Methodenartikel

Schnelle Identifizierung von Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis und Ureaplasma urealyticum durch RNA-Amplifikations-Lateral-Flow-Assay

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DOI:

10.3791/68413

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20. Juni 2025

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1The First People's Hospital of Foshan

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll, das den RNA-Amplifikations-Lateral-Flow-Assay demonstriert und die Wirksamkeit beim schnellen Nachweis von Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis und Ureaplasmaurealyticum bewertet.

Zusammenfassung

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (CT) und Ureaplasma urealyticum (UU) sind häufige Krankheitserreger, die mit sexuell übertragbaren Krankheiten (STDs) in Verbindung gebracht werden. NG ist der Erreger der Gonorrhoe, die zu verschiedenen Erkrankungen des Urogenitalsystems führen kann, darunter Nebenhodenentzündung, Prostatitis, Zervizitis und Unfruchtbarkeit. CT ist ein Mikroorganismus, der für Nicht-Gonokokken-Urethritis und entzündliche Erkrankungen des Beckens verantwortlich ist. UU wird mit Nicht-Gonokokken-Urethritis, Zervizitis, Prostatitis und Unfruchtbarkeit in Verbindung gebracht. Aktuelle molekulare Technologien zur Analyse von NG, CT und UU sind oft komplex und zeitaufwändig. Schnelle molekulare Tests auf diese Erreger können die Früherkennung von sexuell übertragbaren Krankheiten erleichtern. Der RNA-Amplifikations-Lateral-Flow-Assay (RGT) ist eine Methode, die keine Nukleinsäureextraktion erfordert. Bei diesem Verfahren werden Proben lysiert, um Nukleinsäurefragmente freizusetzen, die dann durch reverse Transkription und Transkription amplifiziert werden. Das amplifizierte RNA-Produkt wird von spezifischen Sonden erkannt und eingefangen, wodurch ein RNA-Detektionssonden-Goldsonden-Komplex gebildet wird, der über laterale Strömung auf einer Nitrozellulosemembran immobilisiert werden kann, um sichtbare Banden zu erzeugen. Der gesamte Eingriff dauert weniger als 1 Stunde. Ziel dieser Studie war es, die Wirksamkeit von RGT für den schnellen Nachweis von NG, CT und UU zu bewerten. Insgesamt wurden 1.416 Proben eingeschlossen. Die Konsistenz von NG, CT und UU bei der Analyse mittels RGT im Vergleich zur Polymerase-Kettenreaktion (PCR)-Fluoreszenzsondierungsmethode betrug 99,03 % (307/310), 99,38 % (159/160) bzw. 99,02 % (303/306). Die Konsistenz von NG, CT und UU bei der Analyse mittels RGT im Vergleich zur Gensequenzierung betrug 99,17 % (238/240), 98,95 % (188/190) bzw. 98,30 % (173/176). Im Vergleich zur Erregerisolationskulturmethode lagen die Nachweisraten für NG-, CT- und UU-Assays bei 100,00 % (9.9., 17.17., 8.8.). Die hohe Sensitivität und Spezifität, die einfache Handhabung und der reduzierte Zeitaufwand machen diesen Assay ideal für den schnellen und genauen Nachweis von NG, CT und UU.

