Vergleichende Untersuchung der DDA- und DIA-Erfassungsmodi in der UPLC-Q-Orbitrap-Massenspektrometrie unter Verwendung von Huahua-Pulver

Zusammenfassung

Diese Studie vergleicht DDA- und DIA-Modi (UPLC-QE-Orbitrap MS) zur Analyse von Huaihua Pulver, einer komplexen TCM. Es wurden optimierte DDA- und DIA-Methoden entwickelt; Die Verbindungen wurden mit dem Compound Discoverer identifiziert. Die Leistung (Identifizierung von Verbindungen, Reproduzierbarkeit, spektrale Qualität, Empfindlichkeit) wurde evaluiert, was eine empirische Anleitung für die Auswahl des TCM-Scanmodus lieferte.

Zusammenfassung

In dieser Studie wird systematisch die vergleichende Leistung von zwei massenspektrometrischen Erfassungsmodi, der datenabhängigen Erfassung (DDA) und der datenunabhängigen Erfassung (DIA), in Verbindung mit der hochauflösenden Massenspektrometrie der Ultrahochleistungsflüssigkeitschromatographie-Quadrupol-Orbitrap (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) für ein umfassendes chemisches Profiling komplexer Formulierungen der traditionellen chinesischen Medizin (TCM) bewertet. Huaihua Pulver, ein klassisch formuliertes Rezept, wurde als Modellsystem für die empirische Bewertung verwendet. Optimierte DDA- und DIA-Erfassungsmethoden wurden getrennt voneinander etabliert: Die DDA-Methode beinhaltete eine gezielte Strategie zur Auswahl von Vorläuferionen mit angepassten Fragmentierungsparametern, während die DIA-Methode eine segmentierte Variablenfensterstrategie verwendete, um den Zielbereich m/z abzudecken und eine unverzerrte Fragmentierung aller Vorläuferionen durchzuführen. Die Identifizierung von Verbindungen wurde mit der Software Compound Discoverer durchgeführt. Die vergleichende Bewertung konzentrierte sich speziell auf die Leistungsmerkmale der beiden Erfassungsmodi, einschließlich der Anzahl der identifizierten Verbindungen, der Reproduzierbarkeit, der spektralen MS/MS-Qualität und der Nachweisempfindlichkeit für aktive Bestandteile mit geringer Häufigkeit. Die Ergebnisse zeigten, dass der DDA-Modus eine höhere Gesamtzahl detektierter Verbindungen ergab, während der DIA-Modus einen größeren Anteil an hochzuverlässigen Identifikationen erzeugte (10,63 % mit spektralen Match-Scores >0,8). Bemerkenswert ist, dass der DIA-Ansatz eine signifikant überlegene Reproduzierbarkeit in Bezug auf Retentionszeit und Peakfläche für sechs repräsentative Verbindungen aufwies, wobei Rutin einen >3-fachen Unterschied in der Retentionszeit RSD zwischen den beiden Akquisitionsmodi aufwies. DDA erzeugte jedoch sauberere MS/MS-Spektren mit unterschiedlichen Fragmentionen, während DIA-Spektren Interferenzen durch Schadstoffionen aufwiesen. Gleichzeitig detektierte DIA effektiv aktive Bestandteile mit geringer Abundanz, deren Ionenchromatogramme und MS/MS-Fragmente im DDA-Modus nicht extrahiert werden konnten. Diese Studie liefert wichtige experimentelle Beweise und analytische Datensätze, um die Auswahl hochauflösender massenspektrometrischer Erfassungsmodi für die komplexe TCM-Formulierungsforschung zu unterstützen. Nachfolgende Forscher können die komplementären Vorteile beider Ansätze integrieren, um zwei Ziele in einer umfassenden Verbindungscharakterisierung zu erreichen.

