Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Bewertung der durch natürliche Verbindungen induzierten Apoptose bei reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in nicht-kleinzelligen Lungenkrebszellen (NSCLC) vor.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Forschungsartikel
* These authors contributed equally
Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Bewertung der durch natürliche Verbindungen induzierten Apoptose bei reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in nicht-kleinzelligen Lungenkrebszellen (NSCLC) vor.
Diese Studie untersucht das Anti-Krebs-Potenzial von Pileostegia tomentella, mit besonderem Fokus auf ihre Fähigkeit, die klassische Apoptose in H1299-Zellen des nicht-kleinzelligen Lungenkarzinoms (NSCLC) über reaktive Sauerstoffspezies (ROS)-vermittelte Signalwege zu induzieren. Unter Verwendung eines bioaktivitätsgesteuerten Isolationsansatzes wurden zwei Wirkstoffe, Umbelliferon (UMB) und Epi-Vogelosid, als die wichtigsten zytotoxischen Bestandteile identifiziert. Beide Verbindungen zeigten signifikante inhibitorische Effekte auf die Zellviabilität und lösten effektiv den apoptotischen Zelltod in H1299-Zellen aus. Mechanistische Untersuchungen zeigten, dass die Behandlung mit UMB und epi-Vogelosid zu einem deutlichen Anstieg der intrazellulären ROS-Spiegel führte, was auf oxidativen Stress als Schlüsselmediator hindeutet. Die Western-Blot-Analyse ergab erhöhte Spiegel an gespaltener Caspase-3 und eine verminderte Expression des anti-apoptotischen Proteins Bcl-2, was auf eine Aktivierung des intrinsischen mitochondrialen apoptotischen Signalwegs hinweist. Darüber hinaus zeigte das transkriptomische Profiling weit verbreitete Veränderungen in der Genexpression, was die Störung der zellulären Homöostase weiter unterstützt. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass Pileostegia tomentella und seine Wirkstoffe vielversprechend als potenzielle Therapeutika gegen Lungenkrebs sind.
Krebs stellt eine gewaltige globale Herausforderung für die öffentliche Gesundheit dar, die durch eine beträchtliche jährliche Sterblichkeitsrate gekennzeichnet ist. Nicht-kleinzelliger Lungenkrebs (NSCLC) ist mit etwa 85 % der Lungenkrebserkrankungen weltweit die wichtigste Ursache für krebsbedingte Todesfälle1. Die Karzinogenese, ein inhärent komplexes Zusammenspiel von molekularen und zellulären Prozessen, wird entscheidend durch Störungen in der Homöostase der reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) beeinflusst. ROS, zu denen instabile Oxidantien wie Superoxid-Anionen, Hydroxylradikale und Wasserstoffperoxid gehören, sind Nebenprodukte des normalen Zellstoffwechsels und erfüllen wesentliche Funktionen bei der Signalübertragung, Proliferation, Differenzierung und Apoptose2. Ein Ungleichgewicht in den ROS-Konzentrationen kann oxidativen Stress auslösen und möglicherweise programmierte Zelltodwege, insbesondere Autophagie und Apoptose, aktivieren und dadurch die Proliferation und das Überleben von Krebszellen behindern3. Folglich spielen ROS in der Onkologie eine doppelte Rolle, da sie sowohl als Promotoren als auch als Suppressoren der Tumorprogression fungieren. In den letzten zehn Jahren haben sich die therapeutischen Strategien für NSCLC erheblich weiterentwickelt, wobei die Entwicklung neuartiger Krebsmedikamente, die diese dichotome Natur von ROS ausnutzen sollen, ein besonders dynamisches Forschungsgebiet darstellt4.
