Method Article

Operationsverfahren und Vorsichtsmaßnahmen der Fadeneinbettungs-Akupunkturtherapie bei Alzheimer

DOI:

10.3791/65895

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May 10th, 2024

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1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Hubei Shizhen Laboratory, 3Hubei International Science and Technology Cooperation Base of Preventive Treatment by Acupuncture and Moxibustion, 4Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

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Diese Studie stellt ein Protokoll für die Fadeneinbettung der Akupunkturtherapie bei Ratten vor, die der Alzheimer-Krankheit ähneln.

Abstract

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Die Fadeneinbettungstherapie (TEAT) ist eine Behandlung, die Krankheiten vorbeugt und behandelt, indem ein biologisch abbaubares Nahtmaterial in einen Akupunkturpunkt eingeführt wird, um eine lang anhaltende Stimulation zu gewährleisten. TEAT ist ein einfacher Ansatz, der die Unannehmlichkeiten der regelmäßigen Akupunktur vermeidet und nachhaltige therapeutische Effekte bietet. In diesem Artikel werden die möglichen Auswirkungen von TEAT auf die Lern- und Gedächtnisfähigkeiten von Ratten mit Alzheimer-ähnlichen Symptomen diskutiert. Da chemisch induzierte neuronale Degeneration und kognitive Beeinträchtigungen bei Ratten nicht vollständig die tatsächlichen pathologischen Veränderungen widerspiegeln, die bei der Alzheimer-Krankheit beobachtet werden. Daher hat unsere Arbeitsgruppe diese Manifestationen als Alzheimer-ähnliche Symptome bezeichnet. Es wurde ein Protokoll erstellt, das die Auswahl der Akupunkturpunkte, den Operationsprozess und die notwendigen Vorsichtsmaßnahmen für den Kopf und den unteren Rücken beschreibt. Das Experiment wurde an drei Gruppen durchgeführt: einer Kontrollgruppe, einer Modellgruppe und einer TEAT-Gruppe, die jeweils 6 Ratten umfassten. Um Alzheimer-ähnliche Symptome hervorzurufen, wurde Ratten 7 Wochen lang (49 Tage) intraperitoneal mit D-Galaktose injiziert. Die Ratten in der TET-Gruppe erhielten eine Akupunkturpunkt-Catgut-Einbettungsbehandlung. Im Anschluss an die Interventionsphase wurde ein Morris Water Maze (MWM) durchgeführt, um das Lernen und das Gedächtnis der Ratten zu bewerten. Anschließend wurden die Ratten getötet und ihr Hirngewebe untersucht. Eine histologische Untersuchung wurde durchgeführt, um die Auswirkungen von TEAT auf die Pathologie von Ratten mit Symptomen der Alzheimer-Krankheit zu verstehen. Diese Studie deutet darauf hin, dass TEAT das Lernen und das Gedächtnis bei Ratten mit Alzheimer-ähnlichen Symptomen verbessern kann, was auf einen potenziell vielversprechenden neuen Behandlungsansatz für diese neurodegenerative Erkrankung hinweist.

Introduction

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Bei der Fadeneinbettungsakupunktur (TEA) werden Catgut- oder resorbierbare Nähte mit einer speziellen Nadel in Akupunkturpunkte eingebettet. Diese Technik hat eine verlängerte Wirkung, bis die Nähte absorbiert und abgebaut sind. Es bietet eine kontinuierliche und anhaltende Stimulation der Akupunkturpunkte für eine Woche oder länger1 und erzielt ein vergleichbares Ergebnis, ohne dass täglich wiederholte Eingriffe erforderlich sind2. Dadurch sinkt die Zahl der Patienten, die sich medizinisch behandeln lassen, und es werden medizinische Ressourcen teilweise geschont. In den letzten Jahren wurde TEAT zunehmend in verschiedenen medizinischen Bereichen in China eingesetzt, darunter Innere Medizin, Äußere Medizin, Dermatologie, Gesichtszüge, Gynäkologie und Pädiatrie3. Studien haben gezeigt, dass es bei bestimmten chronischen und komplexen Krankheiten wie Epilepsie4 und Gesichtsnervenlähmung5 eine langfristige und zuverlässige Wirkung zeigt. Es hat die Vorteile eines minimalen Traumas und einer einfachen Bedienung6. Darüber hinaus wurde berichtet, dass die Behandlungskosten von TEAT niedriger sind als die von Elektroakupunktur (EA)7. Daher wird TEAT in der klinischen und wissenschaftlichen Forschung zunehmend geschätzt.

Die Alzheimer-Krankheit (AD) ist eine neurodegenerative Erkrankung, die im Laufe der Zeit fortschreitet. Sein pathophysiologischer Prozess beginnt sich etwa 20 Jahre vor dem Auftreten klinischer Symptome anzuhäufen, aber sein Mechanismus ist immer noch nicht vollständig verstanden8. Angesichts der begrenzten Verfügbarkeit wirksamer Medikamente gegen Alzheimer konzentriert sich die Forschung zunehmend auf das prodromale und präklinische Stadium der Erkrankung9. Prävention ist eine entscheidende Strategie, um der Entwicklung und dem Fortschreiten von AD 9,10 entgegenzuwirken. Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) hat in den letzten Jahren große Fortschritte gemacht und soll neue Möglichkeiten zur Vorbeugung und Behandlung von11,12 n. Chr. bieten. Als Unterform der Akupunktur wird TEAT aufgrund ihres breiten Behandlungsspektrums, des minimalen Traumas, der einfachen Bedienung, der geringen Behandlungshäufigkeit und der lang anhaltenden Wirksamkeit gegenüber anderen Therapien bevorzugt6. Neue Literatur deutet darauf hin, dass TEAT Personen mit Fettleibigkeit13,14, Diabetes15, Schlaflosigkeit16, postmenopausaler Osteoporose17 und Depression18 zugute kommen kann, die alle Risikofaktoren für AD sind. Es verbessert auch die Seneszenz bei alternden Ratten, indem es die Mitophagiereguliert 2, verbessert das räumliche Lernen und die Gedächtnisstörungen, lindert pathologische Schäden des Hippocampus und hemmt die Entzündungsreaktion bei Ratten mit vaskulärer Demenz (VD)19. Es schien attraktiv herauszufinden, ob TEAT auch bei der Alzheimer-Krankheit auf krankhafte Prozesse einwirken kann.

Der aktuellen Forschung mangelt es an Einheitlichkeit und Standardisierung in mehreren kritischen Elementen des TET-Betriebs, einschließlich der Einbettungsmethode, des Einbettungswerkzeugs, des Gewindes und des Einbettungsintervalls. Dieser Mangel an Standardisierung beeinträchtigt die Bewertung der Wirkung der Therapie und die Erforschung der damit verbundenen Mechanismen und schränkt die externe Förderung und Kommunikation ein. Frühere Forschungen 20,21 haben gezeigt, dass die intraperitoneale Verabreichung von D-Galaktose (D-Gal) bei Ratten Alzheimer-ähnliche pathologische Veränderungen hervorrufen kann, einschließlich neuronaler Degeneration und kognitiver Beeinträchtigungen. Darüber hinaus hat sich gezeigt, dass die Elektroakupunktur am Baihui (GV20) und Shenshu (BL23) den kognitiven Verfall wirksam lindert, Neuroinflammation abschwächt und neuronale Schäden reduziert. Diese Studie nimmt Alzheimer-ähnliche Modellratten als Beispiel, um die Auswahl der Akupunkturpunkte sowie den Operationsprozess und die Vorsichtsmaßnahmen von TEAT unter diesem Modell vorzustellen. Es diskutiert die kritischen operationellen Elemente von TEAT in der experimentellen Forschung, um eine Referenz für zukünftige Studien zu liefern.

