Dieses Protokoll beschreibt Verfahren für die Leber, die erweiterte Kühllagerung und die orthotope Transplantation beim Daurian-Ziesel (DGS; Spermophilus dauricus), ein typischer saisonaler Winterschläfer. Es umfasst Methoden zur Entnahme von Lebertransplantaten und Blutproben für prognostische Auswertungen und deren Verarbeitung für einzelzellbasierte Studien.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Management und Probenentnahme nach Lebertransplantation bei Daurian-Zieseln für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Wiederherstellung der Transplantatfunktion und die Immunkompatibilität zwischen Transplantat und Transplantatwirt stellen nach einer Lebertransplantation wichtige prognostische Bedenken dar. Kritisch ist, dass konventionelle Nagetiermodelle mit Ratten oder Mäusen nur einen begrenzten Einblick in die Mechanismen von hypothermieinduzierten Transplantatverletzungen während der Konservierung bieten. Diese Lücke unterstreicht den Bedarf an alternativen Modellen. Da Lebertransplantate des kälteadaptiven Daurischen Ziesels (DGS; Spermophilus dauricus) kann eine verlängerte Kältekonservierung aufrechterhalten und somit eine hohe Überlebensrate bei DGS nach der Transplantation unterstützen, daher beschreibt dieses Protokoll die wesentliche postoperative Tierpflege und physiologische Überwachung, die für transplantierte DGS-Probanden erforderlich ist. Darüber hinaus bietet es standardisierte Verfahren zur Aufbereitung hochwertiger Lebertransplantatproben für nachgelagerte Analysetechniken, einschließlich der Einzelzell-RNA-Sequenzierung (scRNA-seq) für die transkriptomische Profilerstellung und histopathologische Untersuchung. Die erfolgreiche Generierung gut präparierter DGS-Transplantatproben ist der entscheidende erste Schritt bei der Anwendung sowohl traditioneller als auch modernster Methoden zur Untersuchung dieses unkonventionellen, aber hochrelevanten Modells. Dieses Protokoll befasst sich mit den multi-omischen Informationen für DGS und erleichtert so die zukünftige Forschung zu chirurgischen Eingriffen und Krankheitsmodellierung nicht nur bei überwinternden Nagetieren, sondern auch bei anderen spezialisierten Organismen.
Einleitung
In den letzten zwei Jahrzehnten haben immer mehr Forscher erkannt, dass die überlegenen Anpassungsfähigkeiten von überwinternden Arten unschätzbare Möglichkeiten bieten, neue Mechanismen der biologischen Anpassung aufzudecken, und Durchbrüche in verschiedenen medizinischen Bereichen wie der Organkonservierung und der metabolischen Rehabilitation inspirieren können 1,2,3,4,5,6,7,8 . Das erste umfassende chirurgische Protokoll für die verlängerte Erkältungskonservierung der Leber und die orthotope Transplantation bei einem Winterschläfer, dem Daurian-Ziesel (DGS; Spermophilus dauricus) wurde kürzlich etabliert. Offensichtlich ermöglicht die kälteadaptive Natur des DGS eine verlängerte Kühllagerung der Spendertransplantate und eine hohe Überlebensrate der Empfängertiere nach der Transplantation. Daher ist ein Follow-up-Protokoll erforderlich, um die postoperative Genesung des Tieres zu überwachen und Proben für verschiedene histopathologische und omics-Studien vorzubereiten.