Es ist bekannt, dass zahlreiche chemisch synthetisierte Krebsmittel wie Adriamycin (Doxorubicin), Cisplatin und Cyclophosphamid die Apoptose in Krebszellen induzieren, indem sie die ROS-Produktion fördern5. Trotz Fortschritten bei zielgerichteten Therapien und immuntherapeutischen Antikörpern ist die platinbasierte Chemotherapie nach wie vor der Eckpfeiler der Behandlung von NSCLC-Patienten. Das Auftreten von Resistenzen und unerwünschten Nebenwirkungen durch Chemotherapien erfordert jedoch die Entwicklung neuartiger Anti-NSCLC-Medikamente. Folglich wird die Erforschung natürlicher Quellen für krebshemmende Wirkstoffe zunehmend für ihre Bedeutung und ihr Potenzial anerkannt. Jüngste Forschungen haben gezeigt, dass bestimmte Pflanzenextrakte und ihre Wirkstoffe starke krebshemmende Eigenschaften aufweisen, die sich durch eine geringe Toxizität, eine hohe Spezifität und die Fähigkeit auszeichnen, auf mehrere Signalwege abzuzielen6. Insbesondere können einige dieser Naturstoffe den ROS-Spiegel und die Signalübertragungmodulieren 7, wodurch Autophagie oder Apoptose in Krebszellen induziert und therapeutische Wirkungen ausgeübt werden 8,9.
Pileostegia tomentella Hand. Zucc, ein mehrjähriges Kraut aus der Gattung Clematis aus der Familie der Buttercupaceae, kommt vor allem in Regionen wie Japan, Nordkorea und China vor. Die verschiedenen Bestandteile der Pflanze, darunter Wurzeln, Stängel, Blätter und Blüten, sind für ihre medizinischen Eigenschaften bekannt und bieten Vorteile wie Hitzereinigung, Entgiftung, Reduzierung von Schwellungen, Schmerzlinderung sowie antibakterielle und entzündungshemmende Wirkung. Jüngste Forschungen haben die krebshemmende Wirkung von Extrakten oder Wirkstoffen von Hoshi Hairy Vine beleuchtet und tumorsuppressive Wirkungen auf eine Reihe von Krebsarten gezeigt, darunter Gliome, Brust-, Dickdarm- und Gebärmutterhalskrebs10. Die spezifischen Antikrebsmechanismen von Pileostegia tomentella, insbesondere ihre mögliche Rolle bei der Modulation von ROS zur Induktion von Autophagie oder Apoptose in Krebszellen, sind jedoch weitgehend unerforscht.
Trotz des zunehmenden Interesses an Naturstoffen für die Krebstherapie sind die pro-apoptotischen Mechanismen der Schlüsselbestandteile von Pileostegia tomentella bei Lungenkrebs noch unerforscht. Diese Studie leistet Pionierarbeit bei der Identifizierung und mechanistischen Dissektion von Umbelliferon und epi-Vogelosid als selektive ROS-abhängige Apoptose-Induktoren bei NSCLC.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Die in dieser Studie verwendeten Reagenzien und Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.
1. Chemische Zusammensetzung von Pileostegia tomentella und Vorhersage des NSCLC-Ziels
Die chemischen Bestandteile von Pileostegia tomentella wurden mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie in Kombination mit linearer Ionenfallen-Orbitrap-Massenspektrometrie (HPLC-LTQ/MS) analysiert. Die Extrakte wurden vor der Injektion in geeigneten Lösungsmitteln gelöst und filtriert. Die chromatographische Trennung wurde mit einer Umkehrphasensäule unter Verwendung eines auf die Verbindungsklassen zugeschnittenen Gradientenelutionsprogramms erreicht. Die massenspektrometrischen Daten wurden im positiven Elektrospray-Ionisationsmodus über einen Massenbereich von 100-1500 m/z gesammelt. Die molekularen Strukturen der identifizierten Verbindungen wurden mit generischer chemischer Zeichensoftware gezeichnet und im SDF-Format gespeichert. Diese Strukturdateien wurden an ein Online-Zielvorhersagetool übermittelt, um potenzielle biologische Ziele zu identifizieren, wobei die 20 wichtigsten Ziele für die weitere Validierung ausgewählt wurden. NSCLC-assoziierte Ziele wurden aus einer öffentlich zugänglichen Gendatenbank abgerufen. Die sich überschneidenden Ziele aus beiden Datensätzen wurden als potenzielle therapeutische Ziele von Pileostegia tomentella identifiziert.
