Ein obstruktives Modell der chronischen Pankreatitis, das durch Elektrokoagulation etabliert wurde

Zusammenfassung

Das vorliegende Protokoll beschreibt einen neuartigen Ansatz zur Modellierung der chronisch obstruktiven Pankreatitis, der die Visualisierung des Pankreasgangs und die Elektrokoagulation des Pankreasgangs beinhaltet, um eine Obstruktion des Pankreasgangs zu verursachen.

Zusammenfassung

Chronische Pankreatitis (CP) ist eine schwere entzündliche Erkrankung, die die Bauchspeicheldrüse zerstören, zu Diabetes führen und das Risiko für Bauchspeicheldrüsenkrebs erhöhen kann, was die Lebensqualität der Patienten stark beeinträchtigt. Die Behandlung von CP ist ein wichtiger Forschungsschwerpunkt in der Gastroenterologie. Wir haben ein neues Tiermodell entwickelt, um die Einschränkungen bestehender Modelle zu überwinden, indem wir 8 Wochen alte männliche Mäuse des Typs C57BL/6 verwendet haben.

Nachdem wir die Bauchspeicheldrüse durch eine Bauchoperation an anästhesierten Mäusen freigelegt hatten, klemmten wir den gemeinsamen Gallengang in der Nähe der Leber ab, um zu verhindern, dass Methylenblau in ihn eindringt. Eine Kapillare wurde in den Gallengang eingeführt, um den Farbstoff zu injizieren, und nachdem der Pankreasgang gefärbt wurde. Nachdem der Pankreasgang sichtbar gemacht worden war, wurde die Bauchspeicheldrüse für die Elektrokoagulation in den mittleren und unteren 2/3 der Position zwischen dem gemeinsamen Gallengang und der Arteria pancreaticoduodenalis superior ausgewählt. Die Elektrokoagulation wurde beendet, wenn die blaue Färbelösung nicht mehr erkennbar war. Dann wurde der Hinterleib verschlossen und die Mäuse wurden normal aufgezogen. 7, 14, 21 und 28 Tage nach der Operation wurde die Bauchspeicheldrüse mittels HE-Färbung, Masson-Färbung und Immunhistochemie untersucht, und das Blutserum wurde auf biochemische Parameter analysiert. Die Pathologie nach 14 Tagen stimmte weitgehend mit den Merkmalen der chronischen Pankreatitis überein, ebenso wie die biochemischen Parameter des Serums.

Einleitung

Die chronische Pankreatitis (CP) ist eine schwere, fortschreitende Entzündungserkrankung, die zur Zerstörung der Bauchspeicheldrüse führt und sich in Bauchschmerzen und Verdauungsstörungen äußert. Im Laufe der Zeit kann es Diabetes mellitus verursachen und das Risiko für Bauchspeicheldrüsenkrebs erhöhen. Die Etablierung des Tiermodells der CP und die Entwicklung wirksamer therapeutischer Strategien ist daher von entscheidender Bedeutung.

Exokrine Azinuszellen der Bauchspeicheldrüse produzieren und sezernieren eine große Anzahl von Verdauungsenzymen. Wenn die Regulation der Organellen und der Proteinhomöostase gestört ist, kann dies zu einer unsachgemäßen Aktivierung des intrazellulären Trypsinogens führen, was letztendlich zu einer Schädigung der Azinuszellen und zur Entwicklung einer Pankreatitis^{führt 1}.

Frühere Studien haben gezeigt, dass Mausmodelle, insbesondere solche, die durch wiederholte Cerulein-Injektionen² und chirurgische Ligatur der Pankreasgänge ^3,4 induziert wurden, bei der Untersuchung der CP hilfreich waren. Cerulein kann eine akute Pankreatitis induzieren, die in einen chronischen Zustand übergehen kann, aber das Fehlen einer spezifischen Obstruktion des Pankreasgangs schränkt seine klinische Bedeutung bei der Simulation einer obstruktiven Pankreatitis ein. Obwohl die chirurgische Ligatur die obstruktive Natur der menschlichen CP besser nachahmt, ist sie hochinvasiv, schwierig durchzuführen und führt oft zu schweren systemischen Effekten, was die Untersuchung lokalisierter duktaler Pathologien erschwert.

