Diese Studie beschreibt eine schnelle und effektive Methode zur Zellkomponentenanalyse von zerebralen Blutgerinnseln durch Gerinnselauflösung, Zellfärbung und routinemäßige Blutuntersuchung.
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Methodenartikel
Ein umfassender Ansatz zur Analyse der Zellbestandteile von zerebralen Blutgerinnseln
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Hirnthrombose, ein Blutgerinnsel in einer Hirnarterie oder -vene, ist die häufigste Art von Hirninfarkt. Die Untersuchung der Zellbestandteile von Blutgerinnseln im Gehirn ist wichtig für die Diagnose, Behandlung und Prognose. Die derzeitigen Ansätze zur Untersuchung der Zellbestandteile der Gerinnsel basieren jedoch hauptsächlich auf der In-situ-Färbung , die für die umfassende Untersuchung der Zellbestandteile ungeeignet ist, da die Zellen fest in die Gerinnsel eingewickelt sind. In früheren Studien ist es gelungen, ein fibrinolytisches Enzym (sFE) aus Sipunculus nudus zu isolieren, das das vernetzte Fibrin direkt abbauen und die Zellbestandteile freisetzen kann. In dieser Studie wurde eine umfassende Methode auf Basis der sFE etabliert, um die Zellkomponenten des zerebralen Thrombus zu untersuchen. Dieses Protokoll umfasst die Auflösung von Gerinnseln, die Zellfreigabe, die Zellfärbung und die routinemäßige Blutuntersuchung. Nach dieser Methode konnten die Zellbestandteile quantitativ und qualitativ untersucht werden. Die repräsentativen Ergebnisse von Experimenten mit dieser Methode werden gezeigt.
Einleitung
Zerebrovaskuläre Erkrankungen sind eine von drei Hauptkrankheiten, die die menschliche Gesundheit bedrohen können, von denen die ischämische zerebrovaskuläre Erkrankung mehr als 80 % ausmacht. Hirnthrombosen und Hirnvenenthrombosen sind heute die am stärksten betroffenen ischämischen zerebrovaskulären Erkrankungen, die hauptsächlich durch zerebrale Blutgerinnsel verursacht werden 1,2. Wenn die Behandlung nicht richtig durchgeführt wird, führt sie zu einer hohen Behinderungs- und Mortalitätsrate und einer hohen Rezidivrate nach der Entlassung3.
In jüngster Zei....
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Protokoll
Die Forschung wurde in Übereinstimmung mit den institutionellen Richtlinien der medizinischen Ethikkommission der Universität Huaqiao durchgeführt. Die zerebralen Blutgerinnsel wurden chirurgisch entfernt und im Quanzhou First Hospital, das der Fujian Medical University angegliedert ist, mit dem Einverständnis der Patienten entnommen.
1. Vorbehandlung von Blutgerinnseln
- Geben Sie die Gerinnsel auf eine saubere Schale, fügen Sie 5 ml physiologische Kochsalzlösung mit einer Pinzette hinzu, schütteln Sie die Schale vorsichtig und entfernen Sie die Kochsalzlösung mit einer Pipette.
HINWEIS: Wiederholen Sie die Spül....
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Ergebnisse
In der Anfangsphase des Abbauprozesses wurde festgestellt, dass die Blutgerinnsel eine rote, kompakte Struktur aufwiesen und die Arbeitslösung farblos war. Nach einer Inkubationszeit von 30 Minuten färbte sich die Arbeitslösung hellrot, was darauf hindeutete, dass die gekreuzten Blutzellen in die Arbeitslösung freigesetzt wurden. Die meisten Gerinnsel lösten sich auf, wenn die Inkubationszeit auf 5 h verlängert wurde, und die Arbeitslösung wurde hellrot. Im Gegenteil, es gab auch nach 10 h Inkubation keine signifikante V.......
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Diskussion
sFE ist ein fibrinolytisches Mittel, das das Fibrin direkt und effektiv abbauen kann12,16. Hier wurde sFE eingesetzt, um das vernetzte Fibrin der zerebralen Blutgerinnsel abzubauen, die eingeschlossenen Zellen innerhalb der Gerinnsel freizusetzen und die Zellbestandteile der Gerinnsel qualitativ und quantitativ zu analysieren. Die mikroskopischen Daten und die routinemäßige Blutuntersuchung zeigten, dass die eingeschlossenen Zellen aus den Blutgerinnseln freigese.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.
Danksagungen
Diese Forschung wurde vom Wissenschafts- und Technologiebüro der Stadt Xiamen (3502Z20227197) und dem Wissenschafts- und Technologiebüro der Provinz Fujian (Nr. 2019J01070, Nr. 2021Y0027) finanziert.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Agglutinationsreaktionsplatte | ROTEST | RTB-4003 | |
| Automatischer Hämatologie-Analysator | SYSMEX | XNB2 | |
| Automatischer vertikaler Druckdampfsterilisator | SANYO | MLS-3750 | |
| Zentrifugenröhrchen (1,5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
| Reinbank | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Inkubator mit konstanter Temperatur | JINGHONG | JHS-400 | |
| Kulturschale (100 mm) | NEST | 704001 | |
| DHG Serie Heiz- und Trockenofen | SENXIN | DGG-9140AD | |
| Elektronische Analysenwaage | DENVER | TP-213 | |
| Filtermembran (0,22 &Mikro; m) | Millex GP | SLGP033NK | |
| Mikro-Kühlzentrifuge | Cence | H1650-W | |
| Objektträger | CITOGLAS | 01-30253-50 | |
| Milli-Q Referenz | Millipore | Z00QSV0CN | |
| normale Kochsalzlösung | CISEN | H37022337 | |
| Optisches Mikroskop | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Beyotime | C0221A | |
| Pipettenspitze (1 mL | Axygene | T-1000XT-C | |
| Pipettenspitze (200 & Mikro; L) | Axygene | T-200XT-C | |
| Pipettierer (1 mL) | Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| Pipettierer (200 & Mikro; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Skalpell | MARTOR | 23111 | |
| Kleinformatiger Vortex-Oszillator | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Pinzette | Hystic | HKQS-180 | |
| Wright Färbelösung | Beyotime | C0135-500ml |
Referenzen
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
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Nachdrucke und Genehmigungen
