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Methodenartikel

Immunfluoreszenz-Markierung in Nasenschleimhaut-Gewebeschnitten von Ratten mit allergischer Rhinitis mittels Multicolor-Immunoassay

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DOI:

10.3791/65937

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22. September 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Meishan Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine mehrfarbige Immunfluoreszenztechnik zur Evaluierung des Rattenmodells der allergischen Rhinitis.

Zusammenfassung

Allergische Rhinitis (AR) ist eine chronische, nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die hauptsächlich durch spezifisches Immunglobulin E (IgE) vermittelt wird und etwa 10%-20% der Weltbevölkerung betrifft. Während die Immunfluoreszenzfärbung (IF) seit langem eine Standardtechnik zum Nachweis der krankheitsspezifischen Proteinexpression ist, sind herkömmliche IF-Techniken nur begrenzt in der Lage, die Expressionsniveaus von drei oder mehr Proteinen in derselben Probe nachzuweisen. Folglich wurden in den letzten Jahren mehrfarbige IF-Techniken entwickelt, die die gleichzeitige Markierung mehrerer Ziele in Zellen oder Geweben ermöglichen.

Dieses Protokoll bietet einen umfassenden Überblick über den Prozess zur Etablierung eines Rattenmodells der AR, zur Gewinnung von Nasenschleimhautproben und zu den technischen Verfahren für die mehrfarbige Immunfluoreszenz. Alle Ratten in der AR-Gruppe zeigten typische Symptome wie Niesen, eine laufende Nase und eine juckende Nase, wobei die Verhaltensbeobachtungen ≥5 Punkte erreichten. Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung (H&E) zeigte eine erhöhte Anzahl von Entzündungszellen und eine gestörte Integrität der Nasenschleimhaut in der AR-Gruppe. Die mehrfarbige Immunfluoreszenz (mIF) zeigte eine erhöhte Expression von RORγt und TICAM-1, während die Foxp3-Expression im Nasenschleimhautgewebe von AR-Ratten abnahm.

Einleitung

Die allergische Rhinitis (AR) ist eine chronische, nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die hauptsächlich durch spezifisches Immunglobulin E (IgE)1,2 vermittelt wird. Sie ist gekennzeichnet durch Symptome wie Niesen, laufende Nase, verstopfte Nase und Juckreiz in der Nase. Mit der Industrialisierung und Urbanisierung nimmt die Verbreitung von AR allmählich zu und betrifft etwa 10 % bis 20 % der Weltbevölkerung1. Die Immunfluoreszenztechnik (IF) ist eine Fluoreszenzfärbemethode, bei der eine Antikörper-Antigen-Bindungsreaktion verwendet wird. Es kann eingesetzt werden, um die Verteilung und Expression bestimmter Proteine in biologischen Geweben oder Zellen zu erkennen und zu quantifizieren. In der AR-Forschung kann IF mehrere Ziele gleichzeitig erkennen, darunter AR-bezogene Zytokine, Entzündungszellen, Rezeptoren und mehr, was die Erforschung der AR-Pathogenese und der Wirkung von Medikamenten erleichtert 3,4,5,6.

Das mehrfarbige Immunfluoreszenz-Färbeverfahren (mIF) ähnelt stark dem traditionellen IF-Färbeverfahren, wobei bei jeder Färberunde ein Antikörper-Elutionsschritt hinzugefügt wird. Diese Modifikation ermöglicht den gleichzeitigen Nachweis mehrerer Biomarker auf demselben Gewebeschnitt durch sequentielle Einzelmarkierung und mehrere Runden der Re-Färbung. mIF basiert auf der Tyramid-Signalverstärkung (TSA), die wiederholte Zyklen der TSA-Fluoreszenzfärbung und die Verwendung von Mikrowellenheizung zur Entfernung von Antikörpern unter Beibehaltung der Fluoreszenzsignale ermöglicht 7,8. Im Vergleich zu herkömmlichen IF bietet mIF mehrere Vorteile: (1) Es kann schwach exprimierte Antigene nachweisen, die mit konventionellem IF 9,10 nur schwer zu identifizieren sind; (2) Es bietet eine qualitativ hochwertige Färbung mit einem verbesserten Signal-Rausch-Verhältnis; (3) Es ermöglicht die Quantifizierung gewebespezifischer Strukturen und Regionen von Interesse11; (4) Multiplexing mehrerer Signalwege nutzt Gewebe effizient aus und schont begrenzte pathologische Ressourcen12; (5) Die Multiparameter-Analyse mittels mIF bietet tiefere Einblicke in Gewebe und deckt verborgene biologische Informationen auf13.

