Mannose-Rezeptor C Typ 2 sagt schlechte Ergebnisse beim Gliom voraus und ist mit invasiven Phänotypen sowie β-Catenin/EMT-bezogenen Veränderungen assoziiert

Zusammenfassung

Analysen der öffentlichen Kohorten und gliomzellbasierte Experimente identifizieren MRC2 als einen Marker mit schlechter Prognose, der mit verstärkter Proliferation, Migration, Invasion und β-Catenin/EMT-bezogenen Veränderungen im Gliom assoziiert ist.

Zusammenfassung

Gliom bleibt eine tödliche Malignität des zentralen Nervensystems, und zusätzliche Biomarker, die die prognostische Schichtung verbessern und therapeutische Erforschung informieren, sind weiterhin erforderlich. Diese Studie bewertete den Mannoserezeptor C-Typ 2 (MRC2/Endo180) durch Integration öffentlicher transkriptomischer Kohorten mit in-vitro-Validierung . Expressionsprofile und passende klinische Annotationen wurden aus dem Cancer Genome Atlas (TCGA) und dem Genotype-Tissue Expression (GTEx) Projekt für Tumor-Normalvergleiche und Pankrebsscreening gewonnen, und prognostische Zusammenhänge wurden in der Chinese Glioma Genome Atlas (CGGA)-Kohorte weiter untersucht. Die MRC2-Expression wurde in Gliomzelllinien mittels reverser Transkriptionsquantitativer PCR (RT-qPCR) und Immunoblotting untersucht, und ein stabiler MRC2-Knockdown wurde in U87- und U251-Zellen mittels lentiviraler kurzhaarnadel-RNAs (shRNAs) etabliert. Zellwachstum und Klonogenität wurden mittels CCK-8- und Koloniebildungstests untersucht, während Migration und Invasion mit porösen Membraninsert-Assays bewertet wurden. CDK4, CDK6 und β-katenin/epithelial–mesenchymal-übergangsbezogene (EMT)-bezogene Marker wurden durch Immunblotting analysiert. Über Datensätze hinweg war MRC2 im Gliom erhöht, und eine höhere Expression war mit einem schlechteren Gesamtüberleben, krankheitsspezifischem Überleben und progressionsfreiem Intervall assoziiert. In vitro reduzierte MRC2-Depletion die Proliferation, Klonogenizität, Migration und Invasion, begleitet von sinkenden CDK4- und CDK6-Proteinspiegeln sowie Veränderungen der β-Catenin- und EMT-bezogenen Marker. Zusammen unterstützen diese Ergebnisse MRC2 als potenziellen prognostischen Biomarker für aggressive Gliomphänotypen und rechtfertigen weitere mechanistische und in vivo Untersuchungen.

Einleitung

Gliome stellen die häufigsten primären Tumore im zentralen Nervensystem dar und machen einen erheblichen Anteil der intrakraniellen Neoplasien^aus. Epidemiologische Studien schätzen eine Inzidenz von etwa wenigen Fällen pro 100.000 Einwohner pro Jahr, wobei geografische und geschlechtsbezogene Unterschiede zwischen^den Bevölkerungen ^3,4 berichtet wurden. Klinisch decken Gliome ein breites Verhaltensspektrum ab: Niedriggradige Gliome können einen längeren Verlauf verlaufen, während hochgradige Erkrankungen – insbesondere Glioblastom – bei den meisten Patienten weiterhin schnell tödlich^sind 5,6,7,8. Moderne WHO-Klassifikationen integrieren Histologie mit wichtigen molekularen Merkmalen (z. B. IDH-Mutation, TERT-Promotor-Veränderung, MGMT-Promotormethylierung und 1p/19q-Ko-Deletion), die die Diagnose verfeinern und die Prognose ^9,10 informieren. Trotz multimodaler Behandlung, die Chirurgie, Strahlentherapie und Chemotherapie kombiniert, ist Rückfall häufig, und Langzeitergebnisse für hochgradige Tumore bleiben schlecht. Daher bleibt die Identifizierung zusätzlicher prognostischer Marker und zielbarer Schwachstellen eine dringende Priorität.

