Diese Studie hatte zum Ziel, die Auswirkungen von Thymoquinon auf oxidativen Stress, den Keap-1/Nrf-2-Signalweg und das Verhalten im Plasma, im Großhirnrinde und im Hippocampus bei Ratten zu untersuchen, die Bisphenol A ausgesetzt waren.
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Methodenartikel
Diese Studie hatte zum Ziel, die Auswirkungen von Thymoquinon auf oxidativen Stress, den Keap-1/Nrf-2-Signalweg und das Verhalten im Plasma, im Großhirnrinde und im Hippocampus bei Ratten zu untersuchen, die Bisphenol A ausgesetzt waren.
Chronische niedrig dosierte Exposition gegenüber Bisphenol A (BPA), einem weit verbreiteten Umwelt-Endokrinstoff, wird zunehmend mit oxidativ-stress-vermittelter Neurotoxizität in Verbindung gebracht. Thymoquinon (TQ), ein bioaktiver Bestandteil von Nigella sativa, zeigt starke antioxidative Eigenschaften; sein neuroprotektives Potenzial gegen BPA-induzierte Toxizität ist jedoch noch unvollständig verstanden. Angesichts der allgegenwärtigen Natur der BPA-Exposition ist die Identifizierung wirksamer und zugänglicher neuroprotektiver Strategien immer wichtiger. Diese Studie untersuchte die Auswirkungen von TQ auf oxidativen Stress, Keap-1/Nrf-2-Signalisierung, Verhalten und histopathologische Veränderungen bei Ratten, die BPA ausgesetzt waren. Insgesamt wurden 24 adulte männliche Wistar-Albino-Ratten zufällig in vier Gruppen eingeteilt (n = 6/Gruppe): Kontroll, BPA, BPA + 10 mg/kg TQ (BPA+TQ I) und BPA + 20 mg/kg TQ (BPA+TQ II). BPA (50 μg/kg) und TQ wurden 30 Tage lang intragastrisch verabreicht. Die BPA-Exposition führte zu erheblichen Verhaltensstörungen, oxidativem Stress, Störung der Keap-1/Nrf-2-Signalübertragung und deutlichen histopathologischen Schäden am Hippocampus und im Großhirnrinde. Die TQ-Behandlung verbesserte signifikant die Lokomotorik und das depressive Verhalten, reduzierte Lipidperoxidation und Stickstoffmonoxidspiegel, stellte die glutathionbezogene antioxidative Kapazität wieder her und normalisierte die Expression von Keap-1 und Nrf-2 (S. < 0,001). Diese schützenden Effekte waren bei der höheren TQ-Dosis ausgeprägter. Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass Thymoquinon durch BPA-induzierte Neurotoxizität durch die Modulation des oxidativen Stresses und des Keap-1/Nrf-2-Signalwegs abmildert, was sein Potenzial als neuroprotektives Mittel gegen umweltrelevante BPA-Exposition hervorhebt.
Bisphenol A (BPA) ist eine synthetische Verbindung, die weit verbreitet in Kunststoffen und Epoxidharzen verwendet wird und häufig in Lebensmittelverpackungsmaterialien, Wassersystemen, Medizinprodukten und Haushaltsprodukten nachgewiesenwird. Die kontinuierliche Umweltbelastung hat Bedenken hinsichtlich ihrer möglichen neurotoxischen Wirkung aufgeworfen, insbesondere unter chronischen, niedrigen Dosenbedingungen, die der realen menschlichen Exposition entsprechen.
Obwohl Regulierungsbehörden wie die US-amerikanische Food and Drug Administration und die US-Umweltschutzbehörde 50 μg/kg/Tag als das Niveau ohne beobachtete negative Effekte definiert haben, deuten neue experimentelle und epidemiologische Erkenntnisse darauf hin, dass Verhaltens- und kognitive Veränderungen bereits bei niedrigeren Dosen auftreten können. Folglich wurde die europäische tolerable tägliche Aufnahme auf 4 μg/kg pro Tag reduziert, was die Notwendigkeit unterstreicht, mechanistische Auswirkungen der umweltrelevanten BPA-Exposition 1,2 zu untersuchen.
