Versuchsdesign und Plotvorbereitung
Das Experiment wurde im Juli und Anfang August 2023 sowie 2024 durchgeführt. Typischerweise liegt die Sojabohnen-Anbausaison in Ohio ungefähr von April bis November. Die während der Vegetationssaison 2023 genutzten Standorte lagen im Clinton County (39,488, -83,769) und Union County (40,296, -83,283), Ohio. Die während der Wachstumssaison 2024 genutzten Standorte lagen im Clinton County (39,489, -83,762), Preble County (39,893, -84,611) und Licking County (39,948, -82,501), Ohio.
Das Experiment verwendete ein randomisiertes, vollständiges Blockdesign, um räumliche Effekte im Sojabohnenfeld zu kontrollieren. Innerhalb jedes Blocks wurden 5 Parzellen für eine bestimmte Behandlung vorgesehen. Die Behandlungen umfassten zwei Wachstumsphasen (R3 und R5) sowie zwei Anwendungszeiten (Vormittag und Mittag) sowie eine unbehandelte Kontrolle. Dies führte zu den folgenden 4 Pestizidanwendungen auf Parzellen innerhalb jedes Blocks: R3 am frühen Vormittag, R3 am Mittag, R5 am frühen Vormittag, R5 am Mittag. Anträge am Vormittag oder Mittag erfolgten innerhalb eines Fensters von ~2 Stunden, mit Anträgen am Vormittag etwa um 10:00 Uhr und mittags etwa um 12:30 Uhr. Zusätzlich zu den 5 Aufbereitungsflächen in jedem Block wurden 3 Flächen als Ersatzflächen ausgewiesen, die im Falle einer schlechten Sojabohnenbildung oder -wachstumsstärke in die Behandlungsflächen eingelagert werden konnten. Die Stadien der Sojabohnenpflanzen wurden mithilfe von Stadienanleitungen wie dem von der University of Minnesota Extension39 veröffentlichten Stadien bestimmt.
Blöcke von Sojabohnenflächen wurden etwa 1,016 m (40 Zoll) auseinander gesetzt, damit Forscher leicht zwischen ihnen hindurchgehen konnten. Die Sojabohnenflächen waren 1,9 m mal 8,5 m (0,0016 ha; 6,25 ft mal 28 ft), und die für alle Standorte verwendete Sojabohnensorte war Pioneer P35T155E (Corteva, Indianapolis, IN). Auf jedem Beet wurden 6 Reihen gepflanzt und 38 cm Abstand gehalten. Es wurde eine Aussaatrate von 370.658 Samen pro Hektar (150.000 Samen pro Ac) verwendet. Die an dem Experiment beteiligten Bienen stammten alle aus lokalen Populationen. Von den Forschern wurden keine zusätzlichen Bienen hinzugefügt. Die Autoren hatten keine Kenntnis von stationären oder wandernden Bienenköcken in der Nähe der Experimente. Alle für das Experiment verwendeten Materialien sind in der Materialtabelle aufgeführt.
Pestizidzubereitung
Die verwendeten Pestizide waren Fitness-Fungizid (41,8 % Propiconazol-Wirkstoff) und Fastac EC Insektizid (10,9 % Alpha-Cypermethrin-Wirkstoff). Die Pestizidanwendungsraten betrugen 6 fl oz/ac (438,47 mL/ha) für das SBI-Fungizid und 3,8 fl oz/ac (277,70 mL/ha) für das Pyrethroid-Insektizid. Zur Vorbereitung der Pestizide für die Anwendung wurden 9,375 ml SBI-Fungizid und 5,937 ml Pyrethroid-Insektizid mit Wasser gemischt, um ein Endvolumen von 3 L als Beckenmischung zu erzielen. Bei der Zubereitung der Mischung wurden chemikalienresistente Handschuhe getragen. Die Endkonzentration des SBI-Fungizids im Tank betrug 3,125 mL pro L. Die Endkonzentration des Pyrethroid-Insektizids im Becken betrug 1,979 mL pro L.
