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Forschungsartikel

Osthole verbessert Ratten-Arthritis über die miR-34a/Bcl-2-Achse

92 Ansichten

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DOI:

10.3791/69624

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15. Mai 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy, and Public Experimental Research Center, Xuzhou Medical University, 2Department of Joint Surgery, Shuyang Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Osthole (OST) ist eine natürliche Verbindung mit umfangreichen pharmakologischen Aktivitäten. Diese Studie legt nahe, dass OST die Auswirkungen der Kniearthrose (KOA) über die miR-34a/Bcl-2-Achse mildert, wie in vivo - und in vitro-Studien an Ratten gezeigt wurde, und neue Ideen und Richtungen für die patentierte Medizin und klinische Anwendungen liefert.

Zusammenfassung

Kniearthrose (KOA), auch als hypertrophe oder degenerative Arthritis bezeichnet, ist eine häufige Gelenkerkrankung. Aktuelle klinische Managementstrategien umfassen pharmakologische Therapie, körperliche Intervention, chirurgische Eingriffe und ergänzende Behandlungen. Obwohl diese Ansätze KOA-Symptome bis zu einem gewissen Grad lindern können, gehen sie oft mit Einschränkungen wie Nebenwirkungen, eingeschränkter Wirksamkeit oder Invasivität einher. Osthole (OST), ein natürliches Coumarin-Derivat, wurde vielfach wegen seiner medizinischen Eigenschaften untersucht, insbesondere bei der Linderung von Gelenkschmerzen und der Verbesserung der Gelenkfunktion. In dieser Studie wurden CCK8-Assay, Transmissionselektronenmikroskopie (TEM), H&E-Färbung und biochemische Serumanalysen eingesetzt, um zu zeigen, dass OST schützende Effekte auf Chondrozyten sowohl in vitro als auch in vivo ausübt, ohne dass signifikante Toxizität beobachtet wurde. Nachfolgende Untersuchungen mit TEM, Acridin-Orangenfärbung, Durchflusszytometrie und Western Blotting zeigten, dass OST Autophagie fördert und Apoptose in Chondrozyten unterdrückt. Weitere mechanistische Studien mittels qRT-PCR und Luciferase-Reporter-Assays zeigten, dass OST miR-34a herunterreguliert, wodurch die Bcl-2-Expression hochreguliert und die Apoptose über den miR-34a/Bcl-2-Weg gehemmt wird. Zusammenfassend deuten diese Ergebnisse darauf hin, dass OST Chondrozyten sowohl in zellulären als auch in Tiermodellen schützt, LPS-induzierten Stress abschwächt und Entzündungen sowie Apoptose bei KOA-Ratten reduziert. Die Herunterregulierung von miR-34a und die anschließende Erhöhung der Bcl-2-Expression tragen zu seiner anti-apoptotischen Wirkung bei. Diese Ergebnisse bilden eine theoretische Grundlage für die Entwicklung von OST-basierten patentierten Medikamenten und deren potenzielle klinische Umsetzung in der KOA-Therapie.

Einleitung

Kniearthrose (KOA) ist eine häufige Gelenkerkrankung, auch bekannt als hypertrophe, hypertrophe oder senile Kniearthritis. Sie wird durch die Degeneration des Gelenkknorpels und Veränderungen in der Struktur rund um das Gelenk verursacht. Laut epidemiologischen Studien ist Kniearthrose eine häufige Erkrankung, insbesondere bei älteren Menschen1. Seine Häufigkeit hängt eng mit Alter, Gewicht, Genetik, Gelenkverletzung und so weiter zusammen. Auch physiologische Funktionen können beeinträchtigt werden, darunter eingeschränkte Gelenkbewegungen, verminderte Muskelkraft und abnormaler Gang. Derzeit werden bei der Behandlung von Kniearthrose häufig medikamentöse Therapie, Physiotherapie, Chirurgie und adjuvante Therapieverwendet. Zu den Medikamenten gehören häufig Schmerzstiller, nichtsteroidale Antirheumatika und Medikamente gegen chronische Arthritis zur Schmerzlinderung und zur Entzündungskontrolle. Die Physiotherapie umfasst heiße Kompressen, kalte Kompressen, Massagen und spezielle Rehabilitationsübungen zur Verbesserung der Gelenkmotorik und zur Schmerzlinderung. Chirurgische Behandlungen können arthroskopische Operationen, künstliche Gelenkersatz oder morphologische Reparatur der Gelenkknochen zur Wiederherstellung von Gelenkstruktur und -funktion umfassen. Darüber hinaus werden komplementäre Therapien wie Akupunktur, Physiotherapie und traditionelle chinesische Medizin ebenfalls weit verbreitet eingesetzt.

