Trennung von präovulatorischen Follikel-, Granulosa- und Thekazellschichten von Vögeln für Downstream-Anwendungen

Zusammenfassung

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Trennung von Dotter-, Granulosazellen und Thekazellen in präovulatorischen Follikeln von Vögeln. Diese präzise Handhabung ermöglicht kritische Untersuchungen der Rolle dieser Schichten für die Fortpflanzungsfunktion und hilft beim Verständnis der Follikelentwicklung, der Hormonregulation und der Krankheitsforschung, um den landwirtschaftlichen Ertrag zu steigern und biomedizinische Erkenntnisse zu gewinnen.

Zusammenfassung

Legehennen (Legehennen) und Masthähnchenzüchter (Zuchttiere für fleischproduzierende Hühner) sind als zuverlässige Proteinquelle für die weltweite Nahrungsmittelversorgung von entscheidender Bedeutung. Sie sind auch ein aufstrebendes Tiermodell für die Erforschung menschlicher Fortpflanzungskrankheiten. Mit der Entwicklung des Gebiets der Geflügelforschung wird die Gesundheit und Funktion des Eierstocks von Legehennen und Masthähnchenzüchtern ein wichtiger Studienpunkt sowohl für landwirtschaftliche als auch für biomedizinische Forscher sein. Eine der Herausforderungen, die sich aus diesem aufkommenden Interesse ergibt, ist der Bedarf an replizierbaren Techniken, die alle Forscher bei der Entnahme von Eierstockproben einsetzen können. Insbesondere muss ein detaillierter visueller Prozess etabliert werden, um die richtige Trennung der spezialisierten Granulosa- und Thekazellschichten von den Hühnerfollikeln zu definieren, um Übereinstimmung und Konsistenz unter den Forschern zu erreichen.

Diese Studie beschreibt die Extraktion von präovulatorischen Follikeln und Eierstockgewebe bei weißen Leghornhühnern im besten gebärfähigen Alter. Die Trennung dieser Follikel erfolgt unter kalten, flüssigen Bedingungen, um das Eigelb für eine einfachere Handhabung zu erstarren und zu verhindern, dass das Eigengewicht des Follikels die Zellschichten während des Trennungsprozesses auseinanderreißt. Sobald die Trennung abgeschlossen ist, können die gewünschten Zellschichten für Gewebekulturansätze weiter verdaut oder für genomische und proteomische Analysen kryokonserviert werden.

Einleitung

Eier produzierende Hühner sind eine Schlüsselkomponente der weltweiten Lebensmittelversorgungskette und ein sich entwickelndes Tiermodell für die Erforschung von Fruchtbarkeit und Eierstockkrebs. Das Huhn hat eine lange Geschichte der Laboranwendung, von In-Ovo-Studien mit In-Ovo-Impfstoffen¹ bis hin zur Untersuchung des Wachstums von Krebstumoren², und ist ein Schlüsseltier für die Einsicht in die Entwicklung der Gonaden ^3,4,5. Das Verständnis der Rolle des Fortpflanzungssystems einer ....

Protokoll

Alle in dieser Studie verwendeten Tiere wurden gemäß dem vom Institutional Animal Care and Use Committee der University of Delaware (IACUC Protocol 110R) genehmigten Protokoll gehalten und eingeschläfert.

1. Vorbereitung

1. Sterilisation
   1. Autoklavieren Sie 5-Unzen-Glasschalen im Schwerkraftverdrängungsautoklavieren (121 °C für 20 Minuten), die mit Aluminiumfolie abgedeckt und mit Autoklavenklebeband bedeckt sind, um die Sterilität aufrechtzuerhalten und anzuzeigen.
      HINWEIS: Für jeden Follikel, an dem die Trennung durchgeführt wird, wird eine Schüssel benötigt.

Ergebnisse

Dieses Protokoll führt zur Trennung der Granulosa- und Thekalzellschichten vom Ovarialfollikel (Abbildung 5 und Abbildung 6). Diese Schichten können dann für die histologische Untersuchung vorbereitet werden, um eine erfolgreiche Trennung zu bestätigen. Diese histologischen Bilder, die von einem staatlich geprüften Veterinärpathologen (EMB) überprüft und aufgenommen wurden, zeigen deutlich die effektive Trennung der Granulosa- und Thekaschichten sowohl für die p.......

Diskussion

Diese Studie beschreibt das Verfahren zur eindeutigen Trennung von Granulosa- und Thekalzellschichten von präovulatorischen Follikeln bei Geflügel. Im Gegensatz zu der bestehenden Methode, die 1977 von Gilbert et al. etabliert wurde, ermöglichen die bei dieser Methode vorgenommenen Anpassungen eine kontrolliertere Umgebung bei der manuellen Trennung der Granulosazellschicht von der Thekaschicht von allen präovulatorischen Follikeln¹⁵. Darüber hinaus ermöglicht es .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
3,5 Zoll Kleine Glasschalen, 5 oz	Amazon	B0BXP5PJTN	Autoklavierbare Glasschalen mit einem Durchmesser von mindestens 3,5 Zoll
Aluminiumfolie	Costco	720	Cover Autoklavenschalen
Amazon Pet Training Pads, Normal, 100 Stück	Amazon	B0B58WTPFS	Zur Verwendung als nekrospiöse Pads funktioniert jedes absorbierende Pad
Autoklavenband	Fisherbrand	15-901-111
Cole-Parmer LED-faseroptische Beleuchtungen	Cole-Parmer	EW-41723-02
Gebogene sehr feine Präzisionspinzette	Fisherbrand	16-100-123
Präpariermikroskop	ohne	S6E
Feine Präzisionsschere	Fisherbrand	12-000-155	gezahnte
Lebensmittelbehälterboxen mit Deckel Set von 17 Klar/Grün Mikrowellen-Gefrierschrank Spülmaschinenfest	Amazon	B09QGZCRDB	Verwenden Sie jeden Behälter, der Eis aufnehmen kann UND eine kleine Glasschüssel von 3,5 Zoll
Hochpräzise 45 Grad gebogene konische sehr feine Spitze Pinzette / Pinzette	Fisherbrand	12-000-125	nicht gezahnt
Hochpräzise gerade Pinzette/Pinzette mit sehr feiner Spitze	Fisherbrand	16-100-120	Isopropanol ohne Zacken
	Fisherbrand	A426P-4
McKesson Probenbehälter, steril, Schraubverschluss, auslaufsicher, 120 mL	McKesson	16-9526	4 oz. / 120 cc, graduierte
phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS, 10x), pH 7,6	ThermoFisher	J62692. K7	muss zu 1x PBS
Sprühflasche	Cole-Parmer	EW-06091-01	für 70% Isopropanol
sterile chirurgische Klingen # 22	Cincinnati Surgical	122
Sterilisationsbeutel 10" x 16"	Amazon	B07MFB455C
konische ultrafeine Pinzette Fisherbrand	Fisherbrand	16-100-121
Biopsie-Pads aus ungezacktem Schaum, rechteckig	Fisherbrand	22-038-221
Formalinlösung, 10% (histologisch)	Fisher Chemical	SF98-4
Kassetten für die Gewebeverarbeitung/-einbettung mit Deckel	Simport M490-2	Z672122

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