Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Forschungsartikel

Mechanismus und experimentelle Validierung der Gesamtzahl der Flavonoide von Rhizoma drynariae bei der Behandlung von Gichtarthritis

111 Ansichten

⸱

DOI:

10.3791/70849

⸱

5. Juni 2026

 ,  , 
1School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, 2Quality department, Beijing Tongrentang Kangyang Industry Development Co., Ltd, 3Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs, Ministry of Education

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Totale Flavonoide von Rhizoma Drynariae (TFRD) lindern Gicht-Arthritis (GA), indem sie die entzündliche Zellinfiltration unterdrücken und die TNF-α-, IL-6- und IL-17A-Spiegel senken, hauptsächlich durch Hemmung der AKT-, MAPK- und NF-κB-Signalwege, was ihr entzündungshemmendes und immunmodulatorisches therapeutisches Potenzial hervorhebt.

Zusammenfassung

Gicht-Arthritis (GA) ist eine entzündliche Gelenkerkrankung, die durch die Ablagerung von Mononatriumuratkristallen (MSU) im Gelenkraum und im umliegenden Gewebe verursacht wird. In der traditionellen chinesischen Medizin wird Rhizoma Drynariae (Gusuibu) seit langem weit verbreitet in der klinischen Behandlung von GA eingesetzt, und Flavonoide gelten als seine wichtigsten bioaktiven Bestandteile. Diese Forschung nutzte Netzwerkpharmakologie, um ein Komponenten-Ziel-Netzwerk aus Gesamtflavonoiden von Rhizoma Drynariae (TFRD) gegen GA zu konstruieren und so Schlüsselkomponenten, Kernziele und verwandte Signalwege zu identifizieren. Rattenmodelle wurden durch intraartikuläre Injektion einer Mononatriumurat-Kristallsuspension hergestellt und mit TFRD oder der positiven Kontrolle Colchicin durch orale Gavage behandelt. Nach der Probenentnahme wurden die auf Netzwerk-Pharmakologie basierenden Vorhersageergebnisse anschließend mittels Rattenserummetabolomik, enzymgebundenem Immunsorbent-Assay (ELISA) und Western-Blot-Analyse validiert. Netzwerkpharmakologische Analysen zeigten, dass die anti-GA-Effekte von TFRD durch Schlüsselziele wie IL6, AKT1, TNF, EGFR, JUN und PTGS2 vermittelt werden und hauptsächlich mit entzündungs-, immun- und apoptosebezogenen Signalwegen wie den IL-17, TNF, NF-κB, MAPK, PI3K-AKT, JAK-STAT und T-Zellrezeptor-Signalwegen verbunden sind. Ebenso hat die Metabolomik auch die entscheidenden Rollen der Entzündungsreaktion aufgedeckt. Die Färbung von Hämatoxylin und Eosin (H&E) bestätigte, dass TFRD die Infiltration von Entzündungszellen reduzierte. Der ELISA-Test bestätigte, dass die TFRD-Gruppe signifikant die Expression der Entzündungsfaktoren TNF-α, IL-6 und IL-17A im Synovialgewebe hemmte. Die Western-Blot-Analyse zeigte, dass TFRD die GA-induzierte Hyperphosphorylierung von AKT, MAPK p38 und NF-κB p65 im Synovialgewebe der Ratten hemmte. TFRD kann die durch Entzündungen ausgelösten Veränderungen bei den GA-Ratten effektiv mildern, indem es verwandte Entzündungsfaktoren und -signalwege direkt moduliert.

Einleitung

Gicht-Arthritis (GA) ist eine entzündliche Gelenkerkrankung, die durch die Ablagerung von Mononatriumuratkristallen (MSU) innerhalb und um die Gelenke ausgelöst wird, welche den Gelenkbereichstimulieren. Die Pathogenese von GA beinhaltet ein komplexes Zusammenspiel aus genetischer Veranlagung, Umwelteinflüssen und metabolischer Dysregulation, die hauptsächlich durch Hyperurikämie gekennzeichnet ist, die entweder durch übermäßige Harnsäureproduktion oder unzureichende Nierenausscheidungresultiert. Dies führt zur systemischen Ansammlung von Uratkristallen im Nierengewebe und in Gelenkräumen, wo sie das angeborene Immunsystem aktivieren und intensive entzündliche Kaskadenauslösen. In den letzten Jahren haben eine Reihe von Studien gezeigt, dass die weltweite Prävalenz von GA parallel zur zunehmenden Inzidenz von Fettleibigkeit und metabolischem Syndrom gestiegen ist, was zu funktionellen Beeinträchtigungen führt und eine erhebliche sozioökonomische Belastung für Betroffene darstellt7. Die Behandlungsstrategie für Gicht-Arthritis konzentriert sich auf die Kontrolle akuter lokaler Gelenkentzündung und die Kontrolle langfristiger Harnsäurewerte 8,9. Dennoch ist der Nutzen bestehender Pharmakotherapien oft durch ihre Nebenwirkungsprofile und spezifische Kontraindikationen eingeschränkt. Beispielsweise werden nichtsteroidale entzündungshemmende Medikamente bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung im Allgemeinen gemieden, da das damit verbundene Risiko besteht, akute Nierenschäden auszulösen oder zu verschlimmern. Ebenso birgt das uratsenkende Mittel Allopurinol ein gut dokumentiertes Risiko schwerer kutaner Nebenwirkungen wie das Stevens–Johnson-Syndrom, während Benzbromaron eine signifikante Hepatotoxizitätauslösen kann. Daher besteht weiterhin ein dringender Bedarf an der Entwicklung sichererer, breiter anwendbarer und mechanistisch gezielter Therapeutika für das effektive Management von GA.

