Der Artikel beschreibt ein Protokoll zur Rekonstitution pasteurisierter Spendermilch-Mikrobiota unter Verwendung der muttereigenen Milch-Mikrobiota in praktischen, realen Umgebungen. Es zeigt ein effektives Bakterienwachstum und eine effektive Mikrobiommodulation, was die praktikable Anwendung dieses Verfahrens in der Routineversorgung einer Entbindungsklinik und der zugehörigen Muttermilchbank unterstützt.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Individualisierte Rekonstitution der Mikrobiota der Muttermilch: Ein praktikabler Ansatz in der Praxis
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Muttermilch (MOM) ist die vollständigste Nahrungsquelle für Neugeborene. In Fällen, in denen Mütter nicht in der Lage sind, ausreichend Milch zu produzieren oder nicht stillen können, ist die bevorzugte Alternative pasteurisierte Spendermilch (PDM), die routinemäßig von Muttermilchbanken zur Verfügung gestellt wird. PDM bietet eine überlegene Auswahl an ernährungsphysiologischen und immunologischen Elementen im Vergleich zu jeder kommerziell erhältlichen Formel. Um die Biosicherheit zu gewährleisten, wird PDM jedoch einer Pasteurisierung unterzogen, einem Prozess, der kommensale Mikrobiota inaktiviert und bestimmte bioaktive Verbindungen reduziert. In dieser Studie wird ein Protokoll vorgestellt, das entwickelt wurde, um die Mikrobiota von PDM unter Verwendung von MOM als mikrobielle Quelle wiederherzustellen und den Ansatz an ein reales klinisches Umfeld anzupassen.
Das Protokoll wurde in einer klinischen Studie umgesetzt, die in einer Entbindungsklinik und der zugehörigen Muttermilchbank durchgeführt wurde, mit dem Ziel, Frühgeborenen, deren Mütter nicht genügend Milch produzieren können, personalisierte Spendermilch zur Verfügung zu stellen. Die Methodik beinhaltet die Inokulation von PDM mit 10 % der MOM, gefolgt von einer Inkubation bei 37 °C für 4 Stunden. Die mikrobiologische Analyse zeigte ein erfolgreiches Bakterienwachstum in der inokulierten Milch (IM) nach der Inkubation, wobei das Mikrobiotaprofil der rekonstituierten Milch (RM) dem von MOM sehr ähnlich war, was auf eine effektive Wiederherstellung der Mikrobiota hinweist. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass das Rekonstitutionsprotokoll für die Implementierung in der Neugeborenenversorgung machbar ist, mit dem Potenzial, die ernährungsphysiologische und immunologische Qualität von PDM zu verbessern und dadurch die Gesundheit und Entwicklung von nicht gestillten Neugeborenen zu unterstützen.
Einleitung
Muttermilch ist weithin als die beste Nahrungsquelle für Neugeborene anerkannt und liefert nicht nur essentielle Makro- und Mikronährstoffe, sondern auch eine komplexe Reihe von Elementen, darunter verschiedene Metaboliten und Komponenten des Immunsystems wie Antikörper, Zytokine und Zellen1. Darüber hinaus ergeben sich die vorteilhaften Eigenschaften der Muttermilch auch aus einer Gemeinschaft kommensaler Mikroorganismen. All diese Elemente der Muttermilch spielen eine entscheidende Rolle bei der Entwicklung des Neugeborenen1. Die Gemeinschaft der Mikroorganismen, die als Mikrobiota bekannt ist, wird von einer Kombination von Faktoren wie Ernährung, Lebensstil der Mutter, Art der Geburt und Gestationsalter beeinflusst, was dazu führt, dass jede Milch eine Mikrobiota mit bestimmten Merkmalen aufweist2. Die Mechanismen, durch die die Mikrobiota der Muttermilch die Entwicklung von Neugeborenen begünstigt, reichen vom Schutz der Darmoberfläche durch Besiedlung durch kommensale Bakterien bis hin zur Förderung der Reifung des Immunsystems durch die Produktion von Metaboliten, die mit Immunzellen im Darm interagieren3. Aus diesem Grund ist das individuelle Profil der Mikroorganismen in der Muttermilch eine Form der personalisierten Medizin für Neugeborene4.