Insgesamt ermöglicht mIF die Beobachtung verschiedener Antigenexpressionen und -verteilungen innerhalb derselben Probe, was die Untersuchung von Zielproteinen erleichtert. In Zukunft werden Forscher, die die Expression und Verteilung mehrerer Zielproteine verstehen wollen, diese Technik als wertvolle Wahl empfinden. Diese Studie demonstriert die Anwendung von mIF zur Färbung von Nasenschleimhautproben von Ratten mit AR und evaluiert die Etablierung eines Rattenmodells für AR.

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Protokoll

Das Versuchsprotokoll und die Verfahren wurden vom Verwaltungs- und Tierforschungsausschuss der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine genehmigt (Datensatznummer: 2022DL-010). Acht Wochen alte männliche Sprague Dawley (SD)-Ratten mit einem Gewicht von 180-200 g wurden kommerziell gewonnen (siehe Materialtabelle) und unter einem natürlichen Hell-Dunkel-Zyklus mit kontrollierter Temperatur (23 ± 2 °C) und relativer Luftfeuchtigkeit (55 % ± 10 %) gehalten. Zwölf Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in zwei Gruppen eingeteilt: die Kontrollgruppe und die AR-Gruppe. Alle Ratten wurden an diese Bedingungen gewöhnt und erhielten vor dem Versuch eine Woche lang freien Zugang zu Futter und Wasser.

1. Etablierung eines Rattenmodells der AR

  1. Herstellung der sensibilisierenden Lösung: 30 mg Ovalbumin (OVA) und 3 g Al(OH)3 in 100 ml Kochsalzlösung suspendieren (siehe Materialtabelle)14,15.
  2. Grundlegende Sensibilisierung: Fassen und halten Sie die voll wache Ratte mit dem Bauch nach oben. Desinfizieren Sie den Bauch mit 75% alkoholgetränkten Wattebäuschen. Verwenden Sie eine 1,5-ml-Spritze, um 1 ml der in Schritt 1.1 hergestellten sensibilisierenden Lösung in die linke Bauchhöhle der Ratten in der AR-Gruppe zu injizieren. Wiederholen Sie diese Injektion 14 Tage lang einmal alle zwei Tage (Abbildung 1A).
    HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Kopf der Ratte tiefer als ihr Schwanz positioniert ist, um Schäden am Dick- und Dünndarm beim Einführen der Spritze zu vermeiden. Die Injektionsstelle befindet sich 1,5 cm von der ventralen Mittellinie entfernt. Ratten in der Kontrollgruppe sollten 14 Tage lang alle zwei Tage intraperitoneale Injektionen von 1 ml normaler Kochsalzlösung erhalten.
  3. Nasale Provokation: Verabreichen Sie 50 μl 5%ige OVA über Nasentropfen mit einer 100-μl-Pipette (Abbildung 1B) am Tag nach der basalen Sensibilisierung und wiederholen Sie diesen Vorgang 7 Tage lang (Abbildung 1C).
    HINWEIS: Bereiten Sie die 5%ige OVA-Lösung vor, indem Sie 5 g OVA mit 100 ml Kochsalzlösung mischen. Verabreichen Sie der Kontrollgruppe Tropfen des gleichen Volumens Kochsalzlösung.

2. Verhaltens-Scoring von Ratten

  1. Beobachten und zeichnen Sie die Ratten innerhalb von 30 Minuten nach Abschluss der letzten nasalen Herausforderung mit einer Digitalkamera auf, um Symptome wie Nasenkratzen, Niesen und eine laufende Nase basierend auf den in Tabelle 1 (Abbildung 1D) beschriebenen Bewertungskriterien zu identifizieren.
    HINWEIS: Die Bestätigung einer erfolgreichen AR-Modellierung basiert auf dem Erreichen einer Gesamtpunktzahl von ≥5 Punkten14.