In der traditionellen chinesischen Medizin (TCM) fällt GA unter diagnostische Kategorien wie "Lijie-Krankheit" (Gelenkschmerzen), "Gicht bi" (Gichtbehinderung) und "Yu Zhuo bi" (Stasis-Trübungsstörung). TCM-Interventionen für GA bieten synergistische Effekte durch entzündungshemmende und analgetische Wirkungen, Modulation des Harnsäurestoffwechsels, Verbesserung der Mikrozirkulation und Erhaltung der Gelenkfunktion, was sie zu einem bedeutenden Forschungsgebiet der aktuellen Forschungmacht. Rhizoma Drynariae (Gusuibu), abgeleitet vom getrockneten Rhizom von Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm., einem mehrjährigen Farn aus der Familie der Polypodiaceae, wird in der klinischen Praxis häufig zur Behandlung von GA verwendet. Die bioaktiven Verbindungen von Rhizoma Drynariae enthalten hauptsächlich Flavonoide, Phenylpropanoide, Triterpenoide, Phenolsäuren und deren Glykoside20,21. Unter diesen stellen Flavonoide die am umfangreichsten untersuchte Klasse von Verbindungen in den letzten Jahren dar: 22,23,24. Frühere Studien haben gezeigt, dass Flavonoide bemerkenswerte entzündungshemmende und antioxidative Eigenschaften besitzen25.

Vorläufige Untersuchungen haben ergeben, dass die Gesamtzahl der Flavonoide von Rhizoma Drynariae (TFRD) Entzündungsreaktionen bei Arthrose, rheumatoider Arthritis und anderen entzündlichen Gelenkerkrankungen effektiv unterdrücken kann 26,27,28. Die zugrundeliegenden Mechanismen von TFRD gegen GA sind jedoch noch nicht umfassend untersucht worden. Daher zielt diese Studie darauf ab, einen integrierten Ansatz anzuwenden, der Netzwerkpharmakologie, Metabolomik und molekularbiologische Experimente kombiniert, um die spezifischen Mechanismen und therapeutische Wirksamkeit von TFRD bei der Behandlung von GA zu erforschen und zu validieren. Eine systematische Untersuchung der Multi-Komponenten-, Multi-Ziel- und Multi-Pathway-Mechanismen, die der TFRD-Behandlung gegen GA zugrunde liegen, wird voraussichtlich die Wirkstoffentdeckung vorantreiben und innovative Optionen sowie praktische Lösungen für das klinische Management von GA bieten.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

Diese Studie wurde vom Tierethikkomitee des China-Japan Friendship Hospital (Genehmigungsnummer: zryhyy21-22-08-10) geprüft und genehmigt und nach institutionellen Richtlinien für die ethische Versorgung und Verwendung von Labortieren durchgeführt.

Vorhersage und Screening von TFRD- und GA-assoziierten Zielen
Die chemischen Bestandteile von Rhizoma Drynariae wurden aus der Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP) unter Verwendung von "Rhizoma Drynariae" als Suchbegriff29 abgerufen. Das Screening auf potenziell bioaktive Bestandteile erfolgte basierend auf den Kriterien orale Bioverfügbarkeit (OB) ≥ 30 % und Arzneimittelähnlichkeit (DL) ≥ 0,18 30,31,32. Aus dem resultierenden Pool von Verbindungen wurden anschließend Flavonoidkomponenten identifiziert und entsprechend ihrer chemischen Struktur ausgewählt. Diese flavonoiden Bestandteile, im Folgenden als Gesamtflavonoide von Rhizoma Drynariae (TFRD) bezeichnet, wurden in die nachgelagerte Analyse einbezogen. Nach der Abrufung der mit TFRD assoziierten Zielgene aus der TCMSP-Datenbank wurden ihre entsprechenden standardisierten Gensymbole mit der UniProt-Datenbank33 annotiert. Mit "Gicht" als Suchbegriff wurden krankheitsbezogene Ziele aus der GeneCards-Datenbank abgerufen, um einen Satz von Kandidatengenen34 festzulegen.

