Methodenartikel

Anwendung der Optogenetik in Kombination mit der Aufzeichnung der Faserphotometrie bei der Regulation neuronaler Schaltkreise und viszeraler Funktionen durch Elektroakupunktur

DOI:

10.3791/68667

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19. September 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Der Zweck dieses Experiments ist es, einen neuartigen Ansatz für die gleichzeitige Integration von Optogenetik, intrazerebraler Kalziumsignalaufzeichnung und Überwachung der Magenmotilität zu etablieren und ein neuartiges Paradigma für die Echtzeitüberwachung der Beziehung zwischen somatischer Stimulation und Interaktionen zwischen neuronalen Schaltkreisen und viszeralen Funktionen zu bieten, das in der Akupunkturforschung angewendet wird.

Zusammenfassung

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Dieses Protokoll beschreibt eine Technik zur optogenetischen Manipulation bestimmter Arten von Neuronen und zur Echtzeitaufzeichnung der Auswirkungen der Elektroakupunktur in Zusanli (ST36) auf nukleäre Kalziumsignale und die Magenmotilität bei Mäusen unter Narkose in vivo. Die Erforschung der zentralen Mechanismen, die der Wirksamkeit der Akupunktur zugrunde liegen, wurde durch technologische Zwänge eingeschränkt. Die Weiterentwicklung der optogenetischen und optischen Bildgebungstechnologie hat jedoch die Entwicklung der Neurowissenschaften vorangetrieben. Die Aufzeichnung der Faserphotometrie, bei der zunächst genetisch kodierte Kalziumindikatoren genutzt werden, um Veränderungen in der Kalziumdynamik zu visualisieren, die auf neuronale Aktivität hinweisen, ist eine Schlüsseltechnologie zur Charakterisierung von Gehirn-Verhaltens-Korrelationen in vivo. Die Anwendung der Optogenetik ermöglicht die genetische Kodierung von Neuronen, wodurch ihre Aktivierung oder Hemmung als Reaktion auf Lichtstimulation ermöglicht wird. Diese Fähigkeit erleichtert die Etablierung kausaler Zusammenhänge zwischen der Funktion neuronaler Schaltkreise und den Verhaltensergebnissen. Die gleichzeitige Faserphotometrie, die Kalziumaufzeichnung und die optogenetische Stimulation bieten eine Methode zur Echtzeitaufzeichnung und Manipulation der neuronalen Aktivität und dienen als effektiver Ansatz, um die zentralen Mechanismen der Akupunktur zu untersuchen. Nichtsdestotrotz gibt es nach wie vor einen Mangel an Studien, die die gleichzeitige Verwendung von Faserphotometrie, Kalziumaufzeichnung, Optogenetik und viszeraler Funktionsüberwachung in der Akupunkturforschung dokumentieren. Die Ergebnisse dieses Experiments zeigen, dass EA-ST36 die Magenmotilität im Zusammenhang mit dem PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT-Kreislauf regulieren könnte. Die optogenetische Stimulation dieses Schaltkreises erzeugt den gleichen Effekt. Nach der Überlagerung der beiden erreichen die Veränderungen des Kalziumsignals und der Magenmotilität ihr Maximum. Diese Studie etablierte einen neuartigen Ansatz für die gleichzeitige Integration von optogenetischen, intrazerebralen Kalziumsignalaufzeichnungen und der Überwachung der Magenmotilität und bot ein neuartiges Paradigma für die Echtzeitüberwachung der Beziehung zwischen somatischer Stimulation und Interaktionen zwischen neuronalen Schaltkreisen und viszeralen Funktionen.

