Fünf-Geschmacks-Sophora flavescens enterisch beschichtete Kapseln lindern experimentelle Kolitis und ferroptosbedingte Veränderungen

Zusammenfassung

In einem Mausmodell der ulcerösen Kolitis linderten fünfgeschmackige Sophora flavescens enterisch beschichtete Kapseln Darmschäden und verbesserten oxidativen Stress, entzündliche Zytokin-Ungleichgewichte, JAK2/STAT3-Signalübertragung sowie Veränderungen der ferroptosebedingten Marker.

Zusammenfassung

Colitis ulcerosa bleibt schwer zu behandeln, da wirksame und gezielte therapeutische Optionen begrenzt sind und oxidativer Stress, entzündliche Signale sowie regulierte Zelltodswege zu Schleimhautschäden beitragen können. Diese Studie bewertete, ob fünfgeschmackige Sophora flavescens enterisch beschichtete Kapseln (FSEC) experimentelle Kolitis lindern und untersuchte damit verbundene Veränderungen von oxidativem Stress, Entzündung und Markern der Ferroptose. Ein Mausmodell der Colitis ulcerosa wurde unter Verwendung einer zyklischen Exposition gegenüber 2,5 % Dextran-Sulfatnatrium in Kombination mit der Tumornekrosefaktor-Alpha-Herausforderung entwickelt. Mäuse wurden mit niedrig-, mittel- oder hochdosiertem FSEC oder mit dem TLR4-Antagonisten CRX-526 als positive Kontrollmaßnahme behandelt. Die Colon-Histopathologie wurde mittels Hämatoxylin- und Eosinfärbung untersucht. Serum-Superoxid-Dismutase-, Katalase-, Glutathion-, Myeloperoxidase- und^Fe-2⁺-Spiegel wurden mittels biochemischer Tests gemessen. Zytokine des Darmgewebes wurden durch enzymgekoppelte Immunsorbent-Tests quantifiziert, die Expression von JAK2 und STAT3 wurde durch Immunhistochemie untersucht, und die Expression von GPX4, FTH1 und ACSL4 wurde mittels Western Blotting analysiert. Die FSEC-Behandlung reduzierte Schäden an der Darmschleimhaut und die Infiltration von entzündlichen Zellen, erhöhten Antioxidantienindizes und senkten die Myeloperoxidasespiegel. FSEC senkte außerdem die TNF-α- und IL-1α-Spiegel, stellte die IL-13-Spiegel teilweise wieder her und war mit einer schwächeren JAK2- und STAT3-Immunfärbung assoziiert. Parallel dazu verbesserte FSEC ferroptos-bezogene Markeränderungen, darunter reduzierte Fe²⁺- und ACSL4-Spiegel sowie erhöhte GPX4- und FTH1-Expressionen. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass FSEC die experimentelle Colitis ulcerosa bei Mäusen lindert, zumindest teilweise durch die Verbesserung des oxidativen Stressstatus, die Moderierung der entzündlichen Signalgebung und die Wiederherstellung ferroptos-bezogener Markerprofile.

Einleitung

Colitis ulcerosa (UC) ist eine chronische entzündliche Erkrankung, die hauptsächlich die Darm- und Rektalschleimhaut betrifft und durch wiederkehrende Episoden von Schleimhautentzündung, Ulzeration und beeinträchtigter Barrierefunktion^{gekennzeichnet ist.} Obwohl genetische Anfälligkeit, Umweltfaktoren, Dysfunktion der epithelialen Barriere und Immundysregulation an der UC-Pathogenese beteiligt sind, sind die Mechanismen, die der anhaltenden Schleimhautverletzung zugrunde liegen, weiterhin unvollständig verstanden. Aktuelle pharmakologische Behandlungen, darunter Aminosalicylate, Kortikosteroide, Immunsuppressiva und biologische Wirkstoffe, können die Krankheitsaktivität bei vielen Patienten verringern; Ihre klinische Anwendung kann jedoch durch Rückfälle nach Abbruch der Behandlung, Nebenwirkungen, hohe Kosten und unvollständige therapeutische Wirkungen eingeschränkt^{sein 3}.