Anwendung von Pestiziden
Diese Mischung wurde auf einzelne Sojabohnenfelder innerhalb jedes Blocks mit einem maßgefertigten Handrucksacksprüher aufgetragen. Die Pestizidmischung wurde am oberen Ende des Sojabohnendachs mit einer Geschwindigkeit von ~5 km pro Stunde aufgetragen. Nach Beginn des Pestizid-Anwendungsprozesses für eine bestimmte Behandlung dauerte es ~10 Minuten, bis alle Parzellen die Anwendung erhielten. Für jedes 3-Liter-Becken kann eine Fläche von ~0,027 ha mit der Pestizidmischung bedeckt werden. Das pro Hektar verbrauchte Sprühvolumen beträgt etwa 113 Liter. Das bedeutet, dass ~0,18 L des Tankgemisch pro Diagramm aufgetragen wurden. Um Pestizidverlagerung auf andere Parzellen durch Wind zu vermeiden, wurde an windigen Tagen die Anwendung vermieden. Beim Auftragen des Pestizids wurde vollständige persönliche Schutzausrüstung (langärmliches Hemd und lange Hosen, chemikalienresistente Handschuhe, Schuhe plus Socken und Schutzbrille) getragen. Wenn nach Abschluss einer Pestizidanwendung eine überschüssige Pestizidmischung vorhanden war, wurde diese gemäß den Empfehlungen der staatlichen Umweltaufsichtsbehörde entsorgt.
Blockflöter-Aufbau/-nutzung
Die allgemeine Einrichtung und Nutzung von Audiorekordern ähnelt einem Protokoll, das von anderen Autoren40 beschrieben wurde. Handheld-Audiorekorder (Sony ICD-PX370) wurden mit Hakenband an Kunststoff-Step-in-Elektrozaun-Stiften befestigt, und Open-Cell-Schaumstoff wurde als Windschutzscheibe über das Mikrofon gelegt. Eine kegelförmige, 3D-gedruckte Regenabdeckung wurde am Pfahl ~3 cm über dem Recorder befestigt, um ihn vor Witterung zu schützen.
Audiorekorder wurden dann ~24 Stunden vor der ersten Pestizidanwendung in der Mitte jedes Parzellens platziert und mindestens 24 Stunden nach jeder Anwendung laufen lassen. Für jeden Anwendungstag wurden zwölf Recorder eingesetzt, vier für jede Tageszeitgruppe (Vormittag, Mittag, Kontrolle) sowohl in R3 als auch in R5.
Audio-Datenverarbeitung
Alle Audioaufnahmen wurden mit dem maschinellen Lernwerkzeug "buzzdetect"41 verarbeitet, das unter folgender https://github.com/OSU-Bee-Lab/buzzdetect zu finden ist. Dieses Werkzeug wurde darauf trainiert, das Summen von Insekten von anderen Geräuschen zu unterscheiden, die häufig in der experimentellen Umgebung auftreten, wie Autos, Mähdreschen oder Flugzeuge. Das Programm ist nicht in der Lage, das Summen von Apis mellifera von anderen Bienenarten zu unterscheiden. BuzzDetect ist jedoch in der Lage, summende Geräusche von anderen nicht-summenden Insektengeräuschen zu unterscheiden, wobei spezifische Geräusche (wie Grillenrufe, meist nachts) dennoch schwer zu unterscheiden sind. Genauere Anleitungen, wie man buzzDetect benutzt, finden Sie unter: https://buzzdetect.readthedocs.io/en/latest/gui/. Nach der Audioanalyse wurde R42 verwendet, um die Detektionsrate innerhalb von 1- bis 8-Stunden-Zeitintervallen zu berechnen.
Entlaubungsdaten
Entlaubungsbewertungen wurden durchgeführt, indem Blätter aus dem oberen Sojabohnenkronendach auf 10 Pflanzen in jedem am Experiment beteiligten Feld visuell untersucht wurden, einschließlich aller Behandlungen und unbehandelten Kontrollparzellen, wie von der University of Nebraska Extension43 empfohlen. Diese Bewertungen wurden 24 Stunden nach der Anwendung von Pestiziden während der R5-Wachstumsphase durchgeführt.
Ertragsdaten
Sojabohnen wurden geerntet, und der Ertrag wurde in Scheffeln pro Acre mit einem Mähdrescherbein und einem Getreidemesser-Wiegesystem gemessen. Die Ertragsmessungen wurden auf 13 % Feuchtigkeit angepasst. Die Plots hatten jeweils 6 Reihen; Nur die 4 mittleren Reihen wurden für die Ertragsmessung geerntet.
Statistische Analyse
Alle Statistiken wurden in R42 durchgeführt. Die Daten wurden entweder mit Mixed-Effects-Linearmodellen über das lme4-Paket44 oder mit Beta-Regression über das glmmTMB-Paket45 analysiert. Die Rohdaten von BuzzDetect sind in den ergänzenden Materialien verfügbar. Für diese Studie wurden drei Haupttypen von Daten analysiert. Durchschnittliche Bienenaktivitätsdaten über einen Zeitraum von 1 Stunde und 8 Stunden nach einer Pestizidbehandlung, der Ertrag jeder Sojabohnenparzelle und die Entlaubung der Sojabohnen, beobachtet in der R5-Wachstumsphase.