Protocol

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Alle Versuche wurden gemäß dem Leitfaden der National Institutes of Health für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt und vom Labortiermanagement- und -verwendungsausschuss des Provinzzentrums der Provinz Hubei genehmigt. Insgesamt wurden 18 3 Monate alte weibliche Sprague-Dawley (SD) Ratten mit einem Gewicht von 220-250 g für den Test verwendet. Alle Ratten wurden in einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus bei 23 ± 1 °C und 40 % bis 50 % Luftfeuchtigkeit gehalten, mit freiem Zugang zu Futter und Wasser. Nach einer einwöchigen Eingewöhnungsphase, in der sich die Ratten an die Laborbedingungen gewöhnen durften, wurden die Experimente gestartet.

1. Modellentwicklung

  1. Das Versuchsdesign ist in Abbildung 1 dargestellt. Teilen Sie 18 3 Monate alte weibliche Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gewicht von 220-250 g nach dem Zufallsprinzip in Kontroll-, Modell- und TEST-Gruppen auf. Jede Gruppe besteht aus 6 Ratten.
  2. Injizieren Sie der Modellgruppe und der TEA-Gruppe täglich D-Galaktose (D-Gal; 120 mg/kg/Tag), während die Kontrollgruppe 7 Wochen lang (49 Tage) Kochsalzlösung (120 mg/kg/Tag) in den unteren ventralen Bereich erhält22. Die Injektion sollte täglich zwischen 8:00 und 9:00 Uhr verabreicht werden.
  3. Wiegen Sie die Ratten am 7. Tag jeder Woche zwischen 9:00 und 10:00 Uhr. Das Experiment dauerte 49 Tage. Vergraben Sie die Fäden alle 14 Tage am 14., 28. und 42. Tag. Legen Sie die Zeit für jede Thread-Einbettung zwischen 9:00 und 12:00 Uhr fest.
  4. Die intraperitoneale Verabreichung von D-Galaktose wird 7 Wochen lang fortgesetzt, um pathologische Manifestationen im Zusammenhang mit der Alzheimer-Krankheit bei Ratten zu induzieren22.

2. Vorbereitung für den SAUGER

  1. Sterilisieren Sie chirurgische Instrumente wie Augenscheren, Tabletts und Pinzetten und desinfizieren Sie sie. Reinigen Sie die Oberflächen in der OP-Umgebung gründlich und desinfizieren Sie sie.
  2. Bereiten Sie die Operationsplattform vor, indem Sie ein Heizkissen für kleine Tiere flach auf die Oberfläche legen und anschließend mit einem sterilen Handtuch abdecken. Legen Sie anschließend die gereinigte und desinfizierte Bedienplatine glatt mit der rauen Seite nach oben darauf. Schalten Sie dann das Heizkissen ein und stellen Sie die Temperatur auf 32 °C ein.
  3. Wählen Sie für den Eingriff eine Einweg-Fadeneinbettnadel Nr. 6 mit einem Durchmesser von 0,6 mm und ein resorbierbares chirurgisches Nahtmaterial 5-0 (Kollagennaht) mit einer Länge von 2 cm. Schneiden Sie das 2 cm lange resorbierbare chirurgische Nahtmaterial 5-0 mit einer Augenschere in 0,5 cm und 0,2 cm große Stücke. Den abgeschnittenen Faden in 0,9 % Kochsalzlösung einweichen und beiseite stellen.
  4. Waschen Sie die Hände 20 s lang mit Wasser und Seife und trocknen Sie sie dann ab. Tragen Sie danach sterile Handschuhe.
  5. Betäuben Sie die Ratten mit einer IP-Injektion von Chloralhydrat (300 mg/kg) in den unteren ventralen Bereich, um sicherzustellen, dass die Anästhesie bestätigt wird, wenn die Tiere in einer chirurgischen Ebene nicht ansprechbar sind, basierend auf dem fehlenden Ansprechen eines Zehenquetschtests, und um einen stabilen physiologischen Zustand aufrechtzuerhalten. Um Trockenheit der Hornhaut und mögliche Schäden zu vermeiden, während die Ratten unter Narkose stehen, tragen Sie außerdem eine großzügige Menge Tiersalbe auf die Augen auf und stellen Sie sicher, dass sie während des gesamten Eingriffs geschmiert bleiben.
    HINWEIS: Es wird empfohlen, die Ratte zu betäuben, da es für sie schmerzhaft ist, das Piercing zu erleben.

3. Thread-Embedding-Operation für Baihui (GV 20)

  1. Lokalisieren Sie den Akupunkturpunkt Baihui (GV 20) bei Ratten in der rechten Mitte des Scheitelknochens (Abbildung 2A). Positionieren Sie die Ratten so, dass sie den Kopf vollständig freilegen, wobei die Ohren nach vorne gezogen werden, um sich der Methode anzunähern, die beim Menschen zum Verbinden der Ohrspitzenlinien verwendet wird. Identifizieren Sie den Baihui-Punkt (GV 20), indem Sie den zentralen Längskamm des Schädels abtasten und die Stelle ungefähr in der Mitte lokalisieren. Bestätigen Sie diesen Akupunkturpunkt weiter auf der Höhe, auf der die Ohren den Kopf berühren würden, wenn sie flach gelegt würden, und richten Sie sich nach dem Schnittpunkt der sagittalen Naht und des Scheitelknochens aus. Verwenden Sie einen Markierer, um Baihui (GV 20) zu markieren.
  2. Rasieren Sie den Kopfbereich um den Akupunkturpunkt der Ratte mit einem Trimmer (normalerweise ein elektrischer Bartschneider für Männer).
  3. Desinfizieren Sie vor der Operation die Akupunkturpunkte und die umgebende Haut, indem Sie eine 0,5%ige Jodlösung in kreisenden Bewegungen auftragen, beginnend in der Mitte, nach außen. Führen Sie anschließend einen dreifachen Desinfektionsprozess durch: Verwenden Sie den Jodophor 3x, jeweils mit einer Anwendung von Alkohol, um eine ordnungsgemäße Dekontamination zu gewährleisten und den Standort für die aseptische Technik vorzubereiten.
  4. Klemmen Sie das 0,2 cm lange, resorbierbare, in Kochsalzlösung getränkte chirurgische Naht mit einer Pinzette heraus und platzieren Sie es am vorderen Ende des Nadelschlauchs. Verbinde es dann mit dem Nadelkern.
  5. Kneifen Sie den Bereich um Baihui (GV 20) mit Daumen und Zeigefinger an einer Hand zusammen, während Sie mit der anderen Hand die Nadel halten.
  6. Führen Sie die Nadel horizontal und schnell in einem Winkel von 15° zur Hautoberfläche ein, 0,1 cm unterhalb des Baihui-Punktes (GV 20), während Sie die Haut einklemmen (Abbildung 3A).
  7. Nachdem die Nadelspitze 0,1 cm über dem Baihui-Punkt (GV 20) erreicht ist, drücken Sie den Nadelkern, während Sie den Nadelschlauch zurückziehen, um das 0,2 cm resorbierbare chirurgische Nahtmaterial vollständig in das subkutane Gewebe des Akupunkturpunkts zu implantieren (Abbildung 3B).
  8. Entfernen Sie langsam die Nadel und stellen Sie sicher, dass keine Naht freiliegt. Drücken Sie das Nadelloch 10 s lang mit steriler, trockener Watte, um ein Ausbluten zu vermeiden. Wenn sich der Faden nach dem Einbetten der Linie an den Akupunkturpunkten außerhalb des Körpers befindet, ziehen Sie ihn heraus und führen Sie ihn erneut ein.