Ferroptose, eine eisenabhängige Form des regulierten Zelltodes, die durch Lipidperoxidation und veränderten Eisenstoffwechsel gekennzeichnet ist, wird zunehmend mit Darmentzündungen und UC-assoziierten Epithelschädenⁱⁿ Verbindung ^gebracht. Parallel dazu haben traditionelle chinesische Medizinformulierungen zunehmend Aufmerksamkeit als komplementäre Ansätze für die Behandlung von UC erregt, da sie ihr multizielreiches therapeutisches Potenzial⁹.

Fünf-Geschmacks-Sophora flavescens enterisch beschichtete Kapseln (FSEC) werden klinisch zur Behandlung von leichter bis moderat aktiver UC in der traditionellen chinesischen Medizin eingesetzt. Frühere Studien deuten darauf hin, dass FSEC die Symptome von UC durch Multi-Komponenten- und Multi-Ziel-Mechanismen verbessern^{kann 10}. Die Auswirkungen von FSEC auf oxidativen Stress, entzündliche Signalübertragung, JAK2/STAT3-Aktivität und ferroptosebedingte Veränderungen bei experimentellen UC sind jedoch weiterhin unzureichend charakterisiert.

Oxidativer Stress und entzündliche Signalübertragungen sind wichtige Ursachen für Darmschleimhautschäden bei UC. Eine übermäßige Produktion reaktiver Sauerstoffspezies kann die Epithelintegrität stören, die Infiltration von Entzündungszellen fördern und die antioxidative Abwehrsysteme beeinträchtigen. Zytokin-vermittelte Signalwege wie die JAK2/STAT3-Signalübertragung tragen zur inflammatorischen Amplifikation und Gewebeschädigung^bei 11,12,13,14,15. Darüber hinaus sind oxidativer Stress und Ferroptose eng miteinander verbunden durch Veränderungen der antioxidativen Abwehr, des Eisenstoffwechsels und der Lipidperoxidation 16,17,18,19,20. Daher kann die gleichzeitige Evaluation von oxidativen Stressindizen, entzündlichen Zytokinen, JAK2/STAT3-Signalgebung und ferroptose-bezogenen Markern ein umfassenderes Verständnis der mukosalen Verletzungen und therapeutischer Reaktionen im experimentellen UC ermöglichen.

In der vorliegenden Studie wurde ein zyklisches Dextransulfat-Natrium- und Tumornekrosefaktor-Alpha-Challenged-Mausmodell verwendet, um die Auswirkungen von niedrig-, mittel- und hochdosiertem FSEC zu bewerten. Eine zentrale methodologische Stärke dieses Designs ist die Integration der histopathologischen Beurteilung mit Messungen von serumoxidativen Stressindexen, Kolongewebezytokinen, JAK2/STAT3-Immunhistochemie und Western-Blot-Analyse ferroptos-bezogener Proteine innerhalb eines einzigen experimentellen Rahmens. Dieser Ansatz wurde verwendet, um zu bestimmen, ob FSEC experimentelle UC lindert und um assoziierte Veränderungen von oxidativem Stress, entzündlicher Signalgebung und ferroptose-bezogenen Markerprofilen zu charakterisieren. Das gesamte experimentelle Design und der analytische Workflow sind in Abbildung 1 zusammengefasst.

Abbildung 1: Experimenteller Workflow des Mausmodells und nachgelagerte Analysen. Die chronische experimentelle ulcerative Kolitis wurde durch zyklische Exposition gegenüber 2,5 % Dextransulfatnatrium (DSS) in Kombination mit der Tumornekrosefaktor-Alpha-Herausforderung (TNF-α) in der letzten Woche des experimentellen Protokolls ausgelöst. Die Mäuse wurden den normalen Kontrollgruppen, Modell-, niedrigdosierten FSEC-, mitteldosierten FSEC-, hochdosierten FSEC- und CRX-526-Positivkontrollgruppen zugeordnet. FSEC wurde intragastrisch verabreicht in Dosen von 108, 216 oder 432 mg/kg Körpergewicht. CRX-526 wurde als positive Kontrollintervention eingesetzt. Nach der Abschlussbehandlung wurden Proben für histopathologische Bewertungen, biochemische Tests im Zusammenhang mit oxidativem Stress, Zytokinanalysen mit ELISA, Immunhistochemie und Western-Blot-Analyse entnommen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.

