Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Forschungsartikel
* These authors contributed equally
Bei Zebrafischen war Mollugin in sicheren Dosen (≤200 µg/mL) mit einer verbesserten Regeneration des Schwanzes verbunden, begleitet von Veränderungen in der Expression apoptosebezogener Gene, entzündungsfördernder Marker, der Aktivität antioxidativer Enzyme und makrophagenassoziierter Marker. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Mollugin die lokale Verletzungsreaktion während der Schwanzregeneration bei Zebrafischen modulieren könnte.
Mollugin ist eine natürliche Naphthochinonverbindung mit berichteten entzündungshemmenden und antioxidativen Wirkungen, doch seine Rolle bei der Geweberegeneration ist noch nicht vollständig verstanden. In dieser Studie wurde ein Zebrafisch-Schwanzamputationsmodell verwendet, um die Effekte von Mollugin auf die Wundheilung sowie verbundene Immun- und Redoxreaktionen zu untersuchen. Zebrafischembryonen wurden nach Verletzung des Schwanzes Mollugin in Konzentrationen von 22 µg/mL, 66 µg/mL und 200 µg/mL verabreicht. Die Behandlung mit Mollugin war mit einer dosisabhängigen Verbesserung der Wiederherstellung der Schwanzfläche assoziiert, begleitet von einer verminderten Expression apoptosebezogener Gene und einer Hemmung proinflammatorischer Mediatoren, darunter IL-1β, IL-6, TNF-α, TLR4 und NF-κB1. Parallel dazu normalisierte Mollugin die Aktivitäten der antioxidativen Enzyme Superoxiddismutase und Katalase. Die Fluoreszenzbildgebung an Tg(mpeg1:GFP)-Zebrafischen zeigte einen zeitabhängigen Einfluss von Mollugin auf die Anreicherung von Makrophagen: nach 24 h war keine deutliche Reduktion zu beobachten, doch nach 48 h zeigten die Gruppen mit 66 und 200 µg/mL im Vergleich zur verletzten Modellgruppe eine verringerte makrophagenpositive Fläche. Die qRT-PCR-Analyse ergab zudem eine verminderte Expression des M1-assoziierten Markers iNOS und eine erhöhte Expression des M2-assoziierten Markers Arginase-1. Insgesamt legen diese Ergebnisse nahe, dass Mollugin die Regeneration des Zebrafischschwanzes unterstützen könnte, verbunden mit Veränderungen bei entzündlichen, oxidativem Stress, apoptosebezogenen und makrophagenassoziierten Markern. Weitere Studien sind erforderlich, um die zugrundeliegenden zellulären und molekularen Mechanismen zu klären.
Die Geweberegeneration ist ein entscheidender physiologischer Prozess, durch den Organismen Schäden reparieren, und beinhaltet eine komplexe Regulation der Zellproliferation, Differenzierung sowie die Aufrechterhaltung der mikroumgebungsbedingten Homöostase1. Unter den Wirbeltiermodellen haben sich Zebrafische als zentrales System zur Untersuchung von Wundheilungsmechanismen aufgrund ihrer bemerkenswerten Regenerationsfähigkeit herauskristallisiert. Insbesondere die Regeneration der Schwanzflosse bei Zebrafischen umfasst die räumliche und zeitliche Koordination mehrerer biologischer Ereignisse, darunter die Regulation der Entzündungsreaktion, das Gleichgewicht der oxidativen Antwort sowie die Kontrolle der Apoptose2,3. In den letzten Jahren rücken die pharmakologischen Wirkungen natürlicher Produkte verstärkt in den Fokus der regenerativen Medizin. Naphthochinonverbindungen insbesondere werden aufgrund ihrer vielfältigen biologischen Effekte intensiv erforscht4. Mollugin ist eine aus Pflanzen der Familie der Rubiaceae gewonnene Naphthochinonverbindung, die in früheren Studien entzündungshemmende, antioxidative sowie regulatorische Wirkungen auf den Zellzyklus gezeigt hat5,6. Der Wirkmechanismus von Mollugin in der Geweberegeneration ist jedoch noch unklar, und seine mögliche Rolle bei der Modulation der entzündlichen Mikroumgebung und der Polarisation von Immunzellen bedarf einer systematischen Untersuchung.