Angesichts der signifikanten physiologischen Unterschiede zwischen den DGS und den Standard-Nagetiermodellen und der komplexen und dynamischen physiologischen Veränderungen nach der Lebertransplantation bei den Empfängertieren ist die Gewinnung qualitativ hochwertiger Proben von ihnen entscheidend für die nachgelagerten Analysen und damit für das Verständnis der Transplantat-Wirt-Physiologie nach der Transplantation. Anders als bei der Gewinnung, Verarbeitung und Untersuchung von Blut- und Lebergewebeproben mit herkömmlichen Methoden würde eine erfolgreiche Dissoziation der Leberparenchymzellen, bei denen es sich um Hepatozyten handelt, und der nicht-parenchymalen Zellen (NPCs), zu denen Endothelzellen, Sternzellen, Kupffer-Zellen und andere Immunzellen gehören, die Aufklärung der komplexen postoperativen zellulären und molekularen Wechselwirkungen mit der sich schnell entwickelnden einzelzellbasierten Multi-Omics ermöglichen. Zu diesem Zweck wurde seit Anfang der 1950er Jahre die klassische Kollagenase-Perfusionsmethode weiterentwickelt und kontinuierlich weiterentwickelt 9,10,11. Nichtsdestotrotz erfordern die ausgeprägte anatomische Struktur der DGS-Leber, die durch die Gefäßrekonstruktion induzierten postoperativen Adhäsionen und die chirurgisch ausgelösten physiologischen Veränderungen in den Lebertransplantaten eine Feinabstimmung der Extraktionsbedingungen.
Dieses Protokoll enthält eine detaillierte Richtlinie für die postoperative Behandlung und Probenentnahme bei DGS nach einer Lebertransplantation. Insbesondere ermöglicht dieses Protokoll die Isolierung von Hepatozyten aus Lebertransplantaten mit hoher Ausbeute und Zellviabilität und beschreibt die anschließende Verarbeitung von isolierten Hepatozyten für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung (scRNA-seq).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Alle Tierversuche wurden vom Peking University Institutional Committee for Animal Care and Use (LSC-WangSQ-2) genehmigt. Die in dieser Studie verwendeten DGS wurden im Labor von schwangeren weiblichen DGS hergestellt, die auf dem Grasland der Stadt Zhangjiakou gefangen wurden. Die Tiere waren zum Zeitpunkt des Versuchs etwa 1-2 Jahre alt. Sowohl männliche als auch weibliche DGS mit einem Gewicht zwischen 180 g und 400 g wurden als Spender und Empfänger verwendet. Das Gewicht des Empfängers war etwas größer als das des Spenders, mit einem Unterschied von weniger als 50 g. Die verwendeten Reagenzien und die verwendeten Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.
1. Nachsorge nach der Transplantation
- Lagern Sie die DGS nach der Lebertransplantation in einer warmen und sauberen Umgebung unter einem Hell-Dunkel-Zyklus von 12:12 Uhr, wobei Standard-Laborfutter und Wasser ad libitum bereitgestellt werden.
- Überwachen Sie täglich das Körpergewicht, beurteilen Sie den Bauchschnitt auf Blutungen und beobachten Sie den mentalen Zustand und das Aktivitätsniveau des Empfängers.
- Unmittelbar nach der Operation ist die subkutane Injektion von Cefuroxim (16 mg/kg) und Buprenorphin (0,05 mg/kg) alle 12 Stunden für 3 Tage zu verabreichen.
- Intramuskulär injizieren Sie Tacrolimus (1 mg/kg) täglich bis 24 h vor der Gewebeentnahme.
HINWEIS: Da die DGS hauptsächlich aus Wildfängen stammen, bleiben immunologische Faktoren bei der Transplantation nicht zu vernachlässigen. Die Transplantation zwischen DGS gilt als allogene Transplantation (nicht als syngene Transplantation). Wenn in der Studie immunologische Faktoren, wie z. B. Abstoßung, ausgeschlossen werden müssen, stellen Sie sicher, dass der Tacrolimus in der postoperativen Phase standardisiert ist.
2. Vorbereitung der Lebertransplantatprobe
- Vorbereitung von Lösungen und Instrumenten
- Bereiten Sie 50 mL HBSS mit 500 μM EGTA ( Ca2+- und Mg2+-frei; pH 7,4) vor. Vor Gebrauch in einem 40 °C warmen Wasserbad vorwärmen.
- Kollagenase IV (0,4 mg/ml) in 50 mL HBSS (mit Ca2+ und Mg2+) auflösen und 30 Minuten lang bei 40 °C Wasserbad inkubieren.