4. Thread-Embedding-Operation für Shenshu (BL 23)

  1. Der Akupunkturpunkt Shenshu (BL 23) befindet sich bei Ratten 5 mm lateral des 2. Lendenwirbels (Abbildung 2B). Lokalisieren Sie zunächst den 6. Lendenwirbel anhand des Hüfttuberkels der Ratte. Lokalisieren Sie dann den 2. Lendenwirbel, indem Sie vier Wirbelkörper nach oben zählen. Shenshu (BL 23) wird 5 mm lateral davon23 sein.
    HINWEIS: Die Kombination der Akupunkturpunkte Baihui (GV 20) und Shenshu (BL 23) ist ein in der Theorie der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM) häufig eingesetztes Set zur Vorbeugung und Behandlung von Hirnerkrankungen. Wie durch frühere Forschungenbestätigt 20,21, wurde diese Akupunkturpunkt-Paarung für ihre Wirksamkeit nachgewiesen.
  2. Mit einem Marker markiert man Shenshu (BL 23). Rasieren Sie den Rücken- und Taillenbereich um den Akupunkturpunkt der Ratte herum mit einem Trimmer (normalerweise einem elektrischen Bartschneider).
  3. Desinfizieren Sie vor der Operation die Akupunkturpunkte und die umgebende Haut, indem Sie 0,5%ige Jodlösung in kreisenden Bewegungen auftragen, beginnend von der Mitte nach außen. Führen Sie anschließend einen dreifachen Desinfektionsprozess durch: Verwenden Sie den Jodophor dreimal, gefolgt von einer Anwendung von Alkohol, um eine ordnungsgemäße Dekontamination und Vorbereitung der Stelle für die aseptische Technik zu gewährleisten.
  4. Klemmen Sie das 0,5 cm lange, resorbierbare, in Kochsalzlösung getränkte chirurgische Nahtmaterial mit einer Pinzette heraus und platzieren Sie es am vorderen Ende des Nadelschlauchs. Verbinde es dann mit dem Nadelkern.
  5. Dehnen Sie die Haut mit dem Zeige- und Mittelfinger der drückenden Hand oder dem Daumen und Zeigefinger. Halten Sie die Nadel mit der stechenden Hand fest.
  6. Führen Sie die Nadel schnell senkrecht in die Spitze 0,25 cm unterhalb des Shenshu (BL 23) ein. Siehe Abbildung 4A.
  7. Nachdem die Nadelspitze 0,5 cm unter die Haut gelangt ist, stellen Sie die Nadelspitze so ein, dass die Einstichrichtung zentripetal ist, bilden Sie einen 45°-Winkel mit der Hautoberfläche und führen Sie 0,5 cm schräg ein (Abbildung 4B).
    HINWEIS: Es ist wichtig, beim Nadeln des Shenshu (BL 23), das sich in der Nähe der Niere befindet, Vorsicht walten zu lassen. Tiefes Einführen oder wiederholtes Heben und Stoßen der Nadel kann zu Schäden führen. Daher empfehlen wir eine Einstichtiefe von ca. 0,3-0,6 cm.
  8. Schieben Sie den Nadelkern hinein, während Sie den Schlauch zurückziehen, und implantieren Sie das 0,5 cm resorbierbare chirurgische Nahtmaterial vollständig in das Muskelgewebe des Akupunkturpunkts (Abbildung 4C).
  9. Ziehen Sie die Nadel langsam heraus und stellen Sie sicher, dass keine Naht freiliegt. Drücken Sie dann das Nadelloch 10 s lang mit steriler, trockener Watte, um ein Ausbluten zu vermeiden. Wenn sich der Faden nach dem Einbetten der Linie an den Akupunkturpunkten außerhalb des Körpers befindet, ziehen Sie ihn heraus und führen Sie ihn erneut ein.

5. Nachsorge

  1. Legen Sie die Ratte postoperativ auf ein Heizkissen für kleine Tiere, das auf eine Temperatur von 32 °C eingestellt ist, um die Genesung von der Narkose zu erleichtern. Stellen Sie sicher, dass das Tier bei vollem Bewusstsein ist und sein Zustand zufriedenstellend ist, bevor Sie es in sein Gehege zurückbringen.
  2. Nach der Operation sind innerhalb einer Woche Anzeichen steriler Entzündungsreaktionen im betroffenen Bereich zu beobachten. Zu diesen Anzeichen können Rötungen, Schwellungen oder ein eitriger Ausfluss gehören. In der Regel erfordern diese Symptome keine Behandlung. Wenn jedoch eine übermäßige Menge an Exsudat vorhanden ist, entleeren und desinfizieren Sie den betroffenen Bereich. Tragen Sie in solchen Fällen Erythromycin-Salbe auf, bis sich die Wunde vollständig erholt hat.

6. Verhaltensuntersuchung und histologische Untersuchung

  1. Führen Sie nach der Intervention in Woche 8 das Morris Water Maze (MWM) Experiment 2,24 durch, um ihre Lern- und Gedächtnisfähigkeiten zu bewerten. Führen Sie die Lernversuche über 5 Tage durch, mit vier Versuchen pro Tag. Führen Sie dann nach 24 Stunden ab dem letzten Erfassungstag einen Sondenversuch durch.
  2. Führen Sie statistische Vergleiche mit statistischer Analysesoftware durch. Analysieren Sie die Verhaltensdaten der Lernfähigkeit durch Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) und Post-hoc-Tukey-Test. Bewerten Sie die Signifikanz von Escape-Latenzdaten durch bidirektionale Varianzanalyse (ANOVA) mit wiederholten Messungen, gefolgt von dem Post-hoc-Bonferroni-Test. Ein Wert von p <0,05 wird in allen Tests als signifikant angesehen.
  3. Nach der Verhaltensbeurteilung werden die Ratten wie oben beschrieben anästhesiert und mit intraperitonealen Injektionen von 150 mg/kg Körpergewicht Pentobarbital-Natrium eingeschläfert.
  4. Das Gehirn der Ratte wird durch Perfusion mit 4 % Paraformaldehyd fixiert, das über das Gefäßsystem perfundiertwird 25.
    1. Einführen und Fixieren der Sondennadel
      1. Bereiten Sie eine 12G-Nadel vor und stellen Sie sicher, dass sie gerade und für den Gang durch den Ventrikel der Ratte geeignet ist. Lokalisieren Sie den Ventrikel der Ratte, bei dem es sich typischerweise um den linken Ventrikel handelt, und führen Sie die Nadel durch ihn in die aufsteigende Aorta ein. Dieser Schritt erfordert Präzision und ein gutes Verständnis der Anatomie der Ratte.
      2. Sobald die Nadel an Ort und Stelle ist, klemmen Sie die Sondennadel mit einem Blutstiller in die Nähe der Stelle, an der sie in die Aorta eintritt. Dies hilft, die Nadel zu sichern und zu verhindern, dass sie sich bewegt.
      3. Stellen Sie sicher, dass die Klemme fest genug ist, um die Nadel sicher zu halten, aber nicht so fest, dass die Aorta beschädigt oder der Blutfluss behindert wird. Die Sondennadel sollte während des gesamten Eingriffs in der aufsteigenden Aorta verbleiben, um eine ordnungsgemäße Durchblutung zu gewährleisten.
    2. Durchblutung mit normaler Kochsalzlösung
      1. Bereiten Sie eine 50-ml-Spritze ohne Nadel für die Perfusion vor. Befestigen Sie das andere Ende der Sondennadel, das sich außerhalb des Körpers der Ratte befindet, an der Spritze, die mit normaler Kochsalzlösung gefüllt ist.
      2. Machen Sie einen kleinen Schnitt, um das rechte Vorhofohr zu durchtrennen, damit das Blut aus dem Herzen fließen kann. Dieser Schritt sorgt dafür, dass das Blut während der Perfusion durch die Kochsalzlösung verdrängt wird.
      3. Beginnen Sie mit der Injektion der normalen Kochsalzlösung in die aufsteigende Aorta mit einer gleichmäßigen und konstanten Geschwindigkeit. Dadurch wird das Blut ausgespült und das Gewebe für die Fixierung vorbereitet.
      4. Überwachen Sie die Flüssigkeit, die aus dem rechten Vorhofohr austritt, und seien Sie darauf vorbereitet, die Spritze nach Bedarf zu wechseln, um eine kontinuierliche Perfusion mit frischer Kochsalzlösung aufrechtzuerhalten.
        Bereiten Sie die Perfusion mit dem Fixiermittel vor.
      5. Ersetzen Sie die Spritze mit Kochsalzlösung durch eine Spritze mit 4 % Paraformaldehyd, einem in der Histologie häufig verwendeten Fixiermittel. Fahren Sie mit der Perfusion fort, indem Sie das Paraformaldehyd verwenden, um das Gewebe für die nachfolgende Verarbeitung und Analyse zu fixieren.
        HINWEIS: Während dieses Verfahrens ist es wichtig, aseptische Techniken beizubehalten, um Infektionen zu verhindern, und die Ratte sanft zu behandeln, um Verletzungen zu minimieren. Darüber hinaus sollte das gesamte beteiligte Personal in der Technik geschult werden, um Konsistenz und Wirksamkeit zu gewährleisten.
  5. Das Rattenhirn wird entnommen und in eine Probenflasche mit 4 % Paraformaldehyd für 24-48 h bei 4 °C25,26 gelegt. Führen Sie Schritt für Schritt eine Ethanol-Dehydratisierung und eine Xylolbehandlung durch, gefolgt von herkömmlichen kontinuierlichen Koronaschnitten (4-5 μm) zur Messung. Bewerten Sie die Morphologie und den Verlust von Hippocampus-Neuronen in jeder Gruppe mit Hämatoxylin- und Eosin-Färbung (H&E) (200x).
    HINWEIS: Eine Autopsie zur Beurteilung von gastrointestinalen (GI) Läsionen wurde bei den Nagetieren nicht durchgeführt, da während des gesamten Versuchszeitraums keine klinischen Symptome auftraten, die auf gastrointestinale Störungen hinweisen. Die Tiere zeigten keine offensichtlichen Nebenwirkungen, die auf das Vorhandensein solcher Pathologien hindeuten würden.