Nach einer Verletzung wird die Entzündung rasch aktiviert und beeinflusst direkt die Gewebereparatur. Ein mäßiges entzündliches Signal ist essenziell für die Beseitigung nekrotischen Gewebes und die Initiierung des Regenerationsprogramms, während eine übermäßige Entzündungskaskade den oxidativen Stress verschärfen und zur Gewebsfibrose führen kann7. Zytokine wie IL-1β, IL-6 und TNF-α steigen nach der Verletzung deutlich an und gehen mit der Aktivierung des TLR4/NF-κB-Signalwegs einher, was zu verstärkten entzündlichen Reaktionen und einer Umgestaltung des Gewebes führt8,9. Das interzelluläre Adhäsionsmolekül-1 (ICAM-1) und der CC-Chemokin-Ligand 2 (CCL-2) sind nach einer Verletzung ebenfalls erhöht und mit einer verstärkten Rekrutierung von Neutrophilen und Makrophagen in das geschädigte Gewebe assoziiert10. Bemerkenswerterweise verschärft ein oxidativer Ungleichgewicht den Gewebeschaden weiter, und verminderte Aktivitäten der Superoxiddismutase (SOD) und der Katalase (CAT) weisen auf eine eingeschränkte antioxidative Kapazität hin2,11.
Makrophagen fungieren als zentrale Regulatoren des entzündlichen Mikromilieus, und ihre funktionelle Polarisation beeinflusst maßgeblich den Regenerationsprozess12. M1-Makrophagen sind mit der Expression der induzierbaren Stickstoffmonoxid-Synthase (iNOS) und entzündlichen Aktivitäten assoziiert, während M2-Makrophagen Arginase-1 (Arg-1) exprimieren und mit der Gewebereparatur verknüpft sind13,14. Die Polarisation von Makrophagen wird durch lokale Zytokine, oxidativen Stress und signalsbezogene Apoptose beeinflusst. In diesem Zusammenhang wirkt das aus Bcl-2-Familienproteinen und Caspase-3 bestehende Netzwerk der apoptotischen Regulation nicht nur auf das Zellüberleben an der Verletzungsstelle ein, sondern moduliert indirekt auch das chemotaktische Verhalten von Immunzellen durch die Freisetzung von "find-me"-Signalen15. Daher könnte die Erforschung von interventionsbasierten Strategien, die entzündliche Reaktionen, oxidativen Stress und die Makrophagenpolarisation gleichzeitig modulieren, zur Verbesserung der Geweberegeneration beitragen.
Natürliche Verbindungen haben einzigartige Vorteile bei der Modulation dieser biologischen Prozesse gezeigt. Neuere Studien haben bestätigt, dass Naphthochinon-Substanzen aufgrund ihrer konjugierten Strukturen das Potenzial besitzen, freie Radikale zu scavengen; ihr Benzochinon-Kern kann redoxempfindliche Signalwege über Elektronentransfermechanismen beeinflussen16,17. Es wurde berichtet, dass Mollugin entzündliche Reaktionen bei DSS-induzierter Kolitis abschwächt, verbunden mit einer verminderten Produktion proinflammatorischer Zytokine und einer verringerten TLR4-Expression in Kolongewebe18. Mollugin wurde zudem gezeigt, dass es die TAK1-NF-κB/MAPK-Signalübertragung hemmt und den Keap1-Nrf2-Weg in Makrophagen aktiviert6; seine Wirkung auf die Makrophagenpolarisierung und das Apoptose-Antiapoptose-Netzwerk in einem in-vivo-Wundmodell ist jedoch bisher nicht geklärt. Zudem müssen die dosisabhängigen biologischen Effekte von Mollugin und seine regulatorische Rolle während des Regenerationsprozesses systematisch aufgeklärt werden.