Obwohl diese Behandlungen eine gewisse Linderung von Symptomen und der Erkrankung der Kniearthrose bieten, gibt es dennoch Einschränkungen. Eine medikamentöse Behandlung kann Nebenwirkungen und Abhängigkeitsprobleme verursachen; Physiotherapie erfordert einen fortlaufenden Rehabilitationsprozess, und die Ergebnisse variieren je nach individueller Unterschied; Die chirurgische Behandlung ist riskant, der Genesungsprozess ist langwierig und erfordert sorgfältige Überlegung; Und obwohl die adjuvante Therapie breite Aufmerksamkeit und Anwendung erfahren hat, gibt es weiterhin begrenzte wissenschaftliche Belege für ihre Wirksamkeit; eine tiefgehende Untersuchung des regulatorischen Mechanismus der adjuvanten Therapie muss eingehend untersucht werden. In der Adjuvanstherapie wurden traditionelle chinesische Medikamente zur Behandlung von Kniearthrose in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt und sich als nützlich erwiesen. Es muss einige Komponenten der traditionellen chinesischen Medizin geben, die noch nicht gut bekannt sind, aber durch langfristige Praxis und Nachuntersuchungen nachgewiesen wurden. Derzeit verfügen viele chinesische Mediziner über umfangreiche Erfahrungen in der Behandlung von Kniearthrose, wie Cibotium barometz3, Ligusticum wallichii Franchat4, Angelica pubescens5 und andere. Diese Kräuter haben schmerzlindernde und entzündungshemmende Wirkungen, die Schmerzen wirksam lindern und Entzündungen reduzieren können.

OST ist eine coumarinähnliche Verbindung, die in der Medizin weit verbreitet als natürlicher Kräuterextrakt6 verwendet wird. Es verfügt über viele pharmakologische Aktivitäten und wird durch zahlreiche Studien unterstützt. Studien haben gezeigt, dass Cnidium viele pharmakologische Wirkungen hat, darunter Anti-Tumor-, Anti-Entzündungs-, Hyperglykämie, Anti-Thrombozyten-Aggregation und Neuroprotektion, und potenzielle therapeutische Effekte auf vieleandere Krankheiten hat. Es wurde berichtet, dass OST die Apoptose von Krebszellen fördern kann, indem es die Autophagie reguliert, wobei OST die Apoptose von Ovarialkarzinomzellen durch LC3-vermittelte Autophagie und GSDME-abhängige Pyroptose8 hemmt; OST induziert die Apoptose von HT-29-Zellen über den Stress des endoplasmatischen Retikulums und Zellautophagie9; OST fördert die Apoptose von Darmkrebs durch Unterdrückung der AMPK/Akt-Signalübertragung, induziert Zellautophagie, ROS und Ferroptose10; OST kann das Wachstum von Darmkrebs hemmen, indem es Autophagie und mitochondrienvermittelte Signaltransduktion11 reguliert. Gleichzeitig ist OST besonders wichtig für die Linderung von Gelenkschmerzen und die Verbesserung der Gelenkfunktion, hauptsächlich durch die Reduzierung der Entzündungsreaktion und die Linderung von Gelenkschmerzen. Und seine Wirkstoffe können die Freisetzung entzündlicher Substanzen reduzieren und die durch Arthritis verursachte Degeneration des Gelenkknorpels hemmen. Im Vergleich zu gängigen westlichen Medikamenten ist OST sicherer und hat eine geringe Toxizität, und eine langfristige Anwendung führt nicht zu Medikamentenresistenz. Es wurde berichtet, dass Osthole die Osteogenese in Osteoblasten durch eine erhöhte Transkriptionsfaktor Osterix über cAMP/CREB-Signalübertragung in vitro und in vivoerhöht 12; OST unterdrückt die Entwicklung von Kniearthrose, indem sie die Autophagie verstärkt, die über den AMPK/ULK1-Weg13 aktiviert wird; Cnidiumlacton hemmt die Osteoklastendifferenzierung über p38 MAPK und PI3K-Akt sowie c-Fos/NFATc1 Signalweg14; Cnidium-Lacton verhindert Knochenabbau in einem ovariektomierten Rattenmodell über den Östrogen-α/BMP-2/Smad-Signalweg15; OST verbessert die Osteoporose durch erhöhte Autophagie der mesenchymalen Stammzellen16. Die Beobachtung und Analyse zeigten jedoch, dass die meisten Studien im Phänotyp blieben oder den Mechanismus der Regulierung des Signalwegs der Arzneimittelbeteiligung auf molekularer Ebene nicht aufdeckten, was auch einer der Gründe ist, warum aus der traditionellen chinesischen Medizin gewonnenen Verbindungen schwer breit akzeptiert werden können. Daher ist es von großer Bedeutung, den biologischen Regulationsmechanismus von Osthole auf molekularer Ebene für seine patentierte Medizin und klinische Anwendung weiter zu erforschen.