Aufbau eines Verbindungsziel-Netzwerks
Die Schnittstelle zwischen TFRD-assoziierten Zielen und GA-bezogenen Zielen wurde identifiziert und definiert als die wichtigsten therapeutischen Ziele, die die anti-GA-Effekte von TFRD vermitteln, und das überlappende Set wurde mit einem Venn-Diagramm visualisiert. Darüber hinaus wurde ein regulatorisches Netzwerk von "TFRD - Targets - GA" aufgebaut und mit der Cytoscape-Software35 analysiert.

Protein-Protein-Interaktionsnetzwerk
Die wichtigsten therapeutischen Ziele von TFRD gegen GA wurden in eine Online-Datenbank importiert, um ein Protein-Protein-Interaktionsnetzwerk (PPI) zu erstellen, wobei der Mindestwert für die erforderliche Interaktion auf "hohe Zuverlässigkeit (0,700)36" gesetzt wurde. Das PPI-Netzwerk wurde mit der Cytoscape-Software optimiert, und die Top 30 Kernziele, geordnet nach Gradzentralität, wurden ausgewählt, um ein Balkendiagramm37,38 zu erzeugen.

KEGG-Anreicherungsanalyse des Signalwegs
Die KEGG-Signalweganreicherungsanalyse wurde an diesen Kernzielen mit R-Software und der Bioconductor-Datenbank38,39 durchgeführt. Wege mit einem p-Wert < 0,05 galten als statistisch signifikant. Nach Ausschluss von krankheits- und stoffwechselbezogenen Signalwegen wurde in Cytoscape ein Signal-Ziel-Interaktionsnetzwerk visualisiert. Unter diesen Pfaden wurden die 20 besten Pfade nach steigendem P-Wert in einer Balkendiagramme dargestellt.

Arzneimittelzubereitung
Zur Herstellung einer Mononatriumurat-(MSU)-Kristallsuspension wurden 500 mg MSU-Kristalle mit einer analytischen Waage gewogen, verteilt in 10 ml normaler Kochsalzlösung und 2 ml Tween 80 und magnetisch erhitzt. Das Gemisch wurde anschließend auf ein Endvolumen von 20 mL mit normaler Kochsalzlösung eingestellt, um eine 25 mg/mL Suspension zu erhalten. Nach der Autoklavierung wurde die Federung bis zur Nutzung bei 4 °C gelagert. Die übliche klinische Dosierung für TFRD beträgt 750 mg pro Tag für einen 70 kg schweren Erwachsenen, was einer Rattendosis von 67,5 mg/kg Körpergewicht pro Tag entspricht. TFRD wurde in destilliertem Wasser auf eine Konzentration von 6,75 mg/mL gelöst und bei 4 °C für die spätere Verwendung gelagert. Nach der Normalisierung der Körperoberfläche beträgt die äquivalente orale Dosis von Colchicin (dem positiven Medikament) bei Ratten, die aus der klinischen menschlichen Dosis (0,6 mg/60 kg) umgewandelt wurden, 0,062 mg/kg. Eine Colchicinlösung wurde in destilliertem Wasser mit einer Konzentration von 0,0062 mg/mL hergestellt und bei 4 °C für die spätere Verwendung gelagert.

Tiere
Insgesamt wurden 36 sechs Wochen alte männliche Sprague–Dawley (SD) Ratten (220 ± 10 g) in dieser Studie verwendet (Tierlizenz Nr. SCXK [Jing] 2025-0008). Die Tiere wurden im Labortierzentrum des China-Japan-Freundschaftskrankenhauses unter Standardernährungsbedingungen bei einer Temperatur von 22–24 °C und einer Luftfeuchtigkeit von 50–70 % untergebracht.

Modelletablierung und Intervention
Nach einer Woche der Akklimatisierung wurden die Ratten zufällig in vier Gruppen (n = 9 jeweils) eingeteilt: Kontrollgruppe, Modell, TFRD und positives Medikament. Die Randomisierung erfolgte mit einer Zufallstabelle. Datenerhebung und -analyse erfolgten unter blinden Bedingungen. Alle Behandlungen wurden einmal täglich oral mit Gavage verabreicht. Alle Interventionen wurden einmal täglich um 08:00 Uhr um 08:00 Uhr an sieben aufeinanderfolgenden Tagen durchgeführt. Die Blank-Kontroll- und Modellgruppen erhielten normale Kochsalzlösung (10 ml/kg), während die TFRD- und die positiven Medikamentengruppen ihre jeweiligen Medikamentensuspensionen mit einem äquivalenten Volumen (10 mL/kg) erhielten. Am vierten Tag der Interventionen erhielt die Blank-Kontrollgruppe eine intraartikuläre Injektion steriler normaler Kochsalzlösung, während Ratten im Modell, TFRD und die positiven Medikamentengruppen mit einer MSU-Kristallsuspension injiziert wurden, um akute Gichtarthritis auszulösen. Vor der Injektion wurden die Ratten mit einem Isofluran-Anästhesiesystem betäubt. Jede Ratte im Modell, TFRD und den positiven Arzneimittelgruppen erhielt 200 μL der MSU-Suspension in die linke Sprunggelenkshöhle. Nach dem Nadelentzug wurde an der Injektionsstelle mit einem sterilen Wattestäbchen für mehrere Sekunden sanft Druck ausgeübt, um ein Auslaufen zu verhindern.

