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Die ethische Genehmigung wurde vom IATRC-Überprüfungsgremium eingeholt. Alle Verfahren mit menschlichen Urinproben entsprachen den Grundsätzen der Erklärung von Helsinki. Von allen Teilnehmern wurde eine schriftliche informierte Zustimmung eingeholt, und alle Proben wurden anonymisiert, um die Vertraulichkeit zu schützen.
Sensordesign und numerische Simulation
Der erste Schritt bei der Konstruktion eines Sensors ist die Durchführung einer elektromagnetischen Simulation. Das CST Microwave Studio wird verwendet, um das Layout zu gestalten, das einen Resonator aus einer kreisförmigen Spiralinduktivität (CSI) in Reihe mit einem Interdigitalkondensator (IDC) umfasst. Es gibt einen Verbindungspunkt für eine Fernbeziehung zwischen diesen Teilen, der es ihnen ermöglicht, optischzusammenzuarbeiten. Zur Leistungssteigerung werden zwei Hilbert-Fraktal-Bruch-Stubs an die CSI-IDC-Verbindung angebracht, um elektromagnetische Feldfringe und Verzerrungen zu reduzieren. Eine Backloop-Struktur wird der Massefläche hinzugefügt, um die Band-Refusfilter-Antwort stabiler zu machen und die Messgenauigkeit26 zu verbessern. Das Design funktioniert am besten auf einem standardisierten, kostengünstigen FR4-Substrat (εr≈ 4,3, Dicke 1,6 mm) und hat eine Hauptbetriebsresonanz bei 1,22 GHz. Wir nutzten Software, um ein äquivalentes Lumped-Element-Schaltungsmodell zu erstellen und zu analysieren, um die simulierten S-Parameter zu überprüfen. Dies stellte sicher, dass die Ergebnisse der Vollwellen-elektromagnetischen und Schaltungssimulationen identischwaren. Die Wahl von LDR als optisches Transduzierelement wurde durch seine deutlichen Vorteile in dieser speziellen Mikrowellenmessarchitektur vorangetrieben. Im Gegensatz zu Photodioden oder Phototransistoren, die komplexe Vorspannungsschaltungen benötigen und eine nichtlineare Strom-Licht-Beziehung bieten, bietet der LDR eine passive, lineare und weitreichende resistive Modulation als Reaktion auf einfallende Lichtintensität. Diese lineare Verschiebung des Widerstands moduliert direkt S21 des benachbarten Mikrowellenresonators, ohne aktives Schaltungsrauschen einzuführen oder zusätzliche Signalaufbereitung erforderlich zu machen. Darüber hinaus entsprechen die kostengünstigen Kosten, der kompakte Fußabdruck und die nahtlose Integration des FR4-Substrats – ohne externe Vorrichtungslinien – mit dem übergeordneten Designziel eines einfachen, kostengünstigen und nicht-invasiven Point-of-Care-Sensors.