Einleitung

Sexuell übertragbare Infektionen (STIs) stellen weltweit eine große Herausforderung für die öffentliche Gesundheit dar und führen zu schwerwiegender Genital- und Fortpflanzungsmorbidität und Mortalität1. Neisseria gonorrhoeae (NG) ist der Erreger der Gonorrhoe, wobei weltweit jährlich etwa 87 Millionen neue Fälle gemeldet werden2. Dieser Erreger induziert Entzündungen in erster Linie, indem er in das säulenförmige Epithel des Urogenitaltraktes eindringt3. Chlamydia trachomatis (CT), ein weiterer Mikroorganismus, ist für Nicht-Gonokokken-Urethritis und Beckeninfektionen verantwortlich und verursacht jedes Jahr rund 130 Millionen neue Fälle4. Ureaplasma urealyticum (UU), die einfachste und kleinste selbstreplizierende Zelle, dringt leicht in geschädigtes Gebärmutterhalsgewebe ein und wird mit Nicht-Gonokokken-Urethritis, Zervizitis, Prostatitis und Unfruchtbarkeit in Verbindung gebracht5. Alle diese Infektionen verlaufen sowohl bei weiblichen als auch bei männlichen Patienten oft asymptomatisch, können jedoch zu schweren Komplikationen führen, wenn sie nicht sofort behandelt werden. Mütterliche Infektionen können zu schwerwiegenden unerwünschten Schwangerschaftsergebnissen führen, einschließlich Totgeburten, Fehlgeburten, Frühgeburten und direkten fetalen Infektionen6. Daher ist die Entwicklung einer schnellen, sensitiven, spezifischen und benutzerfreundlichen Methode zum Nachweis von Krankheitserregern von größter Bedeutung.

Der schnelle und genaue Nachweis von Krankheitserregern ist entscheidend für eine effektive Diagnose und Behandlung von Krankheiten. Herkömmliche Kulturmethoden, die die Isolierung, Kultivierung und Identifizierung von Krankheitserregern erfordern, haben erhebliche Nachteile, darunter Zeitaufwand und geringe Empfindlichkeit. Obwohl die Gensequenzierung eine hohe Genauigkeitsrate aufweist, erfordert sie eine komplexe Umgebung und Ausrüstung, was sie kostspielig und auch zeitaufwändig macht. Konventionelle molekulare Technologien für die Analyse von NG, CT und UU sind weithin akzeptiert; Diese Methoden sind jedoch oft kompliziert und zeitaufwändig und erfordern eine ausgeklügelte Instrumentierung, geschulte Techniker und lange Bearbeitungszeiten. Daher besteht ein dringender Bedarf an einer einfachen und zuverlässigen molekulardiagnostischen Methode, um die Grenzen herkömmlicher Ansätze zu überwinden. Der RNA-Amplifikations-Lateral-Flow-Assay (RGT) bietet eine schnelle, empfindliche und spezifische Alternative, ohne dass komplexe Verfahren erforderlich sind 7,8. Bei dieser Methode werden Proben direkt lysiert, um Nukleinsäurefragmente ohne Nukleinsäureextraktion freizusetzen, und diese Fragmente werden durch reverse Transkription und Transkription amplifiziert. Das amplifizierte RNA-Produkt wird dann von spezifischen Sonden erkannt und eingefangen, wodurch ein RNA-Detektionssonden-Goldsonden-Komplex gebildet wird, der auf einer Nitrozellulosemembran über laterale Strömung immobilisiert werden kann, um sichtbare Bandenzu erzeugen 9. Der gesamte Prozess dauert weniger als 1 Stunde und eignet sich daher sehr gut für Notfall-Labortests.

In dieser Studie rekrutierten wir 1.416 Proben, um die Verwendung von RGT zum Nachweis von NG, CT und UU zu bewerten. Die Proben wurden mittels RGT, PCR-Fluoreszenzsondierung, Gensequenzierung und Erregerisolationskulturmethoden analysiert. Die Ergebnisse zeigten, dass die RGT-Methode genau war und mit herkömmlichen diagnostischen Methoden übereinstimmte. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die hohe Sensitivität und Spezifität, die Benutzerfreundlichkeit und der reduzierte Zeitaufwand diesen Assay ideal für den schnellen und genauen Nachweis von NG, CT und UU machen, was auf seine vielversprechende Anwendung in der medizinischen Vorabdiagnose von sexuell übertragbaren Krankheiten hindeutet.