Protokoll

Alle Tierverfahren wurden vom Tierschutz- und Ethikausschuss des Nanchang Medical College überprüft und genehmigt (Genehmigungsnummer NY2SC 20250407). Alle Experimente wurden gemäß institutionellen Richtlinien für die Pflege und Nutzung von Labortieren durchgeführt. Die Chemikalien, Reagenzien und Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.

1. Tiere und Behandlung

Männliche C57BL/6J-Mäuse (Wildtyp, 8 Wochen alt) wurden in dieser Studie verwendet. Die Tiere wurden unter standardisierten Laborbedingungen mit kontrollierter Temperatur und Luftfeuchtigkeit gehalten und erhielten freien Zugang zu Futter und Wasser. Nach der Akklimatisierung wurde die chronische Kolitis durch die Verabreichung von drei Zyklen von 2,5 % Dextransulfatnatrium (DSS) im Trinkwasser ausgelöst. Jeder Zyklus dauerte eine Woche und wurde durch eine zweiwöchige Erholungsphase mit regelmäßigem Trinkwasser getrennt. In der letzten Woche des experimentellen Protokolls erhielten die Mäuse in der Modell- und Behandlungsgruppe den Tumornekrosefaktor Alpha (TNF-α; 10 μg/100 g Körpergewicht, zweimal täglich) durch intragastrische Gavage, um die Darmverletzung weiter zu verschlimmern. Normale Kontrollmäuse erhielten nur Vehicle und wurden weder DSS noch TNF-α ausgesetzt.

Fünf-Geschmacks-Sophora flavescens enterisch beschichtete Kapseln (FSEC) wurden als kommerziell erhältliches, zugelassenes chinesisches Patentmedikament verwendet. Die Formulierung enthielt Sophora flavescens Aiton, Sanguisorba officinalis L., Indigo naturalis, Bletilla striata (Thunb.) Rchb.f. und Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC. Der Kapselinhalt aus derselben Produktionscharge wurde gewogen und in sterilem destilliertem Wasser suspendiert, um frische Dosierungssuspensionen vor der Verabreichung herzustellen. Die Aufhängungen wurden vor jeder Streuung gründlich gemischt, um eine gleichmäßige Verteilung zu gewährleisten. Produktherkunft, Zulassungsnummer, pharmazeutische Spezifikationen und Qualitätskontrollinformationen sind in der Materialtabelle angegeben. Die Produktqualität wurde gemäß der genehmigten pharmazeutischen Spezifikation und vom Hersteller bereitgestellten Informationen beschrieben, einschließlich Kapselspezifikationen, Aussehen, Anforderungen an enterische Freisetzung und Desintegration, mikrobielle Grenzwerte sowie Qualitätskontrollstandards.

FSEC-behandelte Mäuse erhielten in der letzten Modellwoche zweimal täglich niedrig dosierte FSEC (108 mg/kg Körpergewicht), mitteldosierte FSEC (216 mg/kg Körpergewicht) oder hochdosierte FSEC (432 mg/kg Körpergewicht) durch intragastrische Gavage. Die Dosiswerte wurden anhand der zugelassenen klinischen Dosis, der Umwandlung von Körperoberfläche und vorläufigen Dosisbereichsüberlegungen ausgewählt. Fahrzeugbehandelte Mäuse erhielten durch intragastrisches Gavage das gleiche Volumen steriles destilliertes Wasser.

Die positive Kontrollgruppe erhielt in der letzten Modellwoche den TLR4-Antagonisten CRX-526 mit 1 mg/kg per Tail Vin Injection. CRX-526 wurde als Referenz für entzündungshemmende Interventionen verwendet. Die Studie umfasste sechs Gruppen (n = 6 pro Gruppe): normale Kontrollgruppe, Modellgruppe, niedrig dosierte FSEC, mitteldosierte FSEC, hochdosierte FSEC und CRX-526 positive Kontrollgruppe. Die Mäuse wurden 24 Stunden nach der letzten Studienbehandlung geopfert. Die Euthanasie wurde durch zervikale Verrenkung unter Isoflurananästhesie gemäß den institutionellen Richtlinien für die Pflege und Nutzung von Labortieren durchgeführt.

