Die Studie wurde in Übereinstimmung mit der Erklärung von Helsinki und den ethischen Richtlinien des Krankenhauses durchgeführt und vom Wuxi Second People's Hospital, dem Jiangnan University Medical Center sowie den ethischen Komitees (Ethische Nr. 2024-Y-231) unterstützt. Alle menschlichen biologischen Proben (venöses Blut und Serumaliquoten) wurden in strikter Einhaltung der Biosicherheitsvorschriften (GB 19489-2008) behandelt. Alle Operationen wurden in einem Biosicherheitsschrank durchgeführt, um Probenkontamination und Personenexposition zu vermeiden. Die Entsorgung gebrauchter biologischer Proben, kontaminierter Pipettenspitzen und Mikrozentrifugenröhren erfolgte gemäß den Standards für das Management medizinischer Abfälle: Proben und kontaminierte Materialien wurden bei 121 °C für 30 Minuten autoklaviert und anschließend an qualifizierte medizinische Abfallentsorgungseinrichtungen zur zentralen Behandlung zur Sicherung der Biosicherheit übergeben.
Forschungsdesign
Dies war eine retrospektive Kohortenstudie mit nur einem Zentrum zur Untersuchung des prognostischen Wertes von präoperativen Serum-HGF-Spiegeln und IBPS auf die postoperativen pathologischen Ergebnisse von OSCC-Patienten. Dieses Studiendesign folgt den REMARK-Richtlinien (Tumor Marker Prognostic Study Report Recommendations). Die Bevölkerung, die von Januar 2020 bis Dezember 2022 die Zahnmedizinische Abteilung des Wuxi Second People's Hospital, Jiangnan University Medical Center, besuchte, wurde als Studienpopulation ausgewählt. Insgesamt wurden 170 Fälle gesammelt, 165 Fälle nach Ausschluss einbezogen, 7 Fälle gingen während der Nachsorgezeit verloren, und schließlich 79 Fälle in der A-Gruppe (gesunde Kontrollgruppe, gesunde Personen, die im gleichen Zeitraum zur körperlichen Untersuchung ins Krankenhaus eingeliefert wurden) und 79 Fälle in B-Gruppe (OSCC-Gruppe, Patienten mit OSCC) eingeschlossen wurden. Das Flussdiagramm dieser Studie ist in Abbildung 1 dargestellt. Geeignete Studienpersonen wurden über das elektronische Krankenaktensystem des Krankenhauses und die Datenbank des Untersuchungszentrums abgerufen und detaillierte klinisch-pathologische Daten der A-Gruppe (gesunde Kontrollgruppe) und der B-Gruppe (OSCC-Gruppe) gesammelt. Durchführung einer postoperativen Nachbeobachtung der B-Gruppe Patienten während der Studie, um Rückfall, Metastasen und Überleben zu dokumentieren. Nur eine gesunde Kontrollgruppe wurde eingeschlossen, um die unterschiedliche Expression von Entzündungsmarkern zwischen OSCC-Patienten und gesunden Personen zu identifizieren, was eine rationale Grundlage für die Festlegung des Grenzwerts für das selbstkonstruierte IBPS liefert. Bewertete den prognostischen Wert von IBPS und verifizierte ihn innerhalb der OSCC-Patientenkohorte anhand ihrer postoperativen pathologischen Ergebnisse. Dieses Studiendesign sicherte die Genauigkeit der Daten und die wissenschaftliche Validität der Studie durch strenge Gruppierungskriterien, standardisierte Labortestverfahren und systematische Nachbeobachtungsmechanismen und bot einen rigorosen Forschungsrahmen zur Analyse des prognostischen Werts von HGF-Werten und IBPS-Werten in den postoperativen pathologischen Endpunkten von OSCC, was voraussichtlich eine wissenschaftliche Grundlage für die Entwicklung personalisierter prognostischer Bewertungsprotokolle und therapeutischer Verfahren liefert. Strategien in der Klinik.
