Netzwerkpharmakologie und experimentelle In-vitro-Zellstudie zur Erforschung des therapeutischen Potenzials von Thiazolonderivaten bei Rhabdomyosarkomen

Zusammenfassung

Wir präsentieren eine Studie, die das therapeutische Potenzial von Thiazolonderivaten gegen Rhabdomyosarkome systematisch untersucht, basierend auf Netzwerkpharmakologie und Computerchemie, wobei die Validierung und Bewertung durch In-vitro-Zellexperimente durchgeführt wurde.

Zusammenfassung

Das Rhabdomyosarkom (RD) ist ein bösartiger Tumor, der von Rhabdomyoblasten ausgeht und eine ernsthafte Bedrohung für die Gesundheit von Kindern und Jugendlichen darstellt. Basierend auf dem Potenzial von Thiazolonderivaten in einer Vielzahl biologischer Aktivitäten sollen in dieser Studie die Mechanismen von Thiazolonderivaten bei der Behandlung von RD durch die Kombination von Netzwerkpharmakologie und in vitro Zellexperimenten systematisch untersucht werden. Durch die Netzwerkpharmakologie wurden Hochdurchsatzdaten integriert, um die potenziellen Ziele von Thiazolon vorherzusagen. Darüber hinaus wurde die AutoDock Vina-Software verwendet, um die Bindungsenergie der Verbindung und des Zielproteinmoleküls zu berechnen und ihren Signalweg in Bezug auf RD aufzudecken. Schließlich konnten in vitro Zellexperimente die tumorsuppressive Wirkung der Verbindungen weiter bestätigen. Die Netzwerkpharmakologie wurde verwendet, um die Ziele von Thiazolonderivaten bei der Behandlung von RD zu analysieren, und schließlich wurden 172 Zielgene durch Kombination und Deduplizierung erhalten. Fünf Proteinziele mit niedriger Bindungsenergie wurden durch Andocken zwischen der Verbindung und dem Zielproteinmolekül PIK3CD, AKT1, GSK3B, HSP90AB1 und ITGB1 gescreent. Die Ergebnisse von In-vitro-Zellkulturexperimenten zeigten, dass ein spezifisches Thiazolonderivat eine signifikante hemmende Wirkung auf RD-Zelllinien hatte und damit eine wissenschaftliche Grundlage für die Entdeckung neuer Ziele und wirksamer Verbindungen für die Behandlung von RD bildete. Diese Studie enthüllte die Mechanismen von Thiazolonderivaten bei der Behandlung von RD durch eine Kombination aus Netzwerkpharmakologie und In-vitro-Experimenten und eröffnete eine neue Perspektive für zukünftige Arzneimittelentwicklungs- und Behandlungsstrategien.

Einleitung

Rhabdomyosarkom (RD), ein hochaggressives Weichteilsarkom bei Kindern, das eine erhebliche Bedrohung für die Gesundheit von Kindern darstellt und nur begrenzte therapeutische Möglichkeiten bietet. Epidemiologische Studien deuten darauf hin, dass RD zwar relativ niedrige Inzidenzraten aufweist, die hohe Malignität und die schlechte Prognose jedoch erhebliche klinische Herausforderungen darstellen. Die RD wird in vier verschiedene histologische Subtypen eingeteilt: embryonal, alveolär, spindelzellulär/sklerosierend und pleomorph, wobei das embryonale Rhabdomyosarkom (ERMS) die häufigste Form ist ^1,2,3. Aktuelle Therapiestrategien für neu diagnostizierte Niedrigrisiko-ERMS-Patienten umfassen in erster Linie die chirurgische Resektion lokalisierter Tumoren in Kombination mit Chemotherapeutika wie Vincristin, Dactinomycin und Cyclophosphamid. Hochrisikopatienten erhalten in der Regel intensivierte Multi-Wirkstoff-Chemotherapien mit Ifosfamid und Etoposid ^4,5. Der multimodale Ansatz, der Chirurgie, Chemotherapie und Strahlentherapie kombiniert, hat sich zwar als wirksam erwiesen, um eine lokale Tumorkontrolle zu erreichen und Mikrometastasen zu beseitigen⁵, aber es bleiben erhebliche Herausforderungen bestehen. Die erheblichen Toxizitätsprofile der derzeitigen Chemotherapeutika, einschließlich Neurotoxizität und irreversibler Nieren- und Blasenschäden⁶, stellen besondere Risiken für pädiatrische und jugendliche Patienten dar. Darüber hinaus unterstreichen die inhärente Heterogenität der RD und ihre Neigung zu Rückfällen die dringende Notwendigkeit, wirksamere und zielgerichtetere Therapeutika zu entwickeln⁷.