Das Vorhandensein einer gesunden Mikrobiota kann dazu beitragen, das Neugeborene vor der Besiedlung durch potenziell pathogene Mikroorganismen zu schützen, indem es die ökologische Nische einnimmt und die Ernährung unterstützt, insbesondere für Frühgeborene, die aufgrund ihres Aufenthalts in einem Krankenhaus und eines unreifen Immunsystems anfälliger für diese äußeren Einflüsse sind. Darüber hinaus haben Mütter, die zu früh gebären, oft Schwierigkeiten, Milch in ausreichender Menge für ihre Neugeborenen zu produzieren. Die Milchproduktion ist in der Regel geringer, je jünger das Gestationsalterist: 5 Jahre. In diesen Fällen ist die beste Option für die Fütterung des Neugeborenen pasteurisierte Spendermilch, die von Muttermilchbanken (HMB)6 bereitgestellt wird.
Brasilien verfügt über das größte und umfangreichste Netz von HMBs der Welt7. Dieses Netzwerk sammelt, bereitet auf und verteilt mehr als 160.000 Liter pasteurisierte Spendermilch (PDM) im ganzen Land, ohne dass den Eltern Kosten entstehen, und zwar über das nationale einheitliche Gesundheitssystem (Sistema Único de Saúde), das vom Gesundheitsministeriumverwaltet wird 7. Die Pasteurisierung ist unerlässlich, um die biologische Sicherheit der gespendeten Milch für Neugeborene zu gewährleisten. Dieser Vorgang wird in der Regel nach der Holder-Methode durchgeführt, bei der ein Behälter mit roher Spendermuttermilch 30 min lang in ein Wasserbad bei 62,5 °C getauchtwird 6,8. Das resultierende PDM wird dann bis zum Verzehr gekühlt gelagert. Die Pasteurisierung verringert jedoch die Lebensfähigkeit der kommensalen Mikrobiota der Milch und verringert die Bioverfügbarkeit verschiedener bioaktiver Komponenten. Dies liegt daran, dass der Pasteurisierungsprozess standardisiert ist, um die Übertragung pathogener Mikroorganismen auf das Neugeborene zu verhindern. In diesem Zusammenhang beschrieben Cacho und Kollegen 2017 die Möglichkeit, die kommensale Mikrobiota der eigenen Muttermilch zu rekonstituieren, indem diese in verschiedenen Anteilen in PDM9 geimpft wird. Ihre Ergebnisse zeigten, dass die Verwendung einer Konzentration von 10 % der Muttermilch (MOM) die optimale Konzentration ist, um die ursprüngliche Zusammensetzung des MOM-Mikrobiomprofils zu erhalten. Dieser Ansatz verringert das Risiko eines übermäßigen Wachstums bestimmter Bakterien, die zwar in der Regel kommensal, aber schädlich werden können, wenn sie in der rekonstituierten Milch unverhältnismäßig stark vorhanden sind. Insbesondere wurde in der Studie beobachtet, dass eine Verdünnung von 1:10 (10 % MOM + 90 % PDM), die 4 Stunden lang inkubiert wurde, zu einer ausgewogenen Bakterienlast führte – etwa 60 % der in unverdünntem MOM gefundenen – was auf einen sichereren und effektiveren Ansatz hinweist. Im Gegensatz dazu führten höhere Verdünnungen, wie z. B. 3:10, zu übermäßigem Bakterienwachstum, was die dringende Notwendigkeit kontrollierter Konzentrationen und Bedingungen unterstreicht, um die Sicherheit zu gewährleisten.