Die vorliegende Studie untersuchte die Wirkungen von Mollugin in einem Zebrafisch-Modell zur Regeneration des Schwanzflossengewebes. Insbesondere analysierten wir das Nachwachsen des Schwanzes, die Genexpression apoptosebezogener Gene, entzündliche Signalwege, die Aktivität antioxidativer Enzyme sowie makrophagenassoziierte Reaktionen nach der Behandlung mit Mollugin. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Behandlung mit Mollugin mit einer verbesserten Regeneration des Schwanzes sowie Veränderungen mehrerer Marker der Verletzungsreaktion in diesem Zebrafisch-Modell verbunden ist.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Alle Tierversuche erfolgten gemäß den Richtlinien des National Research Council für die Pflege und Verwendung von Labortieren und wurden von dem Ethikausschuss des Fuzhou First General Hospital genehmigt (Genehmigungsnummer 202408002).
Zebrafisch-Zucht
Alle Experimente wurden mit Zebrabärblingen (Danio rerio) unter standardisierten Laborbedingungen durchgeführt. Wildtyp-AB-Zebrafische wurden für den Toxizitätsassay und den Schwanzamputations-Regenerationsassay verwendet. Tg(mpeg1:GFP)-Zebrafische wurden speziell für die Makrophagen-Bildgebung eingesetzt. Tg(mpeg1:GFP) ist eine Makrophagen-Reporterlinie, bei der die Expression von GFP Makrophagen-Linienzellen unter Kontrolle des makrophagenexprimierten mpeg1-Promotors markiert. Alle Zebrafisch-Linien wurden bei 28,5 °C unter einem 14-h/10-h-Licht/Dunkel-Zyklus gehalten. Für Experimente wurden nur morphologisch normale Embryonen verwendet. Für alle Experimente wurden die Embryonen in Danieau-Puffer inkubiert, der aus Reagenzien-Grad-Chemikalien hergestellt wurde, einschließlich NaCl, KCl, Ca(NO₃)₂·4H₂O, MgSO₄·7H₂O und HEPES, das auf pH 7,2 eingestellt wurde.
Arzneimittelherstellung und Sicherheitsbestimmung
Mollugin (40 mg) wurde in 1 mL DMSO gelöst, um einen 40 mg/mL-Stammsatz herzustellen. Der Stammsatz wurde zunächst im Verhältnis 1:10 in Danieau-Puffer auf 4 mg/mL verdünnt und anschließend weiter auf 22, 66 und 200 µg/mL für die Behandlungen verdünnt. Zur Bestimmung der maximalen sicheren Konzentration wurden 48 Stunden nach der Befruchtung (hpf) befruchtete Embryonen des AB-Stamms entchorioniert und mit 0,003 % Natriumhypochlorit desinfiziert, bevor sie auf 6-Loch-Platten verteilt wurden (n = 20, jeweils drei Wiederholungen pro Gruppe). Die Embryonen wurden 48 Stunden lang bei 28,5 °C in E3-Medium mit Mollugin (22 µg/mL, 66 µg/mL, 200 µg/mL, 240 µg/mL, 280 µg/mL, 320 µg/mL oder 360 µg/mL) inkubiert. Das Überleben wurde unter einem Stereomikroskop überwacht, und die höchste Konzentration mit einer Embryovitalität von ≥90 % wurde als sichere Obergrenze für nachfolgende Experimente festgelegt.
Konstruktion des Modells zur Schwanzamputation und Regeneration
Für Regenerationsstudien wurden 48 hpf Wildtyp-AB-Embryonen mit 0,03 % Tricain, hergestellt in Embryomedium, anästhesiert und lateral unter einem Stereomikroskop positioniert. Vor der Schwanzamputation wurden die Embryonen in Danieaus Puffer gehalten. Eine standardisierte transversale Schwanzamputation wurde unter stereomikroskopischer Kontrolle durchgeführt. Die Amputationslinie wurde unmittelbar hinter der Chorda-Spitze angelegt, wobei das hintere Ende der Chorda als anatomische Landmarke diente. Der distal zur Landmarke liegende Schwanzflossenlappen wurde mit einem Mikroskalpell entfernt, um ein konsistentes Verletzungsmaß zwischen den Proben sicherzustellen. Unmittelbar nach der Amputation (0 h) wurden Bilder mit einem stereoskopischen Fluoreszenzmikroskop aufgenommen. Nach der Amputation wurden die Embryonen in das entsprechende auf E3-Medium basierende Behandlungsmedium für den Regenerationsversuch überführt. Mollugin-Arbeitslösungen wurden durch Verdünnen der Mollugin-Stocklösung in E3-Medium auf Endkonzentrationen von 22, 66 und 200 µg/mL hergestellt. Mollugin wurde während der Regenerationsphase über eine Badexposition verabreicht. Um die Fahrzeugexposition zu kontrollieren, wurden die ungeverletzte Kontrollgruppe und die verletzte Modellgruppe in E3-Medium mit 0,5 % DMSO gehalten, was der Endkonzentration von DMSO in der Mollugin-Gruppe mit 200 µg/mL entspricht. Die Embryonen wurden zwei Tage lang in 6-Well-Platten bei 28,5 °C gehalten, wobei das jeweilige auf E3-Medium basierende Behandlungsmedium täglich erneuert wurde. Die Regeneration wurde durch Bildaufnahme 24 und 48 Stunden nach der Amputation unter Weißlicht- und Fluoreszenzbedingungen dokumentiert, um das Nachwachsen des Schwanzes und die Verteilung von Makrophagen zu beurteilen. Bildmessungen wurden mit ImageJ durchgeführt.