In diesem Zusammenhang konzentriert sich die Forschung hier auf eine Klasse von Thiazolonderivaten mit unterschiedlichen pharmakologischen Eigenschaften. Thiazolonderivate weisen signifikante entzündungshemmende, antioxidative und Apoptose-regulierende Aktivitäten^{auf 8}, was eine breite biologische Aktivität und ein vielversprechendes Potenzial für die Arzneimittelentwicklung zeigt ^9,10. Molekulare Docking-Simulationen von Elgubbi et al. zeigten starke Bindungsaffinitäten von Thiazolonderivaten an Schlüsselziele wie die humane Carboanhydrase IX (CA IX), ein Hypoxie-induzierbares Enzym, das in aggressiven Tumoren überexprimiert wird, was auf einen Mechanismus für ihre antiproliferative Wirkung hindeutet¹¹. Die computergestützte Studie klärt die molekularen Wechselwirkungen zwischen Thiazolonderivaten und krebsassoziierten Proteinen auf. Im Jahr 2024 berichteten El-Helw et al., dass Benzochinolin-basierte Thiazolonderivate eine starke Aktivität gegen Krebszelllinien aufweisen, wobei Thiazolthion und Thiazolanaloga die höchste Wirksamkeit zeigten¹². Mechanistische Studien^10,13 deuten darauf hin^, dass diese Verbindungen die Lebensfähigkeit von Tumorzellen über zwei Wege stören: (1) Induktion von oxidativem Stress durch die Modulation des antioxidativen Signalwegs und (2) direkte Hemmung der Proliferation. Diese Ergebnisse unterstreichen das breite pharmakologische Profil von Thiazolonen, einschließlich entzündungshemmender und antimikrobieller Eigenschaften. Bemerkenswert ist, dass Verbindungen wie Pioglitazon¹⁴ und Troglitazon¹⁵ hauptsächlich bei der Behandlung von Typ-2-Diabetes eingesetzt^{werden 16}, während 4-Thiazolon-Derivate antiproliferative Wirkungen gegen Leukämiezellen zeigen¹⁷ (Abbildung 1). Diese Verbindungen zeigen nicht nur in klinischen Studien ein erhebliches therapeutisches Potenzial, sondern zielen auch spezifisch auf mehrere Zellsignalwege ab, einschließlich der Hemmung der Tumorzellproliferation, der Induktion der Apoptose und der Regulation des Zellzyklus. Die Antikrebsmechanismen von Thiazolonderivaten umfassen mehrere Signalwege, die das Wachstum und Überleben von Tumorzellen effektiv behindern, indem sie kritische Signalwege modulieren, wie z. B. den PI3K/Akt- und NF-κB-Signalweg. Darüber hinaus haben Thiazolonderivate auch regulatorische Wirkungen auf die Mikroumgebung des Tumors gezeigt, einschließlich der Hemmung der Angiogenese und der Modulation von Immunantworten¹⁸. Die vielfältigen mechanistischen Wirkungen von Thiazolon-Derivaten positionieren sie als ideale Kandidaten für die Entwicklung neuartiger Krebstherapeutika.