Oxidativer Stress gilt als zentraler Mechanismus hinter BPA-induzierter Neurotoxizität. BPA stört das zelluläre Redox-Gleichgewicht, indem es antioxidative Abwehrmechanismen wie Glutathion (GSH) verringert und die Lipidperoxidationsmarker, einschließlich Malondialdehyd (MDA)3,4. Die vorgelagerten Regulationsmechanismen, die die antioxidativen Reaktionen unter BPA-Exposition steuern, bleiben jedoch unzureichend charakterisiert.
Der Kelch-ähnliche ECH-assoziierte Protein-1 (Keap-1)/Nuklearfaktor erythroid 2-bezogene Faktor 2 (Nrf-2)-Weg ist ein wesentlicher endogener antioxidativer Abwehrmechanismus. Unter oxidativen Stressbedingungen dissoziiert Nrf-2 von Keap-1, translokiert in den Kern und aktiviert die antioxidative Antwort-elementabhängige Genexpression5. Trotz ihrer etablierten Rolle in der zellulären Abwehr wurde die regionsspezifische Modulation der Keap-1/Nrf-2-Signalübertragung im Gehirn während umweltrelevanter BPA-Exposition nicht umfassend in Verbindung mit Verhaltensergebnissen untersucht.
Thymoquinon (TQ), der wichtigste bioaktive Bestandteil von Nigella sativa Samenöl, ist ein lipophiles Benzochinon, das die Blut-Hirn-Schranke überwinden kann. TQ weist antioxidative, entzündungshemmende und antiapoptotische Eigenschaften auf, teilweise durch Aktivierung der Nrf-2-Signalübertragung und Verstärkung der endogenen antioxidativen Kapazität5,6. Während frühere Studien die schützenden Effekte von TQ in verschiedenen Neurotoxizitätsmodellen gezeigt haben, fehlt ein integrierter methodischer Ansatz zur Bewertung von oxidativen Stressmarkern, Keap-1/Nrf-2-Signalisierung und Verhaltensparametern innerhalb desselben BPA-Expositionsparadigmas 5,6,7.
Hier beschreiben wir ein reproduzierbares experimentelles Protokoll zur Bewertung von Biomarkern für oxidativen Stress, der Expression der Keap-1/Nrf-2-Signalwege und Verhaltensänderungen in einem Rattenmodell der umweltrelevanten BPA-Exposition sowie zur Bewertung der neuroprotektiven Effekte von Thymoquinon über mehrere Hirnregionen.
Wir stellten die Hypothese auf, dass eine niedrig dosierte BPA-Exposition Verhaltensstörungen durch oxidative, stressvermittelte Dysregulation des Keap-1/Nrf-2-Signalwegs hervorruft und dass Thymoquinon diese Effekte abmildert, indem es das Redox-Gleichgewicht wiederherstellt und Nrf-2-abhängige Antioxidativantworten aktiviert.
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Alle experimentellen Verfahren wurden vom Institutional Animal Experimentation Local Ethics Committee genehmigt (Genehmigungsnummer: 68429034/07).
Tiere und Versuchsdesign
Vierundzwanzig erwachsene männliche Wistar-Albino-Ratten (200–250 g) wurden aus dem Experimental Animal Research Laboratory gewonnen und einzeln unter kontrollierten Bedingungen (12 Stunden Hell/Dunkel-Zyklus, 24 ± 2 °C) mit ad libitum Zugang zu Standardfutter und Leitungswasser untergebracht. Die Tiere wurden vor dem Experiment, das 32 Tage dauerte, an Laborbedingungen gewöhnt.
Die Ratten wurden mit einer computergenerierten einfachen Randomisierungsmethode zufällig experimentellen Gruppen zugeteilt, um Selektionsverzerrung zu minimieren, wobei jede Gruppe gleich viele Tiere zugeteilt (n = 6/Gruppe): Kontrolle, BPA, BPA + 10 mg/kg Thymoquinon (BPA + TQ I) und BPA + 20 mg/kg Thymoquinon (BPA + TQ II). Die Stichprobengröße wurde durch eine a priori Energieanalyse mit der G*Power-Software (Version 3.1) bestimmt. Basierend auf den in früheren Studien 5,6,7 berichteten Effektgrößen, die BPA-induzierte Neurotoxizität und antioxidative Interventionen bewerteten, insbesondere für biochemische und verhaltensbezogene Endmaße, wurde für einseitige ANOVA eine statistische Potenz von 0,80 angenommen. Unter diesen Bedingungen waren mindestens sechs Tiere pro Gruppe erforderlich, um statistisch signifikante Unterschiede zwischen experimentellen Gruppen zu erkennen.
