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Methodenartikel

Mikrohärtemessungen an Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren

2K Aufrufe

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DOI:

10.3791/66583

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26. April 2024

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Die Mikrohärte ist eine mechanische Eigenschaft und ein informativer Parameter zur Beurteilung der Pathophysiologie des Hartgewebes. Hier demonstrieren wir ein standardisiertes Protokoll (Probenvorbereitung, Polieren, flache Oberfläche und Eindruckstellen) für die Mikrohärteanalyse von Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren, nämlich Zahnfluorose und Ligatur-induzierte parodontale Knochenresorption.

Zusammenfassung

Die mechanische Eigenschaft, die Mikrohärte, wird in Zahnschmelz, Dentin und Knochen in oralen Krankheitsmodellen, einschließlich Zahnfluorose und Parodontitis, bewertet. Die Mikro-CT (μCT) liefert 3D-Bildinformationen (Volumen und Mineraldichte) und die Rasterelektronenmikroskopie (REM) erzeugt Mikrostrukturbilder (Schmelzprisma und Knochenlakuna-Kanalikulär). Ergänzend zur Strukturanalyse mittels μCT und REM ist die Mikrohärte einer der informativen Parameter, um zu beurteilen, wie strukturelle Veränderungen die mechanischen Eigenschaften verändern. Obwohl es sich um einen nützlichen Parameter handelt, sind die Untersuchungen zur Mikrohärte des Alveolarknochens bei oralen Erkrankungen begrenzt. Bisher wurde über unterschiedliche Messmethoden zur Messung der Mikrohärte berichtet. Da die Mikrohärtewerte je nach Probenvorbereitung (Polieren und flache Oberfläche) und Eindringstellen variieren, können unterschiedliche Protokolle zu Diskrepanzen zwischen den Studien führen. Die Standardisierung des Mikrohärteprotokolls ist für eine konsistente und genaue Bewertung in oralen Krankheitsmodellen unerlässlich. In der vorliegenden Studie demonstrieren wir ein standardisiertes Protokoll für die Mikrohärteanalyse im Zahn- und Alveolarknochen. Die verwendeten Proben sind wie folgt: Für das Zahnfluorosemodell wurden Schneidezähne von Mäusen entnommen, die 6 Wochen lang mit/ohne fluoridhaltiges Wasser behandelt wurden; Für das Modell der ligaturinduzierten parodontalen Knochenresorption (L-PBR) wurden Alveolarknochen mit parodontaler Knochenresorption von Mäusen entnommen, die am 2. Molaren des Oberkiefers ligiert waren. 2 Wochen nach der Ligatur wurde der Oberkiefer entnommen. Die Vickers-Härte wurde in diesen Proben nach dem standardisierten Protokoll analysiert. Das Protokoll enthält detaillierte Materialien und Methoden für die Einbettung von Kunststoffen, das serielle Polieren und die Eindringstellen für Schneidezähne und Alveolen. Nach unserem besten Wissen ist dies das erste standardisierte Mikrohärteprotokoll zur Bewertung der mechanischen Eigenschaften von Zahn- und Alveolarknochen in Modellen für orale Erkrankungen von Nagetieren.

Einleitung

Die Härte ist eine der mechanischen Eigenschaften (z. B. Elastizität, Härte, Viskoelastizität und Bruchverhalten) und wird häufig verwendet, um die Fähigkeit zu charakterisieren, der Druckverformung und dem Bruch eines lokalen Bereichs eines Materials zu widerstehen. Die statische Eindringhärteprüfung ist die am häufigsten verwendete Methode, einschließlich der Vickers-Härte und der Knoop-Härte1. Die Vickers-Härteprüfung wird durchgeführt, indem ein Diamanteindringkörper unter einer festen Prüfkraft in die Oberfläche gedrückt wird. Der Eindringkörper ist pyramidenförmig, mit einer quadratischen Basis und einem Winkel von 136° zwischen gegenüber....

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Protokoll

Alle in diesem Protokoll beschriebenen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften für die Verwendung von Wirbeltieren durchgeführt, die vom Institutional Animal Care Use Committee (IACUC) an der Augusta University und an der Nova Southeastern University genehmigt wurden, die von der Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International (AAALAC) akkreditiert ist. Beachten Sie, dass Dr. Suzuki an der Augusta University angestellt war, wo die Experimente zur Zahnfluorose bei Mäusen durchgeführt wurden.