In diesem Artikel zeigen wir, dass dieses Verfahren zur Rekonstitution der Muttermilchmikrobiota in PDM in realen Situationen im Rahmen der Routineversorgung einer Entbindungsklinik und der zugehörigen Muttermilchbank erreicht werden kann.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Dieses Protokoll wurde im Rahmen der Verfahren einer klinischen Studie durchgeführt, die von unserer Forschungsgruppe (Brasilianisches Register für klinische Studien, ReBEC RBR-729kr8x) durchgeführt wurde, und erhielt die Genehmigung der Ethikkommission (Prozess CAAE nº 41063520.4.0 000.0121) und die Einverständniserklärung aller Teilnehmer vor der Randomisierung und Probenentnahme wurde eingeholt.
Das Verfahren zur Rekonstitution der Milchmikrobiota erfolgt in drei Schritten:
1. Rohmilch der Mutter gewinnen
HINWEIS: Das Verfahren zur Gewinnung von Milch finden Sie an anderer Stelle10,11.
- Holen Sie vor dem Eingriff die Einverständniserklärung der Mutter gemäß der Ethikkommission ein und erklären Sie der Mutter alles, was getan wird, und gehen Sie auf alle Zweifel, Bedenken, Ängste und Ängste bezüglich des Eingriffs ein, um die Mutter entspannt zu halten.
- Lassen Sie die Mutter Milch mit einer elektrischen Milchpumpe in einen sterilisierten Behälter abpressen, unter Aufsicht der für die Station verantwortlichen Krankenschwester, wobei die festgelegten lokalen Hygienestandards jeder Entbindungsstation eingehalten werden.
- Beschriften Sie nach der Entnahme den Behälter mit der Milch mit den Informationen der Mutter, dem Datum und der Uhrzeit der Entnahme. Halten Sie die Muttermilch (MOM) bis zu 12 h bei einer Temperatur von -4 °C oder niedriger.
2. Auftauen von pasteurisierter Spendermilch (PDM)
HINWEIS: Die HMBs verfügen über einen eigenen PDM-Vorrat, der für einen Zeitraum von maximal 6 Monaten bei einer Temperatur unter -4 °C eingefroren wird, und das Verfahren ist in der Literatur an anderer Stelle gut beschrieben 12,13,14.
- Tauen Sie Rohmilch oder PDM, die in sterilisierten Glasbehältern mit Kunststoffdeckel gelagert werden, in einem Wasserbad bei 40 °C auf, um eine Temperaturerhaltung und eine kürzere Verarbeitungszeit zu gewährleisten.
HINWEIS: Tauen Sie PDM nicht bei Raumtemperatur oder Kühltemperatur (im Kühlschrank) auf, da die Auftauzeiten in diesen Fällen verlängert werden, was die mikrobielle Exposition und das Wachstum fördert. - Nehmen Sie die Muttermilchflaschen aus dem Wasserbad, bevor die Milch in der Flasche eine Temperatur von über 5 °C erreicht.
3. Inokulation von PDM mit MOM zur Rekonstitution des Mikrobioms
HINWEIS: Das Standard-Volumenverhältnis für den Prozess der Inokulation von PDM mit MOM beträgt 90%: 10% (v/v). Die Schritte des Verfahrens sind wie folgt:
- Weisen Sie den Techniker an, einen Laborkittel, eine Maske, eine Mütze und Handschuhe zu tragen.
- Reinigen Sie die Arbeitsfläche mit einer Oberflächenreinigungslösung gemäß dem lokalen institutionellen Protokoll.
- Ordnen Sie die zu verwendenden Materialien an und bereiten Sie die Ausrüstung vor. Den Inkubator (Wasserbad) mit Wasser auf 37 °C vorheizen.
- Planen Sie die endgültige Menge der zu verwendenden geimpften Milch und wählen Sie einen Behälter in geeigneter Größe. Stellen Sie den Behälter mit frischem rohem MOM und dem PDM in flüssiger Form auf die Arbeitsfläche.
