbt und die pathologischen Veränderungen21 im Nierengewebe unter einem Lichtmikroskop bei 200-facher Vergrößerung beobachtet.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Morphologie der Niere
Wie aus Abbildung 5 ersichtlich ist, waren Größe, Farbe und Textur der Nieren in Gruppe D (Kräuterkuchen-getrennte Moxibustionsgruppe) im Vergleich zu den anderen Gruppen näher an denen der Normalgruppe. Die Nierenmorphologie der Modell- und der Losartan-Kaliumgruppe zeigte einen unterschiedlich ausgeprägten Grad der weißen Fibrose.
Gewicht der Nieren
Abbildung 6
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Klinisch gesehen erfordert die Akupunktur- und Moxibustionsbehandlung von den Patienten, dass sie ruhig und entspannt sind, übermäßige Wut und Hunger vermeiden und den "Frieden" betonen. Die derzeitige Praxis der Akupunktur- und Moxibustionsexperimente basiert jedoch immer noch auf der Prämisse der Bindung von Tieren, was nicht nur der ursprünglichen Absicht des Versuchs widerspricht, sondern auch nicht der klinischen Praxis entspricht. Das Binden von Tieren, das die Tiere verängstigt und wütend macht, führt zu einem ras...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen. Die Patentnummer des experimentellen Ratten-Moxibustions-Plattformgeräts lautet ZL202320880924.X.
Danksagungen
Wir danken Associate Professor Huang und Miss Cui für ihre strenge Anleitung und Unterstützung für dieses Papier. Die Studie wurde unterstützt von: 1. National Natural Science Foundation of China (NSFC), 82160938, "Erforschung der Mechanismusforschung zur renalen interstitiellen Fibrose mit kuchengetrennter Moxibustion aus der interaktiven Wirkung von ERK- und Smad-Signalwegen, die durch TGF-β1 vermittelt werden"; 2. Das Inkubationsprojekt der Gesundheitskommission der Provinz Yunnan "2020 High-level TCM Reserve Talents" (Yunwei TCM Development [2021] Nr. 1); 3. Gemeinsame Sonderfonds für Chinesische Medizin der Provinz Yunnan für Wissenschaft und Technologie – Angewandte Grundlagenforschung (Nr. 2019FF002-022, Nr. 202101AZ70001-286, Nr. 202301AZ070001-030); 4. Innovationsteam der Provinz Yunnan: Prävention und Behandlung von Zerebropathie mit Akupunktur und Tuina (2023).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 0,5 mL Heparin-Lithium-Biochemie-Röhrchen | Shijiazhuang Kangweishi Medical Equipment Co., LTD | 220518 | Blutentnahme |
| 0,9 % normale Kochsalzlösung | Kunming Nanjiang Pharmaceutical Co., LTD | / | Spülung |
| 1,5 mL Eppendorf-Röhrchen | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | 12100024 | Unterpackung |
| 2 mL Kryokonservierungsröhrchen | Baroque Biotechnology Co., Ltd | 88-0151 | Verpackte Niere |
| 4 > C Kühlschrank | Haier Group Co. Ltd | BCD-236WDGL | 5 |
| mL Spritze | speichern Sichuan New Century Medical Polymer Products Co., LTD | 20211115 | Gavage |
| 50 mL Zentrifugenröhrchen | Beijing Langeke Biotechnology Co., LTD | CT-002-50A | Verpackte Niere |
| 12 G Sondennadel | Beijing Zhongke Hengtian Technology Co., Ltd. | 12#55mm | Öffnung |
| 96-Well-Platten | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | 11510 | Bestimmung der Proteinkonzentration |
| -80 > C Gefrierschrank | Thermo Fisher Scientific | 991 | Store |
| Adenine | Beijing Boaotuo Technology Co., LTD | A0607 | Moulding Drug |
| BCA-Entwickler | Biyuntian Biological Engineering Co., LTD | P0010 | Bestimmung der Proteinkonzentration |
| BCL-2 Protein Antikörper-Reagenz | Abcam Shanghai Trading Co., LTD | ab196495 | Western Blot |
| Caspase-3 Protein Antikörper-Reagenz | Abcam Shanghai Trading Co., LTD | ab184787 | Western Blot |
| Chemilumineszenz-Bildgebungssystem | Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD | 100240073 | Proteinbanding-Bildgebung |
| Chinesisches Medizinpulver | Das zweite angeschlossene Krankenhaus der Yunnan Universität für Chinesische Medizin | / | Heilung |
| Direktlast-Farb-Vorgefärbter Marker | Beijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar) | M221 | Western Blot |
| Einweg-Blutentnahmenadel | Liuyang Sanli Medizinische Wissenschafts- und Technologieentwicklung Co., LTD | YZB / Land 0411-2010 | Blutentnahme |
| Einweg Einweg Behälter für venöse Blutproben | Liuyang Sanli Medizinische Wissenschaft und Technologieentwicklung Co., LTD | 20210901 | Blutentnahme |
| DK-30 Automatische Schneeeismaschine | Henan Brothers Instrument Equipment Co., LTD | SHDX0023 | ECL-Leuchtsubstrat-Kit für die Eisherstellung |
| Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL520B | Umwandlung von latenten Bildern in belichteten Film in sichtbare Bilder | |
| elektronische Waage | Shanghai Ran Hao Electronics Co., LTD | JCS-31002C | Das Körpergewicht und das Nierengewicht von Ratten wurden gemessen |
| Einfrieren von Mikrotomen | Thermo Fisher Scientific | HM525 NX | Mikrotom |
| vollautomatischer biochemischer Analysator | Tianjin Micro Nano Core Technology Co., LTD | PV2112001Z02410305 | Nierenfunktionstest |
| Gasanästhesiesystem | Zhongshi Technology Co., Ltd | ZS-MV-1 | Anästhesie |
| Glycin | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | Cat#G8200 | Laufpuffer, Western Transfer Puffer |
| HE Färbereagenz | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1120 | Färbung |
| High-Protein-Futter | Jiangsu Synergetics Biological Engineering Co., LTD | XT19008 | Fütterung |
| Intelligente Labor-Reinstwassermaschine | Chongqing huachuag Wasseraufbereitung Engineering Co., LTD | 15L | Filtration |
| Interne Referenz β-Aktin | Jiangsu Qinke Biological Research Co., LTD | AF7018 | Western Blot |
| Isofluran | Jiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co., Ltd | 20220701 | Anästhesie |
| Flüssigstickstoff | Kunming Botai Trockeneis Sales Co., | LTD / | Einfrieren von Nierengewebe |
| Losartan Kaliumtabletten | Merck Sharp & Dohme (China) Investment Co., Ltd | J20180054 | Cure |
| Niedertemperatur-Hochgeschwindigkeits-Gewebeschleifmaschine | Wuhan Servicebio Technology CO., LTD | SKZ3F20200191 | Gewebeschleifen |
| Maason Färbekit | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1340 | Färbe-Methanol |
| Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd | 20220519 | Westlicher Transferpuffer | |
| Mini-PROTEAN Tetra | Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd | 552BR 233193 | Elektrophorese |
| Moxa | Das zweite angeschlossene Krankenhaus der Yunnan University of Chinese Medicine | / | Cure |
| Multiskan-Spektrum-Mikroplatten-Spektrophotometer | TECAN | Spark | Die Absorption und Konzentration von Gewebeprotein wurden bei |
| der Operation der Schere | Zhangjiagang Stadt Jinfeng Hirschmesser Schneidefabrik | 201118 | Schneiden Sie die Haut |
| Paraformaldehyd | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL539A | Fixiertes Gewebe |
| PERK-Protein-Antikörper-Reagenz | Shanghai Pumai Biotechnology Co., LTD (CST China Agent) | 3192 | Western-Blot |
| Positives Fluoreszenzmikroskop | Carl Zeiss Suzhou Co., Ltd. | 5446000456 | Bild aufnehmen |
| Vorgefertigter Kleber | Derun Cheng (Beijing) Biological Co., Ltd (ACE China Agent) | B230418 | Western Blot |
| ProteinFind Ziege Anti-Kaninchen LgG(H+L), HRP Konjugat | Shanghai Dinran electronic Technology Co., LTD (TRAN) | HS101 | Western Blot |
| Pulverisierer | Hefei Rongzhida kleine Haushaltsgeräte Co., LTD | RS-FS1401 | Zerkleinertes Chinesisch |
| PVDF-Membran | MerckMillipore Corporation | IPVH00010 | Western-Blot |
| Kühlzentrifuge | Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD | MIKRO 220R | Zentrifuge |
| RIPA Lysat | Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio) | R0010 | Lytische |
| Gewebeentnahme Kapillare | Jiangsu Kangjianhua Medical Supplies Co., LTD | 20160157 | Blut aus dem inneren Canthus |
| Brühsalbe (Zilian-Salbe) | Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine | / | Verwendet zur Behandlung von Verbrühungen durch Moxibustion |
| Magermilchpulver | Guangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX) | 1172GR500 | Western Blocking-Puffer |
| chirurgische Klinge | Shanghai Medical Equipment Co., LTD | JOBO10 | Schnitt Nierengewebe |
| chirurgischer Messergriff | Shanghai Medical Equipment Co., LTD | J11010 | Montageklinge |
| TS-200 Orbitalschüttler | Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd. | TS-8S | Gel-Fixierung |
| Tween 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| Pinzette | Shanghai Medical Equipment Co., LTD | JD1050 | Nimm den Moxa |
| Tierarzneimittel * Mikrokern-Nierenfunktionstestscheibe | Tianjin Mikro-Nanokern-Technologie Co., LTD | 47031-35,5-0145-0227-62-220750 | Nierenfunktionstest |
Referenzen
- Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
- Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
- Ren, H. W., Cai, D. J. Brief discuss on treating febrile diseases with moxibustion. China's Naturopathy. 29 (02), 1-2 (2021).