3. Entnahme von Nasenschleimhautproben

  1. Ratten opfern: Opfern Sie die Ratten, indem Sie sie einer Überdosis CO2 aussetzen. Desinfizieren Sie die Ratten anschließend mit 75%igem Ethanol (siehe Materialtabelle). Verwenden Sie ein Skalpell, um einen Schnitt entlang der beiden Mundwinkel zu machen, um das Muskelgewebe freizulegen (Abbildung 2A). Als nächstes werden die Gelenke des Jochbeins und des Unterkiefers auf beiden Seiten des Schädels mit einer Gewebeschere durchtrennt (Abbildung 2B) und der Unterkiefer entfernt (Abbildung 2C).
  2. Freilegung der Nasenhöhle: Trennen Sie die Haut des Oberkiefers mit einem Hämostat (Abbildung 2D) ab, um die Nasenhöhle freizulegen (Abbildung 2E). Durchtrennen Sie die knöcherne Verbindung zwischen Nasenhöhle und Oberkiefer mit einer Gewebeschere (Abbildung 2F). Dann wird die Verbindung zwischen der Nasenhöhle und den Augenhöhlen beidseits am Foramen infraorbitalis durchtrennt (Abbildung 2G) und die Nasenhöhle entfernt (Abbildung 2H).
  3. Fixierung: Die extrahierte Nasenhöhle wird zur Fixierung in 4% Paraformaldehyd gelegt und 24-72 h bei Raumtemperatur gelagert (siehe Materialtabelle).
    HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass die Menge des verwendeten Paraformaldehyd-Fixiermittels ausreicht, um die Abschnitte für eine ordnungsgemäße Fixierung vollständig zu bedecken.

4. Vorverarbeitung von Nasenschleimhautproben

  1. Entkalkung: Beginnen Sie mit der Fixierung des entfernten Gewebes aus Schritt 3.1. Waschen Sie sie dreimal mit PBS für jeweils 20 Minuten. Waschen Sie sie anschließend dreimal mit destilliertem Wasser, jeweils 20 Minuten lang. Anschließend wird das Gewebe in einer Entkalkungslösung mit einem Volumen von 20-30 mal so groß wie das Gewebe bei Raumtemperatur entkalkt.
    1. Die Entkalkungslösung (siehe Materialtabelle) sollte einen pH-Wert von 7,2-7,4 aufweisen. Zum Schluss legen Sie das entkalzte Gewebe in eine Dehydrierbox.
      HINWEIS: Die Entkalkungslösung muss wöchentlich gewechselt werden. Der Entkalkungsprozess kann abgeschlossen werden, wenn das Gewebe weicher wird (ca. 2 Monate).
  2. Dehydrierung und Waxing: Füllen Sie die Dörrbox in einen Dörrautomat (siehe Materialtabelle). Beginnen Sie mit 75 % Alkohol für 4 Stunden, gefolgt von 85 % Alkohol für 2 Stunden, 90 % Alkohol für 2 Stunden und 95 % Alkohol für 1 Stunde.
    1. Tauchen Sie anschließend das Gewebe für 30 Minuten in wasserfreies Ethanol, wiederholen Sie den Vorgang für weitere 30 Minuten, verwenden Sie Xylol für 5-10 Minuten, wiederholen Sie diesen Schritt für weitere 5-10 Minuten, tauchen Sie das Gewebe 1 Stunde lang in Wachs, wiederholen Sie diesen Schritt für eine weitere Stunde und tauchen Sie das Gewebe schließlich für weitere 1 Stunde in Wachs.
  3. Einbetten: Legen Sie den geschmolzenen Wachsblock in die Einbettbox (siehe Materialtabelle) und lagern Sie ihn in einem Gefrierschrank bei -20 °C. Sobald sich das Wachs verfestigt hat, entferne es und schneide den Wachsblock ab.
  4. Schneiden: Den getrimmten Wachsblock in ein Paraffinmikrotom (siehe Materialtabelle) stecken und in 3 μm dicke Scheiben schneiden. Die Scheiben in ein 40 °C warmes Wasserbad auf einen Objektträgerstreuer legen. Das Tuch flach drücken, dann mit einem Objektträger anheben und bei 60 °C backen.
    1. Nachdem das Wasser verdunstet ist und das Wachs richtig ausgehärtet ist, entfernen Sie die Objektträger und lagern Sie sie bei einer Temperatur von 25 °C.