Um diese Einschränkungen zu beheben, wurde ein neues obstruktives CP-Modell durch Elektrokoagulation vorgeschlagen. Ähnlich dem Prinzip der Ligatur des Pankreasgangs blockiert sie den Pankreasgang, ist aber einfacher durchzuführen und hat eine höhere Erfolgsquote. Forscher haben vorgeschlagen, dass die Radiofrequenzablation im Hauptpankreasgang von Schweinen eine sichere und wirksame Methode zur Induktion von Pankreasatrophie^{ist 5}, was auch darauf hindeutet, dass das Abschneiden des Hauptpankreasgangs durch Hochfrequenz-Elektrokoagulation ähnliche Effekte hervorrufen kann. Diese Technik umfasst eine retrograde Punktion des Pankreasgangs und die Injektion einer Methylenblaulösung zur duktalen Färbung, gefolgt von einer Elektrokoagulation, um eine lokalisierte duktale Obstruktion zu induzieren (Abbildung 1). Dieser Ansatz führt zu Entzündungen und Fibrose, die eine obstruktive CP beim Menschen nachahmen, und vermeidet gleichzeitig eine weit verbreitete Entzündungsreaktion und systemische Komplikationen. Im Vergleich zu herkömmlichen Modellen bietet das Elektrokoagulationsmodell mehrere Vorteile: Es zielt gezielt auf den Pankreasgang ab, reduziert die Variabilität und mildert systemische Komplikationen. Es bietet einen krankheitsspezifischeren, reproduzierbareren und vielseitigeren Ansatz zum Verständnis der Mechanismen, die der duktalen Obstruktion bei CP zugrunde liegen, und ihrer Rolle beim Fortschreiten der Krankheit.

Protokoll

Alle beschriebenen Tierversuche wurden vom Ausschuss für die Verwendung und Pflege von Tieren der Naval Medical University genehmigt. Stellen Sie sicher, dass alle chirurgischen Materialien steril sind.

1. Laparotomie

1. Verabreichen Sie eine Mischung aus Ketamin (80 mg/kg) und Xylazin (10 mg/kg) durch intraperitoneale Injektion zur Anästhesieeinleitung. Überwachen Sie die Anästhesietiefe, indem Sie den Verlust des Pedalreflexes und des Hornhautreflexes beurteilen. Geben Sie bei Bedarf zusätzliche Dosen (20% der Anfangsdosis), um eine angemessene Anästhesie während des Eingriffs aufrechtzuerhalten. Bestätigen Sie die ausreichende Anästhesietiefe, indem Sie die Zehen einklemmen. Legen Sie das Tier auf ein Heizkissen, um die Körpertemperatur zu halten.
2. Verwenden Sie einen Trimmer, um die Haare (~2 cm²) zwischen Brust und Unterbauch zu rasieren. Desinfizieren Sie das Operationsgebiet 3x mit abwechselnden Runden Chlorhexidin/Jod und Alkohol.
3. Befestigen Sie die Mäuse mit chirurgischem Klebeband auf der Operationsplatte und bringen Sie sterile Abdecktücher an.
4. Machen Sie mit einer Schere einen 2 cm langen Schnitt im Mittelbauch, gefolgt von einem 1 cm langen Schnitt zwischen dem Oberbauch und dem Xiphoid-Prozess.

2. Lokalisieren und Freilegen der Bauchspeicheldrüse

1. Lokalisieren Sie mit Hilfe eines Bauchexpanders den Bereich der Bauchspeicheldrüse, in dem die Elektrokoagulation durchgeführt wird.
2. Identifizieren Sie mit Hilfe eines sterilen Wattestäbchens den Zwölffingerdarm von der Rückseite des linken Oberbauchs und drehen Sie den Zwölffingerdarm, um den klaren Gallengang sichtbar zu machen, der die Leber verbindet.

3. Verfolgung der Operationsstelle

1. Verwenden Sie einen mikrovaskulären Clip, um den proximalen gemeinsamen Gallengang vorübergehend zu verschließen und ein Austreten der retrograden Infusion in die Leber zu verhindern.
2. Verbinden Sie den Polyethylenschlauch mit einem Innendurchmesser von 0,25 mm und einem Außendurchmesser von 0,35 mm mit der Nadel mit einem Außendurchmesser von 0,25 mm. Verwenden Sie dieses Gerät, um es um die Ampulle herum einzuführen. Zielen Sie auf die große Papille des Zwölffingerdarms und führen Sie die Röhre hinein. Führen Sie den Katheter zur Hälfte in den Gallengang ein und stoppen Sie das Einführen.
3. Starten Sie die Infusionspumpe und mikropumpen Sie 0,2 % Methylenblaulösung (verdünnt in 0,9 % Kochsalzlösung) in einer Dosis von 50 μl/10 g für 2 min mit einer Geschwindigkeit von 50 μL/min. Der Pankreasgang wird allmählich blau.
4. Ziehen Sie am Ende der Sitzung den Polyethylenschlauch heraus und entfernen Sie den mikrovaskulären Clip.