Einschluss- und Ausschlusskriterien
Einschlusskriterien: (1) Patienten mit der Diagnose OSCC21; (2) Alter 40–65 Jahre; (3) Mit vollständigen klinischen Informationen; (4) Erhielt einen umfassenden sequentiellen Behandlungsplan, der auf Operation basierte und durch selektive Strahlentherapie ergänzt wurde; (5) Patienten mit guter Compliance und der Bereitschaft, mit dem von der Studie entwickelten Behandlungsplan zu kooperieren; (6) Der allgemeine psychische Zustand der Patienten ist gut, ihre Körper sind im Wesentlichen gesund, und sie können ihre Beschwerden über ihre Symptome ehrlich äußern und relevante Fragen von Fachkräften beantworten; (7) Die Patienten und ihre Familien wurden informiert, stimmten zu und unterschrieben ein Formular zur informierten Einwilligung.
Ausschlusskriterien: (1) Patienten mit kombinierten bösartigen Tumoren außer OSCC; (2) Patienten mit einer Kombination schwerer systemischer Erkrankungen oder Erkrankungen des Immunsystems; (3) Patienten mit kombinierter hämorrhagischer Gerinnungsstörung oder schweren Herz-, Leber- oder Nierenfunktionsdefekten, schweren Herz-Kreislauf-Erkrankungen oder anderen schwerwiegenderen Erkrankungen; (4) Kombinierte chronische Infektionskrankheiten mit anderen sexuell übertragbaren Krankheiten (z. B. Syphilis, Gonorrhö usw.); (5) Kombinierte Anomalien der Gehirn-, Herz-, Leber- und Nierenfunktion; (6) Patienten, die an klinischen Arzneimittelstudien oder Studien beteiligt waren; (7) Antrag auf Abbruch der Behandlung oder automatischer Entlassung aus persönlichen Gründen; (8) Andere Bedingungen, die nach Ansicht des Studienarztes nicht berücksichtigt werden sollten; (9) Weitere Umstände, die die Indikatoren der Nachbeobachtung beeinflussen.
Gruppierungsmethode
Die Studienteilnehmer wurden in zwei Gruppen unterteilt: A-Gruppe: gesunde Kontrollgruppe (n = 79), B-Gruppe: OSCC-Gruppe (n = 79).
Indikatorensammlung
Die grundlegenden Informationen über Patienten in beiden Gruppen gesammelt.
Probenentnahme
Nüchternde venöse Blutproben (5 ml) wurden frühmorgens vor der Operation von allen Teilnehmern entnommen und während des Transports bei Raumtemperatur (25 ± 2 °C) aufbewahrt. Die Blutproben wurden innerhalb von 30 Minuten (1.800 Sekunden) nach der Entnahme verarbeitet. Nach der Zentrifugation bei 3.000 × g für 15 Minuten bei Raumtemperatur (25 ± °C wurde das Supernatant-Serum in 0,5 mL Aliquots mit sterilen Polypropylen-Mikrozentrifugenröhren übertragen. Alle Aliquots wurden sofort in einen -80 °C Ultra-Niedrigtemperatur-Gefrierschrank zur Langzeitlagerung bis zur Analyse gelegt und wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen vermieden (bei Bedarf war nicht mehr als 1 Gefrier-Tau-Zyklus erlaubt).
Serum-HGF-Niveau
Die Serum-HGF-Konzentrationen wurden mit einem kommerziellen enzymgebundenen Immunsorbent-Assay-(ELISA)-Kit gemäß den Herstelleranweisungen22 bestimmt. Kurz aufgetaut wurden Serumproben bei 4 °C für 30 Minuten aufgetaut, um eine Proteindenaturierung zu vermeiden, und anschließend im Verhältnis 1:1 mit dem vom Set bereitgestellten Verdünnungspuffer verdünnt. Wurden Standards, Kontrollen und verdünnte Serumproben (100 μL pro Bohrloch) zur ELISA-Platte hinzugefügt und bei 37 °C für 60 Minuten inkubiert. Nachdem die Platte fünfmal mit dem bereitgestellten Waschpuffer gewaschen wurde, wurde das primäre Antikörperkonjugat hinzugefügt und bei 37 °C weitere 30 Minuten inkubiert. Nach einer zweiten Waschrunde wurde das chromogene Substrat hinzugefügt, die Reaktion wurde bei 37 °C im Dunkeln 15 Minuten inkubiert, wobei die Reaktion mit der Stoplösung beendet wurde. Die Absorption wurde bei 450 nm mit einem ELISA-Leser innerhalb von 10 Minuten nach dem Abbruch gemessen. Implementierung standardisierter Qualitätskontrollverfahren während des gesamten Tests, einschließlich des Einsatzes von kit-bereitgestellten Kalibratoren und Kontrollen. Der intraassay Variationskoeffizient (CV) lag bei < 5 % und der intraassay CV bei < 8 %, was eine zuverlässige analytische Leistung bestätigt.