5. H&E-Färbung von Nasenschleimhautgewebe

  1. Entwachsung und Hydratation: Legen Sie die Scheiben für 20 Minuten in Xylol, wiederholen Sie den Vorgang für weitere 20 Minuten, absolutes Ethanol für 5 Minuten, wiederholen Sie diesen Schritt für weitere 5 Minuten, 75% Alkohol für 5 Minuten und waschen Sie schließlich 5 Minuten lang.
  2. Hämatoxylin-Färbung: 100 μl Hämatoxylin-Färbelösung (siehe Materialtabelle) für 3-5 Minuten mit einer 100-μl-Pipette abgeben, 5-10 s lang spülen, 100 μl 0,5%iges Salzsäure-Ethanol für 10-30 s hinzufügen, 5-10 s spülen, 100 μl 0,2%iges Ammoniakwasser für 10-30 s hinzufügen und 30 s lang spülen.
    HINWEIS: Nach der Hämatoxylin-Färbung ist eine Differenzierung mit 0,5% Salzsäure-Ethanol erforderlich, um überschüssigen Hämatoxylin-Farbstoff zu entfernen, der an den Zellkern gebunden und vom Zytoplasma absorbiert wird. Wenn eine Eosin-Färbung durchgeführt wird, werden die Zellkerne und das Zytoplasma deutlich gefärbt. Die Scheiben erscheinen nach der Differenzierung mit 0,5%igem Salzsäure-Ethanol rot oder rosa, also spülen Sie sofort nach der Differenzierung ab, um die Säure aus den Gewebeschnitten zu entfernen und die Differenzierung zu stoppen. Verwenden Sie dann 0,2 % Ammoniakwasser, um die Kernfärbung zu verbessern.
  3. Eosin-Färbung: Verwenden Sie eine 100-μl-Pipette, um 100 μl Eosin-Färbelösung (siehe Materialtabelle) für 5 Minuten zu dosieren und 30 s lang zu spülen.
  4. Dehydrierung und Versiegelung: Tauchen Sie die Scheiben 5 Minuten lang in absolutes Ethanol, wiederholen Sie den Vorgang für weitere 5 Minuten, wiederholen Sie den Vorgang noch einmal für 5 Minuten, Dimethyl für 5 Minuten und Xylol für 5 Minuten. Zum Schluss mit Neutralharz abdichten (siehe Materialtabelle).
  5. Platzieren des gefärbten Schnitts auf dem Mikroskop: Positionieren Sie den gefärbten Bereich auf dem Mikroskop, stellen Sie den Fokus des Mikroskops ein, bis das Bild deutlich sichtbar ist, stellen Sie die Vergrößerung auf 40x ein und nehmen Sie das Bild auf.