Results

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In diesem Artikel wird die spezifische Operationsmethode von TEAT bei Ratten, die der Alzheimer-Krankheit ähneln, vorgestellt. Es diskutiert die kritischen operationellen Elemente von TEAT in der experimentellen Forschung, um eine Referenz für zukünftige Studien zu liefern.

TEAT verbessert das Lernen bei Ratten, die der Alzheimer-Krankheit ähneln
Wie im Flussdiagramm (Abbildung 5) dargestellt, wurde während der adaptiven Trainingsphase beobachtet, dass Ratten in jeder Gruppe die Umgebung beim Schwimmen beobachteten. Die Analyse der Schwimmgeschwindigkeit (Abbildung 6) zeigte keinen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen, was auf ein konsistentes Ausgangsniveau der Bewegungsgeschwindigkeit und der visuellen Wahrnehmung hinweist. Die beobachteten Unterschiede in den experimentellen Ergebnissen waren nicht auf Variationen in der Bewegungsfähigkeit oder der visuellen Wahrnehmung zurückzuführen.

Die Ratten durchliefen ein 5-tägiges Training zur Plattformsuche. In Abbildung 7A ist zu sehen, dass sich die Bewegungstrajektorien jeder Gruppe von Ratten in den frühen und späten Stadien des Trainings unterschieden. An Tag 2 schwammen die meisten der fluchtgetriebenen Rattengruppen nach dem Zufallsprinzip. An Tag 5 schwammen die Ratten in der Kontrollgruppe jedoch mit Richtung, während die Ratten der Modellgruppe zufällig an der Beckenwand entlang schwammen. Die Bewegung der TEA-Gruppe der Ratten wurde im Zielquadranten dichter. Das Experiment maß die Escape-Latenz, wobei eine kürzere Latenz auf stärkere Fähigkeiten hinweist. Abbildung 7B zeigt, dass die Modellgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe reduzierte Lern- und Gedächtnisfähigkeiten aufwies. Die TEA-Gruppe zeigte jedoch eine signifikante Verbesserung der Beeinträchtigung des räumlichen Referenzgedächtnisses bei Ratten mit AD-ähnlicher Pathologie.

TEAT verbessert das räumliche Gedächtnis bei Ratten, die der Alzheimer-Krankheit ähneln
Im Sondenversuch deutet der Ort, an dem das Tier Zeit verbringt, auf eine räumliche Verzerrunghin 27. Ratten verwenden vier Hauptmethoden, um nach Plattformen zu suchen: Edge-basiert, zufallsbasiert, trendbasiert und linear-basiert28. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass jede Gruppe von Ratten unterschiedliche Suchstrategien anwandte (Abbildung 8A). Die Kontrollgruppe verwendete hauptsächlich lineare und gerichtete Suchstrategien, was auf ein starkes Gedächtnis und die Fähigkeit hindeutet, sich an den Standort der Plattform zu erinnern. Im Gegensatz dazu zeigten die Ratten in der Modellgruppe eine kantenartige Hauptsuchstrategie, was auf eine signifikante Abnahme ihrer Gedächtnisleistung hinweist. Sie haben nicht gelernt, die Plattform zu finden oder sich an ihren Standort zu erinnern. Die Ratten in der TEA-Gruppe zeigten eine trendbasierte Suchstrategie. Die Trajektoriendichte war sowohl in dem Quadranten, in dem sich die ursprüngliche Plattform befand, als auch in den angrenzenden Quadranten am höchsten. Dies deutet auf eine Verbesserung des Arbeitsspeichers im Vergleich zur Modellgruppe hin.

Die Abbildungen 8B und 8C zeigen die Ergebnisse der Verweildauer im Quadranten der ursprünglichen Plattform und die Häufigkeit, mit der die Ratten die Plattform überquert haben. Die Ratten der Modellgruppe zeigten im Vergleich zur Kontrollgruppe eine signifikante Verkürzung ihrer Verweildauer im ursprünglichen Plattformquadranten und der Häufigkeit, mit der sie die Plattform überquerten (p <0,01). Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten die Ratten der TEAT-Gruppe eine signifikante Zunahme ihrer Verweildauer im ursprünglichen Plattformquadranten und der Häufigkeit, mit der sie die Plattform überquerten (p <0,01). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass TEAT das räumliche Lernen und die Gedächtnisbeeinträchtigung bei Ratten mit AD-ähnlicher Pathologie verbessern kann.

TEAT verbessert die Alterung des Hippocampus bei Ratten (Abbildung 9). Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigten die Ratten in der Modellgruppe schwere pathologische Veränderungen, einschließlich einer signifikanten Verringerung der Anzahl der Pyramidenzellen und ihrer unregelmäßigen Anordnung. Darüber hinaus wurden Kernkondensation, neuronale Degeneration und andere Anomalien beobachtet. Nach der TET-Behandlung nahm die Anzahl der Hippocampus-Pyramidenzellen bei Ratten jedoch zu und war besser organisiert. Obwohl einige Zellkerne Kondensation aufwiesen, schien die Zellmorphologie insgesamt normaler zu sein. Die Zellen waren dichter verteilt und geordneter, die zytoplasmatische Färbung war konsistenter und das Ödem, das die Zellen umgab, wurde signifikant reduziert. Bemerkenswert ist, dass normale Pyramidenzellen beobachtet wurden.