4. Einleitung des Elektrokoagulationsverfahrens

1. Fixieren Sie mit Hilfe von sterilen Wattestäbchen die Bauchspeicheldrüse und richten Sie das Elektrokoagulationsmesser auf den blauen Teil für die Elektrokoagulation. Die Elektrokoagulationsstelle befindet sich in den mittleren und unteren 2/3 zwischen dem Gallengang communis und der Arteria pancreaticoduodenalis superior.
   1. Um dieser Studie zu folgen, verwenden Sie die folgenden Betriebsparameter der Elektrokoagulation: Spannung : 220 V; Elektrodenmaterial: reines Kupfer; Behandlungsdauer: Behandlung in der Position der Bauchspeicheldrüse unter Vermeidung der Blutgefäße für 2-3 s, bis das Blau der Methylenblau markierten Position nach der Elektrokoagulation durch gelb oder braun ersetzt wird; Größe des Operationsbereichs: Je nach Maus befindet sich der Elektrokoagulationsbereich auf der Rückseite der Bauchspeicheldrüse. Wählen Sie die Position zwischen dem Gallengang communis und der Arteria pancreaticoduodenalis anterior superior; Temperatur: 300 °C.
2. Beenden Sie die Elektrokoagulation, wenn die blaue Färbelösung nicht zu sehen ist.
3. Verschließen Sie den Bauch mit 4-0 resorbierbaren Nähten und die Haut mit 4-0 nicht saugfähigen monofilen Polypropylen-Nähten. Zwischen der Laparotomie und dem Nähen sollten nicht mehr als 20 Minuten liegen.
4. Behandeln Sie die Kontrollgruppe auf die gleiche Weise wie die Versuchsmäuse, aber stellen Sie sicher, dass die Infusionskomponenten nur aus Methylenblau bestehen. Verabreichen Sie in der Kontrollgruppe (Sham) die Methylenblau-Injektion, führen Sie jedoch keine Elektrokoagulationsoperation durch.

5. Tiere am Leben erhalten

1. Für die postoperative Wundversorgung der Maus nach einer Bauchoperation untersuchen Sie den Schnitt täglich auf Blutungen oder Rötungen: Wenn Blutungen auftreten, üben Sie sanften Druck mit steriler Gaze aus, um sie zu stoppen, und wechseln Sie dann den Verband, und wenn Rötungen vorhanden sind, tragen Sie einmal täglich eine Erythromycin-Salbe auf und ergreifen Sie gleichzeitig Maßnahmen, um zu verhindern, dass die Maus an der Wunde nagt. In Bezug auf die Analgesie ist Carprofen (5 mg/kg) durch intraperitoneale Injektion unmittelbar nach der Operation zu verabreichen, dann einmal alle 24 Stunden an 3 aufeinanderfolgenden Tagen.