2. Histologische Untersuchung mittels Hämatoxylin- und Eosinfärbung

Darmgewebe wurde aus der makroskopisch am stärksten betroffenen Region zwischen Anus und ileozekalem Bereich entnommen. Für jede Maus wurde ein repräsentatives Dickdarmsegment aus dieser Region mit 10 % neutralem Formalin fixiert, in Paraffin eingebettet, mit Hämatoxylin und Eosin geschnitten und gefärbt. Für die histologische Bewertung wurden von jedem Tier mindestens drei Schnitte vorbereitet, und pro Schnitt wurden fünf nicht überlappende Hochleistungsfelder untersucht. Die Felder wurden systematisch zufällig ausgewählt, indem der Abschnitt von einer Kante zur anderen gescannt wurde, wobei aufgerissene, gefaltete oder stark verfärbte Bereiche vermieden wurden. Histopathologische Veränderungen, darunter Schleimhautulzeration, Drüsenzerstörung, Verstopfung und inflammatorische Zellinfiltration, wurden unter Lichtmikroskopie untersucht.

3. Messung von oxidativ-stressbezogenen biochemischen Indikatoren

Blutproben (0,5 ml) wurden in gerinnungsmittelhaltigen Röhrchen entnommen und bei etwa 1160 × g für 10 Minuten bei 4 °C zentrifugiert. Der Supernatant wurde gesammelt und verwendet, um Serumeisen-, Superoxiddismutase (SOD), Glutathion (GSH), Katalase (CAT) und Myeloperoxidase (MPO) mit den entsprechenden Assay-Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers in der Materialtabelle zu messen.

4. Immunhistochemische Analyse von JAK2 und STAT3

Paraffin-eingebettete Darmgewebeschnitte (5 μm) wurden in Xylol deparaffinisiert, durch eine graduierte Ethanolserie rehydratisiert und mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung abgespült. Die Antigenentnahme erfolgte im Citratpuffer (pH 6,0) unter Verwendung von Mikrowellenheizung. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die endogene Peroxidase-Aktivität mit 3 % H₂O₂ für 10 Minuten blockiert. Die Schnitte wurden mit 5 % normalem Ziegenserum für 30 Minuten bei Zimmertemperatur blockiert und über Nacht bei 4 °C mit primären Antikörpern gegen JAK2 und STAT3 bei Verdünnungen von 1:50 bzw. 1:80 inkubiert. Nach phosphatgepufferten Kochsalzlösungswashen wurden Abschnitte gemäß den Anweisungen des Herstellers mit einem Meerrettichperoxidase-konjugierten Sekundärantikörper inkubiert. Immunreaktive Signale wurden mit 3,3′-Diaminobenzidin visualisiert, und die Kerne wurden mit Hämatoxylin gegenfärbt. Schnitte wurden ausgetrocknet, montiert und unter einem Lichtmikroskop untersucht.

5. Zytokinquantifizierung durch enzymgekoppelten Immunsorbent-Assay

Das Darmgewebe wurde in 2–3 mm große^3-Stücke geschnitten, auf Eis in phosphatgepufferter Kochsalzlösung homogenisiert und bei 12.000 × g für 15 Minuten bei 4 °C zentrifugiert. Der Supernatant wurde gesammelt, und die Konzentrationen von TNF-α, IL-1α und IL-13 wurden mit den entsprechenden ELISA-Bausätzen gemäß den Anweisungen des Herstellers gemessen. Die Absorptionswerte wurden mit einem Mikroplatten-Leser gemessen, und die Zytokinkonzentrationen wurden anhand von Standardkurven berechnet, die für jeden Test erzeugt wurden.

6. Westliche Blot-Analyse ferroptos-bezogener Proteine

Gesamtproteine wurden aus dem Dickdarmgewebe extrahiert und die Proteinkonzentrationen mittels eines Bicinchinainsäure-Tests bestimmt. Gleiche Mengen Protein aus jeder Probe wurden durch SDS-PAGE getrennt und auf Membranen übertragen. Nach der Blockierung mit 5 % fettfreier Milch oder einem gleichwertigen Blockpuffer für 2 Stunden bei Raumtemperatur wurden die Membranen über Nacht bei 4 °C mit primären Antikörpern gegen GPX4, FTH1, ACSL4 und das Loading-Control-Protein β-Aktin, wie in der Materialtabelle aufgeführt, inkubiert. Am folgenden Tag wurden die Membranen gewaschen und mit dem entsprechenden Meerrettichperoxidase-konjugierten sekundären Antikörper für 2 Stunden bei Zimmertemperatur inkubiert. Die Proteinbänder wurden mit einem chemilumineszenten Substrat visualisiert und mit einem chemilumineszenten Bildgebungssystem abgebildet. Die Bandintensitäten wurden mit Densitometrie-Software quantifiziert. Die Expressionsniveaus von GPX4, FTH1 und ACSL4 wurden auf β-Aktin normalisiert, und die relative Proteinexpression wurde zur statistischen Analyse berechnet.