Einleitung

Die Rezepturen der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM) verfügen über komplexe chemische Systeme mit erheblichen Schwankungen in den Komponentenkonzentrationen, insbesondere durch das Vorhandensein zahlreicher Wirkstoffe mit geringer Häufigkeit, die die Analysetechnologien vor große Herausforderungen stellen. Huahua-Pulver, eine klassische und renommierte Formel der traditionellen chinesischen Medizin, besteht aus vier Heilkräutern: Sophora japonica, Platycladus orientalis-Blätter, Schizonepeta tenuifolia-Ähren und Citrus aurantium-Schale. Diese Formel enthält eine Vielzahl von bioaktiven Substanzen, darunter Flavonoide, Alkaloide und flüchtige Öle, mit erheblichen Schwankungen in ihren Konzentrationen. Es dient als repräsentatives Modell komplexer Systeme¹ für die Untersuchung der materiellen Grundlagen von TCM-Formeln. Eine genaue, umfassende und zuverlässige Charakterisierung seiner chemischen Zusammensetzung ist eine entscheidende Voraussetzung für die Aufklärung der pharmakodynamischen Materialbasis und die Verbesserung der Qualitätskontrollstandards.

Ultra-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Quadrupol-Elektrostatisches Feld Die hochauflösende Massenspektrometrie von Orbitrap (UPLC-QE-Orbitrap MS) hat sich aufgrund ihrer außergewöhnlichen Auflösung, Empfindlichkeit und Massengenauigkeit zu einer zentralen Plattform für die Analyse chemischer Komponenten in komplexen TCM-Systemen entwickelt. In Bezug auf Datenerfassungsstrategien sind die datenabhängige Erfassung (DDA) und die datenunabhängige Erfassung (DIA) zwei Hauptmodi ^2,3,4 (Abbildung 1). Der DDA-Modus löst selektiv die Fragmentierung von Ionen mit hoher Abundanz auf der Grundlage voreingestellter Regeln (z. B. Intensitätsschwellen für Vorläuferionen, dynamischer Ausschluss) aus und liefert gezielt hochwertige MS/MS-Spektren, die die strukturelle Aufklärung erleichtern. Es hat jedoch Einschränkungen 5,6,7,8 bei der Abdeckung von Ionen mit geringer Abundanz. Im Gegensatz dazu führt der DIA-Modus eine diskriminierungsfreie Fragmentierung aller Vorläuferionen innerhalb eines bestimmten Bereichs des Masse-Ladungs-Verhältnisses unter Verwendung kontinuierlicher oder variabler Fenster durch. Theoretisch erfasst es alle nachweisbaren Ionen, was die Breite und Reproduzierbarkeit der Detektion erheblich erhöht und sich besonders für die ungezielte globale Analyse eignet, obwohl die resultierenden gemischten MS/MS-Spektren komplexer zu interpretieren sind ^5,9.

Während DDA- und DIA-Techniken in der TCM-Analyse einzeln angewendet werden, sind systematische, empirische Vergleichsstudien zu zentralen Leistungsindikatoren wie der Identifikationsbreite (insbesondere für Komponenten mit geringer Abundanz), der Qualität des MS/MS-Spektrums und der Nachweisempfindlichkeit innerhalb desselben komplexen TCM-Formelsystems (z. B. Huahua-Pulver) unzureichend. Die Klärung der anwendbaren Szenarien, Vorteile und Grenzen dieser beiden Modi in komplexen TCM-Matrizen ist für Forscher von entscheidender Bedeutung, um die Strategieauswahl auf der Grundlage spezifischer experimenteller Ziele zu optimieren¹⁰.

Die wichtigsten Parameter und Einschränkungen werden hier zusammengefasst, um den Leser über die Anwendbarkeit dieses Protokolls zu informieren. Die Methode ist sehr effektiv für die Profilierung komplexer pflanzlicher Matrices mit optimierten Parametern für ein System, das Flavonoide und Alkaloide enthält. Das kritische DIA-Variablenfenster wurde nach empirischen Tests auf 30 m/z gesetzt; Dieser Parameter muss für Proben mit unterschiedlichen physikalisch-chemischen Eigenschaften abgestimmt werden. Die Methode detektiert zuverlässig Ionen mit geringer Häufigkeit (Peakbereich ~10⁵), erfordert jedoch eine Erfassung in getrennten positiven und negativen Ionisationsmodi, um die Datenqualität zu gewährleisten. Eine Haupteinschränkung ist die Abhängigkeit von DIA von Spektralbibliotheken und fortschrittlicher Dekonvolutionssoftware für sichere Identifikationen, was sich auf die Anforderungen an die Rechenressourcen auswirkt.