MRC2 (Mannoserezeptor C-Typ 2; auch bekannt als Endo180/CD280/uPARAP) ist ein transmembranes Mitglied der C-Typ-Lektinrezeptorfamilie¹¹. Es ist in stromalen und Immunkompartimenten wie Fibroblasten und Makrophagen angereichert und beteiligt sich am Wechsel der extrazellulären Matrix (ECM), der fibrosebedingten Remodellierung und Tumor-Mikro-Umwelt-Interaktionen^12,13. Strukturell enthält MRC2 eine N-terminale, cysteinreiche Region, eine Fibronektin-Typ-II-Domäne, die Kollagen bindet, mehrere C-Typ-Lektin-ähnliche Domänen, ein Transmembransegment und einen zytoplasmatischen Schwanz^14,15. Durch Kollageninternalisierung und -remodellierung kann MRC2 die Zellbeweglichkeit und Gewebeinvasion fördern, und erhöhtes MRC2 wurde mit aggressivem Verhalten in mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht, darunter Brust-, Bauchspeicheldrüsen-, Prostata-, Melanom und Glioblastom 11,14,16,17,18 . Frühere Arbeiten deuten auch auf Verbindungen zwischen MRC2 und pro-invasiven Signalprogrammen (z. B. TGF-β-assoziierte Signalwege), der Matrix-Metalloproteinase-Aktivität und EMT-ähnlichen phänotypischen Veränderungen sowie auf Rollen in krebsassoziierten Fibroblast- und Makrophagenzuständen^hin 17,18,19,20,21 . Die klinische Bedeutung von MRC2 bei Gliomen und die funktionellen Folgen der MRC2-Dysregulation in Gliomzellen bleiben jedoch unklar.

Obwohl MRC2 mit der Remodellierung der extrazellulären Matrix und invasivem Verhalten bei mehreren Malignitäten in Verbindung gebracht wird, wurde seine klinische Bedeutung beim Gliom nicht systematisch über unabhängige transkriptomische Kohorten hinweg nachgewiesen, und seine phänotypassoziierten Effekte in Gliomzellen wurden nicht innerhalb eines integrierten Rahmens bewertet, der öffentliche Datensatzanalyse mit funktioneller Validierung kombiniert. Diese Studie stellte daher die Hypothese auf, dass MRC2 mit unerwünschten klinischen Ergebnissen und malignen Phänotypen im Gliom assoziiert ist. Um diese Frage zu klären, wurden Pankrebs-Screening, unabhängige Gliom-Kohortenvalidierung und stabile Knockdown-Experimente in Gliomzelllinien integriert, um die prognostische Bedeutung von MRC2 und dessen Zusammenhang mit Proliferation, Migration, Invasion und Veränderungen der β-Catenin/EMT-bezogenen Marker zu bewerten. Da MRC2 zur Mannoserezeptorfamilie gehört und der Gliomprogression ebenfalls vom Tumormikroumfeld beeinflusst wird, wurde eine zusätzliche explorative Analyse der MRC1-Expression nach IDH-Status einbezogen, um kontextuelle Informationen zu immunbezogenen Unterschieden zwischen Gliom-Subtypen zu liefern.

Die Neuheit dieser Arbeit liegt in der kombinierten Bewertung von MRC2 über öffentliche Gliomdatensätze und in-vitro-funktionelle Assays, wodurch ergänzende klinische und experimentelle Belege für seine Relevanz im Gliom geliefert werden. Im Vergleich zu Einzelkohortenanalysen oder Cell-only-Studien bietet dieser integrierte Arbeitsablauf mehrere praktische Vorteile. Die Integration von TCGA, GTEx und CGGA ermöglicht die Validierung über Kohorten hinweg und verringert die Abhängigkeit von einem einzigen Datensatz. Darüber hinaus verbindet die Verbindung von Analysen aus öffentlichen Kohorten mit Gliomzell-Knockdown-Assays klinische Assoziationen mit Phänotyp-Evidenz. Schließlich ermöglicht der Einsatz komplementärer Auslesungen, darunter RT-qPCR, Immunoblotting, CCK-8, Kolonienbildung und poröse Membraninsert-Assays, die parallele Bewertung von transkriptionellen, proteinbezogenen, proliferativen und motilitätsbezogenen Änderungen. Das gesamte Studiendesign und der analytische Workflow sind in Abbildung 1 zusammengefasst. Zusammen verbessert diese Strategie die Robustheit und biologische Interpretierbarkeit der Ergebnisse im Vergleich zu ausschließlich bioinformatischen oder Single-Assay-Ansätzen.