7. Statistische Analyse

Die Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt. Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden mittels einer Einweg-Varianzanalyse durchgeführt, gefolgt von Bonferronis Post-hoc-Test, wenn die Annahmen von Normalität und Homogenität der Varianz erfüllt waren. Ein Wert von P < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.

Ergebnisse

FSEC lindert histopathologische Schäden und verbessert oxidativ-stressbedingte Indizes bei Mäusen mit Colitis ulcerosa
Wie in Abbildung 2 gezeigt, zeigte die normale Kontrollgruppe eine intakte Darmschleimhautarchitektur mit gut organisierten Drüsen und minimaler Infiltration von entzündlichen Zen. Im Gegensatz dazu zeigte die Modellgruppe eine schwere Schleimhautverletzung, die durch Epithelstörungen, Schleimhautulzeration, Drüsenzerstör...

Diskussion

Diese Studie untersuchte die Auswirkungen von fünfgeschmackigen Sophora flavescens enterisch beschichteten Kapseln (FSEC) in einem Mausmodell der experimentellen ulcerösen Kolitis (UC) und bewertete die damit verbundenen Veränderungen der oxidativ-stressbezogenen Indizes, entzündlichen Zytokine, JAK2/STAT3-Signalgebung und ferroptosebezogenen Markern. Die Hauptbefunde waren, dass die FSEC-Behandlung die histopathologische Schädigung des Darms linderte, die biochemischen Indizes ...