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Protokoll

Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit den ethischen Richtlinien und der Genehmigung des Institutional Review Board des First People's Hospital of Foshan, Provinz Guangdong, China, durchgeführt (Ethical Review Document No. LR (2025) 136). Insgesamt wurden prospektiv 1.416 Genitalabstrichproben (716 von weiblichen Patienten, 700 von männlichen Patienten) von Personen mit klinischem Verdacht auf sexuell übertragbare Krankheiten entnommen, die sich in den letzten 14 Tagen keiner Antibiotikatherapie unterzogen hatten (Ergänzende Tabelle 1). Für jeden Teilnehmer wurden gleichzeitig gepaarte Abstriche entnommen und parallel analysiert: einer nach der Testmethode (RGT) und der andere nach der Referenzmethode (PCR-Fluoreszenzsondierung, Gensequenzierung bzw. Erregerisolierungskultur). Die Übereinstimmung zwischen den Methoden wurde unter Verwendung des Cohen-Kappa-Koeffizienten (κ) quantifiziert, wobei sich die Interpretation an den Kriterien von Landis und Koch orientierte.

HINWEIS: Das Assay-Protokoll für CT und UU folgt identischen Verfahrensschritten wie die für NG beschriebenen, wobei die Modifikationen auf erregerspezifische Reagenzien beschränkt sind. Detaillierte Reagenzienformulierungen finden Sie in Schritt 2.1 (Ergänzende Tabelle 2, Ergänzende Tabelle 3 und Ergänzende Tabelle 4).

1. Probenentnahme

  1. Anwendbarer Probentyp: Entnahme von Genitalabstrichen (weiblicher Gebärmutterhalsabstrich, männlicher Harnröhrenabstrich).
  2. Probensammlung
    1. Führen Sie den Genitalabstrich für 2-3 cm in die männliche Harnröhrenöffnung oder ca. 1-2 cm in die weibliche Gebärmutterhalsöffnung ein.
    2. Einmal drehen und 10 s halten.
    3. Entfernen Sie den Tupfer und führen Sie ihn in das Entnahmeröhrchen ein, das 1 ml normale Kochsalzlösung enthält.
    4. Brechen Sie den Schwanz des Tupfers ab, entsorgen Sie ihn und ziehen Sie dann den Röhrchendeckel fest.
    5. Notieren Sie die Entnahmezeit und führen Sie den Test zeitnah durch.
  3. Lagerung und Transport von Proben
    1. Transportieren Sie die Proben bei Raumtemperatur (RT) innerhalb von 4 h oder bei 2-8 °C mit einem Eisbeutel innerhalb von 24 h.
    2. Die restlichen Zellpellets der verarbeiteten Proben sind 3 Monate lang bei -20 °C oder bis zu 6 Monate bei -80 °C zu lagern, wenn die Tests nicht rechtzeitig durchgeführt werden können.