1. Extraktion von Unterkieferschneidezähnen in einem Zahnfluorosemodell der ....

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Ergebnisse

Zahnfluorosemodell: Abbildung 1 zeigt repräsentative μCT-Bilder von Schneidezähnen bei Kontrollmäusen und fluoridbehandelten Mäusen. In der Kontrollregion (Abbildung 1B-D) zeigte die zervikale Region eine geringere Schmelzmineraldichte (EMD) von 1,188 g/cm3 (Abbildung 1B) im Vergleich zur mittleren (1,924 g/cm3) und Spitze (1,819 g/cm3; Abbildung 1C,D

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Diskussion

Die Mikrohärte wird durchgeführt, um die mechanischen Eigenschaften von Hartgeweben wie Zähnen und Knochen zu bewerten. Bisher wurde über unterschiedliche Messmethoden zur Messung der Mikrohärte berichtet. Die meisten Messinformationen, insbesondere die Probenvorbereitungen und die Eindringstellen, dürften unzureichend sein. Diese Studie konzentrierte sich auf das Mikrohärteprotokoll für Zahnschmelz und Alveolarknochen in Modellen für Zahnfluorose und Parodontalerkrankungen. Um konsistente und genaue Ergebnisse zu erhalt.......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt besteht.

Danksagungen

Die in dieser Veröffentlichung berichtete Forschung wurde von JSPS KAKENHI JP21K09915 (MO) und dem National Institute of General Medical Sciences unterstützt; T34GM145509 (MM) und dem Nationalen Institut für zahnärztliche und kraniofaziale Forschung; R01DE025255 und R21DE032156 (XH); R01DE029709, R21DE028715 und R15DE027851 (TK); R01DE027648 und K02DE029531 (MS).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Geflochtene Seidennaht 6-0Teleflex
Canica Kleintierchirurgie-SystemKent Scientific Corporation SURGI 5001
CarbiMet PSA 120/P120Bühler30080120
CarbiMet PSA 60/P60Bühler36080060
CarbiMet PSA 600/P1200Bühler36080600
Castroviejo Micro Needle HilderF.S.T12060-01
Epofix kalt abbindendes Einbetten HarzElektronenmikroskopie WissenschaftCAT-1237
Fisherbrand 112xx Serie Erweiterter UltraschallreinigerFisher BrandFB11201
fluoridfreie NagetierdiätBio ServF1515  AIN-76A, 1/2" Pellets
in-vivo microCT Skyscan 1176Bruker
Isomet 1000 PräzisionssägeBuehlerMA112180
Läppfolie 0,3µ mMaruto instrument co., LTD. Japan26-4203Alternativ 
A3-0.3 SHT, 3M USA
Läppfolie 1µ mMaruto Instrument Co., LTD. Japan26-4206Alternative
A3-1 SHT, 3M USA
Läppfolie 12µ mMaruto Instrument Co., LTD. Japan26-4211Alternativ
A3-12 SHT, 3M USA
Läppfolie 3µ mMaruto Instrument Co., LTD. Japan26-4204Alternativ
A3-3 SHT, 3M USA
Läppfolie 9µ mMaruto instrument co, LTD. Japan26-4201Alternative
A3-9 SHT, 3M USA
Leica Wildmikroskop LeicaLEIC M690
Metaserv 2000 Schleifmaschine mit variabler Drehzahl PoliermaschineBühlerNr.: 557-MG1-1160
MicroCut PSA 1200/P2500Bühler36081200
MicroCut PSA P4000Brühler36084000
Mikrohärteprüfer, ALPHA-MHT-1000Z PACE Technologies
SamplKups   1 ZollBuehlerNr.: 209178
NatriumfluoridFisher ScientificS299-100
West cott Stich SchereJEDMEDKat. #25-1180
ZooMed Repti Thern Untertankheizung (U.T.H)Zoo Med Laboratories, Inc.RH-4

Referenzen

  1. Broitman, E. Indentation hardness measurements at macro-, micro-, and nanoscale: A critical overview. Tribol Lett. 65 (1), 23(2017).
  2. Lee, M. J., et al. Sirt6 activation ameliorates inflammatory bone loss in ligature-induce....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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