BPA (50 μg/kg) und TQ (10 oder 20 mg/kg) wurden intragastrisch durch Gavage 1x täglich für 30 Tage verabreicht. Alle Behandlungen wurden frisch vorbereitet und mit einem Gesamtvolumen von 1 ml/kg verabreicht. Die in der vorliegende Studie verwendete BPA-Dosis (50 μg/kg/Tag) wurde basierend auf ihrer Einstufung als nicht beobachtetes Nebenwirkungsniveau und Referenzdosis durch die US-Umweltschutzbehörde und die US-amerikanische Food and Drug Administration ausgewählt. Diese Dosis wurde in experimentellen Studien häufig eingesetzt, um die umweltrelevante BPA-Exposition zu modellieren und potenzielle neurobehaviorale und biochemische Veränderungen bei zuvor als sicher angesehenen Expositionsniveaus zu untersuchen. Wichtig ist, dass die gesammelten experimentellen Belege darauf hindeuten, dass negative neurologische und verhaltensbezogene Effekte bei oder unter dieser Dosis auftreten können, was ihre Relevanz für die Beurteilung der BPA-Toxizitätmit niedriger Dosis 1,2 unterstützt. Die Auswahl der TQ-Dosen (10 und 20 mg/kg) basierte auf früheren experimentellen Studien, die ihre neuroprotektive und antioxidative Wirksamkeit ohne Toxizität zeigten 5,6,7. Diese Dosen wurden häufig in Nagetiermodellen von Neurotoxizität, oxidativem Stress und Neuroinflammation eingesetzt und liegen deutlich unter den gemeldeten Toxizitätsschwellen für wiederholte Verabreichung. Es wurde keine Pilotstudie zur Dosisermittlung durchgeführt; Die Dosenauswahl orientierte sich an der Literatur und festgelegten Sicherheitsprofilen, um sowohl Wirksamkeit als auch translationale Relevanz sicherzustellen.
BPA wurde 30 aufeinanderfolgende Tage verabreicht. Verhaltensuntersuchungen wurden an den Tagen 31 und 32 nach der letzten Exposition durchgeführt. Die Tiere wurden am 32. Tag nach Abschluss aller Verhaltenstests geopfert. Dieser Zeitrahmen wurde so gestaltet, dass ausreichend Zeit für die Verhaltensbewertung ermöglicht wird und gleichzeitig mögliche störende Auswirkungen von akuter Handhabung oder prozeduraler Belastung auf nachfolgende biochemische, molekulare und histopathologische Analysen minimiert werden. Thymoquinon wurde unmittelbar nach BPA unmittelbar täglich über denselben intragastrischen Weg verabreicht. Verhaltenstests wurden nach den letzten BPA- und TQ-Verabreichungen durchgeführt. Der experimentelle Zeitplan ist in Abbildung 1 zusammengefasst.
Körpergewichtsmessung
Körpergewichte wurden mit einer kalibrierten digitalen Präzisionsbilanz gemessen (±0,1 g Empfindlichkeit). Jede Ratte wurde morgens vor der Behandlung einzeln gewogen, und die Messungen wurden an den Tagen 1, 10, 20 und 32 unter standardisierten Bedingungen registriert, um die Variabilität zu minimieren (Abbildung 2).
Verhaltensbewertungen
Alle Verhaltensparameter wurden von einem einzelnen Beobachter bewertet, der für die Gruppenzuweisung blind war, um Beobachterbias und Inter-Beobachter-Variabilität zu minimieren. Die Tiere wurden mindestens 30 Minuten vor der Verhaltensuntersuchung an den Testraum gewöhnt, um neuheitsbedingten Stress zu reduzieren.
Die kombinierte Anwendung des Open-Field-Tests (OFT) und des Forced Swim Test (FST) ermöglicht eine umfassende Bewertung der durch BPA induzierten neurobehavioralen Toxizität, da gezeigt wurde, dass BPA sowohl die emotionale Reaktivität als auch die Lokomotorik bei Nagetierenverändert 2,3. OFT-abgeleitete Lokomotorik-Ergebnisse wurden bei der Interpretation der FST-Immobilität berücksichtigt, um potenzielle Störeffekte im Zusammenhang mit veränderter motorischer Aktivität zu minimieren.