- Percoll-Lösung: Mischen Sie Percoll mit 10× PBS in einem Verhältnis von 9:1 (v/v) und verdünnen Sie es mit 1× PBS in einem Verhältnis von 9:1 (v/v) in ein 15-ml-Röhrchen. Bewahren Sie die Lösung auf Eis auf.
HINWEIS: 5 ml 90%ige Percoll-Lösung sind pro DGS ausreichend. - Tauchen Sie chirurgische Instrumente vor Gebrauch 30 Minuten lang in 70%iges Ethanol.
- Montieren Sie das Perfusionssystem, bestehend aus einer Schlauchpumpe mit einstellbarer Drehzahl, einem silastischen Schlauch und einem Wasserbad. Spülen Sie den Schlauch mit warmer Kochsalzlösung, um Luftblasen zu entfernen, und schließen Sie einen sterilen 0,22-μm-Filter an den Schlauchauslass an.
HINWEIS: Vor dem Spülen der Luftblasen ist es notwendig, den wiederverwendeten Schlauch auszuspülen, indem 70 % Ethanol 15 Minuten lang gründlich laufen gelassen wird, gefolgt von einer vollständigen Spülung mit ddH2O für 15 Minuten, um Ethanolreste zu entfernen.
- Verfahren bei Tieren
- Anästhesieren Sie das DGS nach der Transplantation durch intraperitoneale Injektion von 2,5 % Tribromethanol in einer Dosis von 1 ml/100 g Körpergewicht. Führen Sie Tests auf Verlust von Reflexen durch, wie z. B. die Reaktion auf das Einklemmen der Zehen, um eine vollständige Anästhesie zu gewährleisten.
- Rasieren Sie das Bauchfell und fixieren Sie das DGS mit der Bauchseite nach oben auf der Operationsplatte.
- Sprühen Sie 70%iges Ethanol über den Bauchbereich des Tieres und öffnen Sie dann die Bauchhöhle, indem Sie mit einer scharfen Schere und einer Zahnzange einen großen Kreuzschnitt in die Haut und das Bauchfell setzen.
- Bewegen Sie den Darm mit einem Wattestäbchen vorsichtig nach rechts außerhalb der Bauchhöhle, bis das Lebertransplantat, die Pfortader (PV) und die untere Hohlvene (IVC) deutlich freigelegt sind (Abbildung 1A).
HINWEIS: Aufgrund von postoperativen Verwachsungen in der Bauchhöhle nach einer Lebertransplantation die Verwachsungen vorsichtig mit einem feuchten Wattestäbchen präparieren. - Führen Sie eine 5-ml-Spritze in die IVC unterhalb des Anastomosen-Stomas ein, um 1-2 ml Blut zu sammeln, und üben Sie sofort mit einem trockenen Wattestäbchen leichten Druck auf die Einstichstelle aus, um nach dem Herausziehen der Nadel aus dem Gefäß eine Blutstillung zu erreichen (Abbildung 1B).
HINWEIS: Um Blutungen zu minimieren, kann die Nadel durch eine Nadel aus einer 1-ml-Spritze ersetzt werden, die etwa 30 G enthält. - Bei abgeschrägter Ausrichtung punktieren Sie den PV vorsichtig mit einem 22-G-Katheter in einem Winkel von 15° relativ zur Gefäßoberfläche, gefolgt von einem Zurückziehen der Nadel des Katheters. Sobald die erfolgreiche Punktion bestätigt ist, schieben Sie die Kanüle vorsichtig weitere 1-1,5 cm durch das Gefäß. Sichern Sie die Position der Kanüle mit einer Gefäßklemme (Abbildung 1C).
HINWEIS: Wenn die Kanüle richtig platziert ist, ist ein Rückfluss von Blut sichtbar. Wenn die PV-Kanülierung fehlschlägt oder auf technische Herausforderungen stößt, wechseln Sie zur Kanülierung des infrahepatischen IVC und bestimmen Sie die PV als Perfusatabflussweg. - Starten Sie die Perfusionspumpe mit warmer Kochsalzlösung bei 6-8 mL/min, dann verbinden Sie den oben erwähnten 0,22 μm Filter mit der Kanüle.