Einleitung

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In den letzten Jahren hat die Verbreitung biomolekularer Fluoreszenzsensoren die Nutzung der Faserphotometrie in der Molekularbiologie vorangetrieben und die In-vivo-Aufzeichnung erleichtert1. Dieser Fortschritt ermöglicht die Echtzeitüberwachung von Veränderungen der neuronalen Aktivität im Gehirn. Die Integration der Optogenetik ermöglicht die neuronale Manipulation und bietet den Vorteil, dass die Optogenetik und die Aufzeichnung von optischen Fasern durch einfaches Einführen der optischen Faser sofort durchgeführt werden können. In Kombination mit der Aufzeichnung viszeraler Funktionen bietet diese Methode eine gute zeitliche Auflösung und ein gezieltes Targeting auf Kernebene, um zu beobachten, wie die Akupunktur die viszeralen Funktionen durch neuronale Aktivitätsmodifikationen moduliert.

Zahlreiche Studien haben den ausgeprägten regulatorischen Einfluss der Akupunktur auf die Magen-Darm-Funktion verdeutlicht 2,3,4, obwohl die genauen zentralen Mechanismen schwer fassbar sind. Viele alte chinesische medizinische Bücher, wie z.B. HuangDiNeiJing, berichteten auch, dass das ST36 (auf der lateralen Seite posterior des Kniegelenks, etwa 2 mm unterhalb der Caput fibula5) häufig zur Behandlung von Magen-Darm-Erkrankungen eingesetzt wird. Neuere Studien haben gezeigt, dass die Kerne, die an magenphysiologischen Prozessen (z. B. Fressverhalten6, Einstellung des Fressens7, Appetitzügler8) und pathologischen Prozessen (z. B. Magenschmerzen9, Magenfunktionsstörung10) beteiligt sind, den Nucleus parasubthalamicus (PSTn), den Nucleus raphe dorsus (DRN), den Nucleus parabrachialis lateralis (LPB), den Nucleus des Tractus solitäris (NTS) und den dorsalen motorischen Kern des Vagus (DMV) umfassen. Studien haben gezeigt, dass die Elektroakupunktur an ST36 die Anzahl der c-Fos+-Zellen in DMV erhöhen kann, wodurch die c-Fos+-Expression im kaudalen Subnukleus von NTS11 erhöht wird. Darüber hinaus wurde dokumentiert, dass der parazentrikuläre Kern (PBN) an der Zusammensetzung des parazentrikulären Kernkomplexes beteiligt ist und bis zur Medulla oblongata NTS projizieren kann, die eine wichtige Rolle bei der Integration viszeraler sensorischer Informationen, wie z.B. gastrointestinaler Signale, spielt12,13. Die obigen Informationen deuten darauf hin, dass Akupunktur möglicherweise die Magenmotilität modulieren könnte und möglicherweise mit dem neuronalen Schaltkreis PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT zusammenhängt. Glutamaterge Neuronen sind hauptsächlich an LPB und NTS beteiligt14, während cholinerge Neuronen hauptsächlich an der DMV während magenphysiologischer und pathologischer Prozesse beteiligt sind15. Die Untersuchung der regulatorischen Auswirkungen der Akupunktur auf neuronale Schaltkreise und viszerale Funktionen kann zu einem besseren Verständnis der Akupunkturmechanismen führen und eine theoretische Untermauerung für klinische Akupunkturinterventionen bei viszeralen Erkrankungen liefern.

Aufgrund technischer Einschränkungen wurde jedoch nur in begrenztem Umfang die neuronalen Schaltkreise der Elektroakupunktur bei der Modulation viszeraler Funktionen untersucht. Daher werden in der vorliegenden Studie vereinfachte Richtlinien vorgestellt, um den detaillierten Prozess der Virusinjektion vorzustellen. Insbesondere kann die in diesem Artikel vorgestellte Methodik verwendet werden, um die Schaltmechanismen aufzuklären, die an der Regulierung verschiedener viszeraler Funktionen durch Akupunktur beteiligt sind.

Daher zielt diese Studie darauf ab, die regulatorischen Effekte der Akupunktur auf die Magenmotilität zu untersuchen, die möglicherweise mit dem neuronalen Schaltkreis PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT zusammenhängen, indem Optogenetik mit Faserphotometrie für die Aufzeichnung von Kalziumbildgebung kombiniert wird. Ziel ist es, ein Protokoll für die Kalziumbildgebung und die optogenetische Synchronisation zu etablieren und damit einen neuartigen Forschungsrahmen für die Untersuchung der viszeralen Funktion und der neuronalen Schaltkreise einzuführen.