Protokoll

Diese Studie nutzte öffentlich zugängliche, de-identifizierte Datensätze (TCGA, GTEx und CGGA) sowie etablierte kommerzielle Zelllinien. Es waren keine neu rekrutierten menschlichen Teilnehmer, identifizierbare Patientendaten oder patientenabgeleitete Proben beteiligt. Alle Analysen wurden gemäß den relevanten institutionellen und internationalen Richtlinien für die Nutzung öffentlich zugänglicher Daten durchgeführt. Daher war für diese Studie keine zusätzliche institutionelle Ethikgenehmigung oder informierte Zustimmung erforderlich.

1. Bioinformatischer Workflow und Datenvorverarbeitung

Genexpressionsprofile und passende klinische Annotationen wurden aus öffentlich verfügbaren Quellen gewonnen, darunter The Cancer Genome Atlas (TCGA), das Genotype-Tissue Expression (GTEx)-Projekt und der Chinese Glioma Genome Atlas (CGGA). Expressionsmatrizen und klinische Metadaten wurden in R importiert und entsprechend Stichprobenkennungen harmonisiert. Doppelte oder nicht übereinstimmende Einträge wurden entfernt, und Proben, denen wesentliche Überlebensinformationen fehlten, wurden aus den Überlebensanalysen ausgeschlossen. MRC2-Expressionswerte und entsprechende klinisch-pathologische Variablen wurden für nachgelagerte Analysen extrahiert. Für Tumor-Normalvergleiche wurde die MRC2-Expression über verschiedene Krebstypen hinweg mit TCGA-reinen Daten verglichen und mit integrierten TCGA–GTEx-Daten, wenn zusätzliche normale Kontrollen benötigt wurden. Für gliomfokussierte Analysen wurden Patienten in den TCGA-LGG- und CGGA-Kohorten in Hoch- und Niedrigexpressionsgruppen nach dem Median des MRC2-Expressionsniveaus der Kohorte geschichtet. Anschließend wurden Kaplan-Meier-Überlebensanalyse, zeitabhängige Empfänger-Funktionsmerkmale (ROC) und Cox-Proportional-Hazard-Regression durchgeführt, um die prognostische Relevanz von MRC2 zu bewerten. Cox-Modelle bezogen verfügbare Kovariaten wie Alter, Geschlecht, WHO-Grad und weitere klinisch-pathologische Variablen ein, abhängig von der Datenvollständigkeit innerhalb jeder Kohorte. Subgruppenanalysen wurden anhand von Variablen wie Alter, histologischem Subtyp, WHO-Grade, IDH-Mutationsstatus, 1p/19q-Codeletionsstatus und behandlungsbezogenen Informationen durchgeführt, sofern verfügbar. Die Figuren wurden mit standardisierten statistischen Plot-Workflows in R und GraphPad Prism erstellt.

2. Pankrebs-Expressions- und Überlebensanalysen

Die MRC2-Expression wurde zwischen Tumoren und normalen Geweben über Krebsarten hinweg mit TCGA- und GTEx-Datensätzen verglichen. Die Unterschiede wurden mit Boxplots visualisiert und mit Radardiagrammen zusammengefasst. Cox-Proportional-Hazard-Regressionsanalysen wurden durchgeführt, um Zusammenhänge zwischen MRC2-Expression und Gesamtüberlebensrate (OS), krankheitsspezifischem Überleben (DSS) und progressionsfreiem Intervall (PFI) über Krebstypen hinweg zu bewerten. Hazard Ratios und entsprechende Signifikanzniveaus wurden mithilfe von Waldflächen und Heatmaps visualisiert.

3. Prognostische Validierung und Untergruppenanalysen in Gliomkohorten

In der TCGA-Kohorte mit niedriggradigem Gliom (TCGA-LGG) wurden die Patienten in Gruppen mit hoher und niedriger MRC2-Expression geschichtet. Kaplan–Meier-Überlebensanalysen wurden durchgeführt, um OS, DSS und PFI zwischen den Gruppen zu vergleichen. Zeitabhängige Empfänger-Betriebscharakteristik (ROC)-Kurven wurden erzeugt, um die prädiktive Leistung zu bewerten. Univariate und multivariate Cox-Regressionsanalysen wurden durchgeführt, um den unabhängigen prognostischen Wert von MRC2 zu bewerten. Eine externe Validierung erfolgte mit dem CGGA-Gliomdatensatz, einschließlich Kaplan–Meier-Überlebensanalyse, ROC-Analyse und Cox-Regression. Subgruppenanalysen wurden durchgeführt, um die MRC2-Expression über klinisch-pathologische Variablen hinweg zu bewerten, darunter Alter, Tumorgrad, histologischer Subtyp, IDH-Mutationsstatus, 1p/19q-Codeletionsstatus und behandlungsbezogene Variablen.