Um den vorgeschlagenen Sensor im weiteren Kontext der Harnstofferkennungstechnologien einzuordnen, ist ein kurzer Vergleich mit etablierten Methoden angebracht. Biochemische Tests wie die enzymatische Urease-Methode stellen den klinischen Goldstandard dar und bieten hohe Genauigkeit und Empfindlichkeit (Nachweisgrenzen bis zu 1–5 mg/dL), erfordern jedoch spezialisierte Laborausrüstung, geschultes Personal und typische Bearbeitungszeiten von 30–60 Minuten, was ihren Nutzen in Point-of-Care-Umgebungen einschränkt. Enzymatische Teststreifen bieten eine schnelle (2–5 Min.), kostengünstige, halbquantitative Alternative, die sich für den Hausgebrauch eignet; Sie verlassen sich jedoch auf kolorimetrische Interpretation, die subjektiv sein kann, und bieten eine begrenzte Empfindlichkeit für präzise Konzentrationsmessungen. Elektrochemische Sensoren, einschließlich amperometrischer und potentiometrischer Harnstoffbiosensoren, erreichen eine hohe Empfindlichkeit und ermöglichen eine Echtzeiterkennung, benötigen jedoch oft komplexe Elektrodenfertigung und Enzymimmobilisierung und leiden unter Stabilitätsproblemen aufgrund des Enzymabbaus im Laufe der Zeit. Im Gegensatz dazu bietet der vorgeschlagene optisch gesteuerte Mikrowellensensor eine einzigartige Kombination von Eigenschaften: Nicht-invasive optische Kopplung eliminiert direkten Probenkontakt mit Sensorelementen und verringert so das Kontaminationsrisiko; Die Messzeit beträgt unter 30 Sekunden; die Herstellung auf kostengünstigem FR4-Substrat minimiert die Kosten; und die lineare Beziehung zwischen Harnstoffkonzentration und Insertionsverlust (S21) vereinfacht die Kalibrierung. Während die aktuelle Empfindlichkeit (1,42 × 10–4 pro mg/mol/cm3) für die kategorische Klassifizierung klinisch relevanter Harnstoffbereiche (150–450 mg/dL) geeignet ist, kann eine weitere Optimierung die Nachweisgrenzen erhöhen, die mit elektrochemischen Gegenstücken vergleichbar sind. Insgesamt nimmt der Sensor eine ergänzende Nische ein, da er Einfachheit, Geschwindigkeit und Portabilität für Point-of-Care-Anwendungen priorisiert, bei denen laborreife Präzision nicht unerlässlich ist.
Sensorfertigung
Die Standardphotolithographie verlagert das fertige Design auf eine einseitige, kupferbeschichtete FR4-Platte. Eine hochauflösende Photomaske wird verwendet, um das Sensormuster auf einem mit Photoresist laminierten Substrat zu erzeugen. Das Muster wird dann entwickelt und in einer Lösung aus Eisenchlorid (FeCl₃) geätzt. Nach dem Ätzen und Reinigen werden SubMiniature Version A (SMA)-Stecker sorgfältig an die Ein- und Ausgangs-Mikrostreifenports gelötet, sodass Messgeräte28 angeschlossen werden können. Dieser Prozess erschafft einen funktionierenden, niedrigprofiligen Sensor, der testbereit ist.
Experimenteller Aufbau und Kalibrierung
Mit hochwertigen Koaxialkabeln wird der zusammengesetzte Sensor an einen Vektornetzwerkanalysator (VNA) angeschlossen, ähnlich einer Agilent-PNA-Serie. Mit einem mechanischen Kalibrierungskit wird an den Kabelenden eine vollständige Zwei-Port-Kalibrierung (Open, Short, Load, Through) durchgeführt, um systematische Messfehler zu beseitigen. Um die S-Parameter des Sensors zu messen, ist die VNA so eingestellt, dass sie von 0,1 GHz bis 4 GHz mit einer Ausgangsleistung von -10 dBm29 speept.