Dementsprechend zielt diese Studie darauf ab, einen detaillierten und systematischen Vergleich der umfassenden Leistung der DDA- und DIA-Scanmodi auf der UPLC-QE-Orbitrap MS-Plattform durchzuführen, wobei die klassische Formel Huaihua Powder als Fallstudie verwendet wird. Es werden optimierte DDA- und DIA-Scanmethoden entwickelt, die auf die Huaihua Pulver-Analyse zugeschnitten sind. Die Datenverarbeitung erfolgt mit der Compound Discoverer-Software, um die beiden Modi in den folgenden Dimensionen zu bewerten und zu vergleichen: (1) Gesamtzahl der identifizierten Verbindungen; (2) Qualität der erfassten MS/MS-Spektren; (3) Reproduzierbarkeit von Peakflächen und Retentionszeiten repräsentativer Verbindungen; und 4) Nachweisempfindlichkeit für Wirkstoffe mit geringer Abundanz. Es wird erwartet, dass diese Forschung solide experimentelle Beweise und Daten für die Auswahl hochauflösender massenspektrometrischer Scanmodi in Studien komplexer TCM-Systeme liefert und das Potenzial für komplementäre Vorteile von DDA und DIA untersucht, um ein "Gleichgewicht zwischen Breite und Tiefe" zu erreichen und die TCM-Modernisierung voranzutreiben.

Während des Experiments empfehlen wir in Bezug auf die Parametereinstellung des Fensters mit segmentierten Variablen im DIA-Erfassungsmodus, es auf 30 m/z einzustellen. Gleichzeitig ist der Sammeleffekt von positiven und negativen Ionen getrennt besser.

Protokoll

Die in dieser Studie verwendeten Reagenzien und Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Zubereitung der Huaihua Pulver Testlösung

1. In Übereinstimmung mit den Verarbeitungsnormen von "Gebratene Sophora-Blüten" in der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs (Teil I) eine angemessene Menge des ursprünglichen Sophora-Blütenmaterials nehmen, Verunreinigungen und Äste entfernen, Asche und Schmutz heraussieben, in eine heiße Pfanne geben und bei schwacher Hitze (100 °C) unter Rühren dunkelgelb braten. Herausnehmen und abkühlen lassen.
2. Bereiten Sie die verarbeiteten Produkte der Blätter von Platycladus orientalis gemäß den "Allgemeinen Regeln für die Zubereitung" 0213 in der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs (Teil IV) vor. Nehmen Sie eine angemessene Menge der ursprünglichen Platycladus orientalis-Blätter , entfernen Sie Unreinheiten, geben Sie sie in eine heiße Pfanne und braten Sie sie bei schwacher Hitze (100 ºC) gelb. Herausnehmen und abkühlen lassen.
3. Bereiten Sie die verarbeiteten Produkte von Zhike nach der Methode für "gebratenen Fructus Aurantii aus Kleie" in der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs (Teil I) vor. Nehmen Sie eine angemessene Menge Zhike-Rohmaterial, entfernen Sie Verunreinigungen, erhitzen Sie es auf 100 °C und streuen Sie eine angemessene Menge Weizenkleie im Verhältnis 1:10 (Materialien zu Hilfsstoffen).
   1. Sobald der Rauch aufsteigt, rohe Zhike-Scheiben hinzufügen und schnell unter Rühren anbraten. Wenn die Oberfläche gelb oder dunkelgelb wird, herausnehmen, die Kleie aussieben, abkühlen lassen und beiseite stellen.
4. Bereiten Sie Huahua-Pulver gemäß dem 1:1:1:1-Gewichtsverhältnis zu, das von der chinesischen medizinischen Formulologie (New Century 3rd Edition) verschrieben wurde. Wiegen Sie 1 g von jedem Kräuterpulver genau ab (durch ein Sieb Nr. 5 gesiebt).
   1. Kombinieren Sie die Pulver in einem Mörser und mischen Sie nach der "Verreib- und Mischmethode" für Pulver der traditionellen chinesischen Medizin: Mahlen Sie vorsichtig und gleichmäßig in eine Richtung für 10 Minuten.
   2. Betrachten Sie das Pulver als gleichmäßig gemischt, wenn keine sichtbaren Streifen, Agglomerate oder Farbabweichungen beobachtet werden, was zu einem homogenen Erscheinungsbild über die gesamte Mischung führt. Bereiten Sie die endgültige Huaihua-Pulverprobe mit dieser Methode vor.
5. Beurteilen Sie die Gleichmäßigkeit der Mischung anhand eines standardisierten visuellen Inspektionsprotokolls. Untersuchen Sie die Pulvermischung unter gleichbleibenden Lichtverhältnissen vor weißem Hintergrund.
   HINWEIS: Betrachten Sie die Mischung nur dann als homogen, wenn sie alle folgenden Kriterien erfüllt: durchgehend einheitliche Farbe ohne sichtbare Schlieren oder Flecken einzelner Komponenten; gleichmäßige Textur ohne grobe oder feine Divergenz; keine offensichtliche Variation des Farbtons, wenn von mehreren Punkten abgetastet wird; und keine aggregierten körnigen Klumpen, die bei näherer Betrachtung erkennbar sind. Führen Sie diese Bewertung durch zwei unabhängige Analysten durch, um die Konsistenz zu gewährleisten.
6. Wiegen Sie 0,1 g der gut gemischten Huaihua Pulverprobe genau ab. Übertragen Sie die Probe in einen 10-ml-Messkolben. Fügen Sie 8 mL Methanol hinzu.
7. Führen Sie eine Ultraschallextraktion für 60 Minuten mit einer Leistung von 500 W und einer Frequenz von 40 kHz durch. Auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Füllen Sie das Volumen bis zur Markierung mit Methanol auf.
   1. Gut schütteln, um eine Endkonzentration von 10 mg/ml Huaihua-Pulverextrakt zu erhalten. Filtern Sie durch eine 0,22 μm mikroporöse Membran (PVDF). Übertragen Sie das Filtrat zur Untersuchung in ein Probenfläschchen.
      HINWEIS: Während des Versuchs wurden die Flüssigkeit aus organischen Abfällen und andere damit verbundene giftige und schädliche Reagenzien klassifiziert und gekennzeichnet. Und alle 2 Wochen transportieren die Mitarbeiter des Asset and Experimental Management Office der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine es zu einer qualifizierten Institution für einheitliches Recycling und Verarbeitung.