- Sobald die Perfusion über PV eingeleitet ist, machen Sie einen Schnitt in der IVC, um eine Blutdrainage zu ermöglichen. Für eine ausreichende Perfusion sind 50-80 ml Kochsalzlösung erforderlich (Abbildung 1D).
HINWEIS: Eine erfolgreiche Perfusion wird bestätigt, wenn die transplantierte Leber während dieses Prozesses in eine blassgelb-weiße Farbe übergeht. Einige dunkelrote Bereiche der Stauung können auf der Leberoberfläche verbleiben und nicht vollständig beseitigt werden, was wahrscheinlich auf ein intraoperatives Lebertrauma wie Ischämie-Reperfusionsschäden zurückzuführen ist. - Nach ausreichender Perfusion mit 50-80 ml warmer Kochsalzlösung unterbrechen Sie die Pumpe.
- Ligate den linken lateralen Lappen an seiner Basis mit einer 2-0-Seidennaht, gefolgt von der Exzision des Lappens distal der Ligaturstelle. In ähnlicher Weise wird der Medianlappen an seiner Basis ligiert und mit der gleichen Methode reseziert (Abbildung 1E,F).
HINWEIS: Die partielle Hepatektomie wird durchgeführt, um die Nutzung der transplantierten Leber für mehrere experimentelle Zwecke zu maximieren und den Verbrauch von Kollagenasepuffer zu reduzieren und gleichzeitig eine gründliche Verdauung der Leber zu erleichtern. - Teilen Sie das resezierte Lebergewebe in mehrere Stücke auf: Ein Teil wird für die NPC-Isolierung verwendet, gefolgt von scRNA-seq, die anderen Teile werden für histologische Schnitte in 4 % Paraformaldehyd fixiert oder für andere Experimente in flüssigem Stickstoff schockgefroren.
HINWEIS: Schritt 2.2.11 kann von einer anderen Person gleichzeitig mit den nächsten Schritten durchgeführt werden, um Zeit zu sparen. - Isolierung von NPCs. Das Gewebe wird in das Medium RPMI-1640 in ca. 1-2 mm3 Stücke geschnitten und mit gentleMACS gemäß den Anweisungen des Herstellers enzymatisch verdaut (siehe Materialtabelle). Die Zellviabilität und die Zellkonzentration wurden mit Hilfe eines automatisierten Zellzählers bestimmt.
HINWEIS: Schritt 2.2.12 und die Schritte 2.2.13-2.3.5 werden gleichzeitig ausgeführt. - Schneiden Sie das Diaphragma ab und klemmen Sie die suprahepatische IVC ein (Abbildung 1G).
- Übertragen Sie den Einlaufschlauch in den vorgewärmten EGTA-Puffer. Starten Sie die Pumpe mit einer Geschwindigkeit von 6-8 mL/min neu.
- Klemmen Sie die IVC regelmäßig für 5-10 s ein, um eine gleichmäßige Verteilung der Perfusionslösung im gesamten Leberparenchym zu ermöglichen. Die Leber schwillt beim Klemmen sichtbar an und entspannt sich beim Loslassen.
HINWEIS: Es ist wichtig, eine längere Unterbrechung der Drainage zu vermeiden, da eine längere Verstopfung das dünne Bindegewebe, das die Leber umgibt, zerreißen und die Durchblutung oder die Flüssigkeitsdynamik im Leberkapillarbett stören kann. Darüber hinaus kann eine anhaltende Obstruktion die Lebensfähigkeit der Zellen beeinträchtigen und die Ausbeute aufgrund der Empfindlichkeit der Hepatozyten gegenüber mechanischen Kräften verringern. - Nach der Perfusion mit 40-50 mL EGTA-Lösung initiieren Sie die Kollagenase-Puffer-Perfusion mit einer Geschwindigkeit von 4-6 mL/min für 8-10 min. Klemmen Sie das abfließende Blutgefäß kurz ein, wie in den obigen Schritten (Abbildung 1H).