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Protokoll

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Alle Verfahren folgten den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren, die von den National Institutes of Health festgelegt wurden, und erhielten die Genehmigung des Ethikkomitees für Tierpflege und -verwendung des Instituts für Akupunktur und Moxibustion der Chinesischen Akademie der Medizinischen Wissenschaften. Erwachsene männliche C57-Mäuse mit einem Gewicht von 25 g wurden für die Virusinjektion und die Implantation von optischen Fasern eingesetzt. Das Tierversuchsprotokoll hielt sich strikt an die Anforderungen des nationalen Standards "Guidelines for Ethical Review of Welfare of Laboratory Animals" (GB/T 35892-2018) und wurde von der Ethikkommission der Institution genehmigt.

HINWEIS: Halten Sie die Umgebung während des Prozesses der Virusinjektion und der Implantation von Glasfasern sauber. Tragen Sie während des gesamten Betriebs Masken. Im Anschluss an die virale Hochexpressionsperiode (21-28 Tage) wurden Elektroakupunktur an ST36 und optogenetische Manipulationen durchgeführt, um die Magenmotilität aufzuzeichnen. Die Tiere wurden in der Tierhaltung des Instituts für Akupunktur und Moxibustion der Chinesischen Akademie der Medizinischen Wissenschaften unter kontrollierten Bedingungen (Temperatur: 22-24 °C, Luftfeuchtigkeit: 50%-60%, 12 h Hell-Dunkel-Zyklus) mit freiem Zugang zu Futter und Wasser untergebracht. Spezifische Informationen zu den verwendeten Reagenzien und Geräten finden Sie in der Materialtabelle.

1. Präoperative Vorbereitung

  1. Desinfizieren Sie das chirurgische Instrument, das einer Hochtemperatursterilisation unterzogen wurde, und reinigen Sie den Operationsbereich mit 70 % Ethanol.
  2. Anästhesie: Verabreichen Sie der Maus eine intraperitoneale Injektion von 1,25 % Tribromethanol (0,2 ml/10 g Gewicht). Bewerten Sie das Fehlen des Zehenkneifreflexes, um die Tiefe der Anästhesie zu messen.
  3. Rasieren Sie die Haare vom Kopf ab und positionieren Sie die Mäuse in einem stereotaktischen Rahmen, der mit Ohr- und Zahnstangen ausgestattet ist. Tragen Sie Erythromycin-Salbe auf die Augen der Mäuse auf, um Schäden durch chirurgisches Licht zu vermeiden.
  4. Weichen Sie die optische Faserhülse (Hülsengröße: 1,25 mm weiße Hülse, Fasertyp: 200/0,37, Faserlänge: 5,5 mm, Hülsennadelmodell: V8475) 30 min lang in 75 % Ethanol ein und waschen Sie anschließend die 70 % Ethanol mit Kochsalzlösung ab.
  5. Beladen Sie den Mikroinjektor (1 μL) mit Paraffin (800-900 nL). Schmelzen Sie das Glasrohr und ziehen Sie es in zwei Abschnitte. Schärfen Sie einen Abschnitt an der Spitze mit einer Nadelschleifmaschine, die als Injektionsnadel dient. Um die Gasdichtheit des Mikroinjektors zu gewährleisten, füllen Sie das Röhrchen mit Paraffin und verbinden Sie es mit einer Klebepistole mit dem Mikroinjektor an der Spitze.