Materialien

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Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
3,3′-Diaminobenzidin (DAB) Substrat-Kit	ZSGB-BIO	ZLI-9018	Chromogenes Substrat für HRP-basierte Immunhistochemie.
ACSL4 Antikörper (F-4)	Santa Cruz Biotechnology	sc-365230	Maus-monoklonaler Primärantikörper für Western Blot; verwendet bei 1:500; RRID: AB_10842002.
Antigen-Retrieval-Lösung, Citratpuffer, pH 6,0	Beyotime Biotechnology	P0081	Hitzeinduzierter Epitop-Retrieval-Puffer für die Immunhistochemie von Paraffinschnitten.
BCA-Protein-Assay-Kit	Beyotime Biotechnology	P0012	Proteinquantifizierung vor Western Blotting.
C57BL/6J Mäuse	Fujian Anburui Biotechnology Co., Ltd.	N/A	Männliche SPF-Mäuse, 8 Wochen alt; Tierquelle konsistent mit den eingereichten Ethikgenehmigungsmaterialien.
Katalase (CAT) Assay-Kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A007-1-1	Kolorimetrisches Kit zur Messung der Serum-CAT-Aktivität.
ChemiDoc XRS+ Bildgebungssystem	Bio-Rad Laboratories	1708265	Chemilumineszenz-Bildgebungssystem für Western Blot-Erkennung.
CRX-526	TargetMol	T27090	TLR4-Antagonist, der als positive Kontrollintervention verwendet wird; CAS-Nr. 245515-64-4.
Dextransulfat-Natriumsalz (DSS), Kolitis-Grad	MP Biomedicals	160110	DSS, Kolitis-Grad, Molekulargewicht 36.000–50.000 Da; verwendet bei 2,5% im Trinkwasser.
ECL-Chemilumineszenz-Substrat	Bio-Rad Laboratories	1705061	Clarity Western ECL Substrat für die HRP-basierte Western Blot-Signalerkennung.
ELISA-Kit, Maus IL-13	Abcam	ab219634	Kolorimetrisches Sandwich-ELISA-Kit für die Quantifizierung von Maus-IL-13; 450 nm-Messung.
ELISA-Kit, Maus IL-1α	Abcam	ab199076	Kolorimetrisches Sandwich-ELISA-Kit für die Quantifizierung von Maus-IL-1α; 450 nm-Messung.
ELISA-Kit, Maus TNF-α	Abcam	ab208348	Kolorimetrisches Sandwich-ELISA-Kit für die Quantifizierung von Maus-TNF-α; 450 nm-Messung.
Ethanol, absolut	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	10009218	Verwendet für Gewebeverarbeitung, Dehydratisierung und Reagenzzubereitung.
Ferrous-Eisen (Fe2+) Assay-Kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A039-2-1	Kolorimetrisches Kit zur Fe2+-Messung in Serum- oder Gewebeproben.
Fünf-Geschmack Sophora flavescens enterisch beschichtete Kapseln	Beijing Zhonghui Pharmaceutical Co., Ltd.	NMPA-Zulassungs-Nr. Z20150002	Chinesisches Patentmedikament; 0,4 g/Kapsel; Formulierung umfasst Sophora flavescens Aiton, Sanguisorba officinalis L., Indigo naturalis, Bletilla striata (Thunb.) Rchb.f. und Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC.; pharmazeutische Spezifikation YBZ00152015
Glutathion (GSH) Assay-Kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A006-2-1	Reduziertes Glutathion-Assay-Kit zur Serum-GSH-Messung.
GPX4 Antikörper (E-12)	Santa Cruz Biotechnology	sc-166570	Maus-monoklonaler Primärantikörper für Western Blot; verwendet bei 1:500; RRID: nicht im Lieferantendatenblatt aufgeführt.
Hämatoxylin- und Eosin-Färbesatz	Solarbio	G1120	H&E-Färbung von Paraffin-eingebetteten Dickdarm-Gewebeschnitten.
Horseradish-Peroxidase-konjugierter Ziegen-Anti-Maus-IgG	Santa Cruz Biotechnology	sc-2005	Sekundärantikörper für Western Blot; verwendet bei 1:50.000; RRID: AB_631736.
ImageJ Software	National Institutes of Health	Version 1.54	Bildanalyse- und Densitometrie-Software zur Quantifizierung von Western Blot-Banden.
Immunhistochemie-Nachweis-Kit	ZSGB-BIO	PV-9000	Polymer-basiertes HRP-Nachweis-Kit für die Immunhistochemie von Paraffinschnitten.
JAK2 Antikörper (D2E12)	Cell Signaling Technology	3230	Kaninchen-monoklonaler Primärantikörper für JAK2-Immunhistochemie an Paraffinschnitten; RRID: AB_2128522.
Mikroplattenleser	BioTek Instruments	Synergy H1	Plattenleser für ELISA-Absorbanzmessung bei 450 nm.
Myeloperoxidase (MPO) Aktivität Assay-Kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A044-1-1	Kolorimetrisches Kit zur Messung der Serum-MPO-Aktivität.
Neutral gepuffertes Formalin, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128	Fixierung von Dickdarmgewebe vor der Paraffin-Einbettung.
Normales Ziegenserum	Solarbio	SL038	Blocking-Reagenz für Immunhistochemie.
Paraffin	Leica Biosystems	39601006	Einbettmedium für die Verarbeitung von Dickdarmgewebe.
Phosphat-gepuffertes Salz (PBS)	Solarbio	P1020	Puffer für Gewebehomogenisierung, Waschen und Immunfärbungsverfahren.
PVDF-Membran	MilliporeSigma	IPVH00010	Protein-Transfer-Membran für Western Blotting.
Rekombinantes Maus-TNF-α-Protein	R&D Systems	410-MT	Rekombinantes Maus-TNF-α, verwendet für die Entzündungsherausforderung in der letzten Woche.
SDS-PAGE- und Transfer-System	Bio-Rad Laboratories	1658004	Mini-PROTEAN Tetra-System für SDS-PAGE und Western Blot-Transfer-Workflow.
SPSS Statistics Software	IBM	Version 24.0	Statistische Analyse-Software für einseitige ANOVA und Bonferroni Post-hoc-Tests.
STAT3 Antikörper (124H6)	Cell Signaling Technology	9139	Maus-monoklonaler Primärantikörper für STAT3-Immunhistochemie; RRID: AB_331757.
Superoxid-Dismutase (SOD) Assay-Kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A001-3-2	WST-1-Methode-Kit zur Messung der Serum