HINWEIS: Nach 5-6 Minuten Kollagenase-Perfusion wird die Leber merklich weicher und es treten Oberflächenrisse auf. Wenn diese morphologischen Veränderungen nicht vorhanden sind, reduzieren Sie die Perfusionsgeschwindigkeit auf 3-4 ml/min und verlängern Sie die Gesamtaufschlusszeit auf 12-13 min. Nach Abschluss der 50-ml-Kollagenase-Perfusion weist die Leber eine brüchige, tofuähnliche Konsistenz auf, die ein Indikator für eine ausreichende Verdauung ist (Abbildung 1I). - Stoppen Sie die Pumpe und entfernen Sie die Kanüle. Schneiden Sie die Leber vom Körper ab, legen Sie sie in eine 5 cm große Schale mit 10 mL eiskaltem DMEM/F12 Medium.
- Reinigung von Hepatozyten
- Reißen Sie die Leber auf, um Zellen freizusetzen, und geben Sie die Zelllösung in einen konischen 50-ml-Behälter mit einem 70-μm-Filter, der darüber platziert wird.
- Nach dem Zentrifugieren der Zellsuspension bei 50 x g für 3 min bei 4 °C wird der Überstand verworfen und das Pellet mit 20 mL 1× PBS resuspendiert. Wiederholen Sie diesen Schritt 3 Mal. Resuspendieren Sie das Zellpellet nach der letzten Zentrifugation mit 5 mL DMEM/F12 Medium.
- Mischen Sie die Zellsuspension vorsichtig mit einem gleichen Volumen von 90%iger Percoll-Lösung in einem 15-ml-Röhrchen. Zentrifugieren Sie bei 200 x g für 10 min bei 4 °C.
HINWEIS: Nach der Percoll-Zentrifugation trennt sich das Gemisch in drei verschiedene Schichten: Die obere Schicht (ca. 0,5-1 ml) enthält abgestorbene Zellen, während lebensfähige Hepatozyten in der unteren Schicht (ca. 0,5-0,8 ml) konzentriert sind (Abbildung 2). Mit diesem Protokoll wird typischerweise eine Ausbeute von 5-8 × 107 lebensfähigen Hepatozyten mit einer Lebensfähigkeit von >80 % erzielt. (Abbildung 3A,B). - Die abgestorbenen Zellen und der Überstand werden vorsichtig aspiriert, wobei eine starke Störung der Schichten vermieden wird, und die lebensfähigen Zellen werden mit 10 mL DMEM/F12-Medium resuspendiert. Bei 50 x g für 5 min bei 4 °C zentrifugieren.
- Der Überstand wird verworfen und die gereinigten Hepatozyten mit 1-5 ml 1× PBS, ergänzt mit 2 % fötalem Rinderserum, auf eine Endkonzentration von 500-1200 Zellen/μl resuspendiert.
- Mischen Sie die Hepatozyten und NPCs in einem Mengenverhältnis von 1:1, d.h. die Zellsuspension wurde durch Mischen von 10.000 Hepatozyten und 10.000 NPCs hergestellt.
- ScRNA-seq
HINWEIS: Die Schritte 2.4.1 bis 2.4.3 wurden gemäß der Bedienungsanleitung des tröpfchenbasierten Einzelzell-3'-Genexpressionsbibliotheks-Vorbereitungskits12 durchgeführt. Zum Einsatz kam die tröpfchenbasierte mikrofluidische Einzelzellpartitionierungs- und Barcoding-Plattform, die kritische Schritte der Generierung von Gel-Bead-in-Emulsionen (GEM), des Aufbaus von cDNA-Bibliotheken und der Illumina-Sequenzierung nach Standardprotokollen umfasst.- Verwenden Sie für die GEM-Generierung und das Barcoding eine Zellsuspension, die 20.000 Hepatozyten und NPCs enthält. Der Wirkungsgrad der Zellabscheidung beträgt nicht weniger als 60 %.