FST: Depressionsähnliches Verhalten wurde am 32. Tag mittels des erzwungenen Schwimmtests bewertet, dem eine 15-minütige Vortestsitzung 24 Stunden zuvor vorausging. Die Ratten wurden einzeln in zylindrische Becken (35 cm Durchmesser, 50 cm Höhe) mit Wasser gefüllt (30 cm Tiefe, 25 ± 1 °C) platziert und 5 Minuten schwimmen dürfen. Unbeweglichkeit, Schwimm- und Kletterverhalten wurden mit einer Videokamera aufgezeichnet und offline analysiert, um Verhaltensverzweifelung7 zu bewerten.
OFT: Angstähnliches Verhalten und spontane Lokomotorik wurden am 31. Tag mit dem Openfield-Test untersucht. Jede Ratte wurde einzeln in eine weiße Plexiglasarena (90 cm x 35 cm) platziert, die in 24 gleiche Quadrate unterteilt war und 5 Minuten lang frei erkunden durfte. Die Bewegungen wurden mit einer Videokamera aufgezeichnet. Die Zeit in zentralen und peripheren Zonen sowie die Anzahl der Überquerungen mit allen vier Pfoten wurden als Indizes für angstbedingtes Verhalten und Fortbewegungquantifiziert. 8.
Probenentnahme
Am 32. Tag wurden die Ratten tief mit intramuskulärem Ketamin (45 mg/kg) und Xylazin (5 mg/kg) betäubt. Eine ausreichende Tiefe der Anästhesie wurde durch das Fehlen des Pedalrückzugsreflexes bestätigt. Das Blut wurde per Herzpunktion mit einer sterilen Spritze entnommen, und von jedem Tier wurden etwa 3–5 ml Blut gewonnen. Die Euthanasie wurde durch Blutentblutung unter Tiefbetäubung vollzogen. Die Blutproben wurden in gerinnungsmittelhaltige Röhrchen überführt und bei 3.000 x g für 10–15 Minuten bei 4 °C zentrifugiert. Das getrennte Plasma wurde aliquotiert und bei −80 °C bis zur biochemischen Analyse gelagert.
Der Hippocampus und die linke Gehirnhälfte wurden rasch seziert, gewogen, in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei −80 °C für weitere biochemische Analysen gelagert, während die rechte Gehirnhälfte in 10 % neutralem gepuffertem Formalin für histopathologische und immunhistochemische Bewertungen fixiert wurde. Um methodische Konsistenz zu gewährleisten und die Variabilität zwischen den Proben zu minimieren, wurde die linke Hemisphäre systematisch für biochemische Messungen und die rechte Hemisphäre für morphologische Analysen bei allen Tieren zugewiesen. Wichtig ist, dass die Formalinfixierung strikt auf Gewebe beschränkt war, die für histologische und immunhistochemische Verfahren bestimmt waren, und kein fixiertes Gewebe für proteinbasierte biochemische Tests verwendet wurde, wodurch fixationsbedingte Proteinabbau verhindert wurde. Für biochemische Untersuchungen wurden definierte Mengen an eingefrorenem Gehirngewebe (typischerweise 50–100 mg pro Analyse) mittels testspezifischer Homogenisierungspuffer und standardisierten Gewebe-zu-Puffer-Verhältnissen entsprechend den Anforderungen jedes biochemischen Parameters homogenisiert. Alle Analysen wurden mit gleicher Gewebemenge innerhalb jeder Untersuchung über die Versuchsgruppen hinweg durchgeführt.
Die Gesamtproteinkonzentration in Gewebehomogenaten wurde mittels eines fluorometrischen Proteintests gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt. Alle biochemischen Parameter wurden mit standardisierten und gleichwertigen Proteinkonzentrationen innerhalb jedes Tests gemessen, um die Vergleichbarkeit zwischen Proben und Versuchsgruppen sicherzustellen.
Bewertung der oxidativen Belastungsparameter
Die Lipidperoxidation wurde durch Messung der MDA-Werte mit der Thiobarbitursäure-Reaktivstoffmethode (TBARS) in Plasma- und Gewebeproben7 bewertet. Reduzierte Thiol- (RSH)- und GSH-Werte wurden spektrophotometrisch mittels 5,5′-Dithiaobis-(2-Nitrobenzoesäure) (DTNB)-basierten Assays7 bestimmt. Die Gesamtwerte von Stickstoffmonoxid (NO) in Plasma und Gewebehomogenaten wurden mittels der Griess-Reaktion nach Nitratreduktion7 gemessen. Alle biochemischen Parameter werden als nmol/g-Protein oder μmol/g-Gewebe angegeben, wie in Abbildung 3 und Abbildung 4 dargestellt. Alle biochemischen Tests wurden doppelt durchgeführt, und für die statistische Analyse wurden Mittelwerte verwendet.