2. Nachweisbedingungen für UPLC-Q-Orbitrap HRMS

1. Einstellungen für chromatographische Systemparameter
   1. Verwenden Sie eine C18-Säule (3,0 mm × 100 mm, 2,6 μm). Halten Sie die Temperatur der Säule bei 30 °C. Verwenden Sie die mobile Phase A (0,1 % Ameisensäure in Wasser) und die mobile Phase B (Acetonitril).
   2. Programmieren Sie die Steigung wie folgt: 0-10 min, 5%-20% B; 10-25 min, 20%-50% B; 25-40 min, 50%-95% B; 40-45 min, 95% B. Stellen Sie die Durchflussrate auf 0,3 mL/min ein. Injizieren Sie 5 μl der Probe.
2. Führen Sie eine Massenspektrometrie-Studie mit den folgenden Parametereinstellungen durch.
   HINWEIS: Ionenquelle: Erhitzte Elektrospray-Ionisation (H-ESI); Scan-Modus: Im DDA-Erfassungsmodus können sowohl positive als auch negative Ionen gleichzeitig erfasst werden. Im DIA-Erfassungsmodus werden positive und negative Ionen getrennt erfasst. Parameter der Ionenquelle: Sprühspannung +3,5 kV (positive Ionen)/-2,8 kV (negative Ionen); Strömungsgeschwindigkeit des Mantels 40 arb; Zusatz-Luftströmungsgeschwindigkeit 10 arb; Blasgasgeschwindigkeit 1 Arb; Temperatur der Ionentransmissionsröhre: 320 °C; Verdampfungstemperatur: 350 °C; S-Lens RF-Pegel: 55%.
   1. Aufbau und Optimierung der Methode der datenabhängigen Erfassung (DDA)
      1. Wählen Sie für vollständigen MS-Scan (Vollständiger MS) die folgenden Einstellungen aus:
         HINWEIS: Auflösung: 35.000; Scanbereich: 100-1000 m/z; Automatische Verstärkungsregelung (AGC) Ziel: 3e6; Maximale Einspritzzeit (max. IT): 100 ms.
      2. Für Datenabhängiger MS/MS-Scan (dd-MS2) wählen Sie folgende Einstellungen:
         1. Für die Auswahl molekularer Ionen ist die Intensitätsschwelle von 5e4 beizubehalten. Ungeladene Ionen und Isotopenpeaks ausschließen (Isotopenausschluss aktivieren). Wenden Sie einen dynamischen Ausschluss mit einer Ausschlusszeit von 15 s und einer Massentoleranz von ±10 ppm an, um eine wiederholte Auswahl von Ionen mit hoher Intensität zu verhindern.
         2. Behalten Sie für die Fragmentierungseinstellungen Folgendes bei: Isolationsfenster: 1,0 m/z; Fragmentierungsmethode: Hochenergetische Kollisionsdissoziation (HCD); Normalisierte Kollisionsenergie (NCE): 20, 40, 60 V; Sekundäre Auflösung: 17.500; AGC-Ziel: 1e5; Maximale IT-Kapazität: 50 ms; TopN-Strategie: Wählen Sie in jedem Scanzyklus die 3 Molekülionen mit der höchsten Intensität für die Fragmentierung aus.
   2. Aufbau und Optimierung der DIA-Methode
      1. Verwenden Sie für Full MS Scan die gleichen Parameter wie in der DDA-Methode.
      2. Legen Sie für den datenunabhängigen MS/MS-Scan (DIA-MS/MS) eine Strategie für segmentierte Variablenisolationsfenster fest.
      3. Definieren Sie den Zielbereich als 100-1000 m/z. Teilen Sie Fenster basierend auf der Ionenhäufigkeitsverteilung über den gesamten m/z-Bereich mit hochwertigen DDA-Spektren unter optimierten chromatographischen Bedingungen. Legen Sie variable Fenster fest, um die Gesamtionenhäufigkeit über die Segmente hinweg auszugleichen und Sättigung oder Unzulänglichkeit zu vermeiden.
      4. Optimieren Sie auf 30 Fenster, um Abdeckung und Zykluszeit auszugleichen.
         HINWEIS: Fragmentierungseinstellungen - Fragmentierungsmethode: HCD; Stromanschluss: 20, 40, 60 V; Auflösung: 17.500; AGC-Ziel: 1e6; Max. IT: Automatisch; Segmentiertes variables Fenster: 30 m/z.; Anzahl der Schleifen: 30.