2. Aufbau des Komponenten-Ziel-Netzwerks
Die Protein-Protein-Interaktionsdaten für die vorhergesagten Ziele wurden aus einer frei zugänglichen Proteininteraktionsdatenbank gewonnen. Die Interaktionsdaten wurden in eine allgemeine Netzwerkvisualisierungssoftware importiert, um das zusammengesetzte Interaktionsnetzwerk zu konstruieren. Topologische Eigenschaften des Netzwerks, einschließlich Gradzentralität, Betweenness und Closeness, wurden mit integrierten Analysewerkzeugen analysiert, um wichtige regulatorische Knoten zu identifizieren.
3. Analyse der Anreicherung des KEGG-Signalwegs
Die funktionelle Anreicherung der vorhergesagten Zielproteine wurde mittels KEGG-Signalweganalyse über öffentlich zugängliche Anreicherungstools und statistische Software durchgeführt. Signalwege mit adjustierten p-Werten von weniger als 0,05 wurden als signifikant angesehen. Signifikante Signalwege wurden mit Substanz-Ziel-Daten integriert, um ein "Substanz-Ziel-Signalweg"-Interaktionsnetzwerk unter Verwendung generischer Netzwerkvisualisierungssoftware aufzubauen. Die Analyse der Netzwerktopologie hob wichtige biologische regulatorische Knotenpunkte hervor und veranschaulichte die Mehrkomponenten- und Multi-Target-Mechanismen von Pileostegia tomentella.
4. Extraktion der Bestandteile von Pileostegia tomentella
Getrocknete Rebstängel von Corydalis spinosa wurden zu einem feinen Pulver gemahlen. Das pulverförmige Material wurde mit 70 % Ethanol unter Ultraschallbehandlung bei Raumtemperatur für einen definierten Zeitraum extrahiert. Der Rohextrakt wurde filtriert und unter reduziertem Druck konzentriert. Die Flüssig-Flüssig-Teilung wurde unter Verwendung von Lösungsmitteln mit zunehmender Polarität durchgeführt, einschließlich Petrolether, Ethylacetat und n-Butanol. Die Ethylacetatfraktion, die in vorläufigen Assays die höchste biologische Aktivität aufwies, wurde gesammelt, konzentriert, gefriergetrocknet und bis zur weiteren Verwendung bei -20 °C gelagert.
5. Zelllinien und Behandlungsbedingungen
Die humane Lungenkrebszelllinie H1299 wurde in RPMI 1640-Medium kultiviert, das mit 10 % fötalem Rinderserum bei 37 °C in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 % CO2 -Gehalt angereichert war. Die Zellen wurden in einer angemessenen Dichte ausgesät und vor der Behandlung über Nacht anhaften gelassen. Die Zellen wurden unterschiedlichen Konzentrationen (500 μg/ml, 750 μg/ml und 1.000 μg/ml) von zwei Testverbindungen, UMB und epi-Vogelosid, ausgesetzt, die in Tabelle 1 aufgeführt sind. Nach 24 Stunden Inkubation unter Standardkulturbedingungen wurden die Zellen für nachfolgende Analysen geerntet, um die biologische Wirkung der Verbindungen zu bewerten.
6. MTT-Assay für die Zellviabilität
Die zytotoxische Wirkung der Verbindungen wurde mit Hilfe eines kolorimetrischen MTT-Assays bewertet. H1299-Zellen wurden in 96-Well-Platten mit einer definierten Dichte ausgesät und über Nacht anhaften gelassen. Die Zellen wurden dann 72 h lang unter Standardkulturbedingungen mit den Testverbindungen behandelt. Nach der Behandlung wurde eine MTT-Lösung in jede Vertiefung gegeben und inkubiert, damit lebensfähige Zellen MTT in unlösliche violette Formazankristalle umwandeln können. Nach der Inkubation wurde das Medium entfernt und die Formazankristalle wurden in Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst. Die Extinktion wurde bei 570 nm mit einem Mikroplatten-Reader gemessen. Die Absorptionswerte entsprechen der Zellviabilität und ermöglichen eine quantitative Bewertung der Zytotoxizität von Verbindungen.