- Entnehmen Sie ein Aliquot von bis zu 1 ml des MOM mit sterilen Geräten für die anschließende 16S-Sequenzierung und Bakterienzählung. Lagern Sie das Aliquot in einem DNase/RNase-freien Kryoröhrchen bei -80 °C.
- Das verbleibende Volumen, das 10 % des gewünschten Milchvolumens entspricht, wird mit einem sterilen volumetrischen Instrument (z. B. Spritze, Pipette) in ein lebensmittelechtes Gefäß umgefüllt und in ein Wasserbad bei 37 °C getaucht.
- Entnehmen Sie ein 1 ml-Aliquot des PDM mit sterilen Geräten für die anschließende 16S-Sequenzierung und Bakterienzählung. Lagern Sie das Aliquot in einem DNase/RNase-freien Kryoröhrchen bei -80 °C.
- Übertragen Sie eine PDM-Menge, die 90 % des endgültigen gewünschten Milchvolumens entspricht, mit einem sterilen volumetrischen Instrument (z. B. Spritze, Pipette) in den Behälter mit der MOM aus dem vorherigen Schritt, die nun die inokulierte Muttermilch (IM) bildet.
- Verschließen Sie den Behälter mit einem Deckel, der verhindert, dass externe Flüssigkeiten das Innere der Flasche verunreinigen, und tauchen Sie ihn 4 h lang bei 37 °C in das Wasserbad, damit sich die in der Milch inokulierten Mikroorganismen vermehren können.
- Nach 4 h nehmen Sie das Gefäß mit der fermentierten IM aus dem Wasserbad, das jetzt als rekonstituierte Milch (RM) bezeichnet wird.
- Reservieren Sie ein Aliquot von bis zu 1 ml mit sterilen Geräten für die nachfolgende 16S-Sequenzierung und Bakterienzählung. Lagern Sie das Aliquot in einem DNase/RNase-freien Kryoröhrchen bei -80 °C.
- Übertragen Sie das verbleibende Volumen in einen desinfizierten Behälter zum Füttern von Neugeborenen.
4. Validierung der Methode durch Bakterienkultivierung auf Platten
HINWEIS: Alle Verfahren müssen unter sterilen Bedingungen durchgeführt werden, um eine Kontamination zu verhindern und die Genauigkeit der Verdünnungen zu gewährleisten. Das Bakterienwachstum kann mit den an anderer Stelle beschriebenen Methoden abgeschätzt werden 9,15.
- Bereiten Sie serielle Verdünnungen jeder Milchprobe (PDM, MOM, IM, RM) in steriler Kochsalzlösung in den Konzentrationen 10-1, 10-2, 10-3 und 10-4 vor. Mischen Sie jede Verdünnung gründlich, um eine gleichmäßige Bakterienverteilung zu gewährleisten.
- 100 μl jeder verdünnten Probe pipetieren und mit einer sterilen Drigalski-Schlaufe oder einem Glasstreuer in dreifacher Ausfertigung auf Man-Rogosa-Sharpe (MRS)- und Mannitol-Salz-Agar (MSA)-Platten verteilen. Achten Sie darauf, dass das Volumen gleichmäßig auf der Agarplatte verteilt ist.
- Inkubieren Sie MRS-Agarplatten in einem anaeroben Gefäß, das eine sauerstoffarme Umgebung für das Wachstum von Milchsäurebakterien schafft.
- Inkubieren Sie Mannitol-Salz-Agar (MSA)-Platten aerob, um das Wachstum von Staphylokokken-Arten zu unterstützen.
- Die Platten bei 37 ± 2 °C 48-72 h inkubieren.
- Wählen Sie die Verdünnung mit einer zählbaren Anzahl von Bakterienkolonien (25-250 Kolonien) auf jeder Art von Agar
- Zählen Sie die sichtbaren Kolonien auf jeder der drei Replikationsplatten für die ausgewählte Verdünnung.