4. MRC1-Expression in IDH-mutanten - versus IDH-Wildtyp-Gliomen

Der Zusammenhang zwischen MRC1-Expression und IDH-Mutationsstatus wurde mit der GlioVis-Webplattform und dem TCGA GBMLGG-Datensatz bewertet. Die Fälle wurden basierend auf annotiertem IDH-Status in IDH-mutanten- und IDH-Wildtyp-Gliome gruppiert. Die MRC1-mRNA-Expression wurde innerhalb des ausgewählten Datensatzes abgefragt, und die Expressionsniveaus zwischen den beiden Gruppen wurden mithilfe der integrierten statistischen Analysefunktion der Plattform verglichen. Gruppenweise Ausdrucksverteilungen wurden als von der Plattform generiert angezeigt, und die statistische Signifikanz wurde als P < 0,05 definiert.

5. Zellkultur

Menschliche Gliomzelllinien und normale menschliche Astrozyten wurden aus etablierten Zelldepots gewonnen. Die Zellen wurden im modifizierten Eagle's Medium (DMEM) von Dulbecco kultiviert, ergänzt mit 10 % fetalem Rinderserum (FBS) und bei 37 °C in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO₂ und etwa 95 % relativer Luftfeuchtigkeit gehalten. U87- und U251-Zellen wurden für Funktionsverlust-Experimente ausgewählt, da das Baseline-Screening über das getestete Gliomzellpanel zeigte, dass diese beiden Zelllinien relativ höhere MRC2-Spiegel aufwiesen und daher für funktionelle Analysen auf Knockdown-Basis geeignet sind.

6. Lentivirale Niederschlagung von MRC2

Kurzhaarnadel-RNAs (shRNAs), die MRC2 und eine nicht-zielende Kontrolle anvisieren, wurden zu lentiviralen Vektoren geklont. Lentivirale Partikel wurden durch Ko-Transfektierung HEK293T Zellen mit Transferplasmiden und Verpackungsplasmide mit einem Standard-Transfektionsreagenz hergestellt. Virale Supernatanten wurden 48 und 72 Stunden nach der Transfektion gesammelt, bei 2.100 ×g für 5 Minuten zentrifugiert, um Verpackungszellen und Zellreste zu entfernen, und anschließend durch einen 0,45 μm Filter geleitet, bevor sie sofort verwendet oder gelagert wurden bei −80 °^{C 19}. Virushaltige Supernatanten wurden sofort verwendet oder aliquotiert und bei −80 °C gelagert. Wiederholte Frost-Tau-Zyklen wurden vermieden. Gliomzellen wurden mit lentiviralen Partikeln in Anwesenheit von Polybrene infiziert. Nach der Infektion wurden die Zellen mit Puromycin ausgewählt, um stabile Knockdown-Zelllinien zu etablieren. Die verwendeten Sequenzen waren wie folgt: sh-MRC2-1: 5′-GAAATGAATGAGCAGCAAGAA-3′; sh-MRC2-2: 5′-CCGGTATTGATGATTAAGGTGTT-3′; sh-NC: 5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′.

7. Validierung des MRC2-Knockdowns durch RT-qPCR und Immunblotting

Die Gesamt-RNA wurde mit TRIzol-Reagenz extrahiert, und cDNA wurde mit einem Reverse-Transkriptions-Kit gemäß den Anweisungen des Herstellers synthetisiert. Quantitative PCR wurde mit SYBR Green-Chemie unter folgenden Zyklusbedingungen durchgeführt: Anfängliche Denaturierung bei 95 °C für 30 Sekunden, gefolgt von 40 Zyklen mit 95 °C für 5 Sekunden und 60 °C für 30 Sekunden, wobei am Ende der Amplifikation eine Analyse der Dissoziationskurve durchgeführt wurde. Die Primer-Sequenzen waren wie folgt: MRC2 vorwärts, 5′-GGCAAGGACAAGAAGTGCGTGT-3′; MRC2 Rückwärtsgang, 5′-CTTTGGTGACGTTGCTGCGCTT-3′; GAPDH vorne, 5′-TCCACCCATGGCAAATTCC-3′; und GAPDH-Rückwärtsgang, 5′-TCGCCCCACTTGATTTTGG-3′. Die relative mRNA-Expression wurde mit der vergleichenden_C-t-Methode (2^-ΔΔCt) berechnet, wobei GAPDH die interne^Kontroll-20 war. Parallel wurde das Immunoblotting durchgeführt, um den MRC2-Knockdown auf Proteinebene zu bestätigen. Für RT-qPCR wurden drei unabhängige biologische Replikate analysiert, und jede Probe wurde in technischem Dreifachverfahren durchgeführt.