IBPS-Berechnung
Die Serumproben wurden mit dem automatischen Hämatologie-Analysator XN3000 und den begleitenden Reagenzien23 analysiert. Die Serumproben wurden 20 Minuten bei 4 °C aufgetaut und 10 Minuten vor der Prüfung auf Raumtemperatur (25 ± 2 °C) ausgeglichen. Routinemäßige Bluttests wurden bei 25 ± 2 °C durchgeführt, um die Zählungen von Leukozyten, Neutrophilen, Lymphozyten und Blutplättchen zu ermitteln, anschließend wurden die NLR (Neutrophilenzahl/Lymphozytenzahl) und PLR (Thrombozytenzahl/Lymphozytenzahl) berechnet. Die regelmäßige Kalibrierung der Testinstrumente erfolgte bei 25 °C, wobei intrabatch CV < 3 % und interbatch CV < 5 % für Blutroutineindikatoren betrug. Verwendet wurde ein immunoturbidimetrischer Test verwendet, um den Serum-CRP-Gehalt im automatischen biochemischen Analysator zu messen. Die Serumproben wurden 20 Minuten bei 4 °C aufgetaut und 5 Minuten vor der Detektion auf 37 °C ausgegliblibt. Der Test wurde bei 37 °C mit einer Inkubationszeit von 10 Minuten durchgeführt und die Reaktion kontinuierlich bei 546 nm überwacht. Das Instrument wurde strikt gemäß der Bedienungsanleitung bedient, um den Test abzuschließen. CRP-Erkennung mit intrabatch CV < 4 % und interbatch CV < 6 %. Die Bewertung erfolgte nach unserer selbstgemachten IBPS-Skala. Das IBPS-Bewertungssystem bezieht sich auf die Konstruktionsmethode der bisherigen Entzündungsprognosen und passt die Gewichtungen der Indikatoren basierend auf den vorexperimentellen Ergebnissen dieser Studie an. Der NLR-Wert ≤3,0 wurde als 0 Punkte bewertet, 3,0–5,0 als 1 Punkt, >5,0 als 2 Punkte. PLR-Werte ≤150 wurden mit 0 Punkten bewertet, 150–300 mit 1 Punkt und >300 mit 2 Punkten. CRP-Gehalt ≤50 mg/L war 0 Punkte, 50–100 mg/L 1 Punkt und >100 mg/L 2 Punkte. Gesamt-IBPS-Score = CRP-Score + NLR-Score + PLR-Score. Stratifizierungskriterien: ≤ 4 Punkte für mittleres bis niedriges Risiko, 5–6 Punkte für hohes Risiko. Die Grenzwerte und Bewertungskriterien für NLR, PLR und CRP wurden auf Basis zuvor veröffentlichter entzündlicher prognostischer Werte in Kombination mit explorativer Datenanalyse in der vorliegenden Studienpopulation bestimmt, anstatt statistische Optimierungen wie den Youden-Index oder die Analyse der Empfänger-Funktionscharakteristik zu verwenden.