2. Virale Injektionschirurgie

  1. Schneiden Sie die Kopfhaut entlang der Mittellinie von den Augen bis zum Nacken ein, um den Schädel freizulegen. Anschließend wird die Nackenmuskulatur herausgeschnitten, um das Hinterhauptbein freizulegen. Wischen Sie die Knochenoberfläche 30 s lang mit H2O2 ab und reinigen Sie sie dann mit einem trockenen Wattestäbchen, um subkutane Faszien und Bindegewebe zu entfernen (Abbildung 1A).
    HINWEIS: Dieser Schritt dient dazu, die Beschichtung des Hinterhauptknochens mit Zahnzement zu erleichtern und die optische Faser stabiler zu fixieren.
  2. Nivelliere den Schädel.
    1. Nivellierung der X-Achse: Markieren Sie zwei Punkte, die 3,5 mm vom Bregema-Punkt entfernt sind, in der Koronalnaht und verbinden Sie die beiden Punkte zu einer Linie. Der Mittelpunkt dieser Linie ist die Null. Der Absolutwert der Z-Achsen-Differenz auf der Knochenoberfläche in 3,5 mm Entfernung vom Ursprung sollte ≤ 0,03 mm betragen.
    2. Nivellierung der Y-Achse: Markieren Sie zwei Punkte, die 3,5 mm vom Lambda-Punkt entfernt sind, in der Lambdoid-Naht, legen Sie den Mittelpunkt der beiden Punkte fest und verbinden Sie diesen Mittelpunkt mit dem Lambda-Punkt, um eine Linie zu bilden. Der Mittelpunkt dieser Linie ist eine weitere Null. Der absolute Wert der Differenz der Z-Achse zwischen dieser Null und der Nullstelle, bei der die Knochenoberfläche während der X-Achse angepasst wurde, sollte ≤ 0,03 mm betragen.
  3. Markieren Sie die stereotaktischen Koordinaten der Virusinjektion mit einem Filzstift. Für PBN: -1,1 mm anterior-posterior (AP, Y-Achse), -5,45 mm medial-lateral (ML, X-Achse), -3,3 mm dorsal-ventral (DV, Z-Achse) (mit Bregma als Nullpunkt); Für NTS: -0,35 mm AP, 0,2 mm ML, -3,3 mm DV (mit dem höchsten Punkt des Hinterhauptbeins als Nullpunkt); Für DMV: -0,35 mm AP, 0,0 mm (der höchste Punkt des Hinterhauptbeins), -3,5 mm DV (mit dem höchsten Punkt des Hinterhauptbeins als Nullpunkt) (Abbildung 1B). Verwenden Sie einen Hochgeschwindigkeits-Mikrobohrer (0,8 mm Bohrerdurchmesser), um den Schädel an den dafür vorgesehenen Stellen zu durchdringen und die Gehirnoberfläche freizulegen. Verwenden Sie anschließend eine feine Pinzette, um die Dura mater vorsichtig zu punktieren und zu entfernen, tragen Sie Kochsalzlösung auf die gebohrte Öffnung auf, um die Feuchtigkeit auf der Gehirnoberfläche zu erhalten.
  4. Tragen Sie den Single Bond Universal-Kleber auf die Schädeloberfläche (mit Ausnahme des gebohrten Bereichs) auf und setzen Sie ihn zum Aushärten 30 s lang dem Licht aus. Es ist wichtig, vor dem Auftragen des Universalklebstoffs eine trockene Schädeloberfläche zu erhalten, um eine starke Haftung zu gewährleisten. Zusätzlich sollte der Kleber auf der Muskulatur während der Anwendung vermieden werden.
  5. Befestigen Sie den Mikroinjektor am mechanischen Arm eines stereotaktischen Geräts. Mit 250 nL Virus (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA) füllen. Stellen Sie bei Kontakt mit der Nadelspitze mit der Gehirnoberfläche die Tiefe (Z) auf 0 ein. Senken Sie die Nadel auf die Zielstelle innerhalb des parabrachialen Kerns (PBN) und injizieren Sie das Virus mit einer Geschwindigkeit von 35 nL/min in die PBN-Region. Halten Sie die Nadel nach der Injektion 10 Minuten lang an Ort und Stelle und ziehen Sie sie dann mit einer Geschwindigkeit von 6 mm/min zurück. Tauchen Sie anschließend die Nadel zur Reinigung in ein Eppendorf-Röhrchen mit Kochsalzlösung (Abbildung 1C,D).
    HINWEIS: Die Injektionsdosen aller folgenden Viren betragen 250 nL; DMV ist 100 nL16,17.
  6. Verwenden Sie das identische Protokoll, um rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs in den Nucleus tractus solitarius (NTS) und rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA in den dorsalen motorischen Kern des Vagus (DMV) zu injizieren (Abbildung 1D). Alle Virustiter liegen ≥ 1 × 1012 VG/ml.