In früheren Forschungen haben wir Thiazolonderivate mit benachbarten chiralen Zentren durch eine kupferkatalysierte distale asymmetrische Propargylierungsreaktion effizient konstruiert. Unter Verwendung von Propargylestern und Thiazolonen als Substrate wurde die Reaktion durch CuI in Gegenwart eines Phenyl-substituierten Pyridin-Bis(oxazolin)-Liganden katalysiert. Durch die Optimierung der Reaktionsbedingungen erreichten wir eine hohe Effizienz bei der Synthese dieser Thiazolonderivate¹⁹. Die Netzwerkpharmakologie als systembiologischer Ansatz deckt komplexe Wechselwirkungen zwischen Medikamenten, Zielen und Krankheitspfaden auf und revolutioniert das Verständnis und die Entwicklung von Therapien für komplexe Krankheiten wie Krebs²⁰. Diese Studie zielt vorläufig darauf ab, den potenziellen therapeutischen Wert neuartiger Thiazolonderivate bei der Behandlung von RD aufzuzeigen. Durch integrierte Netzwerkpharmakologie und zelluläre Experimente werden Verbindungen mit überlegener Aktivität identifiziert, die durch die koordinierte Regulierung von fünf Kernzielen, einschließlich PIK3CD und AKT1, therapeutische Multi-Target-Effekte ausüben und dadurch wichtige Signalwege wie PI3K-Akt beeinflussen können. Molekulares Docking und Molekulardynamik-Simulationen werden verwendet, um die Bindungseigenschaften zwischen der Verbindung und den Zielproteinen zu demonstrieren. Darüber hinaus wird ein vorläufiges Struktur-Wirkungs-Beziehungsmodell etabliert, das eine Referenz für die anschließende Strukturoptimierung bietet. Diese Arbeit bietet nicht nur neue Kandidatenmoleküle für die Wirkstoffentwicklung des Rhabdomyosarkoms, sondern unterstreicht auch die positive Rolle multidisziplinärer Strategien bei der Erforschung von Multi-Target-Therapiemechanismen von Medikamenten.

Protokoll

Alle Verfahren zur Netzwerkpharmakologie wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien für die Evaluierungsmethoden der Netzwerkpharmakologie²¹ durchgeführt. Der in dieser Studie verwendete umfassende Arbeitsablauf in der Netzwerkpharmakologie ist in Abbildung 2 schematisch dargestellt.

Synthese von Thiazolon-Derivaten
Die Thiazolonderivate in dieser Studie wurden in unserer früheren Arbeit¹⁹ durch eine kupferkatalysierte asymmetrische Fernpropargylierungsreaktion synthetisiert. In der Reaktion wurden CuI als Katalysator und ein chiraler Pybox-Ligand (L1) als Stereokontrollkern in einem DIPEA-Basen- und Methanol-Lösungsmittelsystem bei -10 °C für 48 h verwendet, wodurch eine hohe enantioselektive Kopplung zwischen Propargylestern und Thiazolonen erreicht wurde. Das Zielprodukt wurde mit einer Ausbeute von bis zu 89 %, einem Enantiomerenverhältnis (er) von 97,8:2,2 und einem diastereomeren Verhältnis (dr) von 17,8:1 erhalten. Detaillierte Informationen zu den Synthesemethoden dieser Verbindungsserie finden Sie in früheren Studien¹⁹. Diese Methode zeigte eine breite Anwendbarkeit des Substrats und ermöglichte die Aufnahme von Aryl (ortho-, meta-, para-Substituenten), aliphatischen Ketten und Propargylestern mit geschmolzenen Ringen sowie verschiedenen substituierten Thiazolonen mit Ausbeuten zwischen 51 % und 98 %. Diese Strategie konstruiert zum ersten Mal effizient multichiral-zentrierte Thiazolon-Gerüste in einem einstufigen Prozess und bietet einen hochselektiven und unkomplizierten Ansatz für die Synthese chiraler Wirkstoffmoleküle mit signifikanten potenziellen Anwendungen in der medizinischen Chemie.

Pharmakologische Vorhersage des Netzwerks
Zielvorhersage des Thiazolon-Derivats: Die strukturellen Darstellungen der Thiazolon-Derivate wurden mit der KingDraw-Software generiert, und die entsprechenden Strukturdateien wurden anschließend über die Open Babel-Software in SMILES ID umgewandelt. Um potenzielle therapeutische Ziele gegen RD vorherzusagen, verwendeten wir einen umfassenden computergestützten Ansatz unter Verwendung von drei verschiedenen Zielvorhersagedatenbanken: SwissTargetPrediction (http://swisstargetprediction.ch/), TargetNet (http://targetnet.scbdd.com) und SuperPred (https://prediction.charite.de). Für die TargetNet-Analyse haben wir ein strenges Filterkriterium implementiert, indem wir Gene mit einer Wahrscheinlichkeit > 0 ausgewählt haben. In der SuperPred-Datenbank haben wir strengere Selektionsparameter angewendet und nur die Gene beibehalten, die eine Modellgenauigkeit > 90 % und eine Wahrscheinlichkeit > 60 % aufweisen, um eine hohe Zuverlässigkeit der Zielvorhersagen zu gewährleisten.