miRNA ist eine kleine RNA, die die biologische Funktion reguliert, indem sie die Expression von Zielgenen hemmt. Viele traditionelle chinesische Medikamente sind dafür bekannt, ihre biologische Wirkung durch die Regulierung von miRNA auszuüben. Ebenso wurde berichtet, dass OST die miRNA-Expression beeinflusst. Erstens spielt OST eine anti-tumorale biologische Rolle durch miRNA. Es wurde berichtet, dass OST die Zellproliferation hemmte und die Zellapoptose durch die Verringerung der CPEB2-Expression durch hochregulierendes miR-424 im Endometriumkarzinom17 induzierte; OST unterdrückt die Proliferation und beschleunigt die Apoptose menschlicher Gliomzellen durch die Hochregulation von miR-16 und die Downregulation von MMP-9-18; OST zeigt eine antitumorwirkende Wirkung beim Retinoblastom, indem es den PI3K/AKT/mTOR-Weg hemmt und die hsa_circ_0007534/miR-214-3p-Achse19 reguliert. Zweitens kann OST auch die physiologischen Prozesse der Körperorgane durch die Regulation von miRNA beeinflussen, wobei OST die pulmonale Gefäßremodellierung durch Modulation der vermittelten lipidmetabolischen Umprogrammierung von miR-22–3p lindert20; OST schützt Ratten vor Myokardischämie/Reperfusionsverletzungen, indem es miR-30a herunterreguliert und Autophagie21 fördert; OST schützt die H9c2-Kardiomyozyten vor durch Trastuzumab verursachten Schäden, indem es die Autophagie über den p38MAPK/mTOR-Signalweg22 verstärkt. Drittens kann OST eine neuroprotektive Rolle durch miRNA spielen, das die Differenzierung neuronaler Stammzellen in einem Alzheimer-Krankheitsmodell durch Hochregulation von miR-9 stimulierte und die funktionelle Beeinträchtigung hippocampaler Neuronen bei APP/PS1-transgenen Mäusen23 rettete; OST senkt die Beta-Amyloid-Spiegel durch Hochregulierung von miR-107 bei Alzheimer 24. Es wurde jedoch nicht berichtet, dass miRNA durch OST zur Behandlung von Kniearthrose reguliert werden kann. Die Literatur zeigte, dass miR-34a die Chondrozytenapoptose verbessert und die Entwicklung von Arthrose fördert, indem es DLL1 anvisiert und den PI3K/AKT-Weg25 reguliert. Die lange nicht-kodierende RNA MEG3 reguliert das Fortschreiten der Arthrose, indem es die miR-34a/Klotho-Achse26 reguliert; Die Downregulation von miR-34a fördert die Proliferation und hemmt die Apoptose von osteoarthritischen Knorpelzellen der Ratten, indem sie den PI3K/Akt-Weg27 aktiviert. Könnte KOA also mit OST über die miR-34a-Regelung behandelt werden? Daher wird vermutet, dass OST Kniearthrose durch die Regulation von miRNA behandeln kann.

