Methodenartikel

Ein Atherosklerosemodell bei Mäusen, induziert sowohl durch partielle Karotisligation als auch durch Überexpression von PCSK9

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DOI:

10.3791/69862

27. Februar 2026

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ein reproduzierbares Mausmodell induziert Karotisatherosklerose durch Kombination des PCSK9-adenoassoziierten Virus (PCSK9-AAV) – eine fettreiche Diät vermittelte Hypercholesterinämie und partielle linke Karotisligation (PCL) und rekapituliert die menschliche Pathophysiologie. Dies ermöglicht eine schnelle Induktion menschenähnlicher carotis-atherosklerotischer Läsionen bei Wildtypmäusen ohne genomische Editierung und bietet ein standardisiertes Werkzeug zur Erforschung der Karotis-Atherosklerose.

Zusammenfassung

Das Fehlen schneller, reproduzierbarer carotisspezifischer Arteriosklerose-Modelle bei Wildtypmäusen schränkt translationale Studien zur Plaquebiologie und Therapien ein. Dieses Protokoll beschreibt eine nicht-genomisch editierte, zeiteffiziente Methode, um reproduzierbare Karotisatherosklerose bei C57BL/6-Mäusen zu induzieren, indem adenoassoziierte Virus-(AAV)-vermittelte PCSK9-Überexpression , eine atherogene fettreiche Diät und eine partielle Ligatur der linken Karotislinie (PCL) kombiniert wird. Das Ziel ist es, einen standardisierten Arbeitsablauf bereitzustellen, der wichtige pathophysiologische Merkmale der menschlichen Karotiserkrankung – Hyperlipidämie plus gestörter Durchfluss – reproduziert, ohne dass genetisch veränderte Tiere erforderlich sind. Zu den Methoden gehören die Dosierung und Verabreichung von PCSK9-AAV, die perioperative Vorbereitung, eine schrittweise chirurgische Ligierung der linken Karotis, postoperative Versorgung, Ernährungsschema, Gewebeentnahme sowie histologische Beurteilung einschließlich Oil Red O und Verhoeff-Van Gieson Färbung. Die Ergebnisse zeigen erhöhte zirkulierende Cholesterinwerte und niedrigdichte Lipoproteinwerte im Vergleich zu Referenzwerten. An der linken ligierten Halsschlagader entwickeln sich ausgeprägte atherosklerotische Plaques, mit signifikant erhöhter Lipidansammlung und signifikanter arterieller Intimamedia-Verdickung im Vergleich zur rechten nicht-ligierten Kontrollarterie. Dieses standardisierte Protokoll verbessert die Reproduzierbarkeit und Zugänglichkeit für Forscher, die die Bildung und das Fortschreiten von Karotisplaque, Interventionsstrategien untersuchen, und erleichtert laborübergreifende Vergleiche experimenteller Therapien.

Einleitung

Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVDs) bleiben die Hauptursache der globalen Sterblichkeit, wobei Arteriosklerose als gemeinsame pathologischeGrundlage dient. Die Halsschlagader ist ein kritischer Ort für arteriosklerotische Läsionen; Die Untersuchung der Karotisarteriosklerose ist unerlässlich, um die Pathogenese von Herz-Kreislauf-Erkrankungen zu verstehen undtherapeutische Strategien zu entwickeln. Tiermodelle sind unverzichtbare Werkzeuge für die Atheroskleroseforschung in vivo , doch bestehende Modelle haben oft Einschränkungen hinsichtlich Bequemlichkeit und ihrer Fähigkeit, m....

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Protokoll

Alle Verfahren wurden vom Tierethikausschuss des Ethikausschusses für Tierversuche am Peking Union Medical College (ACUC-A02-2024-006) genehmigt und entsprechen dem Leitfaden zur Pflege und Nutzung von Labortieren.

1. Versuchstierpräparation

  1. Kauf männliche C57BL/6 Mäuse im Alter von 6-8 Wochen (Körpergewicht: 22-25 g).
  2. Hausmäuse in einer bestimmten krankheitserregerfreien (SPF) Umgebung unter streng kontrollierten Bedingungen: Temperatur (23 ± 1°C), Luftfeuchtigkeit (50 ± 5 %) und ein 12-stündiger Hell/Dunkel-Zyklus (Beleuchtung: 07:00–19:00).
  3. Vor dem Experiment bieten Sie de....

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Ergebnisse

Die Ergebnisse der Ölrot-O-Färbung zeigten, dass die ligaierten Arterien eine starke Atherosklerotische Plaquebildung, offensichtliche Lipidkerne und nekrotische Bereiche aufwiesen. Der Anteil der Lipidregionen war in der linken Halsschlagader signifikant höher als in der rechten Halsschlagader-Kontrollarterie (p < 0,001) (Abbildung 2A). Die VVG-Färbung zeigte die Zerstörung oder das Verschwinden elastischer Fasern im Intima sowie eine deutliche Verdickung d.......

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Diskussion

Dieses Protokoll beschreibt eine standardisierte Methode zur Etablierung eines Karotis-Atherosklerose-Modells bei C57BL/6-Mäusen, indem PCSK9-AAV-induzierte Hypercholesterinämie, fettreiche Diät (HFD) und eine partielle Ligation der Arterie Halsschlagader (PCL) kombiniert wird.

Im Vergleich zu traditionellen Modellen wie dem ApoE-/- oder LDLR-/- Modell oder PCL-Modellen mit WT-Maus5 bietet dieses Modell einzigartige Vorteile in.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (82470516, 8227022021), dem Sonderforschungsfonds für zentrale Universitäten, dem Peking Union Medical College (3332025111), der National High-Level Hospital Clinical Research Funding (2025-PUMCH-A-181, 2025-PUMCH-D-001) und der Natural Science Foundation of Sichuan Province (2024NSFC0715) gefördert.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
6-0 sterile NylonnahtJinhuan MedicalF602NA
C57BL/6 MäuseShanghai Model Organisms Center, Inc. (SMOC)SM-001NA
Chow deitXietong-BiografieNein. XT93GNA
Cryostat Leica CM1950NA
EnthaarungscremeVeetRB Health LLCNA
Fettreiche DiätXietong-BiografieXT108cNA
OCTSakura4582NA
Oil Red O-LösungServiceBio&NBSP;G1017-100mLNA
Optisches MikroskopLeicaDM4BNA
Paraformaldehyd Servicebio G1101-500mLNA
PCSK9-AAVWZBioscience AV208001-AV8NA
Poly-L-Lysin-beschichtete ObjektträgerSigmaP0425NA
Dia-Scanner3DHISTECHPannoramischer SCHANDNA
SulfamethoxazolSelleckS1915 NA
Gewebeklebstoff3M Vetbond1469SBNA
Venen-visualisierender Mausschwanz-Injektionshalter Jinan Yiyan Wissenschaft & Technology Development Co., LtdYLS-Q9GNA

Referenzen

  1. Vaduganathan, M., Mensah, G. A., Turco, J. V., Fuster, V., Roth, G. A. The global burden of cardiovascular diseases and risk: A compass for future health. J Am Coll Cardiol. 80 (25), 2361-2371 (2022).
  2. Saba, L., et al. Carotid artery at....

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Schlagwörter

PCSK9 berexpressionfettreiche Ern hrungC57BL 6 M useadeno assoziiertes VirusPlaquebildungOil Red O F rbungVerhoeff Van Gieson F rbungHyperlipid mie

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