8. Zellproliferationstest

Die Zellproliferation wurde mit dem CCK-8-Test bewertet. Die Zellen wurden in 96-Well-Platten mit entsprechender Dichte ausgesaat und für die angegebenen Zeiträume kultiviert. Zu jedem Zeitpunkt wurde CCK-8-Reagenz zu jedem Bohrloch hinzugefügt und gemäß den Anweisungen des Herstellers inkubiert, danach wurde die Absorption bei 450 nm mit einem Mikroplattenleser gemessen. Mindestens drei unabhängige biologische Replikate wurden durchgeführt.

9. Koloniebildungstest

Die Zellen wurden mit geringer Dichte in Sechs-Well-Platten ausgesät und 10–14 Tage lang kultiviert. Die Kolonien wurden 15 Minuten lang mit 4 % Paraformaldehyd bei Zimmertemperatur fixiert und 15 Minuten mit 0,1 % Kristallviolett gefärbt. Die Kolonien wurden mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen, an der Luft getrocknet und manuell oder mit Bildanalysesoftware^{gezählt 21}. Mindestens drei unabhängige biologische Replikate wurden durchgeführt.

10. Zellmigration und Invasionstests

Zellmigration und -invasion wurden mittels poröser Membran-Einsatz-Assays²² untersucht. Für Invasionstests wurden die oberen Einsätze mit extrazellulärem Matrixgel vorbeschichtet; Für Migrationstests wurden unbeschichtete Einsätze verwendet. Zellen, die in serumfreiem Medium suspendiert waren, wurden der oberen Kammer hinzugefügt, und ein mit Serum enthaltendes Medium wurde in der unteren Kammer als Chemoanziehstoff platziert. Nach der Inkubation wurden die nicht wandernden Zellen auf der oberen Membranoberfläche vorsichtig mit einem Wattestäbchen entfernt. Zellen, die in die untere Oberfläche eingedrungen oder eingedrungen waren, wurden 15 Minuten lang mit 4 % Paraformaldehyd fixiert, 15 Minuten mit 0,1 % Kristallviolett gefärbt, mit kalter phosphatgepufferter Kochsalzlösung abgespült, an der Luft getrocknet und unter einem umgekehrten Mikroskop mit ×200 Vergrößerung abgebildet. Die Zellen wurden in fünf zufällig ausgewählten mikroskopischen Feldern pro Insert gezählt. Mindestens drei unabhängige biologische Replikate wurden durchgeführt.

11. Western-Blot-Analyse

Die Zellen wurden in einem RIPA-Puffer mit Proteaseinhibitoren aufgestockt, und die Proteinkonzentration wurde mittels eines BCA-Tests bestimmt. Gleiche Mengen des Gesamtproteins wurden durch SDS-PAGE getrennt und auf PVDF-Membranen übertragen. Die Membranen wurden bei Raumtemperatur 1 Stunde lang in 5 % fettarmer Milch blockiert und über Nacht bei 4 °C mit primären Antikörpern inkubiert. Für das westliche Blotting wurden folgende primäre Antikörper und Arbeitsverdünnungen verwendet: Anti-MRC2 (1:5.000), Anti-CDK4 (1:1.000), Anti-CDK6 (1:2.000), Anti-β-Katenin (1:5.000), Anti-E-Cadherin (1:10.000), Anti-N-Cadherin (1:3.000) und Anti-β-Aktin (1:5.000). Nach dem Waschen wurden die Membranen mit Meerrettichperoxidase-konjugierten Ziegen-Anti-Maus- oder Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Sekundärantikörpern (1:5.000) für 1 Stunde bei Zimmertemperatur inkubiert. Die Signale wurden mittels Chemilumineszenz visualisiert, und Bandintensitäten wurden quantifiziert und auf β-Aktin normalisiert. Mindestens drei unabhängige biologische Replikate wurden durchgeführt.