Folgebesuche
In dieser Studie wurde eine standardisierte 20-monatige Nachbeobachtung durchgeführt, um die postoperativen Ergebnisse bei Patienten zu bewerten. Der Nachsorgetermin war der Tag der Operation für die B-Gruppe (OSCC-Gruppe) Patienten, und die Endzeit war der 31. August 2024. Eine Kombination aus ambulanter Nachsorge und telefonischer Nachsorge wurde eingeführt. Bei jeder Nachuntersuchung wurde die körperliche Untersuchung und bildgebende Untersuchung durchgeführt, um das Vorhandensein eines Tumorrückfalls oder Metastases zu bestätigen. Die wichtigsten prognostischen Indikatoren waren das Gesamtüberleben (OS) und das krankheitsfreie Überleben (DFS). OS wurde definiert als die Zeit vom Tag der Operation bis zum Tod aus jeglicher Ursache. DFS wurde definiert als der Zeitraum vom Tag der Operation bis zum Rückfall, Fortschreiten oder Tod des Tumors durch tumorbedingte Ursachen.
Berechnung der Stichprobengröße
Diese Studie nutzte G*Power 3.1.9.7 zur Schätzung der Stichprobengröße, um den prognostischen Wert der HGF-Werte und IBPS-Werte für postoperative pathologische Ergebnisse bei OSCC-Patienten zu klären. Setzen Sie einen Testwert von α von 0,05 (bilateral), eine Testwirksamkeit von 85 % und einen vorhergesagten Entzündungsfaktor AUC von 0,75, wie von der Software berechnet, und es wurden 75 Fälle in jeder Gruppe benötigt, um die statistischen Anforderungen der ROC-Kurvenanalyse und multifaktoriellen Regression zu erfüllen. Unter Berücksichtigung der Unsicherheiten möglicher Ausfälle und fehlender Daten wurde die Stichprobengröße dieser Studie schließlich auf 79 Fälle pro Gruppe festgelegt, um sicherzustellen, dass die Studie eine ausreichende statistische Wirksamkeit hatte, um verlässliche Schlussfolgerungen zu ziehen.
Statistische Analyse
Für die Datenanalyse wurde die SPSS 28.0 Statistiksoftware verwendet. GraphPad Prism 9.0 wird verwendet, um Überlebenskurven zu zeichnen, während Lucidchart zum Zeichnen von Flussdiagrammen verwendet wird. Ich habe die Daten in der Studie zuerst auf die Normalverteilung getestet. Vergleichen Sie die Basislinienmerkmale zwischen der A-Gruppe und der B-Gruppe mit einem unabhängigen Stichproben-t-Test für Messdaten und einemχ-2-Test für Zähldaten. Beschriebene Basischarakteristika als Zählung [n (%)] und Messdaten (ausgedrückt als x ± s). Indikatoren wie HGF, NLR, PLR und CRP wurden als x ± s angegeben, und intergruppenvergleiche dieser Indikatoren wurden ebenfalls mit einem unabhängigen Stichproben-t-Test durchgeführt. Die binäre logistische Regressionsanalyse wurde verwendet, um den Zusammenhang zwischen HGF-Werten, IBPS-Werten und postoperativen pathologischen Ergebnissen (abhängige Variable, 1 = negativ, 0 = günstig) zu untersuchen, wobei positive Regressionskoeffizienten eine positive Korrelation zwischen Indikatoren und negativen Ergebnissen anzeigen. Die Kaplan-Meier-Methode wurde verwendet, um die OS- und DFS-Kurven der A- und B-Gruppe darzustellen, und der Log-Rang-Test wurde angewandt, um die statistischen Unterschiede in den Überlebensraten zwischen den Gruppen zu vergleichen. Der prognostische Wert der obigen Metriken für OSCC-Patienten wurde anhand der Empfänger-Funktionscharakteristik (ROC)-Kurve und der Fläche unter der Kurve (AUC) analysiert, um den optimalen Cutoff-Wert, die Empfindlichkeit und die Spezifität zu bestimmen. Die Zähldaten wurden als n (%) dargestellt, und der Vergleich zwischen der A-Gruppe und der B-Gruppe wurde mit dem χ-2-Test analysiert. Alle statistischen Tests waren zweiseitig, und P < 0,05 zeigte einen statistisch signifikanten Unterschied.