Vorhersage von RD-Zielen: Basierend auf der GeneCards-Datenbank (https://www.genecards.org/) und der OMIM-Datenbank (https://omim.org/) führten wir eine Suche nach Rhabdomyosarkom durch. Für die Daten aus der GeneCards-Datenbank haben wir die Ergebnisse mit einer Punktzahl von mehr als 20 gefiltert, um Gene zu erhalten, die mit dem Rhabdomyosarkom assoziiert sind.

Aufbau und Analyse von Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken (PPI): Die potenziellen Ziele von Thiazolonderivaten und die mit RD assoziierten Gene wurden durchschnitten. Die potenziellen Ziele für die Behandlung des humanen embryonalen Rhabdomyosarkoms durch Thiazolonderivate wurden in die STRING-Datenbank (https://www.string-db.org/) hochgeladen, um eine hochzuverlässige Analyse der Ziel-PPI-Beziehung (Protein-Protein-Interaktion) durchzuführen. Das PPI-Netzwerk wurde in der Cytoscape-Software (http://www.cytoscape.org/) erstellt, und die Kernziele wurden auf der Grundlage von Gradwerten gescreent.

Aufbau eines Netzwerknetzwerks für den Wirkstoff-Krankheit-Ziel-Signalweg: Das Netzwerk des Wirkstoff-Ziel-Signalwegs kann die Ziele von Verbindungen und Krankheiten und die an diesen Zielen beteiligten Signalwege klar erkennen, um mögliche Schlüsselziele und -wege für die Therapie von Wirkstoffen bei RD zu identifizieren. Erstellen Sie zunächst die Netzwerktabelle und die Attributtabelle in der Tabelle. Der Inhalt der Netzwerktabelle umfasst hauptsächlich die Korrespondenz zwischen der Verbindung und dem Kernziel, die Korrespondenz zwischen dem Kernziel und dem beteiligten Signalweg sowie die Korrespondenz zwischen RD und dem Hauptweg. Der Inhalt der Attributtabelle dient hauptsächlich dazu, alle Informationen in der Netzwerktabelle zu klassifizieren und zu benennen. Öffnen Sie danach die Cytoscape-Software, laden Sie die Netzliste an den Ladeort hoch, legen Sie den Start- und Endpunkt fest, laden Sie die Attributtabelle hoch und ändern Sie schließlich die Bildform.

Integrierte funktionelle Annotation und netzwerkpharmakologische Analyse - Construction Gene Ontology (GO) Enrichment, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG): Die GO- und KEGG-Anreicherungsanalyse der Kernziele wurde von der DAVID-Datenbank durchgeführt (https://david.ncifcrf.gov/). In der Reihenfolge des P-Wertes von klein bis groß wurden die Top 10 Items in den Bereichen biologischer Prozess (BP), zelluläre Komponente (CC) und molekulare Funktion (MF) in GO für die Analyse ausgewählt, und die Top 20 Items in KEGG wurden analysiert, und die GO- und KEGG-Blasenkarten der Kernziele wurden auf der Grundlage der Online-Mikrobioinformationsplattform erstellt.

Molekulares Docking: Die Kernzielproteine wurden aus der PDB-Datenbank (https://www.rcsb.org/) ausgewählt und die Strukturdateien der Kernziele heruntergeladen. Zunächst wurden die Proteine mit der PyMol-Software dehydriert, gefolgt von der Trennung von Liganden und Rezeptoren. Anschließend wurden die Proteine mit der ADFRSuite-Software hydriert und die Gitterbox-Parameter für die molekulare Docking-Software AutoDock ermittelt. Die pdbqt-Dateien von Thiazolidinon-Derivaten und Kernzielproteinen wurden mit der AutoDock Vina-Software erstellt. Anschließend wurden molekulare Docking-Simulationen von Thiazolon-Derivaten und Kernzielproteinen durchgeführt. Schließlich wurden die molekularen Docking-Modelle mit der PyMol-Software visualisiert.