Probenentnahme und -verarbeitung
72 Stunden nach der Modellinduktion wurden die Ratten betäubt und im Rücken positioniert. Nach der Bauchdesinfektion wurde die Peritonealhöhle geöffnet und der Darm vorsichtig zurückgezogen, um die Bauchaorta freizulegen. Eine Blutentnahmenadel wurde parallel zum Gefäß eingeführt, um abdominales Aortenblut zu entnehmen, das sofort in heparinisierte, vorgekühlte Röhren in einem Eiswasserbad übertragen wurde. Die Proben wurden bei 3000 × g für 10 Minuten bei 4 °C zentrifugiert, um Serum zu gewinnen, das aliquotiert und bei -80 °C für die spätere metabolomische Profilierung gelagert wurde. Die Tiere wurden anschließend durch CO₂-Erstickung eingeschläfert. Das Fell um das linke Sprunggelenk wurde rasiert, und die umliegende Haut und Muskeln wurden sorgfältig entfernt, um die intakte Gelenkstruktur freizulegen. Das Synovialgewebe, das als dünne weißliche Membran erscheint, die die Gelenkkapsel auskleidet, wurde mit feinen Pinzetten sanft von der benachbarten Faszie isoliert. Die gesammelten Gelenkproben wurden in 4 % Paraformaldehyd bei 4 °C für 72 Stunden fixiert. Anschließend wurde ein Teil des Gelenkgewebes in einer EDTA-Entkalkungslösung entkalkt, wobei die Lösung wöchentlich 8 Wochen lang erfrischt wurde. Die vollständige Entkalkung wurde durch Nadelstichtests bestätigt: Bei Widerstand wurde die Entkalkung fortgesetzt, bis das Gewebe vollständig durchdringbar war.

Nach der Entkalkung wurden die Sprunggelenke sagittal durchschnitten, in Verarbeitungskassetten eingesetzt und einer Gradientenethanol-Dehydration unterzogen. Das Gewebe wurde mit Xylol beseitigt, mit Paraffin infiltriert und in Paraffinblöcke eingebettet. Abschnitte mit einer Dicke von 6 μm wurden mit einem automatisierten Mikrotom geschnitten, auf einem 40 °C Wasserbad geschwommen und auf Klebeträger montiert. Nach dem Trocknen bei 60 °C für 30 Minuten wurden die Schnitte deparaffinisiert, gemäß den Standardprotokollen mit Hämatoxylin und Eosin (H&E) gefärbt und schließlich mit neutralem Balsam gedeckt. Ganze Diabilder wurden mit einem digitalen Dia-Scanner aufgenommen.

Serummetabolomik-Analyse
Serumproben aus den Modell- und TFRD-Gruppen wurden vor der Verarbeitung bei 4 °C aufgetaut. Für jede Probe wurden 100 μL Serum in ein Mikrozentrifugenrohr übertragen und mit 400 μL vorgekühltem Extraktionslösungsmittel (Methanol: Acetonitril, 1:1, v/v) kombiniert, das interne Standards enthielt. Die Mischung wurde 1 Minute lang vortexiert, gefolgt von einer 10-minütigen Sonikation in einem Eiswasserbad. Anschließend wurde es 1 Stunde lang bei -40 °C inkubiert, um die Proteinausfällung zu erleichtern, und anschließend bei 12.000 × g für 15 Minuten bei 4 °C zentrifugiert. Das nach der Zentrifugation gewonnene Supernatant wurde sorgfältig gesammelt und in Autosampler-Phiolen für die UHPLC–MS-Analyse übertragen. Zusätzlich wurden gleiche Mengen Supernatant aus jeder Probe derselben Gruppe zusammengelegt, um Qualitätskontrollproben (QC) zu erzeugen.