- Berechnen Sie die durchschnittliche Koloniezahl aus dreifachen Platten für die ausgewählte Verdünnung in MRS- und MSA-Medien.
- Bestimmen Sie die Anzahl der koloniebildenden Einheiten (KBE) pro ml für jede Probe mit der folgenden Formel und konvertieren Sie sie in eine logarithmische Skala zur Basis 10 (log10), um die Interpretation zu erleichtern. Fahren Sie mit der statistischen Analyse der Ergebnisse fort.
Anzahl der KBE/ml = Anzahl der Kolonien × Gesamtverdünnungsfaktor/plattiertes Volumen in mL
5. Analyse des Milchmikrobioms
HINWEIS: Die Milchmikrobiomanalyse kann gemäß den an anderer Stelle beschriebenen Methoden und der Pipeline durchgeführt werden16. Ein Screenshot des R-Skripts, das in dieser Analyse verwendet wird, ist in der ergänzenden Abbildung S1 dargestellt.
- 500 μl der Probe für 15 s bei 180 × g zentrifugieren, um Zellen und Partikel zu sedimentieren.
- Sammeln Sie 350 μl des Überstands und verwenden Sie ihn für die DNA-Extraktion.
- Quantifizieren Sie die extrahierte DNA mit einem Spektralphotometer.
- Amplifizieren Sie die V3- und V4-Regionen der ribosomalen 16S-RNA mit 20 ng DNA und den Primern 357F/805R (siehe Materialtabelle)17.
- Verwenden Sie magnetische Kügelchen, um die resultierenden Amplikons zu reinigen, und quantifizieren Sie Barcode-Amplikons mit einem DNA-Fluorimeter.
- Sequenzieren Sie die Amplikons im Paired-End-Modus mit 250 bp.
- Die resultierenden Sequenzen werden durch Qualitätstrimmen und Entfernen des Adapters18 verarbeitet. Verwenden Sie den Paired-End-Modus (PE) mit Phred33-Scoring und legen Sie eine Mindestleselänge von 200 bp fest, um qualitativ hochwertige Lesevorgänge zu gewährleisten.
- Importieren Sie Sequenzdaten mit gepaarten Enden in QIIME 219 mit einem Manifest-Dateiformat und dem Befehl: qiime tools import.
- Verarbeiten Sie die importierten Sequenzen mit DADA2 zur Entrauschung, Dereplikation und Chimärenentfernung mit dem Befehl: qiime dada2 denoise-paired. In diesem Schritt werden qualitativ hochwertige repräsentative Sequenzen und eine Feature-Tabelle generiert.
- Filtern Sie Features und Sequenzen, um nur die Features und Sequenzen beizubehalten, die ausreichend repräsentiert sind, indem Sie die folgenden Befehle verwenden: qiime feature-table filter-features und qiime feature-table filter-seqs.
- Bereiten Sie eine Referenzdatenbank vor, indem Sie Regionen extrahieren, die durch die Primer (V3-V4) amplifiziert wurden, indem Sie qiime feature-classifier extract-reads verwenden.
- Verwenden Sie den VSEARCH-Algorithmus für die taxonomische Klassifizierung mit der Silva-Referenzdatenbank bei einem Identitätsschwellenwert von 97 %, indem Sie den folgenden Befehl ausführen:
qiime feature-classifier classify-consensus-vsearch - Integrieren Sie taxonomische Zuweisungen mit der Feature-Tabelle mithilfe von BIOM-Tools: biom add-metadata.