Zusammenfassend ist OST eine natürliche Verbindung mit umfangreichen pharmakologischen Aktivitäten28. Zuvor hatte die Forschungsgruppe bestätigt, dass OST die Kniearthrose bei Ratten verbessern kann, aber die zelluläre Signaltransduktion und molekularen Mechanismen, die diesem biologischen Effekt zugrunde liegen, sind noch nicht vollständig geklärt. In diesem Artikel soll durch die weitere Untersuchung der MIRNA-, Autophagie- und Apoptose-Signalwege von OST der Mechanismus des OST geklärt und neue Ideen und Richtungen für die patentierte Medizin und klinische Anwendung bereitstellen.

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Protokoll

Alle Studien wurden vom Institutional Animal Care and Treatment Committee der Xuzhou Medical University genehmigt. Die Reagenzien und die verwendeten Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Tiermodell

Erwachsene männliche und weibliche Sprague-Dawley (SD) Ratten mit einem Gewicht von 250–300 g wurden vom Experimental Animal Center der Xuzhou Medical University gekauft. Ratten wurden in einem speziellen, pathogenfreien Raum gezüchtet. Die tierexperimentellen Verfahren, einschließlich Behandlung, Pflege und Wahl des Endpunkts, folgten den Richtlinien "Animal Research: Reporting In Vivo Experiments". Tierversuche wurden mit Randomisierung durchgeführt. SD-Ratten wurden in vier Gruppen eingeteilt (n = 8 pro Gruppe): Normale Gruppe (keine Operation, normale Fütterung) (Normale Gruppe), Schein-Gruppe (Schein-Operation: Haut- und Muskelschnitt ohne vordere Kreuzbanddurchtrennung [ACLT], gefolgt von Kochsalz-Gavage), KOA/NC-Gruppe (ACLT-Operation + Kochsalz-Gavage), KOA/OST-Gruppe (ACLT-Operation + OST Gavage). Das KOA-Modell des Rattenknies wurde mit der Methode der vorderen Kreuzbandtranssektion (ACLT) konstruiert, wie bereitsbeschrieben 29. Die Kochsalzlösungsgruppe erhielt Kochsalzlösung per Gavage, und die OST-Gruppe erhielt für 4 Wochen OST per Gavage. Die OST-Dosis beträgt 50 mg/kg Körpergewicht (gelöst in PEG 400 und verdünnt mit physiologischer Kochsalzlösung), und die Verabreichungsfrequenz erfolgt einmal täglich für 4 Wochen im Rats-Subsection. Anschließend wurden die Ratten zur Analyse eingeschläfert (nach institutionell genehmigten Protokollen). Das Gewebe wurde entweder sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren oder in 4%igen Paraformaldehyd fixiert.

2. Zellkultur

Die humane Chondrozytenzelllinie (C28/I2) wurde aus der American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA) gewonnen. Die Zellen wurden gemäß den ATCC-Richtlinien kultiviert und innerhalb von 6 Monaten verwendet.

Kulturbedingungen: DMEM/F-12-Medium, ergänzt mit 10 % fetalem Rinderserum und 1 % Penicillin-Streptomycin, inkubiert bei 37 °C in einem 5 % CO 2befeuchteten Inkubator.