Nach der Metabolitenerkennung in Serumproben aus beiden Gruppen wurden die rohen Massenspektrometriedaten von spezieller Software für automatisierte Peak-Erkennung, Extraktion, Ausrichtung und Integration verarbeitet, was eine strukturierte Datenmatrix der Ionenspektralmerkmale ergab. Die detektierten spektralen Merkmale wurden mit etablierten metabolomischen Spektralbibliotheken abgeglichen, um Metaboliten zu identifizieren, die aus TFRD stammen und in den systemischen Kreislauf gelangt waren. Unidentifizierte Merkmale und solche mit übermäßig fehlenden Werten wurden aus dem Datensatz entfernt. Der kuratierte Datensatz wurde neu indexiert und in ein standardisiertes Format40 strukturiert.

Die differenzielle Expression der Metaboliten zwischen den beiden Gruppen wurde durch Berechnung sowohl der Faltenänderung (FC, ausgedrückt als Intergruppenverhältnis) als auch der statistischen Signifikanz (p-Wert) bewertet. Metabolite, die die Schwelle von |log₂FC| erreichen. ≥ 1 und P < 0,05 wurden als differenziell exprimierte Metaboliten (DEMs) definiert. Die Screening-Ergebnisse wurden visuell mit Methoden wie Vulkandiagrammen zusammengefasst. Die gescreenten differentiellen Metaboliten wurden anschließend in die PubChem-Datenbank importiert, um ihre kanonischen Identifikatoren (CIDs)41 zu erhalten. Die entsprechenden KEGG-IDs wurden dann auf Basis der CIDs ermittelt. Schließlich wurden die KEGG-IDs in eine Metabolomik-Analyseplattform importiert, um eine Analyse der metabolischen Signalweganreicherung durchzuführen und die signifikant mit den DEMs assoziierten Signalwege zu identifizieren.

ELISA
Synovialgewebeproben wurden in flüssigem Stickstoff gefroren und zu einem feinen Pulver zerkleinert. Ungefähr 100 mg des Pulvers wurden mit einer elektronischen Präzisionswaage gewogen, mit 1 ml eiskaltem PBS gemischt und mit einem Glashomogenisator auf Eis homogenisiert. Das Homogenat wurde bei 10.000 g × g für 5 Minuten bei 4 °C zentrifugiert, und das Supernatant wurde für die anschließende ELISA-Detektion gesammelt. Vor der Analyse durfte das ELISA-Kit für 30 Minuten auf Raumtemperatur ausgleichen. Alle Reagenzien, einschließlich seriell verdünnter Standards, Waschpuffer, biotin-markierte Antikörper-Arbeitslösung und enzymkonjugierte Lösung, wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers hergestellt. Anschließend wurden 100 μL Standards bei unterschiedlichen Konzentrationen und Proben zu den vorgesehenen Bohrlöchern der vorbeschichteten Mikroplatte hinzugefügt. Der Teller wurde versiegelt und bei 90 Minuten bei 37 °C inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Inhalte entsorgt und die Brunnen viermal gewaschen. Anschließend wurden 100 μL biotinylierte Antikörper-Arbeitslösung in jedes Bohrloch gegeben, gefolgt von einer Inkubation bei 37 °C für 60 Minuten und einem weiteren Waschschritt. Anschließend wurden 100 μL enzymkonjugierte Arbeitslösung eingebracht, und die Platte wurde bei 37 °C 30 Minuten inkubiert, gefolgt von weiterem Waschen. Anschließend wurde ein chromogenes Substrat hinzugefügt, und die Platte wurde im Dunkeln bei 37 °C für 10 Minuten inkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 100 μL Stoplösung beendet, und die Absorption wurde mit einem Mikroplattenleser bei 450 nm gemessen. Eine Standardkurve wurde konstruiert, indem die optischen Dichtewerte (OD) der Standards an ihre entsprechenden Konzentrationen angepasst wurden, und die Probenkonzentrationen wurden entsprechend berechnet.

Westlicher Blot
Synovialgewebe wurde schnell eingefroren und mechanisch zu einem feinen Pulver gemahlen. Ein gemessener Teil des Pulvers wurde in einem passenden Volumen eiskalten RIPA-Puffers mit Protease- und Phosphataseinhibitoren (1:100, v/v) lysiert, gefolgt von einer 30-minütigen Inkubation auf Eis. Die Lysate wurden dann bei 10.000 × g für 5 Minuten bei 4 °C zentrifugiert, und die Supernatanten wurden sorgfältig gesammelt. Die Proteinkonzentrationen wurden mittels eines BCA-Tests quantifiziert, und alle Proben wurden auf die gleichen Konzentrationen wie der RIPA-Puffer angepasst. Die Proteine wurden mittels SDS-PAGE getrennt und auf PVDF-Membranen übertragen. Die Membranen wurden blockiert und anschließend mit primären Antikörpern (1:1000 Verdünnung) inkubiert, gefolgt von sekundären Antikörpern (1:5000 Verdünnung). Proteinsignale wurden mit einem ECL-Detektionssystem visualisiert, und Bandintensitäten wurden mit der Image-Lab-Software (Version 5.2.1) quantifiziert. Die relativen Expressionswerte wurden gegen β-Actin normalisiert.