Zusätzlich zu Hirngewebeanalysen wurden biochemische Schätzungen in Blutproben durchgeführt, um den durch BPA-Exposition induzierten systemischen oxidativen Status zu bewerten. Die Plasma-Lipidperoxidationswerte wurden mit der TBARS-Methode bestimmt, und die Ergebnisse wurden als MDA-Äquivalente angegeben. Reduzierte Sulfhydryl- (RSH)-Spiegel wurden mit DTNB gemessen, und die Gesamt-NO-Werte wurden anhand der Griess-Reaktion nach Nitratreduktion, wie zuvor beschrieben7, bewertet. Die Absorptionswerte wurden spektrophotometrisch bei 532 nm (TBARS), 412 nm (RSH) und 540 nm (NO) aufgezeichnet. Alle Assays wurden doppelt unter standardisierten Bedingungen durchgeführt.
BPA ist ein allgegenwärtiger Umweltgiftstoff, der in den systemischen Kreislauf gelangt und multiorganische Effekte ausübt; Daher liefern zirkulierende oxidative Stressmarker ergänzende Informationen, die das Gesamtredoxungleichgewicht 1,2 widerspiegeln. Die Bewertung blutbasierter biochemischer Parameter ermöglicht die Bewertung des Zusammenhangs zwischen zentralen und peripheren oxidativen Veränderungen und erhöht die translationale Relevanz der Befunde, da solche Marker häufig in Umwelt- und klinischen Studien zur Überwachung von expositionsbedingter Toxizität verwendet werden.
Western-Blot-Analyse
Die Western-Blot-Analyse wurde durchgeführt, um die Keap-1- und Nrf-2-Proteinwerte im hippocampalen Gewebe zu bestimmen. Ungefähr 50 mg Gewebe wurden in 500 μL RIPA-Puffer homogenisiert, der einen Proteaseinhibitor-Cocktail enthält. Die Homogenate wurden bei 14.000 x g für 10 Minuten bei 4 °C zentrifugiert, und die Supernatanten wurden gesammelt. Die Proteinkonzentrationen wurden mittels eines fluorometrischen Proteinquantifizierungstests gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt, und die Konzentrationen wurden anhand einer standardisierten Kalibrierungskurve berechnet. Gleiche Mengen Protein (30 μg) wurden mit einem Laemmli-Puffer gemischt, der β-Mercapttoethanol enthielt, bei 95 °C für 5 Minuten erhitzt, auf 10%ige SDS-PAGE-Gele getrennt und für 60–90 Minuten auf PVDF-Membranen bei 110 V übertragen. Die Membranen wurden mit 3 % BSA blockiert und über Nacht bei 4 °C mit primären Antikörpern gegen Keap-1 und Nrf-2 (1:3000) sowie β-Aktin (1:1000) inkubiert, gefolgt von der Inkubation mit HRP-konjugierten sekundären Antikörpern. Proteinbänder wurden durch chemilumineszenz visualisiert, und Bandintensitäten wurden durch densitometrische Analyse quantifiziert und auf β-Aktin normalisiert.
Histopathologische Analyse
Hirngewebeproben aus der rechten Hemisphäre wurden für 72 Stunden in 10 % neutralem gepuffertem Formalin fixiert, durch eine graduierte Ethanolserie dehydriert, in Xylol freigegeben und gemäß den standardisierten histologischen Verfahren in Paraffineingebettet. Frisches Gewebe wurde für biochemische Analysen reserviert. Koronale Schnitte (5 μm) wurden auf Hippocampus- und Entorhinalkortex-Niveau basierend auf einem Ratten-Gehirnatlas10 durchgeführt. Vier aufeinanderfolgende Schnitte pro Tier wurden auf Glasobjektträger für histologische und immunhistochemische Bewertungen montiert, um eine konstante Schnittdicke und anatomische Lokalisierung sicherzustellen. Die Schnitte wurden entparaffinisiert, rehydriert und mit Hämatoxylin und Eosin (H&E) nach routinemäßigen Färbeprotokollen11 gefärbt. Die histopathologische Untersuchung wurde unter Lichtmikroskopie von einem einzelnen trainierten Beobachter durchgeführt, der auf die experimentellen Gruppen blind war, um Verzerrungen zu minimieren und Inter-Observer-Variabilität zu eliminieren.
