Optimierte und vereinfachte Technik für die Herstellung und Kultivierung von präzisionsgeschnittenen Leberscheiben

Dany Perocheau; Claire Duff; Sonam Gurung; Loukia Touramanidou; Garima Sharma; Julien Baruteau

doi:10.3791/67202

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Methodenartikel

Optimierte und vereinfachte Technik für die Herstellung und Kultivierung von präzisionsgeschnittenen Leberscheiben

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DOI:

10.3791/67202

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22. November 2024

Dany Perocheau¹ , Claire Duff¹ , Sonam Gurung¹ , Loukia Touramanidou¹ , Garima Sharma¹ , Julien Baruteau¹^,²^,³

¹Great Ormond Street Institute of Child Health, University College London, ²Great Ormond Street Hospital for Children NHS Foundation Trust, ³National Institute of Health Research Great Ormond Street Biomedical Research Centre

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ein Protokoll für die Herstellung und Kultivierung von präzisionsgeschnittenen Leberschnitten (PCLS) für die Untersuchung von Mauslebern. Der Artikel konzentriert sich auf Schlüsselaspekte des Protokolls, das nur eine Standard-Laborausrüstung mit Zugang zu einem Vibratom erfordert und ein Überleben von PCLS für mindestens 4 Tage ermöglicht.

Zusammenfassung

Dieses Protokoll stellt ein einfaches System für die Erstellung und Kultivierung von präzisionsgeschnittenen Leberschnitten (PCLS) dar. PCLS enthält alle Zellen in einer intakten Umgebung und ähnelt daher einem Mini-Modell des gesamten Organs. Sie ermöglichen die Untersuchung von lebenden Geweben und replizieren gleichzeitig deren komplexe Phänotypen. Dieses Protokoll ermöglicht die Präparation von Schnitten aus Mauslebern mit einem Vibratom und Standard-Laborgeräten. Die Protokolle für die Produktion und Kultivierung von PCLS sind nicht standardisiert und können je nach dem interessierenden Gewebe, der Art des verwendeten Vibratoms und dem Sauerstoffbedarf drastisch variieren. Diese können in einigen Laboratorien, die nur Zugang zu einem einfachen Vibratom und gemeinsamen Gewebekultureinrichtungen haben, schwierig zu reproduzieren sein. Wir haben ein Protokoll zusammengestellt, das sich auf die Bedeutung einiger wichtiger Schritte innerhalb der verschiedenen Protokolle konzentriert, die bereits verfügbar sind. Dieses Protokoll betont daher die Bedeutung der Einbettungsmethode, der Schnittausrichtung, eines dynamischen und eines statischen Systems und die Bedeutung eines minimalen Kulturvolumens. Dieses Protokoll kann in den meisten Labors, die Zugang zu einem einfachen Tissue Slicer haben, auf einfache Weise erstellt und reproduziert werden. Zusammengenommen und unter Befolgung dieses Protokolls kann PCLS mindestens 4 Tage am Leben bleiben. PCLS ist ein einfaches, wirtschaftliches und reproduzierbares Modell zur Untersuchung des pathophysiologischen und therapeutischen Screenings für Organe wie die Leber.

Einleitung

Precision-Cut Tissue Slices (PCTS) sind dünne Schnitte von Organen. Sie ermöglichen die Erhaltung der Architektur des Organs, das ein Mini-Organ repliziert, während der 3-dimensionale Aspekt der Nachbarzellen und der extrazellulären Matrix erhalten bleibt. Es ist ein attraktives Modell aufgrund seines einfachen Zugangs, seiner Kostenersparnis und seiner weniger arbeitsintensiven Eigenschaften bei gleichzeitiger Beibehaltung der Gewebearchitektur.

PCTS schließen eine Lücke zwischen In-vitro-Zellstudien und In-vivo-Tierversuchen und überwinden die meisten Nachteile beider Modelle. PCTS wurde....