Behandlungen: Die Zellen wurden bei 1 × 106 Zellen/Brunnen in 6-Brunnenplatten ausgesaat; nach 24 Stunden Adhäsion wurden sie allein mit LPS (1 μg/mL) oder mit OST (100 μM) für 24 Stunden behandelt.

3. Tests zur Zelllebensfähigkeit

Chondrozytenzellen wurden zusammen mit OST oder LPS in unterschiedlichen Konzentrationen in 96-Well-Platten ko-inkubiert. Der CCK8-Test zeigt die Lebensfähigkeit der Zelle, indem er Absorption (OD450 nm) mit einem Mikroplattenleser erkennt, wobei höhere OD-Werte auf mehr lebensfähige Zellen hinweisen.

OST-Konzentrationsgradienten: 0, 25, 50, 100, 200, 400 μM (inkubiert für 24 Stunden). Der CCK8-Test zeigte >90 % Zelllebensfähigkeit bei allen Konzentrationen und bestätigte damit die Nicht-Toxizität der Verbindung.

LPS-Konzentrationsgradienten: 0, 0,1, 0,5, 1, 2 μg/mL (inkubiert für 24 Stunden). Die 1 μg/mL LPS-Gruppe hatte ~50 % Zelllebensfähigkeit (im Vergleich zur Ctrl-Gruppe), daher wurde diese Konzentration für spätere Experimente gewählt.

4. Hämatoxylin- und Eosin-(H&E)-Färbung sowie Safanin-O-Färbung

Das Gewebe wurde mit Paraffin eingebettet, entwachst, rehydriert und gemäß den Anweisungen des Herstellers mit H&E und Safranin O/Fast Green gefärbt. Färbebedingungen: AO-Arbeitskonzentration betrug 1 μg/mL; Die Zellen wurden bei 37 °C für 5 Minuten im Dunkeln inkubiert.

Quantitative Methode: Die AVO-Positivitätsrate wurde berechnet, indem orangefarbene Puncta-enthaltene Zellen in 5 Zufallsfeldern (×400 Vergrößerung) pro Probe mit der ImageJ-Software gezählt wurden. Anschließend wurden Schnitte unter einem BX43-Mikroskop (Vergrößerung ×400) aufgenommen.

5. Durchflusszytometrie

Die Zellen wurden entnommen und in einer Annexin-V-FITC/PI-Lösung für die Apoptose-Analyse neu suspendiert. Inkubationsbedingungen: Die Zellen wurden bei 1 × 106 Zellen /mL in einer Annexin-V FITC/PI-Lösung (KeyGEN) wieder suspendiert und bei Raumtemperatur 15 Minuten im Dunkeln inkubiert.

Gating-Strategie: Vorwärtsstreuung (FSC) vs. Side Scatter (SSC)-Gatter wurden verwendet, um Zellreste auszuschließen; Annexin-V FITC⁺/PI⁻-Zellen wurden als früh apoptotisch definiert, und Annexin-V FITC⁺/PI⁺-Zellen als spät apoptotisch. Der Gating Plot ist in Supplementary File 1 (Rohdurchflusszytometriedaten) enthalten. Die Zellen wurden von einem Durchflusszytometer gesammelt. Die Daten wurden mit der Flow Jo-Software analysiert.

6. Transfektion von Plasmiden und Mimik

MiR-34a-Mimik (34a-Mimik) und unspezifischer Kontrollmimik (NC) wurden aus einer kommerziellen Quelle gewonnen. Die Zellen wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers mit Plasmiden mit LipofectamineTM 3000 transfektiert.

7. Acridin-Orangenfärbung

Die Autophagie wurde üblicherweise mittels Acridin-Orangenfärbung in den Zellen untersucht. Nachdem die Zellen mit LPS oder OST in bestimmten Konzentrationen für 24 Stunden behandelt wurden, wurden sie mit AO (1 μg/mL) bei 37 °C für 5 Minuten im Dunkeln inkubiert. Die Bilder wurden mit einem Laserkonfokalmikroskop aufgenommen. Die AVO-Positivitätsrate wurde berechnet, indem orangefarbene Puncta-enthaltene Zellen in 5 Zufallsfeldern (×400 Vergrößerung) pro Probe mit der ImageJ-Software gezählt wurden. Die Daten werden als Mittelwert ± SD aus drei unabhängigen Experimenten angegeben.

