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Methodenartikel

Standardisierte Präparation der isolierten glatten Kaninchen-Duodenalmuskulatur für die in vitro pharmakologische Beurteilung der kontraktilen Aktivität

113 Ansichten

DOI:

10.3791/71167

12. Juni 2026

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier stellen wir ein Protokoll zur Standardisierung der Vorbereitung isolierter Duodenal-Glattmuskulatur von Kaninchen für die in vitro pharmakologische Begutachtung vor, wobei ein Horizontal Constant-Temperature Smooth Muscle Experiment System zur Echtzeit-Datenerfassung der kontraktilen Aktivität verwendet wird.

Zusammenfassung

Die koordinierte kontraktile Aktivität der gastrointestinalen glatten Muskulatur bildet die physiologische Grundlage für die Aufrechterhaltung normaler Verdauungs-, Aufnahme- und Transportfunktionen, wobei ihre Funktionsstörung eng mit Motilitätsstörungen verbunden ist. Die Technik der isolierten Organperfusion eliminiert komplexe in vivo Interferenzen – wie neuronale, endokrine und hämodynamische Faktoren – und dient als klassisches Modell für pharmakologische Studien. Zu diesem Zweck beschreibt diese Studie ein schrittweises Protokoll zur standardisierten Präparation von Kaninchen-isolierter Duodenalglattmuskulatur. Der prozedurale Arbeitsablauf hebt die entscheidenden Schritte hervor, wie die Vorbereitung von Lösungen, die Euthanasierung des Kaninchens, die Durchführung einer präzisen aseptischen mittleren Bauchlaparotomie für eine schnelle Gewebeexzision, das Aufhängen der glatten Muskelstreifen und die Kalibrierung von Transducern für die Echtzeit-Spannungsmessung. Basierend auf dieser technischen Plattform validierten wir die Methode weiter, indem wir die Wirkung von Huoxiang Zhengqi Oral Liquid (HXZQ-OL) auf spontane Kontraktionen und durch Acetylcholin/Bariumchlorid induzierte tetanische Kontraktionen bewerteten. Abschließend liefert dieses Protokoll einen robusten und hochgradig reproduzierbaren methodischen Rahmen und bietet eine breit anwendbare In-vitro-Screening-Plattform für die pharmakologische Bewertung von therapeutischen Wirkstoffen, die auf die gastrointestinale Motilität abzielen.

Einleitung

Die koordinierte kontraktile Aktivität des gastrointestinalen glatten Muskels bildet die physiologische Grundlage für die Aufrechterhaltung normaler Verdauungs-, Absorptions- und Transportfunktionen1. Ihre Funktionsstörung steht in engem Zusammenhang mit verschiedenen häufigen klinischen Erkrankungen, darunter Reizdarmsyndrom2, funktionelle Dyspepsie3 und postoperative gastrointestinale Motilitätsstörungen4. Die Aufklärung der molekularen und pharmakologischen Mechanismen, die die glatte Muskulatur regulieren, ist entscheidend für die Entwi....

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Protokoll

Gesunde, erwachsene neuseeländische Weißkaninchen beiderlei Geschlechts (mit einem Gewicht von 2,0–2,5 kg) wurden in dieser Arbeit verwendet. Alle Tierversuchsverfahren wurden gemäß den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt und vom Ethikkomitee für Labortiere der Chengdu-Universität für Traditionelle Chinesische Medizin genehmigt (Genehmigungsnummer: [2026070]). Alle Anstrengungen wurden unternommen, um Tierleiden zu minimieren und die Anzahl der eingesetzten Tiere zu reduzieren. Das Workflow-Diagramm ist in Abbildung 1 dargestellt.

1. Lös....

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Ergebnisse

Dieses experimentelle Protokoll beschreibt die standardisierte Präparationsmethode für isolierte Embryodenalmuskelstreifen von Kaninchen und den Prozess, deren dynamische Spannungs- und Frequenzänderungen in Echtzeit mit einem isolierten Organperfusionssystem erfasst werden. Nach diesem Protokoll wurde HXZQ-OL sequentiell durch kumulative Dosierung in ein 20-mL-Terod-Lösungsbad gegeben, wodurch die Endvolumenkonzentrationen von 10, 20, 30, 40 und 50 μL/mL im Bad erreicht wurden. Unter Anlehnung an die Standards der Chine.......

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Diskussion

Isolierte Organperfusions- und Spannungserfassungstechniken stellen klassische Methoden zur Untersuchung glatter Muskulaturphysiologie und Pharmakologie dar. Ihre Ergebnisse sind von großer Bedeutung für die Aufklärung der pathophysiologischen Mechanismen, die gastrointestinalen Motilitätsstörungen, Gefäßerkrankungen und Gebärmutterdysfunktion zugrunde liegen 12,13,14,15.

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte, die offengelegt werden müssen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde vom Xinglin Scholar Research Promotion Project der Chengdu University of TCM (QJRC2022031), dem Xinglin Scholar Nursery Talent Project der Chengdu University of TCM (MPRC2023027) und dem Chengdu University of TCM—Affiliated Hospital Joint Innovation Fund (LH202402016) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
0,5-10 µL PipetteDalong Laboratory Instruments Co., Ltd.7010101004
10 µL PipettenspitzenLABSELECTT-001-10
10 mL Volumetrische FlascheSichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.B-043804
100 mL Volumetrische FlascheSichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.B-043807
100-1000 µL PipetteDalong Laboratory Instruments Co., Ltd.7010101014
1250 µL PipettenspitzenLABSELECTT-001-1250
20 mL Volumetrische FlascheSichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.B-010105
200 µL PipettenspitzenLABSELECTT-001-200
50 mL Konischer ZentrifugenbehälterLABSELECTCT-002-50A
5-50 µL PipetteDalong Laboratory Instruments Co., Ltd.7010101006
AcetylcholinchloridSupelcoPHR1546
All-in-One LaborcomputerLenovoR5-3500U
AtropinsulfatMacklinA822893
BariumchloridSigma-Aldrich342920
CalciumchloridSigma-Aldrich499609
D-GlucoseSigma-AldrichG5767
Gefrierpunkt-OsmometerShanghai Precision Instruments Co., Ltd.BS100
Horizontales Konstanttemperatur-Experimentsystem für glatte MuskulaturChengdu Instrument FactoryDSQG-1
Huoxiang Zhengqi-OralflüssigkeitTaiji Group Co., Ltd. Z50020409
MagnesiumchloridSigma-AldrichM8266
Mehrkanaliges physiologisches Aufzeichnungs- und VerarbeitungssystemChengdu Instrument FactoryRM6240XC
Neuseeland-WeißkaninchenPizhou Dongfang Breeding Co., Ltd. (Lizenz-Nr.: SCXK[Su]2022-0004) beides Geschlecht (Gewicht 2,0–2,5 kg)
pH-MeterShanghai Leici PHS-25
KaliumchloridSigma-AldrichP5405
Povidon-IodH&H Medical Co., Ltd.3180132
Präzisionswaage (0,1 mg)SartoriusBCE64i
SalzlösungH&H Medical Co., Ltd.100014438029
NatriumbicarbonatSigma-AldrichS6014
NatriumchloridSigma-AldrichS9888
NatriumdihydrogenphosphatSupelco1063700250
Natrium-PentobarbitalSigma-AldrichP3761
VerapamilhydrochloridMacklinV820460
VortexmixerKylin-BellXW-80A

Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

Kaninchen glatte MuskulaturIn vitro PharmakologieOrganperfusionPr paration von MuskelstreifenSpannungsaufzeichnungGastrointestinale Motilit tMotilit tsst rungen