      5. Erstellen Sie die Einschlussliste basierend auf dem zentralen Molekulargewicht jedes Isolationsfenstersegments, z. B. m/z 115, 145, 175, 205 ... 925, 955, 985.
   3. Prozess der Datenerfassung
      1. Systemäquilibrierung: Äquilibrieren Sie die chromatographische Säule mit der mobilen Phase für mindestens 5 min.
      2. Probenlauf vor dem Experiment: Bereiten Sie die Huaihua Pulver-Testlösung gemäß dem Präparationsverfahren vor. Injizieren Sie 5 aufeinanderfolgende Proben. Bewertung der Systemstabilität (Retentionszeit RSD < 2 %, Gesamtionenstromintensität RSD < 5 %).
      3. Rohling läuft: Injizieren Sie die Methanol-Rohlingslösung für die Hintergrundsubtraktion.
      4. Huaihua Pulver Probenlauf: Analysieren Sie jede Probe durch Injektion in zufälliger Reihenfolge. Führen Sie alle Proben unabhängig voneinander für jeden Scanmodus (DDA, DIA) aus.
   4. Datenverarbeitung
      1. Identifizierung von Verbindungen
         1. Importieren Sie die durch Massenspektrometrie erfassten Rohdaten in die Compound Discoverer-Software. Richten Sie einen Identifikations-Workflow für unbekannte Komponenten ein. Führen Sie die Peak-Verarbeitung und Peak-Ausrichtung durch. Gleichen Sie gemessene MS/MS-Spektren mit der mzCloud Online-MS/MS-Datenbank und der lokalen mzVault-MS/MS-Datenbank ab.
         2. Wenden Sie die folgenden Filterparameter an: Schwellenwert für den Peakbereich 10⁵, Massenabweichung ± 5 ppm für Primär- und Sekundärionen und Matching-Score ≥80. Vergleichen Sie gefilterte Ionen mit Verbindungsinformationen aus Datenbanken, Referenzstandards und relevanter Literatur, um chemische Komponenten zu identifizieren.
         3. Spezifischer Vorgang in der Compound Discoverer-Software: Erstellen Sie einen neuen Analyseprozess und wählen Sie den Workflow Naturprodukt/Naturprodukt mit unbekannter ID w Stats Online und Local Database Searchers aus.
         4. Stellen Sie sicher, dass der Knoten "Verbindungen erkennen" für die Identifizierung und Extraktion von Peaks enthalten ist. Fügen Sie dem Workflow die Datenbanken Search mzCloud und Search mzVault hinzu.
         5. Fügen Sie die Rohdatendatei hinzu und legen Sie die Filterparameter fest (Schwellenwert für den Peakbereich 10⁵, Massenabweichung ± 5 ppm für primäre und sekundäre Ionen). Klicken Sie auf Ausführen , um die Analyse auszuführen.
      2. Vergleichende Analyse verwandter Indikatoren
         1. Identifikationsmenge: Vergleichen Sie die Gesamtzahl der Verbindungen, die im positiven und negativen Ionenmodus sowohl für den DDA- als auch für den DIA-Modus identifiziert wurden. Erstellen Sie Ionenverteilungskarten für jeden Modus.
         2. Reproduzierbarkeitsstudie: Vergleichen Sie die Unterschiede zwischen Retentionszeit (RT) und Peakfläche (AA) repräsentativer Verbindungen mit hoher Abundanz (Rutin, Quercitrin), mittlerer Abundanz (Neohesperidin, Naringin) und geringer Abundanz (Psoralenol, Trimethylcolchicinsäure) zwischen DDA- und DIA-Moden (n = 5).
         3. Qualität des MS/MS-Spektrums: Bewerten Sie die Qualität der MS/MS-Fragmentionenspektren von Pulegon, einer Schlüsselverbindung im Q-Marker, im DDA- und DIA-Modus.
         4. Nachweis von Komponenten mit geringer Abundanz: Vergleichen Sie den Nachweis von MS/MS-Fragmenten repräsentativer Verbindungen mit geringer Abundanz (Carvon, Adenosin) im DDA- und DIA-Modus⁵.