3. Chirurgie von Glasfaserimplantaten

  1. Befestigen Sie die optische Faserhülse mit dem Optrode-Halter und befestigen Sie sie am mechanischen Arm des stereotaktischen Geräts. Stellen Sie die Implantationskoordinaten auf eine Position ein, die etwa 100 μm über der Injektionsstelle des DMV-Virusvirus liegt (Abbildung 1E, F).
  2. Mischen Sie 1-3 g Zahnzement mit 1 ml bei Raumtemperatur ausgehärtetem Kunststoff, bis eine Konsistenz entsteht. Verabreichen Sie die Mischung umgehend um die optische Faserzwinge herum und auf die Schädeloberfläche, wobei 5 mm des oberen Teils der optischen Faserzwinge freiliegen. Sobald der Zement erstarrt ist, lösen Sie die Halterschraube, heben Sie den Halter an und entfernen Sie ihn (Abbildung 1G).
  3. Verwenden Sie resorbierbare chirurgische Nähte (6-0), um die hintere okzipitale Kopfhaut von Mäusen zu nähen. Nehmen Sie die Mäuse aus dem stereotaktischen Rahmen und setzen Sie sie in eine warme Umgebung, um sich von der Narkose zu erholen. Sobald die Tiere sich uneingeschränkt bewegen konnten, wurden sie in einen sauberen und geräumigen Käfig umgesiedelt, in dem 4-5 Mäuse untergebracht waren und freien Zugang zu Futter und Wasser hatten.
    HINWEIS: Während des Versuchs wurde beobachtet, dass ein größerer Käfig für die normale Bewegung von Mäusen von Vorteil ist und entscheidend für die Aufrechterhaltung ihres Gewichts ist. Der vergrößerte Platz verringert auch die Wahrscheinlichkeit eines versehentlichen Kontakts mit der implantierten Faser, wodurch potenzielle Schäden minimiert werden. Mäuse mit einem Gewicht von 25 g oder mehr zeigten nach Akupunktur signifikante Veränderungen des Magendrucks.

4. Operation zum Einsetzen eines Ballons

  1. Auf dem Höhepunkt der Virusexpression (21-28 Tage) fasten Sie die Mäuse für 4-5 Stunden. Anschließend werden die Mäuse durch intraperitoneale Injektion von 1,25 % Tribromethanol (0,1 ml/10 g Gewicht) anästhesiert. 15 Minuten später verabreichen Sie eine intraperitoneale Injektion von 10% iger Ethylcarbamatlösung (0,15 ml/10 g Gewicht). Beurteilen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie das Fehlen eines Zehenkneifreflexes bestätigen.
  2. Rasieren Sie die Haare der Bauch- und ST36-Region. Schalten Sie das Heizkissen ein und stellen Sie es auf eine Temperatur von 37 °C ein, wobei das Tier während der gesamten Operation auf dem Heizkissen bleibt, um eine konstante Körpertemperatur zu gewährleisten.
  3. Verbinden Sie den Latexballon mit der Spritze und injizieren Sie Luft in die Spritze, um zu überprüfen, ob der Latexballon (BS4 73-2787) keine Luftleckage aufweist.
  4. Legen Sie den Magen und einen Teil des Zwölffingerdarms unterhalb des Xiphoid-Prozesses frei. Machen Sie einen kleinen Schnitt im Zwölffingerdarm von etwa 0,3 cm Länge, 0,5-1 cm distal des Pylorus.
  5. Führen Sie den Ballon entlang der Darmrichtung durch den Zwölffingerdarmschnitt in den Magen ein, wobei der Knoten an der Pylorushöhle positioniert wird.
  6. Entfernen Sie die Nadel der Spritze, füllen Sie 5 ml reines Wasser ein, lassen Sie die Luft ab und verbinden Sie das andere Ende des Ballons mit der Spritze. Ziehen Sie den Luer-Lock der Spritze nach oben, um das Gas aus dem Ballon zu entfernen, und senken Sie dann den Luer-Lock, um das reine Wasser in den Ballon zu injizieren. Verbinden Sie die Baugruppe mit einem Dreiwege-Absperrhahn und einem Druckaufnehmer.