12. Statistische Analyse

Statistische Analysen wurden mit R und GraphPad Prism durchgeführt. Die Überlebenskurven wurden mit dem Log-Rank-Test verglichen. Cox-Proportionalhazard-Regressionsmodelle wurden für univariate und multivariate Analysen verwendet. Bei zellbasierten Experimenten werden die Daten als Mittelwert ± SD präsentiert. Vor parametrischen Tests wurde die Normalität mit dem Shapiro–Wilk-Test bewertet. Für normal verteilte Daten wurden die Unterschiede zwischen zwei Gruppen mittels Student's t-Test bewertet, und Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden mit Einweg-ANOVA durchgeführt. Wenn die Normalitätsannahmen nicht erfüllt waren, wurden die entsprechenden nichtparametrischen Tests verwendet. P-Werte wurden für mehrfache Tests mit dem Benjamini–Hochberg False Discovery Rate^{Verfahren 23,24} angepasst. Ein zweiseitiges P < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.

Ergebnisse

Pankrebs-Expression und prognostische Landschaft von MRC2
Pankrebsanalysen wurden zunächst durchgeführt, um das Expressionsmuster und die prognostische Relevanz von MRC2 über menschliche Malignitäten zu charakterisieren. Vergleiche basierend auf TCGA- und GTEx-Datensätzen zeigten, dass die MRC2-Expression signifikant zwischen Tumor- und normalen Geweben bei mehreren Krebsarten unterschied (Abbildung 2A, 2B). Eine Radar-Pl...

