Diese Studie wurde vom Medical Research Ethics Committee des Heyuan People's Hospital geprüft und genehmigt (Genehmigungsnummer: YXYJLL-SFKJ202461; Genehmigungsdatum: 15. Mai 2024). Das ethische Zertifikat wurde als ergänzende Datei hochgeladen. Der Patient, Elternteil oder Vormund eines Minderjährigen hat während der Registrierung eine Erklärung unterzeichnet, in der steht: "Ich stimme zu, dass meine klinischen biologischen Proben und Daten für wissenschaftliche Forschung, technologische Innovationen und klinische Forschung, die vom Medical Research Ethics Committee genehmigt werden, nach Entfernung identifizierbarer personenbezogener Daten verwendet werden", und diese Analyse stellt keine zusätzlichen Risiken für den Patienten dar und entspricht den relevanten Vorschriften. Alle in dieser Studie verwendeten Materialien sind in der Materialtabelle aufgeführt.
Fächer
Insgesamt wurden 1.559 männliche Patienten, die zwischen Januar 2021 und Dezember 2024 die ambulante Abteilung des Heyuan People's Hospital besuchten und sich HPV-Tests unterzogen, in die Studie eingeschlossen. Die Probanden waren im Alter von 2 bis 80 Jahren (Die Studienpopulation besteht aus allen männlichen Patienten mit gültigen HPV-Nukleinsäure-Testergebnissen aus ambulanten Besuchen an dieser medizinischen Einrichtung zwischen 2021 und 2024; Das Hauptziel ist es, einen umfassenden Überblick über HPV-Tests und Infektionsmuster bei männlichen Patienten in der Region zu bieten; Darüber hinaus umfassen die HPV-Infektionswege nicht nur sexuelle Aktivität, sondern auch Reibung oder Kontakt mit der Hautoberfläche und den Schleimhäuten sowie die vertikale Übertragung von der Mutter auf das Kind. Daher wurden keine Altersbeschränkungen verhängt, mit einem Durchschnittsalter von 34,2 ± 10,7 Jahren.
Methoden
Diese Studie verwendete ein retrospektives Querschnittsdesign, um alle männlichen Patienten zu analysieren, die die ambulante Abteilung unseres Krankenhauses besuchten und sich einem HPV-Test unterzogen haben; Für diejenigen, die wiederholt getestet wurden, wurden nur die ersten Stichprobenergebnisse einbezogen.
Probensammlung
Die exfoliierten Zellproben wurden von geschulten Ärzten mit sterilen, spezialisierten Probenbürsten entnommen. Die Entnahmestellen umfassten die dorsalen und ventralen Flächen des Penis, die inneren und externen koronalen Sulci, den Eichelpenis, die distale Harnröhre sowie sichtbare Verrucous-Läsionen, wobei die Standortwahl auf Basis individueller Patientenbefunde bestimmt wurde; Nach der Sammlung wurden die Bürstenköpfe in einer speziellen Probenkonservierungslösung zerbrochen. Bedingungen zur Erhaltung der Exemplare: Nach der Probenahme wurden die Proben sofort in einem Kühlschrank bei 2–8 °C gelagert und der Test innerhalb von 3 Tagen abgeschlossen.
DNA-Extraktion
Nachdem jede Probe oszilliert und gemischt wurde, wurden nacheinander 200 μL zum Nukleinsäureextraktions- oder Reinigungsreagenz hinzugefügt. Die DNA-Extraktion erfolgte mittels magnetischer Perlentechnologie mit dem Extraktionsreagenz im SP96 vollautomatischen Nukleinsäureextraktionsinstrument.
HPV-Nachweis
HPV-DNA-Tests wurden mit dem humanen Papillomavirus-Genotypisierungskits (Typ 23) durchgeführt, das eine Kombination aus PCR-basierter In-vitro-Amplifikation und DNA-Reverse-Dot-Blot-Hybridisierung für HPV-Genotypisierung verwendet. Spezifische Primer wurden auf Basis genetischer HPV-Eigenschaften entwickelt, und Zielfragmente aus 23 HPV-Genotypen wurden amplifiziert. Die verstärkten Produkte wurden mit den auf der Membran befestigten Typisierungssonden hybridisiert, darunter 17 HR-HPV (HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82) und 6 LR-HPV (HPV6,11,42,43,81,83). Basierend auf dem Vorhandensein oder Fehlen von Hybridisierungssignalen wurde der Infektionsstatus dieser HPV-Genotypen bestimmt. Das spezifische Laborverfahren bestand darin, mit einer gefilterten Pipettenspitze 5 μL extrahierte DNA zur PCR-Reaktionsmischung hinzuzufügen, wodurch das Gesamtvolumen auf 25 μL anstieg. Anschließend wurde eine PCR-Verstärkung durchgeführt. Nach der Amplifikation wurden alle verstärkten Produkte dem isothermen Hybridisierer hinzugefügt, der Membranstreifen für die kolorimetrische Hybridisierung enthielt. Nach Abschluss der Farbentwicklung können die Ergebnisse interpretiert werden.
Statistische Analyse
Die Software SPSS 23.0 wurde für statistische Analysen verwendet. Die Zähldaten wurden als Anzahl der Fälle (n) und Prozentsatz (%) angegeben. Der Vergleich zwischen den Gruppen wurde durch den χ-2-Test durchgeführt. p < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen. Unter den 23 HPV-Genotypen weist die Positivität für einen einzelnen Genotyp auf eine HPV-Infektion hin; Positivität für nur einen Genotyp weist auf eine einzelne Infektion hin; und Positivität für zwei oder mehr Genotypen weist auf eine Mehrfachinfektion hin. Mehrere Infektionen werden basierend auf der Anzahl der koexistierenden Genotypen weiter in duale Infektionen, dreifache Infektionen, vierfache Infektionen, Pentapuleninfektionen, sechsfache Infektionen und höher klassifiziert." Das Verhältnis zur gesamten Nachweisfrequenz" wurde unter Verwendung der Gesamtzahl der Genotyp-Nachweise (1.238) als Nenner berechnet, da Patienten mit mehreren Infektionen mehrere Genotypen beitrugen.