- Führen Sie statistische Analysen durch, wie an anderer Stelle beschrieben20,21.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Analyse des Bakterienwachstums durch Plattenkultivierung
Die mikrobiologischen Tests, die zur Validierung der Methode zur Inokulation von PDM mit dem MOM durchgeführt wurden, wie von Cacho et al.9 vorgeschlagen, zeigten, dass es auf der Grundlage der KBE/ml-Zahl keine signifikanten Unterschiede zwischen den inokulierten Milchproben vor und nach der 4-stündigen Inkubation gab. Zu diesen beiden Zeitpunkten wurden jedoch Unterschiede in der Anzahl der Kolonien beobachtet, was auf ...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Hier stellen wir ein Protokoll vor, das in Entbindungskliniken angewendet werden soll, die mit einer Muttermilchbank verbunden sind, mit dem Ziel, PDM die Rekonstitution der Milchmikrobiota einer bestimmten Mutter zu ermöglichen, die aus verschiedenen Gründen ihrem Neugeborenen nicht genügend Milch zur Verfügung stellen kann. Das Protokoll ist einfach und basiert im Wesentlichen auf zwei Schritten. Die erste betrifft die Anwendung von Verfahren, die routinemäßig in Muttermilchbanken durc...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden Interessen haben.
Danksagungen
Die Autoren danken für die finanzielle Unterstützung durch das Programa de Pesquisas para o SUS, PPSUS/2020, Ministério da Saúde do Brasil; Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Estado de Santa Catarina, Fördernummer: 2021TR000506; Programa de Pesquisa Universal, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) do Ministério de Ciência e Tecnologia do Brasil, Fördernummer: 420996/2023-0; Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica 2022 - 2024, Fördernummer: 120815/2023-0. Wir danken auch den Freiwilligen für die Bereitstellung von Proben.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Elektrische Muttermilchpumpe | Horigen | XN-2219M2 | Weiche Pumpe dual plus |
| Pyrex Medienflaschen | Corning | CLS1395100 | Glasbehälter mit Kunststoffdeckel |
| 1000 &Mikro; L-Pipette Labmate pro | Corning HTL SA | 5666 | Pipettore mit variablem Volumen |
| Kryo-Fläschchen | Corning | CLS431417 | DNase/RNase-freie 2 mL Fläschchen |
| 15 mL Zentrifugenröhrchen | Corning | CLS431470 | DNase/RNase-freie 15 mL Röhrchen |
| Wasserbad | EcoSonics | Q3.0/40A | |
| Man– Rogosa– Sharpe (MRS) | Difco | 288210 | Wachstumsmedien für Milchsäurebakterien |
| Mannitol-Salz-Agar (MSA) | Himedia | MH118 | Staphylokokken Wachstumsmedien |
| Anaerobic Jar | Permution | Schaffen Sie eine sauerstoffarme Umgebung für das Wachstum von Milchsäurebakterien | |
| Extrakta Bausatz – DNA e RNA | Loccus | MPTA-PV16-B Y | DNA-Extraktionskit |
| Nanodrop | Promega | E6150 | Quantus DNA |
| GoTaqG2 | Promega | M7841 | PCR-Amplikationssystem |
| Quantus Fluorometer | Promega | E5150 | DNA / RNA-Quantifizierungskit |
| MiSeq System | Illumina Inc. | M-GL-00006 v4.0 | Sequenziergerät |
| MiSeq Reagenzien-Kit v2 (300 Zyklen) | Illumina Inc. | MS-102-2002 | Sequenzierungskits und Reagenzien |
| Name der Software | |||
| https://docs.qiime2.org/2024.10/ | Mikrobiom-Analysepaket | ||
| Primername | Primer-Sequenz | ||
| 16S_357F | TCGTCGGCAGCGTCAGA TGTGTATAAGAGACAGC CTACGGGGGGCWGCAG | ||
| 16S_805R | GTCTCGTGGGCTCGGAG ATGTGTATAAGAGACAGG ACTACHVGGGTATCTAATC |
Referenzen
- Szyller, H., et al. Bioactive components of human milk and their impact on child's health and development, Literature Review. Nutrients. 16 (10), 1487(2024).