Ergebnisse

Allgemeine Identifizierung von Verbindungen

Die Gesamtionenstrom-Chromatogramme von Huaihua-Pulver unter den beiden Erfassungsmodi sind in Abbildung 2 dargestellt, mit minimalen Gesamtunterschieden. Im DDA-Erfassungsmodus wurden insgesamt 14.958 Verbindungen sowohl im positiven als auch im negativen Ionenmodus identifiziert, während 9.489 Verbindungen im DIA-Erfassungsmodus identifi...

Diskussion

In dieser Studie ist es besonders erwähnenswert, dass wir festgestellt haben, dass im DIA-Erfassungsmodus die Werteinstellung des segmentierten Variablenfensters nicht zu groß sein sollte. Wir haben versucht, es auf 300 MHz und 100 MHz einzustellen, aber der endgültige spektrale Effekt war schlecht. Nach wiederholten Erkundungen und Versuchen haben wir uns schließlich für das Akquisitionsfenster von 30 MHz entschieden. Daher hat die Einstellung des Erfassungsfensters einen entscheidenden...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Acetonitril	Thermo Fischer	/	Chromatographische Reinheit
Software für Compound Discoverer 3.3	Thermo Fischer	/	Massenspektrometrie, Datenverarbeitung und Identifizierung von Verbindungen
Fructus aurantii	Sichuan Neijiang	220709	Die Kräuter in der Verschreibung von Huaihua Pulver
Platycladus orientalis Blätter	Shandong Linyi	240619	Die Kräuter in der Verschreibung von Huaihua Pulver
Schizonepeta-Stachel	Jiangsu Taizhou	240601	Die Kräuter in der Verschreibung von Huaihua Pulver
Sophora-Blüte	Sichuan Guangan	241017	Die Kräuter in der Verschreibung von Huaihua Pulver
Ultraschall-Reinigungsmaschine	Jietuo Ultraschall-Reinigungsgeräte Co., Ltd	240HT	Extraktion von Komponenten aus Huaihua Pulver
UPLC-Q-Orbitrap HRMS	Thermo Fischer	/	Hochauflösendes Massenspektrometer
Wasser	Watsons Unternehmen	/	Reinstwasser