Der Mechanismus von Ermiao-Pulver bei der Behandlung der Prostatitis: Eine Studie basierend auf Netzwerkpharmakologie und experimenteller Verifikation

Zusammenfassung

Mit einem Netzwerkpharmakologie-Ansatz zeigte diese Studie, dass Ermiao-Pulver seine therapeutischen Wirkungen gegen Prostatitis ausübt, indem es entzündliche Faktoren und zugehörige Signalwege hemmt. Nachfolgende In-vitro-Experimente zeigten außerdem, dass sein wässriger Extrakt die Expression wichtiger entzündlicher Zytokine in einem LPS-induzierten Modell der Prostataepithelzellen signifikant unterdrückte.

Zusammenfassung

Dieses Protokoll bietet einen kombinierten Ansatz der Netzwerkpharmakologie und experimenteller Validierung, um den Wirkmechanismus von Ermiao-Pulver (EMP) bei der Behandlung von Prostatitis zu untersuchen. Der Arbeitsablauf folgt einem schrittweisen Design: (i) datenbankgestütztes Screening aktiver Verbindungen und Ziele, (ii) Aufbau und Analyse von Interaktionsnetzwerken und (iii) in-vitro-experimentelle Validierung. Zunächst wurden die aktiven Inhaltsstoffe von EMP und deren entsprechende Ziele aus der TCMSP-Datenbank abgerufen, während prostatitisbezogene Ziele aus der GeneCards-Datenbank bezogen wurden. Die Schnittstelle von EMP-Zielen und Krankheitszielen wurde genutzt, um wichtige therapeutische Ziele zu identifizieren. Zweitens wurde ein Netzwerk "Arzneimittel–Wirkstoff–Ziel-Krankheit" mit Cytoscape aufgebaut. Protein-Protein-Interaktionsanalyse (PPI) und die Kyoto-Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)-Weganreicherung wurden an den wichtigsten Zielen durchgeführt, was zeigte, dass entzündliche Faktoren wie IL6 und TNF als Kernziele dienten und Wege wie PI3K/AKT und MAPK signifikant angereichert waren. Abschließend wurde die in-vitro-Validierung mit einem LPS-induzierten Entzündungsmodell von Prostataepithelzellen durchgeführt. Die Behandlung mit EMP reduzierte signifikant die Freisetzung der pro-inflammatorischen Faktoren IL-6 und TNF-α im Vergleich zur LPS-behandelten Gruppe (S. < 0,05) und bestätigte die entzündungshemmende Wirksamkeit von EMP. Dieser integrative Ansatz bietet einen reproduzierbaren Rahmen, der angepasst werden kann, um andere multikomponentige therapeutische Systeme zu untersuchen. Abschließend erläutert diese Studie vorläufig, dass EMP seine antiprostatitisbedingten Effekte durch einen Multikomponenten-, Multi-Ziel- und Multisignalweg-Mechanismus ausübt, der eng mit der Unterdrückung entzündlicher Reaktionen verbunden ist und somit eine wissenschaftliche Grundlage für seine klinische Anwendung bietet.

Einleitung

Prostatitis, insbesondere chronische nicht-bakterielle Prostatitis, stellt eine häufige urologische Störung dar, die durch komplexe Ätiologie und fehlende wirksame Therapien gekennzeichnet ist und eine erhebliche Belastung für die Lebensqualität der Patienten darstellt ^1,2,3. Die aktuelle klinische Behandlung der Prostatitis erfolgt mit einem integrierten Ansatz, der Antibiotika, α-Rezeptorblocker und nichtsteroidale entzündungshemmende Medikamente ^4,5,6

Protokoll

Für diese Studie war keine ethische Genehmigung erforderlich, da sie weder menschliche Teilnehmer noch klinische Proben umfasste. Alle Verfahren mit Zelllinien wurden gemäß institutionellen Biosicherheitsrichtlinien und -vorschriften durchgeführt. Die in dieser Studie verwendete Prostataepithelzelllinie stammt von einem zertifizierten kommerziellen Lieferanten.

HINWEIS: Alle in dieser Studie verwendeten Reagenzien, Instrumente und Software sind in der Materialtabelle aufgeführt. Das Flussdiagramm dieser Studie ist in Abbildung 1 dargestellt.

Ergebnisse

Identifikation aktiver Verbindungen und Zielvorhersage

Diese Ergebnisse zeigen die Wirksamkeit unserer integrierten Netzwerkpharmakologie und unseres in-vitro-Ansatzes zur Identifizierung und Validierung der therapeutischen Ziele von EMP bei Prostatitis. Eine Suche in der TCMSP-Datenbank identifizierte 46 bioaktive Komponenten aus den Bestandteilen der EMP-Kräuter, was 178 potenziellen Zielen entspricht. Aus der Genecards-Datenbank wu.......

Diskussion

Dieses Protokoll integriert Netzwerkpharmakologie mit experimenteller Validierung, um einen systematischen Rahmen für die Untersuchung von multikomponenten therapeutischen Mechanismen zu schaffen. Kritische Schritte umfassen eine genaue Überprüfung aktiver Verbindungen unter Verwendung definierter Schwellenwerte (OB ≥ 30 %, DL ≥ 0,18), zuverlässige Netzwerkkonstruktion und geeignete Auswahl experimenteller Validierungsmodelle. Eine sorgfältige Parameterauswahl in bioinformatischen Analys.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Menschliches IL-6 ELISA KIT	4Abio	CHE0009
Menschliches TNF-Α ELISA KIT	4Abio	CHE0019
K-SFM-Ergänzungen	Procell	CM-0200
Lipopolysaccharide	Solarbio	L8880
MTS	Promega	G1111
Reverse-Transkriptionssystem	Promega	A3500
RWPE-1	Procell	CL-0200	RRID:CVCL_EQ24
RWPE-1 Zell-Komplettmedium	Procell	CM-0200
SYBR Green Realtime PCR Master Mix	Toyobo	QPK-201
Trizolreagenz	Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)	15596026
Trypsin-EDTA	Gibco (Thermofischer)	25200072