Regulation des epithelial-mesenchymalen Übergangs bei Eierstockkrebs durch LncRNA MALAT1 über SNAI2 und MiR-200c-3p

Xiaying Xu; Lihua Lin

doi:10.3791/68653

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Forschungsartikel

Regulation des epithelial-mesenchymalen Übergangs bei Eierstockkrebs durch LncRNA MALAT1 über SNAI2 und MiR-200c-3p

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DOI:

10.3791/68653

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22. August 2025

Xiaying Xu¹ , Lihua Lin¹

¹Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Hospital of Putian University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Bewertung der Rolle von MALAT1 bei der Förderung des epithelial-mesenchymalen Übergangs bei epithelialem Ovarialkarzinom durch seine Regulation der miR-200c-3p/SNAI2-Achse.

Zusammenfassung

Die lange nicht-kodierende RNA MALAT1 reguliert den epithelial-mesenchymalen Übergang (EMT) und die Metastasierung bei epithelialem Ovarialkarzinom (EOC) durch einen konkurrierenden endogenen RNA (ceRNA)-Mechanismus, der miRNA-Modulation beinhaltet. Ziel dieser Studie war es, den molekularen Signalweg aufzuklären, über den MALAT1 das EMT- und Metastasierungsverhalten über die Interaktion mit miR-200c-3p und SNAI2 beeinflusst. Die MALAT1-Expression wurde in der EOC-Zelllinie SK-OV-3 entweder durch Überexpression oder durch Knockdown genetisch manipuliert. Die funktionellen Auswirkungen auf die EMT-bezogenen Proteinspiegel, die Zellmigration und die Invasion wurden mit Western Blotting, Wundheilung bzw. Transwell-Assays bewertet. Bioinformatische Analysen identifizierten miR-200c-3p als gemeinsames Ziel von MALAT1 und SNAI2. Die MALAT1/miR-200c-3p/SNAI2-Achse wurde durch Dual-Luciferase-Reporter-Assays und Immunfluoreszenzfärbung weiter validiert, um direkte molekulare Wechselwirkungen zu bestätigen. Die Überexpression von MALAT1 erhöhte die SK-OV-3-Zellmigration um 20% und die Invasion um 5%, begleitet von einem signifikanten Anstieg der SNAI2-Expression (P < 0,01). Umgekehrt unterdrückte der MALAT1-Knockdown diese Phänotypen. Dual-Luciferase-Assays bestätigten, dass miR-200c-3p direkt an MALAT1 und SNAI2 bindet (P < 0,001). Die Überexpression von miR-200c-3p reduzierte die MALAT1-gesteuerte EMT durch Herunterregulierung von SNAI2 (P < 0,05), während die Wiederherstellung von SNAI2 die inhibitorischen Effekte des MALAT1-Silencings auf die Metastasierung umkehrte. Dieses Protokoll zeigt, dass MALAT1 EMT und Metastasierung in EOC fördert, indem es als ceRNA fungiert, die miR-200c-3p sequestriert, was zu einer Derepression von SNAI2 führt. Die Ergebnisse liefern einen neuen mechanistischen Einblick und identifizieren die MALAT1/miR-200c-3p/SNAI2-Achse als potenzielles therapeutisches Ziel zur Hemmung der Metastasierung von Eierstockkrebs.

Einleitung

Eierstockkrebs (OvCa) ist eine sehr heimtückische und spät diagnostizierte bösartige Erkrankung. Sie schreitet in der Regel asymptomatisch fort, bis sie spätere Stadien erreicht, die durch aggressives Wachstum vor allem in der Bauchhöhle gekennzeichnet sind. Dieser pathologische Prozess zeigt sich typischerweise mit Aszites, vermindertem therapeutischem Ansprechen und einer schlechten Prognose¹. Epidemiologische Statistiken aus dem Jahr 2018 zeigten weltweit etwa 295.000 neu diagnostizierte Fälle mit 185.000 Todesfällen, was einen anhaltenden Aufwärtstrend bei der Krankheitslast widerspiegelt^2....