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Abbildung 1: Flussdiagramm des Experiments. Nach 1 Woche Adaption (Woche 0) wurden 18 Ratten in drei Gruppen eingeteilt: Kontrolle, Modell und TEAT. In den Wochen 1 bis 7 erhielt die Kontrollgruppe Kochsalzinjektionen, während der Modell- und der TEAT-Gruppe D-Galaktose verabreicht wurde. Die TEA-Gruppe unterzog sich zusätzlich in den Wochen 2, 4 und 6 einer Akupunkturtherapie mit Fadeneinbettung. Alle Ratten wurden in Woche 8 dem Morris-Wasserlabyrinth-Test unterzogen, gefolgt von einer Euthanasie. Abkürzungen: Adapt = Anpassung, Con = Kontrollgruppe, Mod = Modellgruppe, TEAT = Thread-embedding Akupuncture Therapy Gruppe, D-gal = D-Galactose, MWM = der Morris-Wasserlabyrinth-Test. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 2: Die Position des Akupunkturpunkts. (A) Der Akupunkturpunkt Baihui (GV 20) bei Ratten. Er befindet sich in der rechten Mitte des Scheitelknochens. (B) Der Akupunkturpunkt Shenshu (BL 23) bei Ratten. Er befindet sich 5 mm lateral zum zweiten Lendenwirbel. Abkürzungen: GV = Governor Vessel, ein Begriff in der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM), der sich auf den Hauptmeridian bezieht, der entlang der Mittellinie des hinteren Aspekts des Körpers verläuft, BL = Blase, steht für den Blasenmeridian, der in der TCM dem Fuß-Taiyang-Meridian entspricht, einem der sechs Yang-Meridiane, der entlang der Rückseite des Körpers und der Beine verläuft. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 3: Detaillierte Thread-Embedding-Operation von Baihui (GV 20). (A) Die Nadel wird horizontal in einem Winkel von 15° zur Hautoberfläche eingeführt, 0,1 cm unterhalb des Akupunkturpunkts von Baihui (GV 20), wobei die Haut eingeklemmt wird, um den Eingriff zu erleichtern. (B) Sobald die Nadelspitze eine Position 0,1 cm über dem Baihui (GV 20) Akupunkturpunkt erreicht, wird der Nadelkern beim Zurückziehen des Nadelschlauchs gedrückt, um das 0,2 cm resorbierbare chirurgische Nahtmaterial vollständig in das Unterhautgewebe am Akupunkturpunkt zu implantieren. Abkürzungen: GV = Governor Vessel, ein Begriff aus der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM), der sich auf den Hauptmeridian bezieht, der entlang der Mittellinie des hinteren Aspekts des Körpers verläuft. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 4: Detaillierte Thread-Embedding-Operation von Shenshu (BL 23). (A) Die Nadel wird schnell senkrecht in den Akupunkturpunkt bis zu einer Tiefe von 0,25 cm unter dem Shenshu eingeführt (BL 23). (B) Sobald die Nadelspitze eine Tiefe von 0,5 cm unter der Hautoberfläche erreicht hat, wird die Nadel in Richtung der Mitte des Akupunkturpunkturpunkts umgelenkt, wodurch ein 45°-Winkel mit der Haut entsteht, und dann schräg bis zu einer Tiefe von 0,5 cm eingeführt. (C) Während der Nadelschaft vorgeschoben wird, wird der Schlauch zurückgezogen, wodurch die vollständige Implantation eines 0,5 cm langen Segments resorbierbarer chirurgischer Naht in das Muskelgewebe am Shenshu (BL 23) Akupunkturpunkt. Abkürzungen: BL = Bladder, steht für den Blasenmeridian, der in der TCM dem Fuß-Taiyang-Meridian entspricht, einem der sechs Yang-Meridiane, die entlang der Rückseite des Körpers und der Beine verlaufen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 5: Das Flussdiagramm des WMW-Tests. Das Anpassungstraining vor dem Experiment wird als Tag 0 bezeichnet, an dem die motorischen Fähigkeiten der Ratten beobachtet und die Schwimmgeschwindigkeit statistisch analysiert wird. Es folgt eine fünftägige Ortsnavigationsphase (Tage 1 bis 5), in der die Latenz zur Flucht (Escape-Latenz) zwischen den verschiedenen Gruppen verglichen und analysiert wird. An Tag 6 wird ein räumlicher Sondenversuch durchgeführt, um die im Zielquadranten verbrachte Zeit (Verweildauer im Zielquadranten) und die Anzahl der Bahnsteigüberquerungen zu bewerten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 6: Vergleich der Schwimmgeschwindigkeit (m/s) zwischen den Gruppen. Diese Abbildung zeigt die mittleren Schwimmgeschwindigkeiten (in Metern pro Sekunde) von Ratten über verschiedene Versuchsgruppen mit jeweils sechs Tieren (n=6). Die Fehlerbalken zeigen die Standardabweichung an. Es wurden keine Unterschiede zwischen den Gruppen festgestellt, wie durch ns (p > 0,05) angezeigt wird. Die statistische Analyse wurde mit Hilfe der SPSS-Software durchgeführt, wobei alle Daten einer Normalverteilung folgten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 7: Die Ergebnisse der Ortsnavigation von WMW. (A) Dieses Panel präsentiert die repräsentativen Bewegungstrajektoriendiagramme, die die Navigationspfade von Ratten innerhalb jeder Versuchsgruppe während der Ortsnavigationsversuche veranschaulichen. (B) Die Escape-Latenzzeit, gemessen in Sekunden (s), wird über die Gruppen hinweg verglichen, wobei jede Gruppe aus sechs Ratten (n=6) besteht. Die statistische Analyse wurde unter Verwendung einer Zwei-Wege-ANOVA mit wiederholten Messungen durchgeführt, um die Effekte der Probanden im Verlauf der Navigationsversuche und die Unterschiede zwischen den Probanden zwischen den Gruppen zu bewerten. Die Daten entsprechen den Annahmen der Normalverteilung und werden als Gruppenmittelwert ± Standardabweichung dargestellt. Signifikante Unterschiede werden durch Sternchen (*p < 0,05, **p < 0,01) im Vergleich zur Kontrollgruppe und durch Hashtags (#p < 0,05, ##p < 0,01) im Vergleich zur Modellgruppe angezeigt. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 8: Die Ergebnisse des Sondenpfads von WMW. (A) Das Panel zeigt repräsentative Bewegungstrajektoriendiagramme, die das räumliche Erkundungsverhalten von Ratten im Sondenversuch innerhalb jeder Versuchsgruppe erfassen. (B) Dieses Diagramm vergleicht die Verweilzeit (in Sekunden, s) innerhalb des Zielquadranten zwischen den Gruppen und spiegelt die Gedächtnisspeicherung der Ratten an den Standort der Plattform wider. (C) Das Diagramm veranschaulicht die Häufigkeit (freq), mit der Ratten den Plattformbereich überquerten, und zeigt ihre räumliche Gedächtnisleistung an. Jede Gruppe bestand aus sechs Ratten (n=6), und die Daten wurden statistisch mit Hilfe einer Einweg-ANOVA analysiert, um die Unterschiede zwischen den Gruppen zu bewerten. Die Daten entsprechen einer Normalverteilung und werden als Mittelwert ± Standardabweichung dargestellt. Signifikante Unterschiede werden durch Sternchen (**p < 0,01) im Vergleich zur Kontrollgruppe und durch Hashtags (#p < 0,05, ##p < 0,01) im Vergleich zur Modellgruppe angezeigt. **p < 0,01 vs. Kontrollgruppe, #p < 0,05 vs. Modellgruppe, ##p < 0,01 vs. Modellgruppe. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Abbildung 9: Beurteilung der Hämatoxylin- und Eosin-Färbung der hippokampalen CA1-Region in Rattengruppen bei 200-facher Vergrößerung. (A) Die Kontrollgruppe weist eine typische neuronale Struktur mit gut erhaltenen Pyramidenzellen auf. (B) Die Modellgruppe zeigt ausgeprägte pathologische Veränderungen, die durch eine deutliche Abnahme der Dichte der Pyramidenzellen, dunkel gefärbte entartete Neuronen und eine ungeordnete Anordnung gekennzeichnet sind. (C) Die TEA-Gruppe zeigt eine verbesserte Hippocampus-Architektur mit einer erhöhten Anzahl von Pyramidenzellen, die geordneter sind und eine normativere Morphologie besitzen. Trotz gelegentlicher Kernkondensation sind die Zellen dichter gepackt, weisen eine gleichmäßige zytoplasmatische Färbung auf und zeigen eine signifikante Verringerung des perizellulären Ödems. Insbesondere das Vorhandensein normativer Pyramidenzellen ist zu beobachten. Maßstabsleiste = 50 μm. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Discussion