6. Methoden der Analyse

1. Messen Sie die biochemischen Indizes des Serums und beobachten Sie pathologische Veränderungen im Pankreasgewebe am 7., 14^., 21. und 28. Tag der Elektrokoagulation.
2. Betäuben Sie das Tier mit einer Mischung aus Ketamin (80 mg/kg) und Xylazin (10 mg/kg) durch intraperitoneale Injektion und sammeln Sie etwa 500 μl Blut durch den Plexus orbitalis.
3. Halten Sie die Haut sanft auf den Rücken, um einen leichten Vorsprung des Augapfels zu erleichtern.
4. Legen Sie das Ende der Kapillare in den Augenwinkel und führen Sie es vorsichtig in einem Winkel von ca. 30°-45° unter den Augapfel ein. Drehen Sie die Kapillare, bis das Blut zu fließen beginnt.
5. Halten Sie am Ende der Sammlung die Augenlider geschlossen, indem Sie sanften Druck mit Gaze ausüben.
6. Das Serum zentrifugieren (1.200 × g, 15 min) und den Überstand zur Bestimmung von Amylase, Bilirubin und Hyaluronsäure entfernen (Schritt 6.10).
7. Betäuben Sie Mäuse mit Ketamin-Xylazin, bestätigen Sie, dass sie sich in einem tiefen Narkosezustand befinden (kein Pedalreflex oder Hornhautreflex), und führen Sie dann eine Zervixluxation zur Euthanasie durch.
8. Legen Sie die euthanasierten Mäuse bei 4 °C auf den Operationstisch und machen Sie mit Schere und Pinzette einen "V"-Schnitt in der Bauchdecke, um die Bauchhöhle freizulegen. Entfernen Sie die Bauchspeicheldrüse der Mäuse und teilen Sie das Organ für die Färbung in drei Teile.
9. Bearbeiten Sie die Bauchspeicheldrüse, indem Sie sie in 4%iger Polyformaldehydlösung fixieren und in Paraffin einbetten. Schneiden Sie Paraffinblöcke der Bauchspeicheldrüse in 0,5 mm dicke Abschnitte und färben Sie sie mit Hämatoxylin und Eosin (HE) sowie dem Masson-Fleck zur Visualisierung unter dem Lichtmikroskop. Verwenden Sie das in Paraffin eingebettete Pankreasgewebe für die immunhistochemische Analyse.
10. Messen Sie Amylase (U/dL), Bilirubin (mmol/L) und Hyaluronsäure (μg/L) mit handelsüblichen Kits gemäß den Empfehlungen des Herstellers.

Ergebnisse

Die Tiere wurden in eine Kontrollgruppe (nur Injektion von Methylenblau für die elektrische Gerinnung) und eine elektrische Gerinnungsgruppe eingeteilt, insgesamt 20 Mäuse in jeder Gruppe. Die Mortalitätsrate betrug 0 % in der Kontrollgruppe und 15 % in der elektrischen Gerinnungsgruppe; Die Erfolgsquote beim Bau des Modells (Anzahl der lebenden Modellmäuse) lag bei 71%. In jeder Gruppe wurden ein Dutzend Tiere für die pathologische Beurteilung ausgewählt. Drei Mäuse in jeder Gruppe wurden am 7., 14., 21. und 28. Tag nach dem Zufallsprinzip für die HE-, Masson- und immunhistochemische Färbung ausgewählt. Der Prozess der Modellierung ist in Abbildung 1 dargestellt. Nach der Abtastung mit Methylenblau haben wir die Position zwischen dem Gallengang communis und der Arteria pancreaticoduodenalis anterior superior an der Bauchspeicheldrüse von Mäusen elektrokoaguliert. Wenn der Elektrokoagulationsbereich im mittleren und unteren Teil der Position mit einer Fläche von weniger als einem Drittel gewählt wird, entspricht der Effekt wahrscheinlich nicht den Erwartungen. Wenn sie jedoch 2/3 übersteigt, sterben die Mäuse wahrscheinlich innerhalb von 72 Stunden nach der Elektrokoagulation, was wahrscheinlich auf eine schwere akute Pankreatitis zurückzuführen ist, die auftritt, nachdem der Pankreasgang vollständig verstopft ist.

Daraus schließen wir, dass am 14. Tag nach der Elektrokoagulation ein histologisches Bild einer chronischen Pankreatitis in der Bauchspeicheldrüse von Mäusen beobachtet werden kann (wie in Abbildung 1 gezeigt), das nicht vollständig blockiert ist, sondern sich nach teilweiser Verstopfung des Pankreasgangs bildet. Das Gewebe an Tag 7 wies ein leichtes Gewebeödem auf, und das Gewebe zeigte keine Hinweise auf eine chronische Pankreatitis. An Tag 14 zeigte die HE-Färbung von Pankreasgewebe, dass Pankreas-Azinuszellen verstreut waren. Am 21. Tag erholte sich der Entzündungsgrad der Azinuszellen im Bauchspeicheldrüsengewebe allmählich. Am Tag 28 gab es Anzeichen für eine Umkehrung der pathologischen Veränderungen im Gewebe (Abbildung 2). Dies könnte auf eine unzureichende Elektrokoagulation des Pankreasgangs während des Elektrokoagulationsprozesses sowie auf die kompensatorische Wirkung des verbleibenden Pankreasgangs nach teilweiser Obstruktion des Pankreasgangs zurückzuführen sein.