Simulation der Molekulardynamik: Die PDB-Datei wurde unter Verwendung des Kraftfeldes amber99sb-ildn und des TIP3P-Wassermodells in das GROMACS-kompatible GRO-Format konvertiert:
gmx pdb2gmx -f Pro.pdb -o Pro_temp_H.gro -ff amber99sb-ildn -water tip3p -ignh
Es wurde eine kubische periodische Grenzbox mit einem Abstand von 1,2 nm vom Protein hinzugefügt:
gmx editconf -f Pro_temp_H.gro -o Pro_temp_H_box.gro -c -d 1.2 -bt cubic
Die Box wurde mit TIP3P-Wassermolekülen gefüllt:
GMX Solvat -CP Pro_temp_H_box.GR -O Pro_temp_H_box_water.GR -P topol.top
Das System wurde durch Zugabe von Na-Ionen neutralisiert:
gmx grompp -f ionen.mdp -c Pro_temp_H_box_water.gro -p topol.top -ionen.tpr
gmx genion -s ionen.tpr -o Pro_temp_H_box_water_ion.gro -p topol.top -neutral
Die Energieminimierung wurde durchgeführt:
gmx grompp -f minim.mdp -c Pro_temp_H_box_water_ion.gro -p topol.top -o em.tpr
gmx mdrun -v -deffnm em
Die NVT-Äquilibrierung wurde durchgeführt:
gmx grompp -f nvt.mdp -c em.gro -r em.gro -p topol.top -o nvt.tpr
gmx mdrun -deffnm nvt -v
Der NVV-Ausgleich wurde durchgeführt:
gmx grompp -f npt.mdp -c nvt.gro -r nvt.gro -t nvt.cpt -p topol.top -o npt.tpr
gmx mdrun -deffnm npt -v
Die Molekulardynamik-Simulation in der Produktion wurde initiiert:
gmx grompp -f md.mdp -c npt.gro -t npt.cpt -p topol.top -o md_0_1.tpr
gmx mdrun -deffnm md_0_1 -v

Nach Abschluss der Simulationen wurden die resultierenden Trajektorien mit Hilfe von Visual Molecular Dynamics (VMD) und PyMOL analysiert, und die Analyse der freien Energie zwischen den Proteinen und den niedermolekularen Liganden wurde mit dem g_mmpbsa Programm durchgeführt.

Bewertung der Auswirkungen von Arzneimitteln auf die Lebensfähigkeit von RD-Zellen
RD-Zellen (Embryonale Rhabdomyosarkom-Zelle; STR Authenticated) in der logarithmischen Wachstumsphase trypsinisiert, um eine Zellsuspension in einer Konzentration von 1 x10⁵ Zellen/ml zu erzeugen. Diese Suspension wurde dann in eine 96-Well-Platte mit einer Dichte von 1 x 10⁴ Zellen/Well (100 μl pro Well) ausgesät und bei 37 °C mit 5 % CO₂ inkubiert, um eine Zelladhäsion zu ermöglichen. Nach der Adhäsion wurde das Medium durch 100 μl serumfreies Medium mit 1 % FBS ersetzt, und die Zellen wurden 12 Stunden lang ausgehungert. Anschließend wurde das Medium gegen 100 μL des jeweiligen Mediums ausgetauscht, das unterschiedliche Konzentrationen der Testverbindung enthielt. Die Kontrollvertiefungen wurden entweder mit lösungsmittelhaltigem Medium oder normalem Medium behandelt, und Blindvertiefungen, die nur das entsprechende Medium ohne Zellen enthielten, wurden eingeschlossen. Die Platten wurden bei 37 °C mit 5 % CO₂ für 24 h inkubiert (die Dauer wurde in Vorversuchen als optimal für die Beobachtung der maximalen inhibitorischen Wirkung dieser Verbindungsklasse auf RD-Zellen bestimmt). Das heißt, die Zeit, die benötigt wird, bis der OD-Wert der Zelldichte etwa 1,0 erreicht. Danach wurden 10 μl CCK-8-Lösung in jede Vertiefung gegeben und die Platten für weitere 1-4 Stunden inkubiert. Schließlich wurde die Extinktion bei 450 nm mit einem Mikroplatten-Reader gemessen. Die lösungsmittelbehandelten Zellen dienten als Kontrollgruppe, und die Blindvertiefungen wurden für die Baseline-Korrektur verwendet. Die Zellviabilität wurde auf der Grundlage der Absorptionswerte berechnet.

