Testen Nikotin Toleranz in Blattläuse mit einer künstlichen Diät Experiment

Summary

In diesem Video-und Assay ist nachgewiesen, dass Tests die Toleranz von Nikotin auf zwei Arten von Blattläusen eine, die Tabakpflanzen befällt im Feld und eine, die nicht.

Abstract

Pflanzen können hochregulieren der Herstellung von vielen verschiedenen seconday Metaboliten in Reaktion auf Insektenfraß. Einer dieser Metaboliten, Nikotin, ist gut kennen, um insektiziden Eigenschaften haben. Eine Antwort von Tabakpflanzen zu Herbivorie oder als nagte an durch Insekten, ist es, die Produktion dieser neurotoxischen Alkaloid zu erhöhen. Hier zeigen wir Ihnen, wie Sie ein Experiment, um diese Frage, ob ein Tabak-adaptierten Stamm der grünen Pfirsich-Blattlaus, Myzus persicae, können höhere Mengen an Nikotin als die eines Stammes von diesem Insekt, das nicht befallen Tabak in tolerieren Adresse dem Feld.

Protocol

In diesem Experiment werden 4 Erwachsene Blattläuse in einem kleinen Plastikbecher eingeschlossen. Sie profitieren von flüssigen Nahrung zwischen 2 Lagen Parafilm über den oberen Teil der Tasse gestreckt pipettiert ernähren. Nach 3 Tagen füttern, ist die Toxizität von Diäten mit unterschiedlichen Konzentrationen von Nikotin im Vergleich zu Diäten durch Zählen Erwachsene und Larven Blattläuse in jede Tasse zu kontrollieren.

1. Machen Sie Lösungen, die Saccharose und 20 Aminosäuren. Blattläuse können auf dieser Diät ernähren, Reproduzieren im normalen Bereich, für mindestens 1 Woche. Bitte beachten Sie angehängte Datei für die künstliche Ernährung.
2. Aliquot 1 mL dieser Diät in 6 verschiedene Eppendorf-Röhrchen mit Nikotin. Label sie mit Bezug auf verschiedene Konzentrationen von Nikotin verwendet, die von 0-500 um.
3. Wählen Sie 4 Blattläuse, entweder rot oder grün, und in dieser experimentellen Tassen.
4. Bei der Auswahl der Blattläuse, ist es wichtig, dass sie konsequenter alt sein. Typischerweise für Blattläuse von ähnlicher Größe und Farbe (die rote Blattläuse dunkler wenn sie älter sind) zu suchen.
5. Decken Sie die Tasse mit einem Stück Parafilm. Schließen Sie die Diät zwischen 2 Stück Parafilm. Teilweise erstrecken zweiten Parafilm Ebene an den Rändern der Schale. Aliquot der flüssigen Nahrung zwischen den Schichten, und versiegeln Sie die oberste Schicht ab.
6. Bewahren Sie diese Tassen in der Insektenwelt Raum unter Kunstlicht in einem langen Tag Photoperiode für 3 Tage, nach welcher Zeit die Daten für das Experiment erfasst werden können.

Bitte besuchen Sie Annual Reviews of Plant Biology , um weitere Informationen über dieses Protokoll und pflanzliche Immunität zu Raupenfraß.