Die Masson-Färbung zeigte, dass der Grad der Fibrose in der Operationsgruppe signifikant schwerer war als in der Scheinoperationsgruppe. Die immunhistochemischen Scores für die Färbung von col-1 und (alpha-glattem Muskelaktin) SMA waren höher (Abbildung 3). Das Vorhandensein einer chronischen Pankreatitis im Pankreasgewebe wurde durch pathologische Analyse am Tag 14 beobachtet, und die Veränderungen davor und danach wurden durch HE-Färbung erst danach in der pathologischen Analyse verglichen. Bei der Analyse der biochemischen Serumindikatoren wurde festgestellt, dass die Serumamylase-, Bilirubin- und Hyaluronsäurekonzentrationen in der elektrischen Gerinnungsgruppe höher waren als in der Kontrollgruppe, was auf den Beginn einer chronischen Pankreatitis hinweist (Abbildung 4).

Abbildung 1: Schematische Darstellung einer obstruktiven chronischen Pankreatitis, die durch Elektrokoagulation bei Mäusen induziert wird. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 2: Hämatoxylin-Eosin-Färbung von Pankreasgewebe im Zeitverlauf. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 3: Hämatoxylin-Eosin- und Masson-Färbung und Immunhistochemie der Bauchspeicheldrüse. Abkürzungen: Col-1 = Alpha-1 Typ 1 Kollagen; SMA = Alpha-glattes Muskelaktin. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 4: Repräsentative Ergebnisse der biochemischen Serumindizes von Mäusen in verschiedenen Perioden. (A) Hyaluronsäurekonzentration im Serum (μg/L). (B) Bilirubinkonzentration im Serum (mmol/L). (C) Serum-Amylase-Konzentration (U/dl). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Diskussion

Das Risiko und der Schweregrad einer Pankreatitis werden sowohl durch genetische als auch durch Umweltfaktoren bestimmt⁶. Die vollständige Heilung der klinischen Pankreatitis ist ein Ziel in der Gastroenterologie, wobei die Erstellung von Tiermodellen der erste Schritt ist. Um diese Modelle zu etablieren, gibt es verschiedene Methoden, jede mit ihren Vor- und Nachteilen 7,8,9,10,11.

Chirurgen haben die Hochfrequenz-Elektrokoagulation verwendet, um eine endoluminale thermische Ablation (ETHA) im Hauptgang der Bauchspeicheldrüse durchzuführen, um die exokrine Sekretion der Bauchspeicheldrüse zu reduzieren und dadurch die Inzidenz von postoperativen Pankreasfisteln (POPF) nach Pankreatikoduodenektomie (PD) zu ^verringern12. Dies deutet darauf hin, dass die Methode der thermischen Ablation, die eine Pankreasatrophie verursacht, in der klinischen Praxis implementiert wurde. Wir haben ein neues Modell der obstruktiven Pankreatitis entwickelt, indem wir Methylenblau verwendet haben, um den Pankreasgang sichtbar zu machen und präzise zu elektrokoagulieren.

C57BL/6 8 Wochen alte männliche Mäuse wurden für dieses Experiment ausgewählt. Weibliche Mäuse haben einen Fortpflanzungszyklus, und der Hormonspiegel im Körper kann einen Einfluss auf die experimentellen Daten haben. Im Alter von 8 Wochen waren die Mäuse in der Blüte ihres Lebens mit reifen Körperorganen und einem guten Lebensgesundheitsindex, und die männlichen Mäuse im gleichen Alter waren größer in der Größe. Im postoperativen 1-monatigen Beobachtungszeitraum nahmen wir an 7, 14, 21 und 28 Tagen Proben aus der Bauchspeicheldrüse der Maus; Die Ergebnisse, die nach 14 Tagen erzielt werden, entsprechen am ehesten den pathologischen Merkmalen der Pankreatitis.