Überlebensrate% = [(Kontrollgruppe-blank)-(Versuchsgruppe-blank)]/(Kontrollgruppe-blank) x 100%

Ergebnisse

In dieser Studie wurden 13 Thiazolonderivate (Verbindungen a-m; Abbildung 3, Abbildung 4) zuvor synthetisiert wurden,^{wurden 19} ausgewählt, um ihre inhibitorische Aktivität gegen Krebszellen zu bewerten (Abbildung 5). Unter diesen Verbindungen zeigte die Verbindung m bei 100 μM die höchste Hemmungsrate gegen RD-Zellen (Embryonale Rhabdomyosarkom-Zelle) (STR-authentifiziert)²². Nachfolge...

Diskussion

Die Netzwerkpharmakologie wird häufig verwendet, um potenzielle aktive Moleküle in komplexen Komponenten der traditionellen chinesischen Medizin vorherzusagen und zu screenen und die synergistischen Mechanismen von Mehrkomponenten-, Multi-Target- und Multi-Pathway-Wirkungen in pflanzlichen Formulierungen aufzuklären. In dieser Studie haben wir einen netzwerkpharmakologischen Ansatz angewendet, um den potenziellen Mechanismus unseres neu synthetisierten Thiazolon-Derivats gegen RD systema...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
CCK-8 Assay Kit	Beyotime Biotechnology Co., Ltd.	C0038	Ein Set, das zur Messung der Zelllebensfähigkeit und -proliferation verwendet wird, basierend auf der Reduktion eines wasserlöslichen Tetrazoliumsalzes zur Bildung eines farbigen Produkts.
Clean Bench	Suzhou Antai Airtech Co., Ltd	SW-CJ-1FD	Eine laminare Luftstrom-Arbeitsstation, die eine sterile Umgebung für den Umgang mit Zellkulturen und anderen empfindlichen Materialien bietet.
CO2 Inkubator	Heilkraft	HF90	Für die Zellkultur wird eine Temperatur<-, Luftfeuchtigkeits- und CO>2-kontrollierte Umgebung genutzt, um optimale Wachstumsbedingungen zu erhalten.
DMEM Hoher Glukose	Cytiva	SH30022.01	Ein Zellkulturmedium mit hoher Glukosekonzentration (4,5 g/L), geeignet für verschiedene Zelltypen, einschließlich schnell wachsender Säugetierzellen.
FBS	YEASEN	40130ES76	Ein gängiges Nahrungsergänzungsmittel in Zellkulturmedien, das essentielle Wachstumsfaktoren, Hormone und Nährstoffe für die Zellproliferation bereitstellt.
Invertiertes Mikroskop	OLYMP	IX51	Ein Mikroskop, das mit der Objektivlinse unter der Bühne entworfen wurde, was die Beobachtung von Zellkulturen in Kolben oder Platten von unten ermöglicht.
Mikroplattenleser	Diatek	DR-200Bs	Ein Instrument, das zur Erkennung biologischer, chemischer oder physikalischer Ereignisse in Mikroplattenproben verwendet wird, indem Absorption, Fluoreszenz oder Lumineszenz gemessen wird.
PBS	Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd.	GNM20012	Eine Pufferlösung wird in der biologischen Forschung häufig verwendet, um Zellen zu waschen, Lösungen zu verdünnen und die pH-Stabilität zu erhalten.
RD (embryonales Rhabdomyosarkom) (STR authentifiziert)	Shanghai FuHeng Biotechnology Co., Ltd.	FH0712	Die Zelllinie wurde durch eine Short Tandem Repeat (STR)-Analyse authentifiziert, besitzt einen klar definierten genetischen Hintergrund und eine klare Zellidentität, wodurch die Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit der experimentellen Daten gewährleistet ist.
RMPI Medium Modified (1640)	Cytiva	SH30809.01	Ein weit verbreitetes Zellkulturmedium, das ursprünglich für menschliche Leukozytenzellen entwickelt wurde, wird heute für verschiedene Säugetierzelltypen eingesetzt.
Trypsin-EDTA	Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd.	GNM25200	Eine Lösung, die verwendet wird, um adhärente Zellen von Kulturoberflächen zu trennen, indem extrazelluläre Proteine verdauen und Calciumionen cheliert werden.