8. Beobachtung des Transmissionselektronenmikroskops

Die Proben wurden in 2,5 % Glutaraldehyd und 1 % Osmiumtetroxid fixiert, dann dehydriert, ausgespült und imprägniert. Nach der Polymerisation wurden die Proben mit einem Ultramikrotom in 70 nm dicke Abschnitte geschnitten. Die Ultrastruktur der Zellen wurde mittels Transmissionselektronenmikroskopie beobachtet.

9. Immunblotting

Mausmonoklonaler Antikörper (Abs) gegen Bcl-2 (#68103), polyklonaler Kaninchenantikörper gegen LC3 (#14600-1-AP), IL-6 (21865-1-AP) und mausmonoklonaler Antikörper gegen β-Actin (#66009-1-lg) wurden von Proteintech gekauft. Sekundäre Abs, konjugiert mit IRDye 800CW Ziegen- (polyklonal), Anti-Kaninchen-IgG (H+L) oder IRDye 800CW Ziegen-(polyklonal) Anti-Maus-IgG (H+L), wurden kommerziell erhalten. Die Zellen wurden in einem Ganzzell-Lysassay lysiert, getrennt durch Elektrophorese auf SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese. Proteine wurden mittels primärer Abs und entsprechender sekundärer Abs nachgewiesen. Die Proteinbelastung betrug 30 μg pro Lane; Primäre Antikörperverdünnungen: Bcl-2 (1:1000), LC3 (1:1500), β-Tubulin (1:5000); Sekundäre Antikörper (IRDye 800CW) wurden bei 1:10.000, IL-6 (1:800) verwendet. Anschließend wurden die Proteinbänder vom verbesserten chemilumineszenz-Laserbildgebungssystem erfasst. Proteinbänder wurden von der Software ImageJ quantifiziert.

10. Quantitative Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR)

Gesamt-RNAs wurden aus Zellen mit dem Trizol-Reagens isoliert. cDNAs, die aus Gesamt-RNAs gewonnen wurden, wurden mit dem cDNA-Regent-Kit synthetisiert und mit SYBR-Green-Methoden analysiert. cDNAs, die aus miRNAs gewonnen wurden, wurden mit miRcute plus miRNA-Erststrang-cDNA-Kit synthetisiert und mit miRcute plus miRNA qPCR-Kit analysiert. Alle Verfahren wurden nach dem Protokoll des Herstellers durchgeführt. Die Expression des Zieltranskripts wurde mit der 2-△△CT-Methode berechnet. GADPH und U6 wurden als Ladekontrolle für mRNA bzw. miRNA verwendet. Die Primer-Sequenz ist in Tabelle 1 aufgeführt.

11. Luciferase-Reporter-Analysen

Wildtyp-psiCHECK2- Bcl-2-3′UTR-Reporterplasmid (WT) und psiCHECK2- Bcl-2-3′UTR-Reporterplasmid mit einem Mutanten an der miR-34a-Bindungsstelle (Mut). Die Reporter und miR-34a-Mimik wurden mit LipofectamineTM 3000 ko-transfektiert in Chondrozytenzellen. Die Zellen wurden nach 24 Stunden Transfektion entnommen und lysiert. Die Luciferase-Intensität wurde anschließend mit dem Dual-LumiTM Luciferase Reporter Gene Assay Kit gemäß den Anweisungen des Herstellers gemessen.

12. Ganganalysetests

Das MGT-PR-System wurde verwendet, um die laufenden Gliedmaßenbewegungen der Ratten in jeder Gruppe zu beobachten. Vor den Tests durften sich die Ratten an die Landebahnumgebung anpassen. Gangdaten während des freien Gehens wurden erfasst, wobei für jede Ratte drei aufeinanderfolgende gültige Laufversuche erfasst wurden. Die analysierten Parameter umfassten Schrittlänge, Schwungdauer und Koordination zwischen rechten und linken Hinterbeinen.