5. Synchrone Aufzeichnung des Magendrucks und der Calciumbildgebung

  1. Schalten Sie das Neurolog Digitimer Model, CED Micro1401-4, Inper Studio, das Mehrkanal-Glasfaseraufzeichnungssystem, die Inper Signal-Software und die Spike 2-Software ein. Stellen Sie die Inper-Software, die Kalziumsignalaufzeichnung so ein, dass sie von der Spike2-Software und dem optogenetischen Stimulator ausgelöst wird, und stellen Sie sicher, dass die Laserstimulation und die Kalziumsignalerfassung durch die Inper-Software mit der intragastrischen Druckaufzeichnung durch die Spike2-Software übereinstimmen.
  2. Öffnen Sie alle Drei-Wege-Absperrhähne, die mit dem Ballon verbunden sind, drehen Sie den ZERO-Knopf am Neurolog-Digitalimer-Modell und beobachten Sie in der Spike 2-Software, ob die Basislinie auf Punkt 0 eingestellt ist. Nachdem Sie den Druck im Inneren des Ballons mit Atmosphärendruck ausgeglichen haben, injizieren Sie reines Wasser in den Ballon, bis der Mageninnendruck 15-35 cm H2O anzeigt. Sobald sowohl der Mageninnendruck als auch die Kalziumsignale einen stabilen Zustand erreicht haben, zeichnen Sie eine Ausgangslinie von 60 s des Magendrucks und der Kalziumsignale im DMV auf (Abbildung 2A).

6. Elektroakupunktur bei ST36 und Laserstimulation

  1. Führen Sie eine Akupunkturnadel (0,25 mm × 25 mm) in den linken Akupunkturpunkt ST36 ein und schließen Sie ihn an ein Elektroakupunkturgerät (10 Hz, 1 mA) an. Verabreichen Sie Elektroakupunktur für 60 s und zeichnen Sie dabei Veränderungen des Mageninnendrucks und der Kalziumsignale auf.
  2. Nach der Stabilisierung des intragastrischen Ausgangsdrucks und der Calciumsignale wird eine optogenetische Stimulation (635 nm, 5 ms, 5 Hz, 30 mW) über die Faser für 60 s durchgeführt, wobei Änderungen des intragastrischen Drucks und der Calciumsignale überwacht werden.
  3. Sobald sich der Ausgangswert des Magendrucks und der Kalziumsignale wieder stabilisiert hat, kombinieren Sie die Elektroakupunktur bei ST36 (10 Hz, 1 mA) mit optogenetischer Stimulation (635 nm, 5 ms, 5 Hz) für 60 s und zeichnen Sie Veränderungen des Magendrucks und der Kalziumsignale auf.

7. Histologische Untersuchung der Virusinjektion und Faserplatzierung

  1. Nach Abschluss der oben genannten Protokolle perfundieren Sie die Mäuse mit Kochsalzlösung und fixieren Sie sie sofort mit 4% Paraformaldehyd über das Herz. Entnehmen Sie die Gehirne der Mäuse. Führen Sie eine Gradientendehydratisierung mit 20%igen und 30%igen Saccharoselösungen durch und schneiden Sie sie nach dem Einbetten mit einem Schnellgefriereinbettungsmittel. Vergleichen Sie die Gehirnschnitte mit den Gehirnkarten von Mäusen, um zu beobachten, ob die Positionen der Virusinjektion und der faseroptischen Implantation korrekt waren. Die präzise Positionierung von Virusinjektionen und Faserimplantaten bestätigte die Validität der intragastrischen Druck- und Calciumsignaldaten (Abbildung 1H,I).