2. Vorbereitung

  1. Reagenzien
    1. Für Reagenzien von NG-Nukleinsäure-Assays siehe Ergänzende Tabelle 2.
    2. Für Reagenzien von CT-Nukleinsäure-Assays siehe Ergänzende Tabelle 3.
    3. Für Reagenzien des UU-Nukleinsäure-Assays siehe Ergänzende Tabelle 4.
    4. Lagerung: Lagern Sie alle Reagenzien bei Temperaturen von -40 °C bis -15 °C und die Detektionskarten bei Temperaturen zwischen 2 °C und 30 °C.
      HINWEIS: Der Amplifikationspuffer und die Nachweislösung sollten vor der Verwendung auf RT äquilibriert werden, basierend auf den täglichen Nachweisanforderungen. Nach Erreichen der RT sollten sie bei 4 °C gelagert werden und können für die nächste Detektion verwendet werden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen. Das Amplifikationsenzym sollte bei -20 °C gelagert werden, außer während des Versuchsprozesses. Ein Anstieg der Lagertemperatur kann zu einem Rückgang oder Verlust der Enzymaktivität führen.
  2. Anforderungen an die experimentelle Umgebung
    1. Führen Sie das Experiment in vier physisch getrennten Zonen durch:
      1. Bereich der Reagenzienvorbereitung: Bei 22 ± 1 °C mit positivem Luftdruck halten (Luftdurchsatz mit hocheffizienter Schwebstofffilterung (HEPA) ≥ 0,3 m/s). Lagern Sie voraliquotierte Reagenzien in UV-sterilisierten Schränken.
      2. Bereich für die Probenvorbereitung: Die gesamte Probenhandhabung erfolgt in einer biologischen Sicherheitswerkbank der Klasse II, die mit 70 % Ethanol vorbehandelt ist.
      3. Verstärkungsbereich: Betreiben Sie Thermocycler auf schwingungsdämpfenden Tischen.
      4. Produktanalysebereich: Verwenden Sie eine UV-sterilisierte Bank (30 min Exposition vor/nach dem Gebrauch).
    2. Regulieren Sie den Personal- und Luftstrom in jedem Bereich, um Kreuzkontaminationen wie folgt zu vermeiden:
      1. Halten Sie einen unidirektionalen Luftstrom von der Reagenzienvorbereitung zu den Produktanalysezonen aufrecht.
      2. Stellen Sie einen Unterdruck im Bereich der Probenvorbereitung sicher (-5 Pa relativ zu den angrenzenden Zonen).
      3. Beschränken Sie die Bewegung des Personals; Dekontaminieren Sie die Handschuhe mit 75 % Ethanol, bevor Sie die Zone übergehen.
      4. Installieren Sie Schleusentüren mit Verriegelungssystemen (mindestens 30 s Verzögerung zwischen den Öffnungen).
    3. Verwenden Sie zonenspezifische Verbrauchsmaterialien (z. B. Zentrifugenröhrchen, Pipettenspitzen usw.) und entsorgen Sie Verbrauchsmaterialien nach einmaligem Gebrauch.
    4. Aufrechterhaltung der Sauberkeit und Qualitätskontrolle:
      1. Reinigen Sie die Bänke täglich mit 10 % Natriumhypochlorit, gefolgt von 75 % Ethanol oder destilliertem Wasser.
      2. Validierung der Sterilität von Verbrauchsmaterialien durch Endotoxintests (Limulus-Amöbozyten-Lysat-Assay, <0,25 EU/ml).
      3. Überwachen Sie die Luftqualität wöchentlich mit Hilfe von Absetzplatten (Tryptischer Soja-Agar [TSA]-Agar, ≤5 koloniebildende Einheiten (KBE)/Platte nach 4 Stunden Exposition).
  3. Qualifikation des Personals
    1. Besitzen Sie Zertifikate oder Qualifikationen in Bezug auf die PCR-Technologie, um die Genauigkeit und Zuverlässigkeit dieses Experiments zu gewährleisten.

3. Lysieren Sie die Zellen, um RNA zu extrahieren

  1. Bearbeitung von Proben
    1. Wirbeln Sie das Probenentnahmeröhrchen 10 s lang mit 2.600 Mal/min vor, um die Zellen aus dem Tupferkopf in die Lösung zu entfernen.
    2. Übertragen Sie 1 ml der Lösung mit einer kalibrierten Pipette auf 1000 μl in ein 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen.
    3. Bei 12.000 × g für 2 min bei 25 °C zentrifugieren.
    4. 950 μl des Überstands werden aspiriert, ohne das Pellet zu stören. Resuspendieren Sie die Pellets in 25 μl Restlösung, indem Sie mit einer kalibrierten 200-μl-Pipette auf 50 μl 10 Mal auf und ab pipettieren.
  2. Lyse von Proben- und Qualitätskontrollmaterialien
    1. Zelllysepuffer und Negativkontrolle bei 25 °C für 15 min voräquilibrieren.
    2. Zentrifugieren Sie die Materialien für die Qualitätskontrolle bei 1000 × g für 10 s bei 25 °C, um sicherzustellen, dass sich alle Pulver am Boden des Röhrchens absetzen.
    3. Geben Sie 30 μl Lysepuffer zu den Qualitätskontrollmaterialien und 20 μl zu den Proben.
    4. 10 min bei 25 °C inkubieren.
      HINWEIS: Bei der Verwendung des Zelllysepuffers ist es wichtig, ihn gründlich zu mischen. Mischen Sie durch 15-maliges Pipettieren (200 μL Spitze) und geben Sie sowohl die Partikel als auch die Flüssigkeit zum Niederschlag. Führen Sie die Positivkontrolle in einer UV-behandelten Biosicherheitswerkbank der Klasse II durch, gefolgt von einer 10%igen Natriumhypochlorit-Dekontamination.