- Fernández, L., Rodríguez, J. M. Human milk microbiota: Origin and potential uses. Nestle Nutr Inst Workshop Ser. 94, 75-85 (2020).
- Fernández, L., Ruiz, L., Jara, J., Orgaz, B., Rodríguez, J. M. Strategies for the preservation, restoration and modulation of the human milk microbiota. Implications for human milk banks and neonatal intensive care units. Front Microbiol. 9, 2676(2018).
- Meier, P. P. More evidence: Mothers' own milk is personalized medicine for very low birthweight infants. Cell Rep Med. 3 (8), 100710(2022).
- Fewtrell, M. S., et al. Predictors of expressed breast milk volume in mothers expressing milk for their preterm infant. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 101 (6), F502-F506 (2016).
- Abrams, S. A., et al. Donor human milk for the high-risk infant: Preparation, safety, and usage options in the United States. Pediatrics. 139 (1), e20163440(2017).
- Brasil é referência em doação de leite materno. , Serviços e Informações do Brasil. At https://www.gov.br/pt-br/noticias/saude-e-vigilancia-sanitaria/2020/02/brasil-e-referencia-em-doacao-de-leite-materno (2024).
- Landers, S., Updegrove, K. Bacteriological screening of donor human milk before and after holder pasteurization. Breastfeed Med. 5 (3), 117-121 (2010).
- Cacho, N. T., et al. Personalization of the microbiota of donor human milk with mother's own milk. Front Microbiol. 8, 1470(2017).
- Pumping breast milk. , Centers for Disease Control and Prevention - CDC. https://www.cdc.gov/nutrition/infantandtoddlernutrition/breastfeeding/pumping-breast-milk.html (2023).
- Expressing and storing breast milk. , NHS UK. https://www.nhs.uk/conditions/baby/breastfeeding-and-bottle-feeding/breastfeeding/expressing-breast-milk/ (2020).
- Arslanoglu, S., et al. Recommendations for the establishment and operation of a donor human milk bank. Nutr Rev. 81 (Supplement_1), 1-28 (2023).
- Moro, G. E., et al. Processing of donor human milk: Update and recommendations from the European Milk Bank Association (EMBA). Front Pediatr. 7, 49(2019).
- Landers, S., Hartmann, B. T. Donor human milk banking and the emergence of milk sharing. Pediatr Clin North Am. 60 (1), 247-260 (2013).
- Stachelska, M. A. Identification of Lactobacillus delbrueckii and Streptococcus thermophilus strains present in artisanal raw cow milk cheese using real-time PCR and classic plate count methods. Pol J Microbiol. 66 (4), 491-499 (2017).
- Ruiz, L., et al. Comparison of two approaches for the metataxonomic analysis of the human milk microbiome. Front Cell Infect Microbiol. 11, 622550(2021).
- Lopez Leyva, L., Brereton, N. J. B., Koski, K. G. Emerging frontiers in human milk microbiome research and suggested primers for 16S rRNA gene analysis. Comp Struct Biotechnol J. 19, 121-133 (2021).
- Bolger, A. M., Lohse, M., Usadel, B. Trimmomatic: A flexible trimmer for Illumina sequence data. Bioinformatics. 30 (15), 2114-2120 (2014).
- Bolyen, E., et al. interactive, scalable and extensible microbiome data science using QIIME 2. Nat Biotechnol. 37 (8), 852-857 (2019).
- McMurdie, P. J., Holmes, S. phyloseq: An R package for reproducible iInteractive analysis and graphics of microbiome census data. PLoS ONE. 8 (4), e61217(2013).
- R Core Team. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. https://www.R-project.org/ (2024).
- Torrez Lamberti, M. F., et al. Metabolomic profile of personalized donor human milk. Molecules. 25 (24), 5783(2020).
- Mallardi, D., et al. Inoculation of mother's own milk could personalize pasteurized donor human milk used for feeding preterm infants. J Transl Med. 19 (1), 420(2021).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