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Zeit für die Intervention
Die Ätiologie der Alzheimer-Krankheit ist komplex, und ihre Pathogenese bleibt ungewiss. Derzeit gibt es keine wirksame Behandlung für die Krankheit, und ihr Verlauf ist irreversibel. Daher hat die akademische Gemeinschaft einen Konsens darüber erzielt, wie wichtig es ist, sich auf die Prävention und Behandlung von Alzheimer zu konzentrieren. Die Präventions- und Behandlungsstrategien für AD betonen eine frühzeitige Intervention, indem sie dem TCM-Konzept folgen, bei dem Erkrankungen behandelt werden, bevor sie auftreten, und die Behandlung vor ihrem Beginn, ihrer Übertragung und ihrem Wiederauftreten im Vordergrund steht. Die gesammelte Forschung am Menschen29,30 und an Nagetieren31,32 hat gezeigt, dass eine frühzeitige Akupunktur und Moxibustionsintervention signifikante Ergebnisse ohne offensichtliche Nebenwirkungen erzielen können, was sie zu einer vielversprechenden potenziellen Methode zur Vorbeugung und Behandlung von AD macht. Daher wurde in dieser Studie eine Behandlung während des Modellierungsprozesses durchgeführt. TEAT wurde zu Beginn der intraperitonealen D-Gal-Injektion implementiert.

Auswahl des Akupunkturpunkts
AD ist eine schwere neurodegenerative Erkrankung, die hauptsächlich die Gehirnregionen betrifft, die für Gedächtnis, Sprache, logisches Denken und Sozialverhalten verantwortlich sind. Das Gehirn (Nao) gilt in der TCM als das Markmeer (Sui). Das Knochenmark (Sui) besteht aus Essenz (Jing), einer in der TCM einzigartigen Substanz, von der angenommen wird, dass sie die wesentliche konstitutionelle Stärke, Vitalität und Widerstandsfähigkeit des Körpers ist. Essenz (Jing) wird hauptsächlich in den Nieren (Shen) gespeichert. Wenn die Nierenessenz (Shen Jing) schwach ist, kann es dem Gehirn (Nao) an Nahrung mangeln und es kann zu kognitiven Beeinträchtigungen kommen. Daher schlägt die TCM vor, die Nieren zu tonisieren und die Essenz (Jing) zu nutzen, um die Gehirnfunktion zu verbessern. Das Gehirn kann direkt von bestimmten Meridianen beeinflusst werden, wie z. B. dem Gouverneursgefäß (GV) und dem Blasenmeridian des Fußes Taiyang (BL), wenn sie in das Gehirn gelangen. Die Kombination aus dem Gouverneursgefäß (GV) und dem Blasenmeridian des Fußes Taiyang (BL), die zur Vorbeugung und Behandlung von AD verwendet wird, wird stark genutzt33,34. Baihui (GV 20) ist ein Akupunkturpunkt, der sich am Scheitelpunkt des Kopfes befindet und Teil des Governor-Gefäßes ist. Laut Literatur hat Baihui (GV 20) in Studien, in denen Akupunktur und Moxibustion zur Vorbeugung und Behandlung von AD eingesetzt werden, die höchste Häufigkeit des Auftretens und wird als kritischer Punkt in der Formel35 angesehen. Das Shenshu (BL 23) ist ein Akupunkturpunkt auf dem Blasenmeridian des Fußes Taiyang. Er befindet sich 1,5 cun lateral zum unteren Rand des Dornfortsatzes des zweiten Lendenwirbels. Als Rücktransport-Shu-Punkt der Niere kann er alle Aspekte der Nieren stärken, einschließlich Niere Yin, Yang, Essenz (Jing) und Qi. Akupunktur und Moxibustion in Baihui (GV 20) und Shenshu (BL 23) können die kognitive Funktion verbessern und die AD-Symptome auf verschiedene Weise lindern36,37.

Intervall-Zeit
Die Operationsstandards von TEAT38 schreiben vor, dass das Behandlungsintervall und der Behandlungsverlauf auf der Grundlage des Krankheitszustands und der gewählten Operationsstelle mit einem Abstand von 1 Woche bis 1 Monat festgelegt werden sollten. Der Behandlungsverlauf kann zwischen 1 und 5 Mal liegen. Dieser Anregung kann auch in der Versuchstierforschung gefolgt werden. Basierend auf der überprüften Literatur39 wird die Behandlung in der Regel einmal pro Woche oder alle 2 Wochen durchgeführt, wobei in den meisten Fällen 4-8 aufeinanderfolgende Behandlungen erforderlich sind. Das Experiment dauerte 49 Tage, wobei die Fäden am 14., 28. und 42. Tag vergraben wurden.

Tool und Methoden
In der aktuellen Versuchstierforschung kommen verschiedene Werkzeuge zum Einbetten von Fäden zum Einsatz. Dazu gehören Nr. 740 oder Nr. 941 Einweg-Fadeneinbettnadeln, selbst neu erfundene Nadeln und Nr. 12 Lumbalpunktionsnadel42. Die selbst neu erfundenen Nadeln verwenden Spritzen Nr. 5-7 als Röhrchen und eine entsprechende fadenförmige Nadel für den Nadelkern. Die Nadelspitze wurde im Vorfeld vorgeglättet. In einer Studie mit SD-Ratten mit einem Gewicht von 250 ± 20 g (Monatsalter im Text nicht angegeben) wählen Sie beispielsweise die Spritze Nr. 7 und die 0,30 x 0,40 mm Filiformnadel43,44. Die selbst neu erfundenen Nadeln müssen jedoch streng desinfiziert werden, so dass sie nicht flächendeckend eingesetzt werden können. Wenn die Nadelspitze zu groß oder zu scharf ist, kann sie Blutgefäße und Nerven schädigen und die Wahrscheinlichkeit von Blutergüssen erhöhen45. Lumbalpunktionsnadeln, die einen großen Durchmesser und scharfe Spitzen haben, schädigen mit größerer Wahrscheinlichkeit Blutgefäße und Nerven. Die Einweg-Einbettnadel wird in der klinischen Praxis am häufigsten verwendet39. Es ist bequemer in der Anwendung und sicherer zu bedienen im Vergleich zu selbst neu erfundenen Nadeln und Lumbalpunktionsnadeln, was es ideal für TEAT macht. Darüber hinaus ist das Ziel des Experiments, die menschliche Gesundheit zu verbessern. Daher sollten Tierversuche die klinische Situation widerspiegeln. Daher ist es ratsam, Einwegnadeln zum Einbetten von Fäden als Werkzeuge zum Einbetten von Fäden zu verwenden.

Catgut war das primäre Fadenmaterial, das in TEAT verwendet wurde, aber aufgrund von Gewebeabstoßung und tierischen Inhaltsstoffen wurde es durch biosynthetische resorbierbare chirurgische Nähte ersetzt. Nähte sind in verschiedenen Größen erhältlich und sollten auf die Nadel abgestimmt sein, wie z.B. Nr. 7 für 4-0 oder 3-0 Nähte. In Tierversuchen werden hauptsächlich 3-041, 4-046 und 5-047 verwendet. Die meisten Nähte sind 1-2 cm lang. Nagetiere haben jedoch einen viel kleineren Körper als Menschen, so dass es an einer angemessenen Größe für ihre Körpergröße mangelt. Daher müssen die Forscher die Nähte in 0,2 bis 0,5 cm große Segmente schneiden, um sie für Nagetiere geeignet zu machen. Daher wird empfohlen, die Nähte nach dem Schneiden und vor dem Einweichen für die spätere Verwendung oder sofortige Anwendung mit sauberem und sterilem destilliertem Wasser oder Kochsalzlösung zu spülen, um das Infektionsrisiko zu verringern46.