4. Isotherme RNA-Amplifikation

  1. Voräquilibrierung des Amplifikationspuffers
    1. Den Amplifikationspuffer auftauen und 15 min lang bei 25 °C ± 1 °C äquilibrieren.
  2. Einrichtung der Steuerung
    1. Beziehen Sie sowohl die Positiv- als auch die Negativkontrolle in jeden Versuchslauf ein.
  3. Etikettierung von Tuben
    1. Beschriften Sie die Amplifikationsröhrchen entsprechend der Anzahl der Proben.
  4. Reaktions-Montage
    1. Pipettieren Sie 17 μl Amplifikationspuffer mit einer kalibrierten 20-μl-Pipette in jedes Röhrchen. Geben Sie 2 μl der Probe oder des Kontrolllysats direkt in das Puffertröpfchen.
      HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass das Lysat in den Puffer eintritt, ohne die Röhrchenwand zu berühren (bei Bedarf kurz bei 500 × g für 5 s zentrifugieren). Verschließen Sie die Röhrchen sofort, um eine Kontamination des Aerosols zu verhindern.
  5. Thermische Aktivierung
    1. Inkubieren Sie die Röhrchen in einem vorgewärmten Thermocycler nach folgendem Programm:
      Schritt 1: 95 °C für 2 min (Denaturierung)
      Schritt 2: 42 °C für 2 min (Grundglühen).
  6. Enzymatische Amplifikation
    1. Geben Sie 1 μl Amplifikationsenzym in jedes Röhrchen und mischen Sie, indem Sie das Röhrchen 5 Mal schnippen, gefolgt von einer kurzen Zentrifugation (500 × g für 5 s). Übertragen Sie die Röhrchen sofort für 45 min in einen zweiten vorgeheizten Thermocycler bei 42 °C.
      HINWEIS: Um Temperaturschwankungen zu vermeiden, verwenden Sie separate Inkubatoren, von denen einer auf 95 °C und der andere auf 42 °C eingestellt ist. Halten Sie bei Läufen mit mehreren Proben die verbleibenden Amplifikationsröhrchen bei 42 °C, während Sie das Amplifikationsenzym in das letzte Amplifikationsröhrchen geben.

5. Lateral-Flow-Assay

  1. Nachweislösung vor der Äquilibrierung
    1. Übertragen Sie die Detektionslösung für 10 Minuten bei 42 °C in den Inkubator.
  2. Homogenisierung
    1. Die Detektionslösung 15 s lang mit 2.600 Mal/min wirbeln, bis die Farbe gleichmäßig ist.
  3. Aufrechterhaltung der Temperatur
    1. Halten Sie die Nachweislösung vor der Verwendung ≤30 Minuten lang bei 25 °C ± 2 °C.
  4. Initiierung der Reaktion
    1. Geben Sie 30 μl Detektionslösung mit einer kalibrierten 20-200 μl-Pipette in jedes Amplifikationsröhrchen.
      HINWEIS: Die Pipettenspitze muss während der Abgabe in einem Winkel von 45° mit der Röhrchenwand in Berührung kommen, um Blasenbildung zu vermeiden.
  5. Hybridisierung
    1. Mischen Sie die Lösung, indem Sie sie 5 Mal auf und ab pipettieren und in einem vorgeheizten Inkubator bei 53 °C 10 Minuten lang inkubieren.
  6. Vorbereitung des Assay-Geräts
    1. Entfernen Sie die Detektionskarten aus den Folienbeuteln.
      HINWEIS: Vermeiden Sie es, die Applikationszone der Probe zu berühren.
  7. Anwendungsbeispiel
    1. Übertragen Sie die gesamte Mischung mit einer 20-200-μl-Pipette in den Probenanschluss der Detektionskarte.
    2. Legen Sie die Detektionskarte sofort für 15 min in einen 42 °C heißen Inkubator.