Statistische Analyse
Statistische Analysen wurden mit SPSS-Software (Version 20.0) durchgeführt. Die Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt. Für Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurde eine Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) verwendet, wenn die Annahme der Varianzhomogenität erfüllt war, gefolgt vom LSD-Test für nachträgliche paarweise Vergleiche. Wenn die Varianzhomogenität nicht erreicht wurde, wurde Welchs ANOVA durchgeführt, gefolgt von Dunnetts T3-Test für Mehrfachvergleiche. Ein p-Wert < 0,05 galt als statistisch signifikant.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Schlüsselkomponenten von TFRD
Potenzielle bioaktive Inhaltsstoffe von Rhizoma Drynariae wurden aus der TCMSP-Datenbank gewonnen und ergaben 71 Kandidaten. Diese 71 aktiven Bestandteile wurden anschließend einem Screening-Prozess unterzogen, der auf oraler Bioverfügbarkeit (OB ≥ 30 %) und Arzneimittelähnlichkeit (DL ≥ 0,18) basierte, was zur Identifizierung von 18 Verbindungen führte. Eine weitere Verfeinerung dieser Liste zeigte, dass 10 dieser Wirkstoffe Fla...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

GA ist eine häufige Form der entzündlichen Arthritis. Derzeit basiert die klinische Behandlung hauptsächlich auf nichtsteroidalen entzündungshemmenden Medikamenten (NSAIDs), Kortikosteroiden und uratensenkenden Wirkstoffen42. Die kombinierte Verabreichung dieser Medikamente verursacht jedoch eine Reihe von Nebenwirkungen bei den Patienten und verursacht eine erhebliche metabolische Belastung für Leber und Nieren43. Dies ist besonders nachte...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Die Autoren berichten, dass es bei diesem Werk keine Interessenkonflikte gibt.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
4 % ParaformaldehydSolarbioP1110
5X-Protein-LadepufferSolarbioP1040
AKT AntikörperZell-Signaltechnik4691S
Antikörper-VerdünnungslösungBeyotime BiotechnologieP0268
Bioleiterdatenbank https://www.bioconductor.org/
ColchicinShanghai Yuanye Co., Ltd
GeneCards-Datenbank https://www.genecards.org/
Hämatoxylin und Eosin (H& E) FleckensetSolarbioG1120
MetaboAnalyst 6.0 Online-Plattform https://www.metaboanalyst.ca/
Maus IL-17A ELISA Kit4a Biotech Co LtdCME0041
Maus IL-6 ELISA Kit4a Biotech Co LtdCME0006
Maus TNF-Α ELISA-Trikot4a Biotech Co LtdCME0004
NF-κ B p65 AntikörperZell-Signaltechnik8242T
Fettfreie TrockenmilchSolarbioD8340
p38 MAPK-AntikörperAbklonalA14401
Phosphatase-Inhibitor-CocktailBeyotime BiotechnologieP1081
Phospho-AKT (Ser473) AntikörperZell-Signaltechnik4060S
Phospho-NF-κ B p65 AntikörperZell-Signaltechnik3031S
Phospho-p38 MAPK-AntikörperAbklonalAP0526
Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)SolarbioR0010
Polyvinyliden-Fluorid-(PVDF)-MembranMilliporeIPVH00010
PubChem-Datenbankhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
R software www.r project.org/
RIPA Lysis-PufferSolarbioR0010
RNase-freies WasserAmbionAM9937
SD-RattenBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. 
SDS-PAGE ElektrophoresepufferServicebioG2144
STRING-Datenbankhttps://string-db.org/
TBST-Puffer (10X)SolarbioT1085
TCMSPhttps://old.tcmsp-e.com
Tris-Glycin-TransferpufferServicebioG2017
TFRDBeijing Qihuang Pharmaceutical Co., Ltd.
UniProt-Datenbank https://www.uniprot.org/
β-Aktin-AntikörperZhongshan Jingqiao BiotechnologieTA-09