13. Statistische Analyse

Die Experimente wurden dreimal durchgeführt und mindestens dreimal unabhängig wiederholt. Die statistische Analyse wurde mit der Software GraphPad Prism 9 durchgeführt. Die Daten wurden als Mittelwert ± SD angegeben. Statistische Unterschiede wurden durch Einweg-ANOVA (Tukey's Post-hoc-Test) für Mehrfachvergleiche oder durch den zweiseitigen Student-T-Test für zwei experimentelle Gruppenvergleiche bewertet. Unterschiede wurden bei p < 0,05 als signifikant akzeptiert.

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Ergebnisse

OST-geschützte Chondrozytenzellen sowohl in vitro als auch in vivo
Als Naturprodukt erfordert das Sicherheitsprofil von OST eine gründliche Untersuchung. Diese Studie bewertete zunächst seine Zytotoxizität an Chondrozyten in vitro mittels des CCK8-Tests. Die Ergebnisse zeigten, dass OST auch bei einer Konzentration von 400 μM keine Toxizität gegenüber Chondrozyten aufwies (Abbildung 1A). Um die entzü...

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Diskussion

Vor allem schützte OST die Chondrozyten in vitro vor LPS-induziertem Stress und linderte Entzündungen und Apoptose bei KOA-Ratten in vivo. Diese schützenden Effekte waren mit der Downregulation von miR-34a und einer daraus resultierenden Zunahme der Bcl-2-Expression verbunden, was mit der vorgeschlagenen Rolle der miR-34a/Bcl-2-Achse bei der Vermittlung der Wirkung von OST übereinstimmt.

In dieser Studie wurde festgestellt, dass OST die Autop...

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine finanziellen Interessenkonflikte.

Danksagungen

Diese Forschung wurde vom Key Laboratory of New Drugs and Clinical Medicine (XZSYSKF2021037) der Jiangsu University finanziert. Die in diesem Artikel beschriebenen Experimente wurden teilweise im Public Experimental Research Center und im Laboratory Animal Center der Xuzhou Medical University durchgeführt. Danksagungen gelten an Fuxing Dong, Kejia Zhang, Jinxia Kuai und Min Zhang für ihre begeisterte Hilfe.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
1 % OsmiumtetroxidRuixin-Technologie
2,5 % GlutaraldehydZhongjingkeyi-Technologie
Acridin-OrangeSigmaAmresco 0360
Annexin-V FITC/PI-LösungKeyGENKGA107
Bcl-2Proteintech#68103
Zellzähl-Kit-8VICMED39,VC5001L
ChemilumineszenzOdyssey CLX
KonfokalmikroskopLeicaSTELLARIS 5
DMEM/F-12HyClone12.SH30023-01
Dual-LumiTM Luciferase Reporter Gen-Assay-KitBeyotimeRG088
FastKing cDNA Regent-KitTIANGENKR116-03
DurchflusszytometerBDFACS Canto II
Humane ChondrozytenzelllinieSammlung der amerikanischen TypkulturYTLK280144
LC3Proteintech#14600-1-AP
LipofectamineTM 3000InvitrogenL3000015
LipopolysaccharideSigma29.L2880
Lysis-AssayKeyGENKGP704-100
MikroplattenleserBioTekSynergie 2
miRcute plus miRNA Erststrang-cDNA-KitTIANGENKR211-02‌
miRcute plus miRNA qPCR-KitTIANGENFP411-02
OstholeMedchemexpressO815127-25g
SDS-Polyacrylamid-GelelektrophoreseNCM BiotechP2012
SerumClark BioscienceFB15015
SYBR GrünTIANGENFP217-01‌
TransmissionselektronenmikroskopieFEITecnai G2
Ultra-MikrotomLeciaUC7
Vertikales FluoreszenzmikroskopOlympusBX43
β-ActinProteintech#66009-1-lg

Referenzen

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