Die koordinierte kontraktile Aktivität der gastrointestinalen glatten Muskulatur bildet die physiologische Grundlage für die Aufrechterhaltung normaler Verdauungs-, Aufnahme- und Transportfunktionen, wobei ihre Funktionsstörung eng mit Motilitätsstörungen verbunden ist. Die Technik der isolierten Organperfusion eliminiert komplexe in vivo Interferenzen – wie neuronale, endokrine und hämodynamische Faktoren – und dient als klassisches Modell für pharmakologische Studien. Zu diesem Zweck beschreibt diese Studie ein schrittweises Protokoll zur standardisierten Präparation von Kaninchen-isolierter Duodenalglattmuskulatur. Der prozedurale Arbeitsablauf hebt die entscheidenden Schritte hervor, wie die Vorbereitung von Lösungen, die Euthanasierung des Kaninchens, die Durchführung einer präzisen aseptischen mittleren Bauchlaparotomie für eine schnelle Gewebeexzision, das Aufhängen der glatten Muskelstreifen und die Kalibrierung von Transducern für die Echtzeit-Spannungsmessung. Basierend auf dieser technischen Plattform validierten wir die Methode weiter, indem wir die Wirkung von Huoxiang Zhengqi Oral Liquid (HXZQ-OL) auf spontane Kontraktionen und durch Acetylcholin/Bariumchlorid induzierte tetanische Kontraktionen bewerteten. Abschließend liefert dieses Protokoll einen robusten und hochgradig reproduzierbaren methodischen Rahmen und bietet eine breit anwendbare In-vitro-Screening-Plattform für die pharmakologische Bewertung von therapeutischen Wirkstoffen, die auf die gastrointestinale Motilität abzielen.