6. Analyse der Ergebnisse

  1. Kontrollierte Umgebung zum Auslesen
    1. Halten Sie die Detektionskarten während der visuellen Interpretation in einem vorgeheizten Inkubator bei 53 °C, um die Signalintensität zu stabilisieren.
  2. Visuelles Interpretationsprotokoll
    1. Lesen Sie die Testergebnisse direkt durch visuelle Inspektion der Banden auf den Detektionskarten innerhalb von 10-20 min ab.
      HINWEIS: Das Ergebnis wird nach 20 min ungültig.
  3. Die Interpretationsmatrix für die Interpretation von RGT-Ergebnissen finden Sie in der ergänzenden Tabelle 5.
    HINWEIS: Die visuelle Interpretation des Ergebnisses ist in Abbildung 1 dargestellt.

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Ergebnisse

Konsistenz der RGT- und PCR-Fluoreszenzsondierungsmethoden
Insgesamt wurden 310 Proben auf NG analysiert, davon 161 Weibchen und 149 Männchen. Die positive Koinzidenzrate lag bei 98,78 % (95 %-KI: 93,39 %-99,97 %), während die negative Koinzidenzrate bei 99,12 % lag (95 %-KI: 96,87 %-99,89 %). Die Gesamtkoinzidenzrate lag bei 99,03 % (95 %-KI: 97,20 %-99,80 %). Der Kappa-Konsistenzwert betrug 0,975 (95%-KI: 0,947-1,003, Z = 17,171, P < 0,0...

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Diskussion

In dieser Studie wurde RGT zum Nachweis von STI-Erregern, einschließlich NG, CT und UU, eingesetzt. Bei der Durchführung unter strengen Betriebsprotokollen zeigte der RGT-Assay eine starke Übereinstimmung mit etablierten diagnostischen Methoden wie PCR-Fluoreszenzsondierung, Gensequenzierung und Kulturtechniken zur Isolierung von Krankheitserregern. Die Sensitivität und Spezifität des RGT-Assays waren vergleichbar mit denen der zuvor berichteten Methoden oder übertrafen diese, wie vergle...