Immunhistochemische Analyse
Interessensgebiete, darunter der Hippocampus und der entorhinale Cortex, wurden aufgrund ihrer Anfälligkeit für BPA-induzierte Neurotoxizität und ihrer Rolle in der kognitiven und emotionalen Regulationausgewählt 1,2. Eine immunhistochemische Färbung für Nrf-2 und Keap-1 wurde an paraffineingebetteten Hirnschnitten durchgeführt. Die Schnitte wurden in Xylol deparaffinisiert, durch eine graduierte Ethanolserie rehydriert und einer hitzeinduzierten Antigenentnahme im Citratpuffer (pH 6,0) unterzogen. Die endogene Peroxidase-Aktivität wurde vor der Inkubation abgeschreckt.
Schnitte wurden über Nacht bei 4 °C mit primären Antikörpern gegen Nrf-2 (1:100) und Keap-1 (1:200) inkubiert. Die Detektion erfolgte mit einem kommerziell verfügbaren, einsatzbereiten polymerbasierten HRP-Detektionssystem, das artspezifische sekundäre Antikörper enthält, die mit Meerrettichperoxidase konjugiert sind, gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die Immunreaktivität wurde mit 3,3′-Diaminobenzidin (DAB) als Chromogen visualisiert, gefolgt von Gegenfärbung mit Hämatoxylin. Abschnitte wurden ausgetrocknet, geräumt und mit Deckung bedeckt.
Negativkontrollsektionen wurden parallel ohne primäre Antikörperinkubation durchgeführt. Für die quantitative Analyse wurden pro Tier drei nicht angrenzende Abschnitte bewertet. Die Bilder wurden unter identischen Belichtungseinstellungen für alle Gruppen aufgenommen. Sechzehn nicht überlappende Felder pro Abschnitt wurden mit der ImageJ-Software analysiert. Interessensgebiete wurden manuell abgegrenzt, Hintergrundfärbung abgezogen und die Immunreaktivität als mittlerer Grauwert angegeben. Der Durchschnittswert pro Tier wurde berechnet und für statistische Analysen verwendet.
Histopathologische Bewertung
Histopathologische Veränderungen wurden halbquantitativ auf H&E-gefärbten Schnitten untersucht. Zehn zufällig ausgewählte, nicht überlappende Felder pro Abschnitt wurden untersucht, und pathologische Parameter wurden unabhängig voneinander bewertet. Die Schwere der Schäden im Hippocampus und im entorhinalen Kortex wurde mit einer Vier-Punkte-Skala basierend auf dem Anteil der betroffenen Zellen bewertet: Punktzahl 0 (<5 %), Wert 1 (≤ ein Drittel), Wert 2 (ein Drittel bis zwei Drittel) und Wert 3 (> zwei Drittel). Für die statistische Analyse wurden mittlere Werte pro Tier verwendet.
Statistische Analyse
Die Daten wurden mit SPSS-Software (Version 29.0) analysiert und als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt. Die Stichprobengröße wurde auf Grundlage früherer Studien und Leistungsanalysen bestimmt, was zeigt, dass sechs Tiere pro Gruppe >80 % Stärke liefern, um biologisch relevante Unterschiede zu erkennen. Die Normalität der Datenverteilung wurde mit dem Shapiro-Wilk-Test bewertet. Die Homogenität der Varianzen wurde mit dem Levene-Test bewertet. Gruppenvergleiche wurden mittels Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) durchgeführt, gefolgt von Tukeys Post-hoc-Test. Die statistische Signifikanz wurde auf p < 0,05 gesetzt.
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Körpergewicht
An den Tagen 1 und 32 der Studie wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede im Körpergewicht zwischen den Gruppen beobachtet (F(3,20)=2,750, p > 0,05; Abbildung 2).
Ergebnisse von Verhaltenstests
Die Analyse von Open-Field-Tests zeigte, dass die BPA-Exposition die Bewegungsaktivität signifikant verringerte, was sich an einer geringeren Anzahl von Kreuzungen im...
