RNA-Isolierung aus dem Epithel der Augenlinse der Maus und den Massenmassen von Faserzellen

Peter N. Huynh; Michael P. Vu; Catherine Cheng

doi:10.3791/69079

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Methodenartikel

RNA-Isolierung aus dem Epithel der Augenlinse der Maus und den Massenmassen von Faserzellen

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DOI:

10.3791/69079

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10. Oktober 2025

Peter N. Huynh¹ , Michael P. Vu¹ , Catherine Cheng¹

¹School of Optometry and Vision Science Program, Indiana University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt die Trennung des Epithels der Maus-Augenlinse und der Volumenmasse der Faserzelle, gefolgt von der RNA-Isolierung und der qPCR-Analyse. Diese Methode ermöglicht die Trennung von Linsenzellkompartimenten für eine detailliertere Analyse des Transkriptoms und der biologischen Prozesse in Epithelzellen im Vergleich zu differenzierten Faserzellen.

Zusammenfassung

Die Linse ist ein spezialisiertes, transparentes Gewebe in der vorderen Augenkammer, das aus zwei Hauptzelltypen besteht, Epithelzellen und Faserzellen. Eine Monoschicht aus Linsenepithelzellen bedeckt die vordere Hemisphäre der Linse, während der größte Teil der Linse aus einer Masse von Linsenfaserzellen besteht. Eine kollagene Basalmembran, die sogenannte Kapsel, umgibt und umhüllt das gesamte Gewebe. Linsenepithelzellen haften stark an der Linsenkapsel und können leicht von der Fasermasse getrennt werden, indem die Kapsel vom Gewebe abgezogen wird. Schwierigkeiten, eine ausreichende RNA-Konzentration aus der geringen Anzahl von Epithelzellen in der Linsenmonoschicht zu erhalten, haben bisher die Untersuchung von Epithelzell-Transkriptomen im Vergleich zu Faserzell-Transkriptomen behindert. Dieses Protokoll stellt eine Methode zur sauberen Trennung und Isolierung der Epithel- und Faserzellkompartimente sowie RNA-Konzentrationsschritte vor, um nachfolgende transkriptomische Experimente an Epithelzellproben aus einem einzigen Paar Mauslinsen zu ermöglichen. Die Möglichkeit, die wichtigsten Zelltypen der Linse einzeln zu untersuchen, hilft bei der Untersuchung biologischer Mechanismen der Linsenerhaltung und -dysregulation und ermöglicht die Charakterisierung zelltypspezifischer Störungen, die für altersbedingte Linsenpathologien verantwortlich sind.

Einleitung

Die Okularlinse ist ein transparentes Organ, das das Licht fein auf die Netzhaut fokussiert, um ein klares Bild zu erzeugen. Die Linse besteht aus zwei Hauptzelltypen: einer Monoschicht aus Epithelzellen, die die vordere Hemisphäre bedeckt, und Faserzellen, die die Masse des Gewebes ausmachen (Abbildung 1). Die Linse ist von einer kollagenen Basalmembran umgeben, die als Linsenkapsel bekannt ist und an die Epithelzellen fest anhaften. Wenn die Linse wächst, vermehren sich Epithelzellen am Äquator und differenzieren sich zu entstehenden Schalen von Faserzellen, die konzentrisch auf die Linse geschichtet werden^<....