Diskussion

Die Standardtherapie für Gliom basiert auf maximal sicherer Resektion, gefolgt von Strahlentherapie und Chemotherapie, meist Temozolomid⁴. Dennoch schränkt diffuse Infiltration häufig die vollständige chirurgische Entfernung ein und trägt zu einem unvermeidlichen Rückfall bei, insbesondere bei hochgradigen Erkrankungen ^3,25. Mehrere molekulare Merkmale – darunter MGMT-Promotormethylierung, IDH-Mutation, 1p...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Anti-CDK4-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	11026-1-AP	Primärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2078702.
Anti-CDK6-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	66278-1-Ig	Primärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2881661.
Anti-E-Cadherin-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	20874-1-AP	Primärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_10697811.
Anti-MRC2-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	86028-1-RR	Primärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2879692.
Anti-N-Cadherin-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	22018-1-AP	Primärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2813891.
Anti-β-Aktin-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	66009-1-Ig	Lade-Kontrollantikörper für Western Blotting. RRID:AB_2687938.
Anti-Β-Catenin-Antikörper	Proteintech Group, Inc., USA	51067-2-AP	Primärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2086128.
BCA-Protein-Assay-Kit	Beyotime Biotechnologie, China	P0012	BCA-Protein-Assay-Kit zur Bestimmung der Proteinkonzentration.
Zellzähl-Kit-8 (CCK-8)	Dojindo Laboratories, Japan	CK04-500T	Zellviabilitäts-/Proliferationstest.
Chemilumineszenzbildgebungssystem	Uvitec Limited, Frankreich	Alliance Q9 Fortgeschrittenes Handbuch	Bildaufnahmesystem zur Erkennung von Western Blot.
CO2 Inkubator	Generische Laborausrüstung	Nicht spezifiziert	Befeuchteter CO2 Inkubator, der für Zellkulturen bei 37 °F verwendet wird; C und 5 % CO2.
Kristallviolette Lösung (0,1 %)	Beyotime Biotechnologie, China	C0121-100 mL	Kristallviolette Färbungslösung wird bei einer Arbeitskonzentration von 0,1 % verwendet.
DMEM, hoher Blutzucker	Gibco, Thermo Fisher Scientific, USA	C11995500BT	Basalmedium für Gliomzellkultur.
Fetales Rinderserum (FBS)	ExCell Bio, China	FSP500	Serumpräparat für Zellkultur.
GlioVis	gliovis.bioinfo.cnio.es	Nicht anwendbar	Webbasierte Plattform zur Visualisierung und Analyse von Datensätzen zur Expression von Gehirntumoren, insbesondere Gliomen.
GraphPad-Prisma	GraphPad Software, USA	Version 10.4.0	Software für statistische Analysen und Grafiken. RRID: SCR_002798.
HEK293T Zellen	Typkultursammlung der Chinesischen Akademie der Wissenschaften, Shanghai, China	GNHu43	Verpackungszelllinie, die für die Lentiviralproduktion verwendet wird. RRID:CVCL_0063.
HRP-konjugiertes Ziegen-Anti-Maus-IgG (H+L)	Proteintech Group, Inc., USA	SA00001-1	Sekundärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2722565.
HRP-konjugiertes Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H+L)	Proteintech Group, Inc., USA	SA00001-2	Sekundärer Antikörper gegen Western Blotting. RRID:AB_2722564.
Menschliche Astrozyten	Typkultursammlung der Chinesischen Akademie der Wissenschaften, Shanghai, China	Nicht öffentlich zugänglich	Normale menschliche Astrozyten, die als Nicht-Tumorkontrolle dienen; Katalognummer nicht öffentlich verfügbar.
Invertiertes Mikroskop	Generische Laborausrüstung	Nicht spezifiziert	Invertiertes Mikroskop für Bildaufnahmen bei Migrations- und Invasionstests.
Matrigelmatrix	Corning, USA	354234	Basementmembranmatrix, die zur Beschichtung von Einsätzen für Invasionstests verwendet wird.
Mikroplatten-Leser	Generische Laborausrüstung	Nicht spezifiziert	Mikroplattenleser, der zur Absorptionsmessung bei 450 nm in CCK-8-Tests verwendet wird.
PAGE-Gel-Vorbereitungsset, 10 %	EpiZyme, China	PG212	SDS-PAGE Gel-Vorbereitungsset.
PAGE-Gel-Vorbereitungsset, 7,5 %	EpiZyme, China	PG111	SDS-PAGE Gel-Vorbereitungsset.
Paraformaldehydlösung (4%)	Beyotime Biotechnologie, China	P0099-100 mL	4% Paraformaldehyd-Fixierung für Koloniebildung und Migration/Invasionstests.
Penicillin-Streptomycin-Lösung	Gibco, Thermo Fisher Scientific, USA	15140163	Antibiotikumpräparat zur Zellkultur.
Polybrene	Beyotime Biotechnologie, China	C0351-1 mL	Hexadimethrinbromidlösung (10 mg/mL) wird zur Erleichterung der lentiviralen Transduktion verwendet.
Vorgefärbter Proteinmarker	Elabscience, China	E-IR-R331	Protein-Molekulargewicht-Marker.
PrimeScript RT Reagenz-Kit	Takara Bio Inc., Japan	RR047A	Reverse-Transkriptions-Kit für cDNA-Synthese.
Puromycin	Beyotime Biotechnologie, China	ST551-10 mg	Puromycin-Dihydrochlorid wird zur Auswahl stabiler Knockdown-Zellen verwendet.
PVDF-Membran	Beyotime Biotechnologie, China	FFP20	Hydrophile PVDF-Membran (0,45 & Mikro; M) für Western Blot-Transfer.
R	R-Stiftung für Statistische Berechnung, Österreich	Version 4.5.1	Statistische Rechenumgebung, die für bioinformatische Analysen genutzt wird. RRID:SCR_001905.
RIPA-Lysepuffer	Beyotime Biotechnologie, China	P0013B	RIPA-Lysepuffer (stark) für die Protein-Extraktion.
SDS-PAGE Ladepuffer (5×)	Beyotime Biotechnologie, China	P0015L	Proteinproben-Ladepuffer.
SYBR Premix Ex Taq II	Takara Bio Inc., Japan	RR066A	qPCR Mastermix.
Transwell-Einsätze, 8.0-µ m Porengröße	Corning, USA	3422	Zellkultur-Einsätze mit 8,0 µ eine porengroße Polycarbonatmembran; Standard-24-Well-Format für Migrations- und Invasionstests.
TRIzol-Reagenz	Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, USA	10296010CN	RNA-Extraktionsreagenz.
U251-Gliomzellen	Nationale Sammlung authentifizierter Zellkulturen, China	SCSP-559	Menschliche Gliomzelllinie, die für Knockdown- und Funktionstests verwendet wird. RRID:CVCL_0021.
U87-Gliomzellen	Nationale Sammlung authentifizierter Zellkulturen, China	SCSP-5432	Menschliche Gliomzelllinie, die für Knockdown- und Funktionstests verwendet wird. RRID:CVCL_0022.