Zur Quantifizierung der Regeneration wurde die re-generierte Schwanzfläche als absolute Fläche in µm2 gemessen und nicht auf die Embryogröße oder die ursprüngliche Schwanzgröße normalisiert. Um die Variabilität zu minimieren, wurden alle Embryonen am gleichen anatomischen Merkmal direkt hinter der Chorda-Spitze amputiert, und dieses gleiche Merkmal wurde verwendet, um den Messbereich über alle Gruppen hinweg festzulegen. Interessenbereiche wurden manuell in ImageJ basierend auf der Umrisslinie des Schwanzes abgegrenzt, und die Analyse wurde von einem Untersucher durchgeführt, der bezüglich der Behandlungsgruppen verblindet war. Zur Quantifizierung des makrophagenpositiven Bereichs wurden GFP-Fluoreszenzbilder von Tg(mpeg1:GFP)-Embryonen in ImageJ analysiert. Der Bereich der Schwanzverletzung/Regeneration wurde manuell als Interessenbereich definiert, wobei das gleiche anatomische Merkmal wie bei der Schwanzflächenmessung verwendet wurde. Die Bilder wurden in 8-Bit-Graustufen konvertiert, und die Hintergrundfluoreszenz wurde unter Verwendung identischer Hintergrundkorrektur-Einstellungen für alle Bilder desselben Experiments subtrahiert. Anschließend wurde ein fester Fluoreszenzschwellenwert einheitlich auf alle Bilder innerhalb jedes Experiments angewendet, um makrophagenassoziierte GFP-positive Signale zu identifizieren. Die makrophagenpositive Fläche wurde als die schwellenwertüberschreitende GFP-Fläche innerhalb des definierten ROI berechnet. Die Messungen basierten auf der fluoreszenzpositiven Fläche und nicht auf der Fluoreszenzintensität oder einer manuellen Zellzählung. Alle Bildanalysen wurden von einem Untersucher durchgeführt, der bezüglich der Behandlungsgruppen verblindet war.
RNA-Extraktion und quantitative Echtzeit-PCR (qRT-PCR)
Nach Abschluss des Regenerationsassays wurden Embryonen aus jeder experimentellen Bedingung gesammelt und gepoolt (mindestens 20 Embryonen pro Gruppe) zur RNA-Analyse. Für jede Bedingung bestand eine biologische Wiederholung aus einer gepoolten Probe, die mindestens 20 Embryonen derselben experimentellen Gruppe enthielt. Für jede Bedingung wurden drei unabhängige, gepoolte biologische Wiederholungen hergestellt und für die statistische Analyse verwendet. Die Gesamt-RNA wurde nach mechanischer Homogenisierung in einem auf Phenol/Guanidin basierenden RNA-Extraktionsreagenz isoliert. Die RNA-Qualität und -Konzentration wurden spektrophotometrisch durch Messung der A260/A280-Verhältnisse bestimmt. Die cDNA-Synthese erfolgte mit einem kommerziellen Reverse-Transkriptionskit. Die PCR-Amplifikation wurde mit SYBR-Green-Reagenzien durchgeführt. Die qRT-PCR-Zyklusbedingungen waren wie folgt: anfängliche Denaturierung bei 95 °C für 30 s, gefolgt von 40 Zyklen mit Denaturierung bei 95 °C für 5 s und Annealing/Extension bei 60 °C für 30 s. Die Expressionslevel von Genen, die mit Apoptose (Caspase-3 und Bcl-2), Entzündung (TNF-α, IL-1β, IL-6, NF-κB1, TLR4, CCL2 und ICAM1) sowie Makrophagen-Phänotyp (iNOS und Arginase-1) assoziiert sind, wurden gemessen. β-Aktin diente als Referenzgen. Die relativen Änderungen der Genexpression wurden nach der 2−ΔΔCt-Methode berechnet. Die Primerinformationen sind in Tabelle 1 aufgeführt.