Referenzen

  1. Keller, S. F., Mandell, B. F. Management and cure of gouty arthritis. Rheum Dis Clin North Am. 48 (2), 479-492 (2022).
  2. Ma, C., et al. Metabolic reprogramming of macrophages by biomimetic melatonin-loaded liposomes effectively attenuates acute gouty arthritis in a mouse model. Adv Sci (Weinh). , e2410107 (2024).
  3. Li, C., et al. Targeting neutrophil extracellular traps in gouty arthritis: insights into pathogenesis and therapeutic potential. J Inflamm Res. 17, 1735-1763 (2024).
  4. Zhang, Y., Chen, S., Yuan, M., Xu, Y., Xu, H. Gout and diet: a comprehensive review of mechanisms and management. Nutrients. 14 (17), 3525 (2022).
  5. Wang, R., et al. Sulforaphane-driven reprogramming of gut microbiome and metabolome ameliorates the progression of hyperuricemia. J Adv Res. 52, 19-28 (2023).
  6. Zhang, S., et al. Mechanism of reactive oxygen species-guided immune responses in gouty arthritis and potential therapeutic targets. Biomolecules. 14 (8), 978 (2024).
  7. GBD 2021 Gout Collaborators. Global, regional, and national burden of gout, 1990-2020, and projections to 2050: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet Rheumatol. 6 (8), e507-e517 (2024).
  8. Towiwat, P., Li, Z. Long-term remission in gout: challenges and future opportunities. Rheumatol Autoimmun. 6, 7-15 (2026).
  9. Chen, S., Li, Z., Deng, X., Gao, L. Advances in understanding the mechanisms of treatment for gouty arthritis: a comprehensive review. Physiol Res. 74 (5), 693-710 (2025).
  10. LaForge, J. M., et al. Non-steroidal anti-inflammatory drugs: clinical implications, renal impairment risks, and AKI. Adv Ther. 40 (5), 2082-2096 (2023).
  11. Klomjit, N., Ungprasert, P. Acute kidney injury associated with non-steroidal anti-inflammatory drugs. Eur J Intern Med. 101, 21-28 (2022).
  12. Anis, T. R., Meher, J. Allopurinol-induced Stevens-Johnson syndrome (SJS). Clin Pharmacol. 15, 99-105 (2023).
  13. Hasegawa, A., Abe, R. Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis: updates in pathophysiology and management. Chin Med J (Engl). 137 (19), 2294-2307 (2024).
  14. Gupta, S. S., Sabharwal, N., Patti, R., Kupfer, Y. Allopurinol-induced Stevens-Johnson syndrome. Am J Med Sci. 357 (4), 348-351 (2019).
  15. Sun, W., et al. Risk of hepatotoxicity in patients with gout treated with febuxostat or benzbromarone: a propensity score-matched cohort study. Arthritis Care Res (Hoboken). 77 (9), 1149-1156 (2025).
  16. Guo, J. W., et al. Therapeutic potential and pharmacological mechanisms of traditional Chinese medicine in gout treatment. Acta Pharmacol Sin. 46 (5), 1156-1176 (2025).
  17. Jiang, Z., et al. The correlation between traditional Chinese medicine constitution and hyperuricemia and gout: a systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2023, 5097490 (2023).
  18. Wang, S., et al. Traditional herbal medicine: therapeutic potential in acute gouty arthritis. J Ethnopharmacol. 330, 118182 (2024).
  19. Wang, Y. B., Jin, C. Z. Roles of traditional Chinese medicine extracts in hyperuricemia and gout treatment: mechanisms and clinical applications. World J Gastroenterol. 30 (47), 5076-5080 (2024).
  20. Jingying, G., et al. A comprehensive review of Drynariae Rhizoma: botany, traditional applications, and active flavonoid components. J Pharm Pharmacol. 77 (10), 1319-1337 (2025).
  21. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma Drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462 (2021).
  22. Zhang, Y., et al. Total flavonoids from Rhizoma Drynariae (Gusuibu) for treating osteoporotic fractures: implication in clinical practice. Drug Des Devel Ther. 11, 1881-1890 (2017).
  23. Yu, X. B., et al. Chondroprotective effects of Gubitong Recipe via inhibiting excessive mitophagy of chondrocytes. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 8922021 (2022).
  24. Zhang, F., et al. Total flavonoids of Drynariae Rhizoma improve glucocorticoid-induced osteoporosis of rats: UHPLC-MS-based qualitative analysis, network pharmacology strategy and pharmacodynamic validation. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 920931 (2022).
  25. Liu, F., et al. Mechanism of flavonoids in the treatment of gouty arthritis (review). Mol Med Rep. 30 (2), 132 (2024).
  26. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of Rhizoma Drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Des Devel Ther. 16, 1743-1766 (2022).
  27. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-λB and PI3K/AKT pathways. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6634837 (2021).
  28. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae treat osteoarthritis by inhibiting arachidonic acid metabolites through AMPK/NFλB pathway. J Inflamm Res. 16, 4123-4140 (2023).
  29. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13 (2014).
  30. Chen, G. Y., et al. Mechanisms of total glucosides of paeony in alleviating methotrexate-induced liver injury. Drug Des Devel Ther. 19, 3407-3423 (2025).