Es gibt mehrere Vorbehalte bei diesem Ansatz. Zunächst sollte der Gallengang so nah wie möglich am Leberhilum festgeklemmt werden, um die Injektion des Farbstoffs in den Pankreasgang zu erleichtern. Zweitens sollte auf die Geschwindigkeit und den Zeitpunkt der Injektion von Methylenblau-Farbstoff in den Pankreasgang geachtet werden. Der Pankreasgang kann mit zu wenig Farbstofflösung nicht gesehen werden, und zu viel Farbstofflösung behindert die Identifizierung der Lage des Hauptpankreasgangs im Operationsfeld. Drittens wurde die Elektrokoagulation beendet, wenn die blaue Färbelösung nicht zu sehen war. In diesen Experimenten wird die Operation in dem Bereich durchgeführt, der durch die Methylenblau-Färbung gekennzeichnet ist, da der Bereich der Bauchspeicheldrüse der Maus, der elektrokoaguliert wird, anders ist, weshalb die Methylenblau-Färbung verwendet wird, um den Pankreasgang zu verfolgen. Viertens sollten alle Blutungen an der Bauchspeicheldrüse während der Operation sofort gestoppt werden. Gleichzeitig sollte das Elektrokoagulationsmesser verwendet werden, um die Bauchspeicheldrüse zu schneiden. Wenn das Elektrokoagulationsmesser aus irgendeinem Grund an der Bauchspeicheldrüse klebt, sollte die Elektrokoagulationszeit verlängert werden. Dies ist die gebräuchlichste Methode, um das Auftreten schwerwiegender postoperativer Komplikationen zu verhindern, die durch Pankreasinsuffizienz verursacht werden.

Diese Methode hat jedoch auch Nachteile. Die Kompetenz des Bedieners wirkt sich direkt auf das Ergebnis des Experiments aus, und die Einheitlichkeit der Operation bei verschiedenen Mäusen beeinflusst die Erfolgsrate des Modells. Dieses Modell simuliert die Auswirkungen von Gallensteinen oder einer Obstruktion des Pankreasgangs, die zu wiederholten Anfällen einer akuten Pankreatitis führen, die schließlich eine chronische Pankreatitis verursacht. Dies könnte die erhöhten Bilirubinspiegel erklären. Daher kann dieses Modell auch als Modell für akute Pankreatitis basierend auf dem Grad der Elektrokoagulation entwickelt werden. Frühe Experimente an der Bauchspeicheldrüse von Mäusen 3 Tage nach der Elektrokoagulation zeigten Merkmale einer akuten Pankreatitis, aber postoperative Komplikationen senkten die Erfolgsrate des Modells bei akuter Pankreatitis. Es kann jedoch nicht ausgeschlossen werden, dass die durch den Elektrokauter während des Elektrokoagulationsprozesses erzeugte Wärme auf den Hauptgallengang übergegriffen hat. Es lohnt sich, der Frage nachzugehen, wie eine akute Pankreatitis durch Elektrokoagulation stabil induziert werden kann.

Im Vergleich zur herkömmlichen Cerulein-Injektionsmethode, die wiederholte Injektionen über mehrere Wochen erfordert, spart die Elektrokoagulationsmethode Zeit und ist bequemer. Während die Cerulein-Injektion eine hervorragende Stabilität und einfache Bedienung aufweist, dauert die Elektrokoagulation ~20 Minuten und spart nachfolgende Versuchszeit.

Die Entwicklung neuer Modelle zielt darauf ab, den natürlichen Verlauf der Krankheit zu untersuchen und zielgerichtete Therapien zu entwickeln. Unser neues Tiermodell hilft bei der Simulation einer chronischen Pankreatitis, die durch eine Obstruktion des Pankreasgangs bei Mäusen verursacht wird, einschließlich der postendoskopischen retrograden Cholangiopankreatographie-Pankreatitis (ERCP)¹³.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
16 mm mikrovaskulärer Clip	Stärker, Ningbo, China
Absorbierbare Naht	Yangzhou Jinhuan Medizintechnikfabrik	4-0	-
Carprofen	Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.	C830557-5g	-
Kapillarrohr	Tygon, USA	AAQ(AAD)04091	0,25 x 0,3 mm
Elektrokoagulationsmesser	Shun Ye MEDICAL Equipment Co., LTD, Ningbo, China	Shun Ye BDD-YE-DF-1
Augenschere
Ketaminhydrochlorid-Injektion (Ketaset CIII)	Zoetis Inc.	S5564	-
Methylenblau-Färbungslösung	Solarbio, Shanghai, China	G1303
Nicht absorbierende 4-0-Monofilament-Polypropylennaht	Jinhuan, Shanghai, China
Betriebsmikroskop	Murzider, Guangdong, China	MSD203
Augenzwangen
Rundkopfabstrich	Olga Sherer, Huaximedical, China
Spritzennadel	Minank, Zhejiang, China		0,25 mm
Gewebezange
Gewebescheren	Shanghai Puxin Instrument Technology Corporation
Xylazin-Hydrochlorid-Injektion	Bayer Tiergesundheit	XYL-50-20	-