Aktivitätsassays für SOD und CAT
Die SOD- und CAT-Spiegel wurden zur Beurteilung des antioxidativen Status nach Schwanzverletzung herangezogen. 48 Stunden nach der Amputation wurden Zebrafische aus jeder Gruppe gesammelt und in kaltem PBS homogenisiert. Nach Zentrifugation wurden die klaren Extrakte mithilfe kommerzieller Aktivitätsassay-Kits zur Bestimmung der SOD- und CAT-Aktivität verwendet. Die SOD-Aktivität wurde mit einem WST-1-basierten Assay-Kit gemäß den Herstelleranweisungen gemessen. Die Proben wurden zusammen mit Standardlösungen in 96-Well-Assay-Platten pipettiert, und die Absorption wurde mit einem Mikroplatten-Reader aufgezeichnet. Die Enzymaktivitäten wurden anhand von Standardkurven ermittelt. Alle Assays wurden im Dreifachansatz durchgeführt.
Statistische Analyse
Die Daten werden als Mittelwert ± SEM aus mindestens drei unabhängigen Experimenten dargestellt. Bei dem Toxizitätsassay bestand jedes unabhängige Experiment aus einer Embryonencharge mit je 20 Embryonen pro Gruppe und dreifachen Ansätzen. Bei der Regenerationsbildgebung und der Makrophagenbildgebung in Tg(mpeg1:GFP)-Zebrafischen wurden einzelne Embryonen als Mess-Einheiten verwendet, wobei pro Gruppe 10 Embryonen analysiert wurden. Bei der qRT-PCR-Analyse bestand eine biologische Wiederholung aus einer gepoolten Probe, die mindestens 20 Embryonen derselben Versuchsgruppe enthielt; pro Bedingung wurden drei unabhängige, gepoolte biologische Wiederholungen analysiert. Bei der Analyse der SOD- und CAT-Aktivität wurden pro Bedingung fünf unabhängige, gepoolte biologische Wiederholungen analysiert. Gruppenunterschiede wurden mittels einfaktorieller ANOVA mit Tukeys post-hoc-Test ausgewertet. Die statistischen Analysen wurden mit GraphPad Prism durchgeführt. Unterschiede mit p < 0,05 wurden als signifikant angesehen.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Toxizität und Bestimmung der sicheren Dosis
Um die Wirkungen von Mollugin zu untersuchen, führten wir zunächst Toxizitätstests durch. Die Ergebnisse zeigten, dass die Sterblichkeit von Zebrafischembryonen bei Konzentrationen bis zu 200 µg/mL gering blieb, während bei Konzentrationen über 200 µg/mL eine erhöhte Sterblichkeit beobachtet wurde (Tabelle 2). Daher wurde die höchste sichere Dosis mit 200 µg/mL festgelegt, während die niedrige und mittlere Dosis bei 22 bzw. 66 µg/mL lagen.<...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
In dieser Arbeit untersuchten wir die Wirkungen von Mollugin auf die Regeneration des Zebrafischschwanzes. Im getesteten Dosisbereich war die Behandlung mit Mollugin mit einer verbesserten Wiederherstellung des Schwanzareals nach Verletzung verbunden, zusammen mit Veränderungen in der Genexpression apoptoserelevanter Gene, entzündlichen Markern, der Aktivität antioxidativer Enzyme sowie makrophagenassoziiierter Marker.