Einige Studien haben detaillierte Anforderungen an die Einbettungsmethode vorgeschlagen, wie z. B. das schnelle Einführen von Nadeln in den Akupunkturpunkt von etwa 0,5 cm unterhalb des Akupunkturpunkts in Richtung des Akupunkturpunkts48. Dies ist wichtig, da Nagetiere klein sind. Neben dem reichlich vorhandenen Muskelgewebe in den unteren Gliedmaßen ist das Unterhautgewebe und die Muskelschichten im Kopf, Rücken und Bauch relativ schwach. Daher muss hier die Frage der Insertionspunkte und des Insertionswinkels von TEAT in der Tierforschung hervorgehoben werden. Bei der Durchführung von TEAT an den unteren Gliedmaßen von Nagetieren ist eine direkte Vernadelung an den Akupunkturpunkten möglich. Was den Körper betrifft, so empfiehlt es sich, die Nadel unterhalb der Akupunkturpunkte einzuführen (der Abstand kann flexibel an die Länge des Fadenkörpers angepasst werden) mit einer schrägen Nadelung (<45°) oder einer flachen Nadelung (<15°), um eine Schädigung der inneren Organe zu vermeiden.

Potenzial von TEAT für die Prävention und Behandlung der Alzheimer-Krankheit
In jüngster Zeit entsteht die Forschung zu TEAT, obwohl seine Wirkungen und Mechanismen noch schwer fassbar sind. Wie oben erwähnt, kann TEAT AD-bedingte Risikofaktoren wie Fettleibigkeit13,14, Diabetes15, Schlaflosigkeit16, postmenopausale Osteoporose17 und Depression18 verbessern. Es hat eine positive Wirkung auf Lern- und Gedächtnisstörungen bei VD-Ratten19. TEAT reguliert den Lipidstoffwechsel über den PPAR-Signalweg, um Gewebeverletzungen bei belastungsinduzierten, erschöpften Rattenzu verbessern 49 und übt bei intermittierenden Mäusen, die durch Kältestress induziert werden, über den TRPV1-Signalweg50 entzündungshemmende und analgetische Wirkungen aus. In der vorliegenden Studie konnten wir zeigen, dass eine Fadeneinbettungsbehandlung bei AD-ähnlichen Ratten Lern- und Gedächtnisstörungen lindern kann, indem sie den Verlust des räumlichen Gedächtnisses verbessert und degenerierte Zellen in hippokampalen CA1-Regionen reduziert. Aufgrund des Mangels an Einheitlichkeit und Standardisierung in mehreren kritischen Elementen des TEST-Betriebs, einschließlich der Einbettungsmethode, des Einbettungswerkzeugs, des Gewindes und des Einbettungsintervalls, werden in diesem Artikel jedoch hauptsächlich die kritischen Betriebselemente von TEAT in der experimentellen Forschung diskutiert. Diese Forschung war nur eine vorläufige Erforschung der Wirkung von TEAT auf AD, die viel mehr Ergänzung und Verbesserung bei der Klärung der genauen Moleküle und Wechselwirkungen zwischen ihnen erforderte. Nichtsdestotrotz bot es einen neuen Versuch für den unvermeidlichen AD-Prozess, der das öffentliche Gesundheitssystem irgendwie entlasten könnte.

Disclosures

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Die Autoren erklären, dass sie nichts offenzulegen haben.

Acknowledgements

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Diese Arbeit wurde mit Mitteln der National Natural Science Foundation of China (NSFC) Nr. 82374564 (bis YJD) und Nr. 82074566 (bis YJD) und von der Sun Guojie Inheritance Base for TCM Acupuncture-Moxibustion der World Federation of Acupuncture-Moxibustion Societies in Wuhan, China (World Federation of Acupuncture-Moxibustion Societies [2019] Nr. 26) (bis YJD) und dem Bauprojekt National Famous TCM Inheritance Studio der National Administration of Traditional Chinese Medicine unterstützt. China (die Nationale Verwaltung für Traditionelle Chinesische Medizin [2022] Nr. 5) (an YJD).

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0,9 % Kochsalzlösung, 4 % Paraformaldehyd, Hämatoxylin, Eosin Y (wasserlöslich), absolutes Ethanol, 0,01 M PBS-Pulver, Xylol, Salzsäure, eingebettetes Paraffin, neutrales GummiSinopharm (www.sinopharm.com)
5-0 resorbierbares chirurgisches NahtmaterialBodamedical (www.bodamedical.com)
70 % Alkohol, Jodophor, WattebauschZur Desinfektion verwendet.
ChloralhydratSigmaC8383
Deckgläser, GlasobjektträgerGuangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd
DörrgerätWuhan Junjie JT-12J Computerisiertes biologisches Gewebedörrgerät
DELUXE THERMOSTAT HEAT MATZhenhua InstrumenteZur Aufrechterhaltung der Körpertemperatur von Ratten.
D-GalactoseSigmaG0750
elektrischer BartschneiderWird zum Rasieren von Ratten verwendet.
Elektronische Waage für Kleintiere (ZK-DST)Henan Zhike Information Technology Co., Ltd
Erythromycin SalbeFrontpharm
GlasschaleWird zum Platzieren von geschnittenen resorbierbaren Nähten verwendet.
Hochdruck-Dampfsterilisationsopfer (YM100Z)Shanghai Sanshen FabrikZur Sterilisation von chirurgischen Instrumenten.
Eismaschine (CMB40)Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
Mikroskop (BX-53)OLYMPUS
MilchpulverWird für den MWM Test verwendet.
Morris Water Maze Video-Tracking-System & Datenanalyse-Software (Version: Watermaze 2.0)Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd
Nr.6 Fadeneinbettnadelbodamedical (www.bodamedical.com)
ophthalmische Schere, Tabletts, Pinzette
Pathologie Mikrotom  (RM 2016)LEICA, Deutschland
PentobarbitalDeutschlandP11011
PermanentmarkerWird verwendet, um den Akupunkturpunkt zu markieren.
Schneidemesser (R35)Federn, japanische
SeifeWird zum Händewaschen verwendet.
sterile Handschuhe
für Männer für medizinische Geräte