- Ouyang, X. L., et al. Moxibustion may delay the aging process of Wistar rats by regulating intestinal microbiota. Biomedicine & Pharmacotherapy = Biomedecine & Pharmacotherapie. 146, 112147(2022).
- Qi, Q., et al. Gut microbiome alterations in colitis rats after moxibustion at bilateral Tianshu acupoints. BMC Gastroenterology. 22 (1), 62(2022).
- Wang, G. Y., Meng, Z., Xu, Q. Y., Dou, L., Cui, X. F. Scar moxibustion Zusanli treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome 20 cases. Modern Chinese Medicine. 33 (03), 79-80 (2013).
- Xue, K. Y., Fu, J., Lan, L., Tang, J. X., Cui, J. Meta-analysis of the efficacy and safety of barrier moxibustion in the treatment of chronic fatigue syndrome. Journal of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine. 44 (03), 53-59 (2022).
- Liu, J. W., Tian, Y., Peng, Y. Y., Ye, Y. Y. Observation on moxibustion sensitivity and curative effect of thermal sensitive moxibustion and knee osteoarthritis. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 41 (10), 1063-1068 (2021).
- Liu, W. A., Chang, X. R., Liu, M., Zhang, G. S. Effects of herbal-cake-separated-moxibustion sized cones at different dosages on blood fat and hemorheology in patients with hyperlipemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (9), 1787-1790 (2013).
- Zuo, Z., Chen, X. M., Jiang, Y. W., Yang, Y. M., Wang, B. Y. Effect of medicinal cake partition moxibustion on serum TGF-β1 and renal function in chronic renal failure rabbits. Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 38 (04), 82-84 (2017).
- Huang, P. D., et al. Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on renal function and expression of renal connective tissue growth factor, integrin-linked kinase and bone morphogenetic protein-7 in chronic renal failure rabbits. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 44 (8), 577-582 (2019).
- Li, L. R., Huang, X. X., Wei, T. T., Zhang, P. Research progress of TCM external treatment for chronic renal failure. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 23 (04), 51-54 (2020).
- Zuo, Z., Jiang, Y. W., Guan, Z. X., Chen, X. M. Observations on the therapeutic effect of herbal cake moxibustion on chronic renal failure. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 34 (03), 218-220 (2015).
- Wang, H., Zhang, H. M., Xu, J. M., Fan, R. Y., Lu, J. Effect of moxibustion on renal hemodynamics in patients with chronic kidney disease. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 43 (11), 722-724 (2018).
- Zhang, X. Q., Zhang, X. Y. External treatment of chronic kidney failure. Clinical Journal of Chinese Medicine. 9 (26), 141-143 (2017).
- He, C., Zhang, C. X., Zhou, S. Q., Fan, Y. S. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Zhang, H. X., et al. Introduction of a new type of mouse forelimb fixator and two types of batch mice moxibustion device. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (7), 616-619 (2021).
- Chen, W., et al. A batch moxibustion device in the mouse abdominal waist. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 45 (04), 110-112 (2022).
- Gao, S. Y., Wu, R. N., Wang, M. M., Zhang, S. J. A device for animal experiment. Clinical Journal of Chinese Medicine. 10 (23), 139-140 (2018).
- Hu, Y. L. Manual of acupuncture for experimental animals (second edition). , China Agriculture Press. Beijing. (2014).
- Liang, Y. L., et al. Reflections on animal experiments with moxibustion. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 31 (11), 4379-4381 (2016).
- Madalina, V. N., Jinyang, Z. -B., Malgorzata, W., Liliana, S. Targeting renal fibrosis: Mechanisms and drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 129, 295-307 (2018).
- Wu, R. N., et al. Design of convenient animal experimental moxibustion therapy device. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 38 (02), 243-244 (2019).
- Yan, L. G., Zhou, T., Jia, Z. K., Li, J., Wang, C. X. Influence of Panax pseudo-ginseng-partition moxibustion on cartilage damage in rats with traumatic osteoarthritis by regulating AMPK/SIRT1/NF-?B signaling pathway. Hebei Medical Journal. 45 (10), 1450-1454 (2019).
- Xu, Q., et al. Effect of mild moxibustion of 45 °C at "Zusanli" (ST36) of different durations on the inflammatory factors in the abdominal aorta of hyperlipidemia rats. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 48 (9), 923-932 (2023).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