7. Beurteilung der Membranintegrität durch LDH-Freisetzung
Die Integrität der Zellmembran wurde durch Messung der Freisetzung von Laktatdehydrogenase (LDH) als Indikator für die Zytotoxizität bewertet. H1299-Zellen wurden mit den Testverbindungen für 24 h, 48 h oder 72 h behandelt. Zu jedem Zeitpunkt wurden Kulturüberstände entnommen und einem LDH-Aktivitätsassay gemäß dem Protokoll des Herstellers unterzogen. Da LDH nur aus Zellen mit geschädigten Membranen freigesetzt wird, spiegeln die gemessenen Absorptionswerte das Ausmaß der Membranschädigung wider, die durch die Verbindungen im Laufe der Zeit induziert wird.
8. Durchflusszytometrische Analyse der Apoptose
Die Apoptose-Induktion wurde durch Durchflusszytometrie unter Verwendung von Annexin V und 7-Aminoactinomycin D (7-AAD)-Färbung untersucht. Nach der Behandlung mit den Testverbindungen wurden H1299-Zellen durch Zentrifugation gesammelt, mit kalter phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen und in Bindungspuffer resuspendiert. Die Zellen wurden dann mit Annexin V inkubiert, das an einen Fluoreszenzfarbstoff und 7-AAD gemäß dem Färbeprotokoll konjugiert war. Die Proben wurden sofort mittels Durchflusszytometrie analysiert. Diese Methode ermöglichte die Differenzierung zwischen lebensfähigen Zellen (ungefärbt), frühen apoptotischen Zellen (Annexin V positiv, 7-AAD negativ) und späten apoptotischen oder nekrotischen Zellen (positiv für beide Färbe).
9. Intrazelluläre ROS-Quantifizierung
Die Gehalte an intrazellulären reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) wurden mit einem fluoreszenzbasierten Assay gemessen. H1299-Zellen wurden in 12-Well-Platten mit einer Dichte von 1 × 105 Zellen pro Well ausgesät und kultiviert, bis sie eine Konfluenz von etwa 80 % erreichten. Die Zellen wurden dann 72 h lang mit den vorgesehenen Verbindungen behandelt. Nach der Behandlung wurden die Zellen mit 1 μM der ROS-empfindlichen Fluoreszenzsonde 2',7'-Dichlordihydrofluoresceindiacetat (DCFH-DA) bei 37 °C für 30 min im Dunkeln inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Zellen geerntet und die Fluoreszenzintensität bei einer Emissionswellenlänge von 525 nm mit einem Fluoreszenz-Mikroplatten-Reader gemessen. Die Fluoreszenzintensität entspricht den intrazellulären ROS-Werten.
10. Quantitative Echtzeit-PCR (RT-qPCR)
H1299-Zellen wurden in 6-Well-Platten mit einer Dichte von 2 × 105 Zellen pro Well ausgesät und kultiviert, bis sie eine Konfluenz von etwa 80 % erreichten. Die Zellen wurden dann 72 h lang mit den vorgesehenen Verbindungen behandelt. Die Gesamt-RNA wurde mit einer weit verbreiteten Phenol-Chloroform-Methode extrahiert. Die komplementäre DNA-Synthese (cDNA) wurde mit einem reversen Transkriptionskit gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Die quantitative real-time PCR (qRT-PCR) wurde unter Verwendung eines real-time PCR-Systems mit spezifischen Primern durchgeführt (siehe Tabelle 2). Die relativen Genexpressionsniveaus wurden mit der vergleichenden Ct-Methode berechnet, wobei Haushaltsgene als interne Kontrollen verwendet wurden.
