Etablierung eines Embryoimplantationsmodells in vitro

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Erstellung eines einfachen und effizienten In-vitro-Modells für die Embryoimplantation zur Bewertung der relevanten Moleküle, die den Einnistungsprozess des Embryos beeinflussen.

Zusammenfassung

Die Einnistung des Embryos ist der erste Schritt auf dem Weg zu einer erfolgreichen Schwangerschaft. Ein In-vitro-Modell für die Embryoimplantation ist entscheidend für die biologische Grundlagenforschung, die Arzneimittelentwicklung und das Screening. In dieser Arbeit wird ein einfaches, schnelles und hocheffizientes in vitro Modell für die Embryonenimplantation vorgestellt. In diesem Protokoll stellen wir zunächst die Blastozystenakquisition von Mäusen und die Vorbereitung der humanen Endometrium-Adenokarzinomzellen (Ishikawa) für die Implantation vor, gefolgt von der Co-Kultur-Methode für Mausembryonen und Ishikawa-Zellen. Schließlich führten wir eine Studie durch, um den Einfluss unterschiedlicher Konzentrationen von 17-β-Östradiol (E₂) und Progesteron (P4) auf die Adhäsionsraten der Embryonen auf der Grundlage dieses Modells zu bewerten. Unsere Ergebnisse zeigten, dass hohe Konzentrationen von E₂ die Adhäsion des Embryos signifikant reduzierten, während die Zugabe von Progesteron die Adhäsionsrate wiederherstellen konnte. Dieses Modell bietet eine einfache und schnelle Plattform für die Bewertung und das Screening von Molekülen, die am Adhäsionsprozess beteiligt sind, wie z. B. Zytokine, Medikamente und Transkriptionsfaktoren, die die Implantation und die Empfänglichkeit des Endometriums steuern.

Einleitung

Die Einnistung des Embryos, der erste Schritt einer erfolgreichen Schwangerschaft, ist entscheidend für das Verständnis der biologischen Grundlagen und die Bewältigung der Herausforderungen der Unfruchtbarkeit. Ethische Zwänge stellen jedoch erhebliche Einschränkungen bei der Entnahme von klinischen Embryonenproben am Menschen dar und behindern die Erforschung der komplizierten Wechselwirkungen zwischen menschlichen Embryonen und dem Endometrium während der frühen Schwangerschaft¹. Ein tiefgreifendes Verständnis dieser komplexen Mechanismen ist unerlässlich, um die biologische Grundlagenforschung, die Arzneimittelforschung und die reproduktive ....

Protokoll

Der Umgang mit Mäusen und experimentelle Studien wurden im Rahmen von Protokollen durchgeführt, die vom Tierausschuss des Shanghai Institute for Biomedical and Pharmaceutical Technologies genehmigt wurden. Sicherheitsverfahren gewährleisten: Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien oder biologischen Materialien immer geeignete persönliche Schutzausrüstung (PSA).

1. Gewinnung von Mausembryonen

HINWEIS: In diesem Abschnitt wird der Prozess der Gewinnung von Mausembryonen beschrieben. Erwachsene weibliche Mäuse (6-8 Wochen alt, Hybride C57BL/6 und DBA/2) wurden unter Standardumgebungsbedingungen von 12 ....

Ergebnisse

Bei der assistierten Reproduktion ist die kontrollierte ovarielle Hyperstimulation (COH) ein entscheidender Schritt, der bei Patientinnen zu einem signifikant erhöhten Östrogenspiegel um mehr als das 10- bis 20-fache im Vergleich zum natürlichen Zyklus führt¹¹. Vor diesem Hintergrund fragten wir, ob hohe Serumöstrogenkonzentrationen die Einnistung des Embryos während des Transfers frischer Embryonen beeinflussen. Basierend auf diesem Embryoimplantationsmodell untersuchten wir die Auswirkungen vers.......

Diskussion

Die Einfachheit und Schnelligkeit des vorgeschlagenen In-vitro-Modells für die Embryonenimplantation bietet bemerkenswerte Vorteile für das Wirkstoffscreening in der Frühphase und andere Forschungsanwendungen. Das unkomplizierte Protokoll, gepaart mit dem hohen Durchsatz der Ishikawa-Zelllinien, macht es zu einem idealen Kandidaten für groß angelegte Screenings, insbesondere in den frühen Stadien der Wirkstoffforschung. Liang¹³ fand heraus, dass der TAGLN2-Knockdown die Invasionsfähigkeit.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
17-β-Estradiol	SIGMA	3301	Stärkstes Säugetier-Östrogenes
Hormon BD Falcon	BD	353001	Bakteriologische Petrischalen 35 x 10 mm Ausführung mit dichtem Deckel, reines Polystyrol in Kristallqualität, steril
Biosicherheitswerkbank	ESCO	Klasse BSC	Aseptische Vorgänge, Herstellung von Kulturschalen, Aliquotierung von Reagenzien usw
CO2 Inkubator	Thermo	8000DH	Embryokultur
Kulturplatte	Corning	3506	Zellkultur
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), flüssig 1:1, Enthält L-Glutamin und 15 mM HEPES-Puffer
Fötales Rinderserum	Gibco	10099141	Fötales Rinderserum, qualifiziert, australische
Herkunft Gelatine	SIGMA	G9391	Typ B, Pulver, BioReagenz, geeignet für Zellkulturen
HCG	Nanjing	Aibei M2520	Sterilisationsreagenz, intraperitoneale Injektion, 50 IE/ml
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagenzqualität, Pulver
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Pulver, ohne Phenolrot, 5 x 10 mL
L-Glutamin	Gibco	25030081	L-Glutamin-200 mM (100x), flüssig
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), flüssig, mit Phenolrot
Mineralöl	SIGMA	M8410	Mineralöl eignet sich zur Verwendung als Deckschicht zur Kontrolle von Verdunstung und Kreuzkontamination in verschiedenen molekularbiologischen Anwendungen
Penicillin-Streptomycin, flüssiges	Gibco	15140122	10.000 Einheiten Penicillin (Base) und 10.000 Einheiten Streptomycin (Base), unter Verwendung von Penicillin G (Natriumsalz) und Streptomycinsulfat in 0,85% Kochsalzlösung
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilisationsreagenz, intraperitoneale Injektion, 50 IE/ml
Progesteron	SIGMA	5341	Steroidhormon, das während der zweiten Hälfte des Menstruationszyklus vom Corpus luteum ausgeschüttet
Natriumpyruvat	Gibco	11360070	Natriumpyruvat wird häufig Zellkulturmedien als Kohlenstoffquelle zusätzlich zu Glukose zugesetzt
Stereomikroskop	Olympus	SZX7	Embryonenentnahme und Beobachtung der Embryonalentwicklung

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