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Die vorliegende Studie bewertete die Auswirkungen von BPA, einer strukturellen Komponente von Polycarbonat-Kunststoffen, die von der USEPA als sicher eingestuft wird, bei einer Dosis von 50 μg/kg 1,2, auf oxidativen Stress, Keap-1/Nrf-2-Signalübertragung, Verhalten und histopathologische Veränderungen im Rattenhirn. Darüber hinaus wurden die potenziellen neuroprotektiven Effekte von TQ, einer natürlich vorkommenden Verbindung mit...
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Die Autoren haben keine Interessenkonflikte zu erklären.
Dieses Projekt wurde vom Koordinationsbüro für wissenschaftliche Forschungsprojekte der Universität unterstützt (Projektnummer TIP. A4.24.003).
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoesäure) | Thermo Scientific | 69-78-3 | |
| Tischzentrifuge NF048 | Nüve | 43560 | |
| Beta_Actin | ThermoFisher Scientific, United States | 7D2C10 | |
| Bisphenol A | Merck | 239658 | |
| BSA-Lösung | Proteintech, United States) | 66201-1-Ig | |
| Butyliertes Hydroxytoluol | Sigma Aldrich | 128-37-0 | |
| Digitaler Homogenisatorör | Daihan Scientific | https://www.artlaboratuvarcih azlari.com/urun/daihan-hg- 15d-dijital-homojenizator-set -a?srsltid=AfmBOorx_az06ulc HpSzKZsuP8-47Za4BkvLOM2 2Xhp00tgwWhJ-86Vc | |
| Hämatoxylin–eosin | Bio Optica | W01030708 | |
| Salzsäure | Merck | 7647-01-0 | |
| Image J Software-Programm | NIH; Washington, U.S.A. | https://imagej.net/ij/ | |
| Immunhistochemisches Färbeset | Lab VisionTM UltraVisionTM Large Volume Detection System: anti-polyvalent | HRP, TA-125-HL | |
| Leica Autocut 14051956472 | Germany | https://www.leicabiosystems. com/histology-equipment/mic rotomes/histocore-autocut/ | |
| Lichtmikroskop | Nikon, Eclipse | Ni-U, 940728 | |
| N-(1-Naphthyl)ethylendiamin | Thermo Scientific | 1465-25-4 | |
| Nano-Mikroplatten-Reader | BMG LABTECH | SPECTROstar Nano | |
| Phosphatpufferlösung | Merck | P4417 | |
| Primäre Antikörper Keap-1 | Proteintech | Cat No. 10503-2-AP, 1:200 | |
| Primäre Antikörper Nrf-2 | Proteintech | Cat No. 16396-1-AP, 1/100 | |
| Qubit Protein BR Assay Kit | ThermoFisher Scientific-INVITROGEN | Q33211 | |
| Natriumcitrat | Merck | 03-04-6132 | |
| Natriumdodecylsulfat | Thermo Scientific | 151-21-3 | |
| Natronlauge | Merck | 1310-73-2 | |
| Natriumnitrat | Merck | 7631-99-4 | |
| Streptavidin Peroxidase | Thermo Scientific | SHRP248-B | |
| Sulfanilamid | Thermo Scientific | 63-74-1 | |
| Thiobarbitursäure | Merck | 504-17-6 | |
| TQ | CAYMAN | 490-91-5 | |
| Tricarballylsäure, 99% | Thermo Scientific Chemicals | 139360500 | |
| Trichloressigsäure | Thermo Scientific Chemicals | 76-03-9 | |
| Tris-HCl | Thermo Scientific | 1185-53-1 | |
| Vanadium(III)-chlorid | Sigma Aldrich | 7718-98-1 | |
| West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate and the iBright 750 | Thermo Fisher Scientific system | https://www.clinxsci.com/product/mini _chemiluminescence_imaging_system ?gad_source=1&gad_campaignid= 16224184202&gbraid=0AAAAAoN6 UOOtoB8UD0deumBAMD8Xi-1l-&g clid=CjwKCAjwgeLHBhBuEiwA L5gNEXtK2CNSLS1GqllMuNgkrFYD aW7yK585njQjFja485Fkwj9lRUEKD BoCgLoQAvD_BwE | |
| Zinksulfatlösung | Merck | 7733-02-0 |
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