11. Immunoblotting für die Proteinexpression
Die Western-Blot-Analyse wurde an kultivierten und behandelten H1299-Zellen durchgeführt. Das Gesamtprotein wurde unter Verwendung eines geeigneten Lysepuffers extrahiert und die Lysate durch Zentrifugation bei 10.000 × g für 15 min bei 4 °C geklärt. Die Proteinkonzentrationen wurden mit Hilfe eines spektrophotometrischen Assays bestimmt. Die gleichen Mengen an Protein aus jeder Probe wurden mittels SDS-PAGE abgetrennt und auf eine Polyvinylidendifluorid (PVDF)-Membran übertragen. Die Membranen wurden 2 h lang bei Raumtemperatur mit 5 % fettfreier Trockenmilch blockiert und dann über Nacht bei 4 °C mit primären Antikörpern inkubiert, die spezifisch für Bcl-2, Caspase-3, PARP1, BAX, GAPDH und Tubulin in optimierten Verdünnungen sind. Nach dem Waschen wurden die Membranen mit entsprechenden Sekundärantikörpern für 2 h bei Raumtemperatur inkubiert. Proteinbanden wurden mit Hilfe eines chemilumineszierenden Substrats sichtbar gemacht und abgebildet. Die densitometrische Analyse wurde mit einer Bildanalysesoftware durchgeführt, und die Bandenintensitäten wurden auf GAPDH und Tubulin als Belastungskontrollen normiert.
12. Immunfluoreszenzmikroskopie von Caspase-3
Die Expression und subzelluläre Lokalisation von Caspase-3, einem wichtigen apoptotischen Protein, wurde durch Immunfluoreszenzfärbung untersucht. Nach der Behandlung wurden H1299-Zellen mit Paraformaldehyd fixiert, mit einer milden Detergenzienzlösung permeabilisiert und mit einem primären Antikörper gegen Caspase-3 inkubiert. Anschließend wurde ein fluoreszenzmarkierter Sekundärantikörper appliziert, um das Primärantikörpersignal zu detektieren. Die Zellkerne wurden mit einem DNA-bindenden Fluoreszenzfarbstoff gegengefärbt. Die gefärbten Zellen wurden unter einem Fluoreszenzmikroskop sichtbar gemacht. Die Intensität und zelluläre Verteilung des Fluoreszenzsignals lieferte qualitative und räumliche Informationen über die Caspase-3-Aktivierung, was seine Beteiligung an der verbindungsinduzierten apoptotischen Reaktion unterstützt.
13. Transkriptomische Sequenzierung
Um die zelluläre Transkriptionsreaktion auf die Testverbindungen zu profilieren, wurde die Gesamt-RNA aus behandelten H1299-Zellen extrahiert und mit Standard-Qualitätskontrollmethoden auf Integrität untersucht. Die Sequenzierungsbibliotheken wurden nach etablierten Protokollen erstellt und einer Hochdurchsatz-Sequenzierung unter Verwendung einer Next-Generation-Sequencing-Plattform unterzogen. Die Rohsequenzierungsdaten wurden über eine konventionelle Bioinformatik-Pipeline verarbeitet, die die Qualitätskontrolle, die Filterung, den Abgleich mit dem Referenzgenom und die Quantifizierung der Transkripthäufigkeit umfasste. Eine differentielle Genexpressionsanalyse wurde durchgeführt, um Gene mit statistisch signifikanten Veränderungen der Expression nach der Behandlung zu identifizieren. Anreicherungs- und Signalweganalysen der differentiell exprimierten Gene wurden durchgeführt, um die wichtigsten biologischen Prozesse aufzuklären, die von den Verbindungen beeinflusst werden, und um so einen umfassenden transkriptomischen Überblick über ihre molekularen Wirkungen zu erhalten.