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Danksagungen

Wir danken Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc. für die Reagenzien und die technische Anleitung, die für diese Studie angeboten wurden.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
10% (w/v)  NatriumhypochloritPräparat im Labor.Vorbereitung im Labor.Verdünnte Bleichlösung zur Dekontamination und Inaktivierung von Krankheitserregern auf Geräten oder Oberflächen.
75% (v/v) EthanolAnte Food Co., Ltd (Anhui, China)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlWässrige Ethanollösung zur Oberflächendesinfektion
Pipette mit einstellbarem Volumen (0,5– 10 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101004Einkanal-Mikropipette für die präzise Handhabung von Volumina im Mikrolitermaßstab.
Pipette mit einstellbarem Volumen (100– 1000 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101014Einkanalpipette, kalibriert für das Handling großer Mengen von Flüssigkeiten.
Pipette mit einstellbarem Volumen (10– 100 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101008Einkanalpipette, die für Zwischenvolumina optimiert ist und häufig in molekularbiologischen Protokollen verwendet wird.
Pipette mit einstellbarem Volumen (20– 200 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101009Einkanalpipette für den Transfer mittlerer Volumina, geeignet für die präzise Aliquotierung von Reagenzien.
Biosicherheitswerkbank (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (Hongkong, China)HF Safe-1200Eine Biosicherheitswerkbank der Klasse II, die den Schutz von Personal, Probe und Umwelt beim Umgang mit pathogenen Mikroorganismen oder Zellkulturen gewährleistet.
ZentrifugenröhrchenHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, China)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Für die Nukleinsäureextraktion, Zellpelletierung und andere Laborverfahren.
Chamydia trachomatis (CT) Nukleinsäure-Assay (RNA-Amplifikation-Lateral-Flow-Assay)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, China)A.10.309-STD-RG-002Zum qualitativen Nachweis von Chamydia trachomatis-Nukleinsäure-RNA in Abstrichproben von Genitalien und Harnwegen.
CO2 InkubatorThermo Fisher Scientific (Asheville, USA) LLCSN:Wird für die Zellkultur verwendet und bietet eine stabile Umgebung mit kontrollierter Temperatur (37 Grad; C), Luftfeuchtigkeit und CO2Konzentration (typischerweise 5 %), um ein optimales Zellwachstum zu gewährleisten.
Kulturplatte Corning Incorporated (Corning, USA)50 mm & akut; 9 mmFür adhärente Zellkulturen und Expansion.
Nachweiskit für Nukleinsäuren gegen Chamydia trachomatis (CT) (PCR-Fluoreszenzuntersuchung)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdChina Medical Device Registration Certificate No. 20143402234Für den qualitativen Nachweis von Nukleinsäuren von Chamydia trachomatis in Abstrichproben von Genitalien und Harnwegen.
Nachweiskit für Nukleinsäuren gegen Neisseria gonorrhoeae (NG)(PCR-Fluoreszenzuntersuchung)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdChina Medical Device Registration Certificate No. 20173401080Für den qualitativen Nachweis von Nukleinsäuren von Neisseria gonorrhoeae in Abstrichproben von Genitalien und Harnwegen.
Detektionskit für Nukleinsäure zu Ureaplasma Urealyticum (UU) (PCR-Fluoreszenzuntersuchung)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdChina Medical Device Registration Certificate No. 20173400536Für den qualitativen Nachweis der Nukleinsäure von Ureaplasma Urealyticum in Abstrichproben im Genital- und Harntrakt.
DMEM-MediumThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)11965092Für Chlamydia trachomatis-Kultur.
Filter-Pipettenspitzen (10 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, China)TF-10-BXLFür präzises Pipettieren in den Experimenten.
Filter-Pipettenspitzen (200 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, China)TF-200-BXLFür präzises Pipettieren in den Experimenten.
GenitalabstrichHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, China)Hz112Sterile Wattestäbchen mit Wattespitze zur Entnahme klinischer Proben von Oberflächen der Genitalschleimhaut.
Gibco Fetales Rinderserum (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)10270106Für die Chlamydia trachomatis-Kultur.
GlasobjektträgerHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, China)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Standard-Objektträger mit Anti-Fade-Behandlung zur Vorbereitung von Zellabstrichen oder Gewebeschnitten, kompatibel mit Gram-Färbeprotokollen.