  31. Zhang, P., et al. Network pharmacology: towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518 (2023).
  32. Luo, W., et al. Integration of molecular docking, molecular dynamics, and network pharmacology to explore the multi-target pharmacology of fenugreek against diabetes. J Cell Mol Med. 27 (14), 1959-1974 (2023).
  33. UniProt Consortium. UniProt: the universal protein knowledgebase in 2023. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D523-D531 (2023).
  34. Stelzer, G., et al. The GeneCards suite: from gene data mining to disease genome sequence analyses. Curr Protoc Bioinformatics. 54, 1.30.1-1.30.33 (2016).
  35. Chen, G. Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the key mechanism of Gubitong Recipe in the treatment of osteoarthritis. Comput Math Methods Med. 2022, 7858925 (2022).
  36. Szklarczyk, D., et al. The STRING database in 2023: protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  37. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1826299 (2022).
  38. Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).
  39. Jin, Q., et al. Network and experimental pharmacology to decode the action of Wendan Decoction against generalized anxiety disorder. Drug Des Devel Ther. 16, 3297-3314 (2022).
  40. Pang, Z., et al. MetaboAnalyst 6.0: towards a unified platform for metabolomics data processing, analysis, and interpretation. Nucleic Acids Res. 52 (W1), W398-W406 (2024).
  41. Kim, S., et al. PubChem in 2021: new data content and improved web interfaces. Nucleic Acids Res. 49 (D1), D1388-D1395 (2021).
  42. Pillinger, M. H., Mandell, B. F. Therapeutic approaches in the treatment of gout. Semin Arthritis Rheum. 50 (3S), S24-S30 (2020).
  43. Yao, T. K., et al. Advances in gouty arthritis management: integration of established therapies, emerging treatments, and lifestyle interventions. Int J Mol Sci. 25 (19), 10853 (2024).
  44. Li, W., et al. Effects of total flavonoids of Rhizoma Drynariae on biochemical indicators of bone metabolism: a systematic review and meta-analysis. Front Pharmacol. 15, 1443235 (2024).
  45. Mohammed, H. S., et al. Investating the involvement of the NLRP3/ASC/caspase-1 and NF-λB/MAPK pathways in the pathogenesis of gouty arthritis: insights from irradiated and non-irradiated Trifolium alexandrium L. extracts and some metabolites. J Ethnopharmacol. 334, 118566 (2024).
  46. Shi, M. F., et al. Study on the effect and mechanism of Zexie Decoction in treating MSU-induced acute gouty arthritis model through PI3K-AKT-mTOR signaling pathway. Int Immunopharmacol. 150, 114214 (2025).
  47. Cui, L., et al. Selenium suppressed the LPS-induced inflammation of bovine endometrial epithelial cells through NF-λB and MAPK pathways under high cortisol background. J Cell Mol Med. 27 (10), 1373-1383 (2023).
  48. Balakin, E., et al. Regulation of stress-induced immunosuppression in the context of neuroendocrine, cytokine, and cellular processes. Biology (Basel). 14 (1), 76 (2025).
  49. Chen, L., et al. AMPK signaling in osteoarthritis: from mechanisms to targeted therapeutics. Front Pharmacol. 16, 1681610 (2025).
  50. FitzGerald, J. D., et al. 2020 American College of Rheumatology guideline for the management of gout. Arthritis Care Res (Hoboken). 72 (6), 744-760 (2020).
  51. Limbachia, V., et al. The effect of different types of oral or intravenous corticosteroids on capillary blood glucose levels in hospitalized inpatients with and without diabetes. Clin Ther. 46 (2), e59-e63 (2024).
  52. Xue, Y., et al. Association of serum glucocorticoids with various blood pressure indices in patients with dysglycemia and hypertension: the Henan Rural Cohort Study. Biomed Environ Sci. 34 (12), 952-962 (2021).
  53. Uson, J., et al. EULAR recommendations for intra-articular therapies. Ann Rheum Dis. 80 (10), 1299-1305 (2021).
  54. Lucenti, L., et al. Do preoperative corticosteroid injections increase the risk of infection after shoulder arthroscopy or shoulder arthroplasty? A systematic review. Healthcare (Basel). 12 (5), 543 (2024).
  55. Feng, W., Cui, D., Yang, T. Interpretation of key points of Chinese guidelines for diagnosis and management of hyperuricemia and gout (2019). J Clin Intern Med. 37 (07), 528-531 (2020).
  56. Lin, Y., et al. Luteolin-4'-O-glucoside and its aglycone, two major flavones of Gnaphalium affine D. Don, resist hyperuricemia and acute gouty arthritis activity in animal models. Phytomedicine. 41, 54-61 (2018).
  57. Wang, Y., et al. A luteolin-loaded electrospun fibrous implantable device for potential therapy of gout attacks. Macromol Biosci. 16 (11), 1598-1609 (2016).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

NetzwerkpharmakologieRattenmodellSerum MetabolomikEnzymgekoppelter ImmunabsorptionsassayWestern BlotEntz ndungswegeSynovialgewebe
Kontakt
Rückmeldung an Ihre Bibliothek

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.