14. Statistische Auswertung
Alle Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) von mindestens drei unabhängigen Experimenten ausgedrückt. Die statistische Signifikanz zwischen den Gruppen wurde unter Verwendung von Standardmethoden bestimmt, gegebenenfalls einschließlich des Student's t-Tests oder der unidirektionalen ANOVA. Unterschiede wurden bei P-Werten kleiner als 0,05 als statistisch signifikant angesehen.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Screening von Schlüsselkomponenten von Pileostegia tomentella gegen Lungenkrebs
Ein Überblick über das Versuchsdesign ist in Abbildung 1 dargestellt. HPLC-LTQ/Orbitrap MS wurde eingesetzt, um sieben bioaktive Hauptbestandteile von Pileostegia tomentella zu charakterisieren (Tabelle 3). Anschliessend wurde eine in silico-Target-Vorhersage für diese Verbindungen unter Verwendung der SwissTargetPrediction-D...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nicht-kleinzelliger Lungenkrebs (NSCLC) ist nach wie vor ein drängendes globales Gesundheitsproblem, das durch seine aggressive Biologie, sein schnelles klinisches Fortschreiten und sein hohes Metastasierungspotenzial gekennzeichnet ist, was häufig zu schlechten Patientenergebnissen führt12. Obwohl Standardinterventionen wie chirurgische Resektion, Strahlentherapie und Chemotherapie im Frühstadium der Erkrankung einen therapeutischen Nutzen bieten, nimmt ihre Wirk...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte anzugeben.
Diese Arbeit wurde unterstützt durch das High-level Key Discipline Construction Project of Traditional Chinese Medicine - Ethnic Minority Pharmacy (Zhuang Pharmacy) von der Staatlichen Verwaltung für Traditionelle Chinesische Medizin (Nr. zyyzdxk-2023165); das Talentförderungsprogramm "Jugendprojekt" des Guangxi International Zhuang Medical Hospital (Nr. 2022001); das Multidisziplinäre Cross-Innovation Team Project in Chinese Medicine von Guangxi (Nr. GZKJ2309); das High-Level Talent Cultivation Innovation Team Program der Guangxi University of Traditional Chinese Medicine (Nr. 2022A008); das Schlüsselforschungs- und Entwicklungsprojekt des Wissenschafts- und Technologieministeriums von Guangxi (Nr. Gui Ke AB21196057); der Dreijahres-Aktionsplan 2023 für den Aufbau eines hochrangigen Talentteams des Guangxi International Zhuang Medical Hospital (Nr. GZCX20231203, GZCX20231202); die dritte Runde des "Qihuang Project" High-Level Talent Team Cultivation Program der Guangxi Universität für Traditionelle Chinesische Medizin (Nr. 202414).
BEITRAG DES AUTORS:
Wen Zhong, Leimin Jiang und Bing Qing trugen zu gleichen Teilen zu dieser Arbeit bei und teilen sich die Erstautorenschaft. Sie waren in erster Linie für die Versuchsplanung, die Datenerfassung und die Interpretation der Ergebnisse verantwortlich. Xiumei Ma führte Datenanalysen durch und trug zur Vorbereitung des Manuskripts bei. Shi Xianyi, Deng Qingmei und Zhou Guangyun beteiligten sich an Studiendesign, Datenerhebung und Literaturrecherche. Jiangcun Wei, der korrespondierende Autor, beaufsichtigte die Datenanalyse und -interpretation und spielte eine führende Rolle bei der Erstellung und Überarbeitung des Manuskripts.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Annexin V– PE / 7-AAD Apoptose-Detektionskit | BD Biowissenschaften | 556547 | Durchflusszytometrie-basierter Apoptose-Nachweis |