- Für die cDNA-Amplifikation sind die Post-GEM-RT-Proben gemäß der Bedienungsanleitung12 zu reinigen.
- Bau von Bibliotheken
- Sequenzierung von Einzelzell-RNA-Bibliotheken unter Verwendung einer Sequenzierungsplattform, um eine Tiefe von 150 Gb pro Probe zu erreichen; Demultiplex von Roh-Base-Call-Dateien in FASTQ-Dateien mit Cell Ranger (v8.0.0).
- Richten Sie die FASTQ-Dateien mit dem Genom von Ictidomys tridecemlineatus (NCBI-Akzession: GCF_016881025.1) aus, um die Expression zu quantifizieren und den experimentellen Arbeitsablauf zu vervollständigen.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Die histologische Untersuchung von Transplantaten, die 24 Stunden lang bei 4 °C gelagert und in DGS transplantiert wurden, ergab an den postoperativen Tagen 3 und 6 eine normale Leberläppchenarchitektur mit minimalen Anzeichen von Entzündung, Nekrose oder Cholestase, vergleichbar mit der scheinoperierten Gruppe (Abbildung 4A-C).
Die Isolierung der primären Hepatozyten aus dem postoperativen DGS dauert ca. 1 h. Unter Verwendung des...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
In Anlehnung an das Protokoll, das die Konservierung und Transplantation der Spenderleber bei DGS beschreibt, beschreiben die hier beschriebenen Verfahren die postoperative Überwachung und das maßgeschneiderte pharmakologische Management von DGSs, denen eine Leber transplantiert wurde, die mindestens 24 Stunden lang kalt gelagert wurde. Dieses Protokoll ermöglicht das Überleben des Empfängers über 7 Tage nach der Transplantation hinaus und zeigt deutliche Vorteile der Überwinterer als Fo...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte anzugeben.
Danksagungen
Diese Studie wurde unterstützt durch das Noncommunicable Chronic Diseases-National Science and Technology Major Project (2023ZD0507600), die National Natural Science Foundation of China Grants (82170671, 92254301, 32230048, 82371794, 32301306), das National R&D Program (2024YFA0916804) und das Akademiemitglied der Zhejiang University Education Foundation, Shusen Lanjuan Talent Foundation.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1&mal; PBS | Servicebiografie | Nr. G4202 | |
| 10 mal; PBS | Servicebiografie | Nr. G4207 | |
| 4% Paraformaldehyd | Bioscharf | BL539A | |
| Buprenorphin | Shafei | H12020276 | |
| Kanüle (22 g) | BBRAUN | Artikel-Nr.: 4254090B | |
| Cefuroxim | Selleck | Nr. E4838 | |
| Zellkulturschale (60 mm) | NEST | 705001 | |
| Kollagenase IV | Sigma-Aldrich | Nr. C5138 | |
| Konisches Röhrchen (15 mL) | NEST | 601052 | |
| Konisches Röhrchen (50 mL) | NEST | 602052 | |
| Wattestäbchen | Baumarkt | ||
| Countstar Automatisierte Zellzählung | Ruiyu | Countstar Rigel S2 | |
| DMEM/F12 | Gibico | C11330500BT | |
| EGTA (EGTA) | Sigma-Aldrich | Nr. E4378 | |
| FBS | Gibco | 10099-141 | |
| Filter (0,22 μ m) | Merck Millipore | SLGP033RB | |
| Filter (70 μ m) | Biologix | 15-1070 | |
| schonende MACS | Miltenyi | 130-093-235 | |
| HBSS (mit Ca2+ und Mg2+) | Servicebiografie | Nr. G4204 | |
| HBSS (ohne Ca2+ und Mg2+) | Servicebiografie | Nr. G4203 | |
| NPCs Dissoziations-Kit | Miltenyi | 130-096-730 | |
| Percoll | Cytiva | 17-0891-09 | |
| Peristaltische Pumpe | Yuyan | BT100 | |
| RPMI-1640 | Gibico | C11875500BT | |
| Salzhaltig | SRB | Nr. Nr. Nr. 009 | |
| Sequenzer | Illumina | NovaSeq X Plus | |
| Silastische Schläuche | Tygon | Nr. E-3603 | |
| Naht aus Seide | ETHIKON | SA845G | |
| Spritze (1 ml) | Lige Wissenschaft | LG05-124 | Es wird nur eine Nadel oder eine Spritze benötigt |
| Spritze (2 ml) | Lige Wissenschaft | LG05-124 | Es wird nur ein Zylinder Spritze benötigt |
| Tacrolimus | Selleck | Nr. S5003 | |
| Pipette übertragen | Biologix | Artikel-Nr.: 30-0138A1 | |
| Tribromethylalkohol | Sigma-Aldrich | Nr. T48402 | |
| Wasserbad | Gewähren | SAP2 |
Referenzen
- Ou, J., et al. IPSCs from a hibernator provide a platform for studying cold adaptation and its potential medical applications. Cell. 173 (4), 851-863 (2018).