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Huang, W., et al. Acupoint catgut embedding for obesity: A protocol systematic review. Medicine (Baltimore). 99 (51), e23728(2020).
  2. Zhou, M., et al. Acupoint catgut embedding improves senescence in a rat model of ageing by regulating mitophagy via the pink1 pathway. J Cell Mol Med. 25 (8), 3816-3828 (2021).
  3. Zhang, X., et al. Acupoint catgut-embedding therapy: Superiorities and principles of application. Zhongguo Zhen Jiu. 32 (10), 947-951 (2012).
  4. Lin, J., Deng, Q. Observation on therapeutic effect of 160 cases of epilepsy treated with acupoint catgut embedding therapy. Zhongguo Zhen Jiu. 36 (11), 14-15 (2001).
  5. Li, L. Acupuncture combined with catgut embedding therapy for treatment of 158 cases of facial paralysis. Zhongguo Zhen Jiu. 25 (3), 23-24 (2005).
  6. Wang, J., Wu, Z., Huo, J., Yuan, Y. Questionnaire investigation on cost-effectiveness analysis of acupuncture for migraine. Zhongguo Zhen Jiu. 35 (4), 377-383 (2015).
  7. Huang, L., Pan, W. Comparation of effect and cost-benefit analysis between acupoint catgut-embedding and electroacupuncture on simple obesity. Zhongguo Zhen Jiu. 31 (10), 883-886 (2011).
  8. Jack, C. R., et al. Tracking pathophysiological processes in alzheimer's disease: An updated hypothetical model of dynamic biomarkers. Lancet Neurol. 12 (2), 207-216 (2013).
  9. Sperling, R. A., et al. Toward defining the preclinical stages of alzheimer's disease: Recommendations from the national institute on aging-alzheimer's association workgroups on diagnostic guidelines for alzheimer's disease. Alzheimer's Dementia. 7 (3), 280-292 (2011).
  10. Guzman-Martinez, L., et al. New frontiers in the prevention, diagnosis, and treatment of alzheimer's disease. J Alzheimers Dis. 82, S51-S63 (2021).
  11. Yang, W. T., et al. Chinese herbal medicine for alzheimer's disease: Clinical evidence and possible mechanism of neurogenesis. Biochem Pharmacol. 141, 143-155 (2017).
  12. Zhao, J. L., Yang, J., Ding, L., Wang, F., Lin, L. A review of the pathogenesis and chinese medicine intervention of alzheimer's disease. J Integr Neurosci. 22 (1), 2(2022).
  13. Chen, I. J., Yeh, Y. H., Hsu, C. H. Therapeutic effect of acupoint catgut embedding in abdominally obese women: A randomized, double-blind, placebo-controlled study. J Womens Health (Larchmt). 27 (6), 782-790 (2018).
  14. Zhang, X., et al. Effect of catgut embedding at acupoints versus non-acupoints in abdominal obesity: A randomized clinical trial. J Tradit Chin Med. 43 (4), 780-786 (2023).
  15. Xia, T., Yang, Y., Li, W., Tang, Z., Guo, Y. Acupoint catgut embedding for diabetic gastroparesis: A protocol of systematic review. Medicine (Baltimore). 98 (43), e17718(2019).
  16. Xu, F., et al. Acupoint catgut embedding alleviates insomnia in different chinese medicine syndrome types: A randomized controlled trial. Chin J Integr Med. 25 (7), 543-549 (2019).
  17. Shi, N., et al. Effects of acupoint catgut embedding on the postmenopausal osteoporosis patients and related mechanism. Am J Transl Res. 13 (3), 1789-1798 (2021).
  18. Li, Y., Zhou, J., Wei, Z., He, X., Kejimu, S. The efficacy and safety of acupoint catgut embedding therapy for depression: A protocol for systematic review and meta-analysis. Front Psychiatry. 14, 1331780(2023).
  19. Zhu, S., et al. Acupoint catgut embedding improves learning and memory impairment in vascular dementia rats. Ann Transl Med. 11 (2), 108(2023).
  20. Yu, C. C., et al. Preventive electroacupuncture ameliorates d-galactose-induced alzheimer's disease-like pathology and memory deficits probably via inhibition of gsk3β/mtor signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2020, 1428752(2020).
  21. He, C., et al. Preventive electroacupuncture ameliorates d-galactose-induced alzheimer's disease-like inflammation and memory deficits, probably via modulating the microbiota-gut-brain axis. Iran J Basic Med Sci. 24 (3), 341-348 (2021).
  22. Hong, X. P., et al. Puerarin ameliorates d-galactose induced enhanced hippocampal neurogenesis and tau hyperphosphorylation in rat brain. J Alzheimers Dis. 51 (2), 605-617 (2016).
  23. Gao, S., Li, R., Tian, H. H. Research progress of Shenshu (BL 23). Zhongguo Zhen Jiu. 37 (8), 845-850 (2017).
  24. Su J, S. K., Wyss, J. m Sripanidkulchai B. Curcuma comosa improves learning and memory function on ovariectomized rats in a long-term morris water maze test. J Ethnopharmacol. 130 (1), 70-75 (2010).
  25. Gage Gj, K. D., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. J Vis Exp. (65), e3564(2012).
  26. Jacobowitz, D. M. Removal of discrete fresh regions of the rat brain. Brain Res. 80 (1), 111-115 (1974).
  27. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. Ilar j. 55 (2), 310-332 (2014).
  28. Zhou, J., et al. Methodology of morris water maze for detecting animal learning and memory levels. Chinese Journal of gerontology. 37 (24), 4(2017).
  29. Wang, Y., et al. Effectiveness and safety of acupuncture for the treatment of Alzheimer's disease: A systematic review and meta-analysis. Front Aging Neurosci. 12, 98(2020).
  30. Jia, Y. J., et al. Acupuncture for patients with mild to moderate alzheimer's disease: A randomized controlled trial. BMC Complement Altern Med. 17 (1), 556(2017).
  31. Yu, C. C., et al. Experimental evidence of the benefits of acupuncture for alzheimer's disease: An updated review. Front Neurosci. 14, 549772(2020).
  32. Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of tfeb (transcription factor eb). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
  33. Hu, J., Zhao, J., Lu, M., Li, Z. Treatment of alzheimer's disease by using "tongdu qishen" acupuncture therapy. World Science and Technology-Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 22 (8), 2634-2640 (2020).
  34. Liang, X., et al. Visualization analysis of literature on acupuncture-moxibustion treatment of alzheimer's disease based on citespace. World Science and Technology-Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 24 (10), 3998-4006 (2022).
  35. Xia, Y. W., et al. Acupoint selection rules in treating alzheimer's disease with acupuncture and moxibustion in china and abroad based on data mining. Journal of Yunnan University of Chinese Medicine. 44 (02), 46-52 (2021).
  36. Zhang, H., Zhu, M., Zhang, W. Effects of serum acetyl choline and amyloid-beta protein by using acupuncture baihui ( gv20) and yongguan ( ki1) acupoint to treat patients with alzheimer disease. World Chinese Medicine. 13 (11), 2855-2857 (2018).
  37. Wang, Y. Y., et al. effect of electroacupuncture of different acupoint groups on learning-memory ability and expression of il-1β and tnf-α in hippocampus and prefrontal cortex in rats with alzheimer's disease. Zhen Ci Yan Jiu. 45 (8), 617-622 (2020).
  38. Guan, L., Zuo, F., Song, Q., Shi, X. study on standardization of thread-embedding technique: Elucidation on the establishment of the national standard standardized manipulation of acupuncture and moxibustion, part x, thread-embedding. Zhongguo Zhen Jiu. 29 (5), 401-405 (2009).
  39. Cheng, L., et al. bibliometric analysis on key elements of clinical application of acupoint catgut embedding therapy in recent ten years. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (9), 830-836 (2022).
  40. Dan, Y. Experimental study on the effects of acupoint thread burial and acupoint injection on insulin resistance and islet morphology in diabetic rats. Hubei University of Traditional Chinese Medicine. , (2015).
  41. Huang, Y. To investigate the regulation of th1/th2 balance in rats with allergic rhinitis by acting on dc at yingxiang acupoint thread burial. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2020).
  42. Zhang, X. Y., Shen, L., Fan, H., Liao, Y., Liang, L. Influence of catgut implantation at acupoints on splenic lymphocyte nuclear factor (nf-κb p65) and correlated signaling molecules (β2ar) in rats with experimental colitis. World J Acupuncture-Moxibustion. 20 (4), 48-53 (2010).
  43. Yu, Q. H. Experimental study on the effect of acupoint thread insertion combined with moxibustion on il-6/jak/stat3 signaling pathway in rats with ulcerative colitis. Guizhou Medical University. , (2020).
  44. Wang, Y. J., et al. Effect of moxibustion combined with acupoint catgut embedding on il-6/jak/stat3 signaling pathway in colonic mucosa of ulcerative colitis rats. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (6), 525-530 (2022).
  45. Ke, C., et al. Application development of acupoint embedding line body and needle. China J Tradl Chinese Med Pharm. 35 (11), 5644-5647 (2020).
  46. Yue, Y. R., et al. Regulatory effect of acupoint thread-embedding therapy at the shu points of the five organs on the hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis in senescent rats under stress. Hunan J Tradl Chinese Med. 34 (05), 180-182 (2018).
  47. Bao, J. Experimental study on the intervention of acupoint thread insertion in the expression of bcl-2 and bax in cochlear spiral ganglion cells in presbycus mice. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  48. Liu, M. Effect of acupoint thread insertion on nasal mucosa th1/th2, treg/th17 in rats with allergic rhinitis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2013).
  49. Song, Y., et al. Acupoint catgut embedding improves lipid metabolism in exercise-induced fatigue rats via the ppar signaling pathway. Animals (Basel). 13 (4), 558(2023).
  50. Lai, P. C., Yen, C. M., Hsiao, I. H., Chen, Y. H., Lin, Y. W. Acupoint catgut embedding diminishes fibromyalgia pain through trpv1 in the mouse brain. J Integr Neurosci. 22 (4), 97(2023).

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