| Antikörper: BAX | Abcam (Englisch) | AB32503 | Western-Blot für pro-apoptotisches Protein |
| Antikörper: Bcl-2 | Abcam (Englisch) | Artikel-Nr.: ab182858 | Western Blot/Immunfluoreszenz |
| Antikörper: Gespaltene Caspase-3 | Abcam (Englisch) | AB32042 | Western blot / IF |
| Antikörper: GAPDH | Abcam (Englisch) | Artikel-Nr.: ab8245 | Interne Kontrolle bei Western Blot |
| Antikörper: PARP1 | Abcam (Englisch) | AB32064 | Western Blot für Apoptose-Marker |
| Antikörper: Tubulin | Abcam (Englisch) | AB78078 | Interne Kontrolle bei Western Blot |
| ChemDraw | PerkinElmer Informatik | CCG821391 | Strukturzeichnung von kleinen Molekülen |
| Chemilumineszenz-Bildgebungssystem | Tanon Wissenschaft & Technologie | Tanon 5200 | Zur Visualisierung von Proteinbanden |
| Zytoscape | Cytoscape.org | https://cytoscape.org | Netzwerkaufbau und -analyse |
| DAPI Nuklear-Fleck | Sigma | Nr. D9542 | Blauer nuklearer Gegenfleck für IF |
| DAVID | NIH | https://david.ncifcrf.gov | Funktionelle Annotation und Anreicherung des KEGG-Signalwegs |
| DMSO | Sigma | MFCD00002089 | Wird verwendet, um Formazan-Kristalle aufzulösen |
| Ethanol (zur Extraktion) | Sigma | MFCD00003568 | Ultraschallgestütztes Extraktionslösungsmittel |
| Ethylacetat | Sigma | MFCD00009171 | Wird für die bioaktive Fraktionierung verwendet |
| FITC-konjugierter Sekundärantikörper | Abcam (Englisch) | Artikel-Nr.: ab6785 | Wird in der Immunfluoreszenz verwendet |
| Durchflusszytometer | Thermo Scientific | Nr. A29001 | Wird für die Apoptose- und ROS-Detektion verwendet |
| Fluoreszenzmikroskop | Olympus Corporation | BX53F | Für die Bildgebung von Immunfluoreszenz-Objektträgern |
| Gefriertrockner | Labconco Corporation | 7670520 | Für die Gefriertrocknung und Konservierung von Proben |
| GeneCards | Weizmann-Institut | https://www.genecards.org | Gendatenbank für Krankheitsrelevanz |
| HPLC-LTQ-Orbitrap Massenspektrometrie | Thermo Scientific | IQLAAEGAAVFACZMAIK | Identifizierung von Verbindungen durch MS |
| Illumina NovaSeq Sequenzierungsplattform | Illumina Inc. | 20012850 | Wird für RNA-seq verwendet |
| LDH-Zytotoxizitäts-Assay-Kit | Beyotime | Nr. C0016 | Zur Messung der LDH-Freisetzung als Indikator für die Zytotoxizität |
| Mikroplatten-Reader | Thermo Scientific | VL0000D0 | Für Absorptionsmessungen in MTT- und LDH-Assays |
| MTT-Zellviabilitäts-Assay-Kit | Beyotime | C0009S | Wird für MTT-Assays zur Beurteilung der Zellviabilität verwendet |
| qPCR-Maschine | Thermo Scientific | 4485701 | Für die Genexpressionsanalyse |
| R-Software | R Stiftung | https://www.r-project.org | Statistisches Rechnen und Pathway Plotting |
| Reverse Transkriptionskit (RT Kit) | Vazyme | MR201 | Für die cDNA-Synthese |
| RNA-seq-Bibliotheksvorbereitungskit | Illumina Inc. | 20020594 | Bibliotheksvorbereitung für die Sequenzierung |
| SwissTargetPrediction | Schweizerisches Institut | http://www.swisstargetprediction.ch | Tool zur Vorhersage von zusammengesetzten Zielen |
| SYBR Green qPCR-Mischung | Vazyme | Frage 311-02 | Für die quantitative PCR |
| TRIzol Reagenz (RNA-Extraktion) | Sigma | Nr. T3934 | Für die Extraktion von Gesamt-RNA |
| Ultraschall-Reiniger | Branson | M1800-CPXH | Für die ultraschallgestützte Extraktion |
| Western-Blot-Apparatur | Thermo Scientific | Nr. A56727 | Gelelektrophorese und Proteintransfer |
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.