8. Datenanalyse

  1. Analysieren Sie Kalziumsignaldaten mit der Inper Data Analyse-Software und die Daten zur Magenmotilität mit der Spike2-Software. Vergleichen Sie die Unterschiede zwischen Kalziumsignalen oder Magenmotilitätsamplituden zum Zeitpunkt der Stimulation (60 s) und denen vor der Stimulation (60 s), um die regulatorischen Effekte verschiedener Reize auf die Magenmotilität und die Kalziumsignale zu beobachten. Bei allen in Abbildung 2 gezeigten Daten handelt es sich um die ursprünglichen Datendiagramme.

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Ergebnisse

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Die Viren wurden in den parabrachialen Nucleus (PBN), den Nucleus tractus solitarius (NTS) und den dorsalen motorischen Kern des Vagus (DMV) von Mäusen injiziert, wobei eine Faser in DMV implantiert wurde (Abbildung 1A-G). Während der maximalen viralen Expressionsperiode wurden nach Elektroakupunktur an ST36 und optogenetischer Stimulation Schwankungen des intragastrischen Drucks und der Kalziumsignale innerhalb des DMV aufgezeichnet. Das Ziel dieser Studie ist es, die regul...

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Diskussion

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Die zentrale wissenschaftliche Untersuchung der Akupunktur bezieht sich auf die Regulation der Zielorgane durch Akupunkturstimulation autonomer Nerven. Die von Q. Ma vorgeschlagenen Ergebnisse deuten darauf hin, dass der Einfluss der Akupunktur auf die Funktionsmodulation von Fernorganen auf somatische autonome Reflexe zurückzuführen ist, die sympathische und/oder parasympathische Bahnen aktivieren, insbesondere solche, die mit Magen-Darm-Erkrankungen und systemischen Entzündungen zusamm...

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Offenlegungen

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Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Danksagungen

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Diese Studie wurde von der National Natural Science Foundation of China (Nr. 82174518, 82474661), den Fundamental Research Funds for the Central Public Welfare Research Institutes (ZZ-2023008) und dem Scientific and Technological Innovation Project der China Academy of Chinese Medical Sciences (CI2021A03402) finanziert.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Virus
rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA (AAV2/9)BrainVTA (Englisch)Kat#PT-0020
rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2/9)BrainVTA (Englisch)Kat#PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)BrainVTA (Englisch)Kat#PT-10973
Andere
1 μ L MikroinjektorHamilton80135
3M EPSP Single Bond UniversalklebstoffOffizieller Vertreter der Dentalwelt41269
Akupunktur-NadelZhongYanTaiHe0,25/13 Sek.
CED Micro1401-4CED(England)1401-4
Zahnzement/Bei Raumtemperatur ausgehärtetes HarzYAMAHACHI DENTALN/A
Feine PinzetteRWDNr. F11028-13
GlasröhreWelt Präzisionsinstrumente504949
HANS-200AHANS-InstitutHANS-200
Inper Signal (Software)InperN/A
Inper Studio (Venus)InperNr. B1502
Latex-LuftballonHarward-ApparaturBS4 73-2787
Mehrkanal-Glasfaser-Aufzeichnungssystem (Vista Pro)InperNr. R5268
Neurolog digitimer Modell DigitimerNL900D
Ferrule für optische Fasern InperNr. V8475
Spike 2 (Software)CED(England)N/A
Stereotaktische Instrumente (mit Koordinatenrechner)David Kopf InstrumenteKOPF 942
TribromethanolSigmaNr. T48402
TribromethanolSigma Nr. T48402

Referenzen

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Schlagwörter

Optogenetische StimulationAufzeichnung von KalziumsignalenRegulation neuronaler SchaltkreiseMagenmotilit tviszerale Funktiongenetisch kodierte IndikatorenEchtzeit AufzeichnungKorrelation zwischen Gehirn und Verhalten

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