- Zhang, X., et al. 5-aminolevulinate improves metabolic recovery and cell survival of the liver following cold preservation. Theranostics. 12 (6), 2908-2927 (2022).
- Zhang, X., et al. Cold-induced Foxo1 nuclear transport aids cold survival and tissue storage. Nat Commun. 15 (1), 2859(2024).
- Zhang, L., et al. Cross-species metabolomic profiling reveals phosphocholine-mediated liver protection from cold and ischemia/reperfusion. Am J Transplant. 24 (11), 1979-1993 (2024).
- Chen, L., et al. Synergy of 5-aminolevulinate supplement and cx3cr1 suppression promotes liver regeneration via elevated igf-1 signaling. Cell Rep. 42 (8), 112984(2023).
- Arnold, C. Hibernation science harnessed to treat obesity and modify metabolism. Nat Med. 30 (10), 2700-2703 (2024).
- Bao, Z., et al. Fatty acid metabolization and insulin regulation prevent liver injury from lipid accumulation in Himalayan marmots. Cell Rep. 42 (7), 112718(2023).
- Carey, H. V., Andrews, M. T., Martin, S. L. Mammalian hibernation: Cellular and molecular responses to depressed metabolism and low temperature. Physiol Rev. 83 (4), 1153-1181 (2003).
- Miller, L. L., Bly, C. G., Watson, M. L., Bale, W. F. The dominant role of the liver in plasma protein synthesis; a direct study of the isolated perfused rat liver with the aid of lysine-epsilon-c14. J Exp Med. 94 (5), 431-453 (1951).
- Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. Isolation and primary culture of rat hepatic Cells. J Vis Exp. (64), e3917(2012).
- Breuer, E., Humar, B. Isolation of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. J Vis Exp. (190), e64493(2022).
- User guides. , X Genomics. https://cdn.10xgenomics.com/image/upload/v1725314293/support-documents/CG000731_ChromiumGEM-X_SingleCell3v4_UserGuide_RevB.pdf (2024).
- Hadj-Moussa, H., Storey, K. B. Bringing nature back: Using hibernation to reboot organ preservation. FEBS J. 286 (6), 1094-1100 (2019).
- Ratigan, E. D., McKay, D. B. Exploring principles of hibernation for organ preservation. Transplant Rev (Orlando). 30 (1), 13-19 (2016).
- Merriman, D. K., Lahvis, G., Jooss, M., Gesicki, J. A., Schill, K. Current practices in a captive breeding colony of 13-lined ground squirrels (Ictidomys tridecemlineatus). Lab Anim (NY). 41 (11), 315-325 (2012).
- Vaughan, D. K., Gruber, A. R., Michalski, M. L., Seidling, J., Schlink, S. Capture, care, and captive breeding of 13-lined ground squirrels, Spermophilus tridecemlineatus. Lab Anim (NY). 35 (4), 33-40 (2006).
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