Vorbereitung und Messverfahren der Urinprobe
Teilnehmer, die sich bereit erklären, ihre Urinproben abzugeben, werden gebeten, dies zu tun. Zur Messung wird eine feste Testplattform eingerichtet: Ein LDR wird direkt unter einem sauberen Glasträger platziert, der über dem aktiven Bereich des Sensors zentriert ist. Zunächst wird eineBaseline-S-21-Messung durchgeführt, wobei das LDR von einer Lichtquelle mit konstanter Intensität und ohne vorhandene Probe beleuchtet wird. Anschließend wird ein 0,01 ml starker Urintropfen auf die Mitte des Glasträgers pipettiert. DasS-21-Spektrum wird erneut mit derselben Lichtmenge aufgezeichnet. Die optischen Eigenschaften der Probe, die vom Harnstoff abhängen, verändern den Widerstand des LDR, was eine messbare Änderung der | des Sensors verursachtS21| bei 1,22 GHz30. Um Kreuzkontamination zu vermeiden, wird der Glasträger zwischen den Probenmessungen mit destilliertem Wasser und Ethanol gereinigt. Frische Urinproben wurden von zehn gesunden Freiwilligen entnommen (fünf männlich, fünf weiblich; Alter 25–45 Jahre). Die Ausgangswerte der Harnstoffkonzentrationen, gemessen mit einem klinischen Chemie-Analysator, lagen zwischen 150 und 450 mg/dL. Um einen kontrollierten Testbereich festzulegen, wurden die Proben in drei Konzentrationsgruppen eingeteilt: niedrig (150–250 mg/dL), intermediär (251–350 mg/dL) und hoch (351–450 mg/dL), mit zehn Proben pro Kategorie. Alle Proben wurden innerhalb von 2 Stunden nach der Entnahme analysiert, bei Nichtgebrauch bei 4 °C gelagert und vor der Messung auf Raumtemperatur ausgeglichen. Für jeden Test wurde ein 0,01 mL Aliquot auf einen sauberen Glasträger angewendet, wobei die Objektträger zwischen den Messungen mit 70 % Ethanol und destilliertem Wasser gereinigt wurden, um Kreuzkontaminationzu verhindern.
Datenerfassung und -analyse
Die wichtigste Information aus jeder Messung ist die Größe von S21 (in dB) bei der Resonanz von 1,22 GHz. Dieser Datensatz wird verwendet, um einen K-Nearest Neighbors (KNN)-Algorithmus zu lehren, der in einem Programm wie MATLAB läuft. Das Modell verwendet die Magnitude S21 , um Harnstoffspiegel in Gruppen wie "niedrig", "mittler" und "hoch" 31 einzuordnen. Außerdem kann die Konzentrationsempfindlichkeit des Sensors gemessen werden, indem die Änderung in |S21| (Δ|S21|) gegen die Veränderung der Harnstoffkonzentration (ΔC). Die Steigung dieser linearen Beziehung, C = ΔS / ΔC, zeigt die Empfindlichkeit. Um die Sensorrobustheit und Messzuverlässigkeit zu bewerten, wurde eine Wiederholbarkeitsstudie mit 45 Messungen pro Harnstoffkonzentrationskategorie (niedrig: 150–250 mg/dL, Zwischenwert: 251–350 mg/dL, hoch: 351–450 mg/dL) über drei unabhängige Tage durchgeführt, insgesamt 135 Messungen. Der Variationskoeffizient lag in allen Kategorien zwischen 0,67 % und 1,07 %, was auf eine ausgezeichnete Messwiederholbarkeit hinweist. Die Messunsicherheit wurde gemäß dem Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement (GUM)-Rahmen quantifiziert, der Typ-A-Unsicherheit (statistische Variation aus wiederholten Messungen) mit Typ-B-Beiträgen aus der VNA-Kalibrierung (±0,05 dB), Temperaturschwankungen (±0,01 dB/°C) und Variationen der Probenpositionierung (±0,02 dB) kombinierte. Die erweiterte Unsicherheit (k=2, 95%-Konfidenzintervall) reichte je nach Konzentrationskategorie zwischen ±0,38 dB und ±0,56 dB. Die Konzentrationsempfindlichkeit, abgeleitet aus der linearen Regression von Δ|S21| im Vergleich zu ΔC wurde berechnet mit 1,42 × 10-4 pro (mg/mol/cm3), mit einem 95%-Konfidenzintervall von 1,35 × 10-4 bis 1,49 × 10-4 pro (mg/mol/cm3) und einem Bestimmungskoeffizienten (R2) von 0,94. Die relative erweiterte Unsicherheit in der Empfindlichkeit betrug ±6,2 % (k = 2), was bestätigt, dass die berichtete Empfindlichkeit statistisch robust ist und der Sensor eine reproduzierbare Leistung zeigt, die für Point-of-Care-Anwendungen geeignet ist.