6. Mehrfarbige Immunfärbung von Nasenschleimhautgewebe

  1. Entwachsung und Hydratation: Befolgen Sie die Anweisungen in Schritt 5.1.
  2. Citrat-Phosphat-Puffer-Behandlung: Citrat-Phosphat-Puffer (pH 6,0) (siehe Materialtabelle) in einen mikrowellengeeigneten Behälter geben. Erhitzen Sie es, bis es kocht, nehmen Sie es heraus und geben Sie dann die Objektträger in den Behälter. 8 Minuten lang bei mittlerer Hitze in der Mikrowelle erhitzen, bis sie kochen, den Herd für 8 Minuten ausschalten und dann für 7 Minuten auf mittlere bis niedrige Hitze umschalten.
    1. Nach dem natürlichen Abkühlen die Scheiben in PBS (pH 7,4) geben, schütteln und dreimal mit einem Entfärbungsshaker waschen, jeweils 5 Minuten lang.
      HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Puffer während dieses Vorgangs nicht verdunstet, und verhindern Sie, dass die Scheiben austrocknen.
  3. Blockieren der endogenen Peroxidase: Trocknen Sie die Scheiben, ziehen Sie mit einem immunhistochemischen Stift einen Kreis um das Gewebe (um zu verhindern, dass der Antikörper wegfließt) und tragen Sie 3%ige Wasserstoffperoxidlösung auf (Wasserstoffperoxid: reines Wasser = 1:9).
    1. Bei Raumtemperatur im Dunkeln 15 min inkubieren. Nach dem natürlichen Abkühlen legen Sie die Scheiben in PBS (pH 7,4) und schütteln Sie sie auf einem Entfärbungsschüttler für drei Zyklen von jeweils 5 Minuten.
  4. Blockierung: 5% Ziegenserum innerhalb des Kreises auftragen und 30 Minuten inkubieren.
  5. Zugabe von Primärantikörpern: Entfernen Sie vorsichtig die blockierende Lösung, geben Sie FOXP3 (Verdünnung: 1:200, siehe Materialtabelle) in die Scheibe und legen Sie sie in eine feuchte Kammer. Über Nacht bei 4 °C inkubieren.
    HINWEIS: Geben Sie eine kleine Menge Wasser in die feuchte Kammer, um die Verdunstung der Antikörper zu verhindern.
  6. Zugabe von sekundären Antikörpern: Geben Sie die Scheiben in PBS (pH 7,4) und schütteln Sie sie auf einem Entfärbungsschüttler für drei Zyklen von jeweils 5 Minuten. Trocknen Sie die Scheiben vorsichtig ab und tragen Sie den Sekundärantikörper (Goat Anti-Rabbit IgG H&L, siehe Materialtabelle) innerhalb des Kreises auf. Bei Raumtemperatur 50 Minuten im Dunkeln inkubieren.
  7. Herstellung der Tyramid-Verdünnungslösung: 100 μl 3 %H2O2mit 100 ml 1x TBST vermischen (siehe Materialtabelle).
  8. Zugabe von TSA-Arbeitslösung: Mischen Sie 1 ml Tyramid-Verdünnungsmittel mit 2 μl CY3-Tyramid, um die TSA-Arbeitslösung herzustellen. 100 μl TSA-Arbeitslösung auf jede Scheibe geben und bei Raumtemperatur im Dunkeln 10 Minuten lang inkubieren. Waschen Sie die Scheiben dann dreimal mit PBS, jeweils 5 Minuten.
    HINWEIS: Bereiten Sie die TSA-Arbeitslösung sofort vor, verwenden Sie sie und lagern Sie sie bei 4 °C im Dunkeln. Sie ist bis zu 24 h gültig.
  9. Wiederholen Sie die Schritte 6.2-6.8: Wechseln Sie zu einer 1:200-Verdünnung von RORγt (FITC-Fluoreszenzfarbstoff) und dann zu einer 1:200-Verdünnung von TICAM1 (TYP620-Farbstoff) (siehe Materialtabelle).
  10. DAPI-gegengefärbte Kerne: Schütteln Sie die Scheiben vorsichtig, um sie zu trocknen, tragen Sie DAPI-Färbelösung auf und inkubieren Sie sie 10 Minuten lang bei Raumtemperatur im Dunkeln.
  11. Autofluoreszenz löschen: Die Scheiben in PBS (pH 7,4) legen und drei Zyklen à 5 Minuten lang auf einem Entfärbungsschüttler schütteln. Den Autofluoreszenzlöscher (siehe Materialtabelle) auf die Scheiben auftragen, 5 Minuten warten und dann 10 Minuten waschen.
  12. Blockierung: Legen Sie die Scheiben in PBS (pH 7,4) und schütteln Sie sie auf einem Entfärbungsschüttler für drei Zyklen von jeweils 5 Minuten. Schütteln Sie die Scheiben vorsichtig, um sie zu trocknen, und versiegeln Sie sie mit dem Anti-Fluoreszenz-Quencher (siehe Materialtabelle).
  13. Mikroskopie: Legen Sie den gefärbten Bereich auf das Mikroskop, stellen Sie den Fokus des Mikroskops für eine klare Sicht ein, stellen Sie die Vergrößerung auf 20x und 40x ein und nehmen Sie das Bild auf.
    HINWEIS: DAPI hat eine UV-Anregungswellenlänge von 330-380 nm und eine Emissionswellenlänge von 420 nm (blaues Licht). FITC hat eine Anregungswellenlänge von 465-495 nm und eine Emissionswellenlänge von 515-555 nm (grünes Licht). CY3 hat eine Anregungswellenlänge von 510-560 nm und eine Emissionswellenlänge von 590 nm (rotes Licht). TYP-690 hat eine Anregungswellenlänge von 630 nm und eine Emissionswellenlänge von 690 nm (rosa Licht).

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Ergebnisse

Sechs SD-Ratten wurden erfolgreich durch intraperitoneale OVA-Injektion und nasale Provokation in das AR-Modell induziert. AR wurde bei allen Ratten in der AR-Gruppe induziert, was 100% der Gruppe ausmachte. Alle Ratten in der AR-Gruppe zeigten typische Symptome wie Niesen, eine laufende Nase und eine juckende Nase. Alle Verhaltensbeobachtungen wurden mit ≥5 Punkten bewertet (Tabelle 2).