Die durchschnittliche Bienenaktivität wurde ermittelt, indem der Anteil der positiven Zeit für das Bienensummen in einem 8-Stunden- oder 1-Stunden-Fenster berechnet wurde. Das 1-Stunden-Zeitfenster soll die akuten Auswirkungen der Anwendung von Pestiziden auf die Bienenaktivität abschätzen, während das 8-Stunden-Zeitfenster die akuten und Restwirkungen abschätzen soll. Für Alpha-Cypermethrin liegen keine Resttoxizitätsdaten vor, aber die Resttoxizität für andere Pyrethroiden wurde mit ~8 Stunden nach der Erstanwendung46 Stunden angegeben. Da die Berechnung der Bienenaktivität ein Anteil ist, wurden Unterschiede in der Aktivität mittels Beta-Regression analysiert, die mit dem R-Paket "glmmTMB" durchgeführt wurde. Die Modelle untersuchten durchschnittliche Nachweisraten für entweder 1 oder 8 Stunden nach einer Pestizidanwendung und wie diese beim Vergleich behandelter Parzellen mit Kontrollflächen (der "gesprühte" Zustand), der Wachstumsphase der Sojabohnen, der Tageszeit des Pestizids oder einer Wachstumsphase und Tagesinteraktion variierten. Der Vergleich zwischen behandelten und Kontrolldiagrammen wird durch die Variable "gesprüht" in den 1-Stunden- und 8-Stunden-Modellformeln referenziert.
Im Modell des 1-Stunden-Fensters waren die festen Effekte der "gesprühte" Zustand, die Wachstumsphase, die Tageszeit sowie der Wachstumsphase und die Tageszeit. Das Modell enthielt sowohl ein Jahr als auch ein Jahr nach Standort als Interaktionsterm als Zufallseffekte. Die vollständige Modellformel war:
(1)
Die variable Detektionsrate spiegelt die durchschnittlichen Bienennachweise wider, die relativ zum gesamten Beobachtungsfenster beobachtet wurden – in diesem Fall 1 Stunde. Die gesprühte Variable entspricht, ob ein Flächen eine Pestizidanwendung erhalten hat oder ob es sich um eine unbehandelte Kontrollfläche handelte. Die variable time_of_day entspricht, ob die Nachweise nach der Pestizidanwendung am Vormittag oder am Mittag für den gewünschten Zeitraum erfasst wurden. Die variable Stufe entspricht der Wachstumsphase, in der die Nachweise erfasst wurden.
Im 8-Stunden-Fenstermodell waren die festen Effekte die Wachstumsphase und der "gesprühte" Zustand. Das 8-Stunden-Modell beinhaltet die Nachtstunden für die Mittagssprühzeit, was einen unfairen Vergleich zwischen Vormittags- und Mittagssprühzeiten ergibt. Dies liegt daran, dass die Applikationszeiten am Mittag nicht die vollen 8 Stunden Resttoxizität testen, da die Bienen abends inaktiv sind – ein großer Teil dieser 8-Stunden-Zeitfenster. Daher wurden mittags Anwendungen aus dem Modell ausgeschlossen, ebenso wie die Begriffe "Tageszeit" und "Tageszeit:Bühne". Die vollständige Formel für dieses Modell lautete:
(2)
Die Variablen Erkennungsrate, Sprührate und Stufe haben in dieser Formel dieselbe Bedeutung wie in der Formel für die 1-Stunden-Fenster. Der einzige Unterschied besteht darin, dass die variable Erkennungsrate für ein 8-Stunden-Zeitfenster berechnet wird. Die Ertragsdaten wurden mit einem linearen Modell mit gemischten Effekten analysiert. Das Modell betrachtete die Scheffel pro Acre pro Parzelle und wie der Ertrag je nach Behandlung variierte. Der feste Effekt im Modell war die Behandlung, und Standort und Jahr wurden als zufällige Effekte angepasst. Die vollständige Modellformel wird geschrieben als:
(3)
Die Entlaubung von Sojabohnenblättern wurde als durchschnittlicher Prozentsatz der fehlenden Blattoberfläche pro Parzelle gemessen. Ein lineares Modell mit gemischten Effekten wurde verwendet, um die Wirkung der Tageszeit der Pestizidanwendung auf den Entlaubungsprozentsatz zu vergleichen. Der feste Effekt im Modell war die Tageszeit, zu der die Flächen besprüht wurden. Standort und Jahr wurden als zufällige Effekte angepasst. Die vollständige Modellformel lautet:
(4)
Alle in dieser Studie verwendeten Protokolle sind in Supplementary File 1 zusammengefasst.