Goldenstar RT6 cDNA Synthesis Kit Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (Peking, China)TSK302SFür die Synthese des ersten cDNA-Strangs im ersten Schritt der zweistufigen RT-PCR. Es enthält alle Reagenzien, die für die Synthese von cDNA aus RNA benötigt werden.
Gram Stain KitBaso Diagnostics,Inc. (Zhuhai, China)BA4012Ein Färbekit mit Kristallviolett, Jod, Entfärbungsmittel und Safranin zur Unterscheidung von Neisseria Gonorrhoeae.
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (New York, USA)Version 25.0Für die Datenanalyse.
Infrarot-SterilisatorHuaxixinrui (Qingdao) Analytical Instruments Co., Ltd.MJ-200WZur sofortigen Dekontamination von Impfösen oder Pinzetten zur Minimierung von Kreuzkontaminationen in Biosicherheitswerkbänken.
ImpfschlaufeBKMAM Biotechnology Co., Ltd. (Hunan, China)110306002Für den mikrobiellen Probentransfer, Streifen oder die Inokulation.
Inverses Mikroskop (IX-51)Olympus Corporation (Tokio, Japan)Asset Code of Labortory:  71807101Zur Beobachtung adhärenter Zellen oder der Dynamik lebender Zellen in Kulturschalen.
MALDI Biotyper automatisiertes mikrobielles MassenspektrometriesystemBruker Daltonics GmbH & Co. KG (Bremen, Deutschland)Nationale Importregistrierung für Medizinprodukte Nr. 20182222017Ein auf MALDI-TOF basierendes Massenspektrometrie-basiertes System zur schnellen mikrobiellen Identifizierung mittels Proteinprofiling, das die Speziesbestimmung von Bakterien und Pilzen in klinischen mikrobiologischen Laboratorien ermöglicht.
McCoy-ZelllinienIm Labor konserviert.Im Labor konserviert.Für Chlamydia trachomatis-Kultur.
Mikrotiterplatten-Thermostat-Inkubator Leopard70-4 (Kapazität mit 4 Platten)Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.Leopard70-4Ein Mikrotiterplatten-Inkubator für bis zu 4 Standard-Mikrotiterplatten mit einem Temperaturbereich von Umgebungstemperatur bis 70°; C,  Wird für die Inkubationsschritte verwendet.
Mikroskop (OLYMPUS CX43)Olympus Corporation (Tokio, Japan)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/Für die klinische Probenbeobachtung (z. B. Zellmorphologie, gefärbte Proben).
Mini-Metallbad MiniG-R100Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.MiniG-R100Zur schnellen Temperaturregelung während des Experiments, z. B. zum Erhitzen, Inkubieren oder Beenden von Reaktionen in kleinvolumigen Proben.
Neisseria gonorrhoeae (NG) Nukleinsäure-Assay (RNA-Amplifikation-Lateral-Flow-Assay)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, China)A.10.309-STD-RG-001Zum qualitativen Nachweis von Neisseria gonorrhoeae Nukleinsäure-RNA in Abstrichproben von Genitalien und Harnwegen.
Nukleinsäure-ExtraktionsreagenzWuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Wuhan, China)A.10.105-SC-001Für die Extraktion, Anreicherung und Reinigung von Nukleinsäuren.
ProbentransportmediumQIAGEN N.V. (Venlo, Niederlande)5128-1220Dieses Medium wurde speziell für die Entnahme, Konservierung und den Transport klinischer Proben entwickelt und stellt die Lebensfähigkeit von Chlamydia trachomatis sicher. und  Neisseria gonorrhoeae  für nachfolgende diagnostische Untersuchungen.
ThermostatzentrifugeBeckman Coulter, Inc. (Brea, USA)SN: MRZ21L037Für die Pelletierung von Zell-, Mikroben- oder Nukleinsäuren.
TM mediumShanghai Yihua Medical Science & Technology Co., Ltd (Shanghai, China)Pu Medical Device Filing No. 20140081TM kann für die Isolierung, Kultivierung und Identifizierung von Neisseria gonorrhoeae aus klinischen Proben verwendet werden, um die Diagnose von Gonorrhoe zu unterstützen.
Trypsin-EDTA (0,25%)Thermo Fisher Scientific Inc.(Waltham, USA)25200072Zur schonenden Dissoziation adhärenter Zellen während der Subkultivierung oder experimenteller Eingriffe.
Ureaplasma urealyticum (UU) Nukleinsäure-Assay (RNA-Amplifikation-Lateral-Flow-Assay)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, China)A.10.309-STD-RG-003Zum qualitativen Nachweis von Ureaplasma Urealyticum Nukleinsäure-RNA in Abstrichproben von Genitalien und Harnwegen.
Ureaplasma urealyticum und Mycoplasma hominis Selective Isolation Culture, Identification and Drug Sensitivity KitHebei Zhongaisheng Biotechnology Co., Ltd.(Hebei, China)Hebei Medical Device Registration No. 20152400168Für die selektive Isolierung, Kultur, Identifizierung und Bestimmung der Arzneimittelempfindlichkeit von Ureaplasma urealyticum und Mycoplasma hominis.
Vortex-MischerXinkang Medical Instrument Co. Ltd (Jiangsu, China)XK80-ALaborgerät zum Homogenisieren von flüssigen Proben durch schnelles Rühren.
300504406 Das Medium Shanghai

Referenzen

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