Die Ergebnisse der H&E-Färbung am 21. Tag der Modellierung zeigten, dass be...

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Diskussion

Die allergische Rhinitis (AR) ist eine nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die durch eine Kombination von Umwelt- und genetischen Faktoren entsteht. Es ist zu einem globalen Gesundheitsproblem geworden, das sich auf die Arbeitseffizienz auswirkt, die Lebensqualität verringert, den Schlaf und die kognitiven Funktionen beeinträchtigt und Reizbarkeit und Müdigkeit verursacht. AR betrifft 10 % bis 20 % der Weltbevölkerung¹ und verursacht erhebliche wirtschaftliche Kosten, die in den EU-Ländern jähr...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie der Provinz Sichuan unterstützt (2021YJ0175).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Al(OH)3Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA7130
75% EthanolAnhui Yiren An Co., Ltd20210107
AmmoniakChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2021070101
wasserfreies EthanolChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022070501
Anti-Fluoreszenz-Quenching-VersiegelungSouthernBiotech0100-01
Automatische FärbemaschineThermo scientificVaristain Gemini ES
Carrier slidesNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd220518001
Citrat-Phosphat-Puffer Servicebio biotechnology co., LtdG1201
Zitronensäure-Antigen-Reparaturlösung (PH 6.0)Xavier Biotechnology Co., LtdG1201
DeckglasNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.
DeckglasNantong Mewtech Life Science Co., LtdCS01-2450
CY3-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1223-50UL
DAPISawell Biotechnology Co., LtdG1012
EntfärbungsschüttlerSCILOGEXS1010E
EDTA EntkalkungslösungWuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd
Elektrischer HeizstrahltrocknerShanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
Einbettungsbox-MarkiermaschineThermo Scientific PrintMate AS
EinbettungsmaschineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5
Schnelle GewebeentwässerungsmaschineThermo scientificSTP420 ES
FilmversiegelerThermo scientificAutostainer 360
FITC-TyramideSawell Biotechnology Co., LtdG1222-50UL
FluoreszenzmikroskopSunny Optische Technologie Co.LtdCX40
Foxp3Affinity Biosciences Co., Ltdbs-10211R
GefriertischWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5
Ziege Anti-Kaninchen IgG H& L (HRP)Liankebio Co., LtdGAR0072
ZiegenserumBiosharpBL210A
H& E FärbesetLeageneDH0020
Hämostatische PinzetteShanghai Medical Devices Co., LtdJ31010
SalzsäureSichuan Xilong Science Co., Ltd210608
Immunhistochemischer StiftBiosharpBC004
MikrowellenherdMidea M1-L213B
Neutrales GummiSinopharm Group Chemisches Reagenz Co., Ltd10004160
Ovalbumin Sollerbauer Biotechnology Co., LtdA804010
OvenShanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
PalmzentrifugeSCILOGEXD1008E
ParaformaldehydBeyotime Biotechnology Co., LtdP0099-100ml
Pathologischer Schnittscanner3DHISTECH KftPannoramic SCAN 
PBS PufferBiosharpG4202
Pipette DragonKE0003087/KA0056573
Rorγ tAffinity Biosciences Co., LtdDF3196
ScalpelQuanzhou Excellence Medical Co., Ltd20170022
Selbstfluoreszierendes Löschmittel Sudan Black BBioengineering Co., LtdA602008-0025
SchneidemaschineThermo scientificHM325
SchneidemaschineThermo scientificHM325
SlideNantong Mewtech Life Science Co., LtdPC2-301
Sprague Dawley RattenSichuan Akademie für Traditionelle Chinesische MedizinSYX figure-materials-1 2023-0100
TICAM-1Affinity Biosciences Co., LtdDF6289
GewebeschereShanghai Medical Devices Co., LtdJ22120
Gewebespreader-BackblechmaschineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
TYR-690 FluoreszenzfarbstoffeShanghai Rutron Biotechnology Co., LtdRC0086-34RM
WirbelmischerSCILOGEXSLK-O3000-S
Wasserbad-SchiebetrocknerWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
WachsschneiderWuhan Junjie Electronics Co., LtdJXL-818
XyloleChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022051901
220518001CR2203047

Referenzen

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Immunfluoreszenz-Markierung in Nasenschleimhaut-Gewebeschnitten von Ratten mit allergischer Rhinitis mittels Multicolor-Immunoassay
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