Zebrafische, ein wichtiges Modell für Regenerationsstudien, zeigen eine Sch...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Die Autoren geben keine Wettbewerbsinteressen an.
Die vorliegende Studie wurde von der Gesundheitskommission der Provinz Fujian in China (Zuschuss-Nr. 2022QNA085) gefördert.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 6-Loch-Gewebekulturplatten | Corning | 3516 | |
| Catalase-(CAT-)Testkit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A007-1-1 | |
| Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | |
| CMax Plus Mikroplattenreader | Molecular Devices | iD3s | |
| Danieau’s Puffer – Ca(NO3)2·4H2O | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | Endkonzentration in Danieau’s Puffer: 0,6 mM. |
| Danieau’s Puffer – HEPES | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | Endkonzentration in Danieau’s Puffer: 5 mM; pH auf 7,2 eingestellt. |
| Danieau’s Puffer – KCl | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | Endkonzentration in Danieau’s Puffer: 0,7 mM. |
| Danieau’s Puffer – MgSO4·7H2O | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | Endkonzentration in Danieau’s Puffer: 0,4 mM. |
| Danieau’s Puffer – NaCl | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | Endkonzentration in Danieau’s Puffer: 58 mM. |
| Dimethylsulfoxid (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| E3-Embryomedium | Im Labor hergestellt (Standardrezeptur) | N/A | Standardrezeptur. |
| Gen-spezifische qPCR-Primer (tnfα, il1β, il6, nfkb1, tlr4, ccl2, icam1, inos, Arginase-1, Caspase-3, bcl2, β-Actin) | Sangon Biotech | N/A | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software, San Diego, CA, USA | N/A | Version 8.0. |
| ImageJ-Software | National Institutes of Health (NIH) | N/A | Version 1.52n. |
| Mollugin (≥98 %, HPLC) | Sigma-Aldrich | SMB00431 | Wirkstoff aus Rubia cordifolia, in DMSO auf 40 mg/mL gelöst und in E3-Medium auf 22, 66 und 200 µg/mL verdünnt. |
| Motorisierter Gewebehomogenisator | IKA, T10 basic ULTRA-TURRAX (oder gleichwertig) | N/A | |
| NovoScript 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix | Novoprotein | abs60077 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | pH 7,4 |
| Echtzeit-PCR-System (Archimed X4) | Sansure Biotech Inc. | Archimed X4 | |
| Kühlmikrozentrifuge | SCILOGEX | CF1524R | |
| RNA-freie Pipettenspitzen | Sangon Biotech | F603222-0010 | |
| RNAiso Plus | Takara Bio Inc. | 9109 | Phenol-/Guanidin-basiertes Reagenz zur RNA-Extraktion. |
| RNase-freie Mikrozentrifugenröhrchen, 1,5 mL | Axygen / Eppendorf | N/A | |
| SMZ800N Fluoreszenz-Stereomikroskop | Nikon | SMZ800N | Fluoreszenz-Stereomikroskop zur Abbildung von Tg(mpeg1:GFP)-Larven und Quantifizierung der Makrophagenaggregation. |
| Natriumhypochlorit-Lösung | McLean, USA | N/A | Arbeitslösung 0,003 %. |
| SYBR Green qPCR Mix (2× SYBR qPCR Mix) | Novoprotein | E096 | |
| SZX16 Stereomikroskop | Olympus | SZX16 | Wird für morphologische Beobachtungen, Toxizitätsbewertung und Flossenamputation an Larven verwendet. |
| Gesamt-Superoxiddismutase-(T-SOD-)Testkit | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A001-3 | |
| Transgene Zebrafische Tg (mpeg1:GFP) | Anburui, Fujian, China (oder eigene Kolonie) | N/A | Makrophagen-Reporterlinie. |
| Tricainmethansulfonat (MS-222) | Sigma-Aldrich | E10521 | Arbeitslösung 0,03 %. |
| UltraPure DNase-/RNase-freies destilliertes Wasser | Invitrogen | 10977023 | |
| Wildtyp-Zebrafische, Stamm CZ98 (Danio rerio) | Anburui, Fujian, China | N/A | Befruchtete Embryonen und Larven wurden aus adulten Zuchttieren gewonnen. |
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.