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Methodenartikel

Multimodale verhaltensbezogene Phänotypisierung stressbedingter depressionähnlicher Zustände bei Drosophila melanogaster

166 Aufrufe

DOI:

10.3791/71280

22. Juni 2026

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll bietet einen Rahmen zur Bewertung stressinduzierter Verhaltensänderungen bei Drosophila melanogaster. Die Kombination komplementärer Assays ermöglicht die Quantifizierung von Aktivität, Erkundung und Entscheidungsfindung für einzelne Fliegen. Der Ansatz ist flexibel und kann an eine Vielzahl von Studien angepasst werden, die Stressbiologie, Stoffwechsel und neurobehaviorale Funktionen untersuchen.

Zusammenfassung

Metabolische, neurodegenerative und stressbedingte Störungen gehen häufig mit veränderter Fortbewegung, beeinträchtigter Entscheidungsfindung und verminderter Verhaltensflexibilität einher. Zugängliche multimodale Verhaltensrahmen zur Quantifizierung dieser Phänotypen bei Drosophila melanogaster bleiben jedoch begrenzt. Hier wird ein Protokoll vorgestellt, das erzwungene Schwimmexposition, Y-Labyrinth-Drehverhalten und -händigkeit, Phototaxis und Aktivitätsbewertung im FlyVac-System, offene Felderkundung und langfristige Lokomotorüberwachung mit dem Drosophila Activity Monitor integriert. Diese komplementären Assays erfassen mehrere Verhaltensdimensionen, darunter motorischer Output, Motivation, Entscheidungsstruktur und Verhaltensvariabilität, als funktionelle Messungen neuronaler und metabolischer Zustände. Die Pipeline ist skalierbar, reproduzierbar und anpassungsfähig an pharmakologische, genetische und Umweltmanipulationen und bietet einen vielseitigen Rahmen zur Erkennung stress-, metabolischer und neurodegenerationsbezogener Verhaltensphänotypen bei Drosophila.

Einleitung

Verhaltensänderungen wie Veränderungen in der Fortbewegung, Entscheidungsfindung und explorativen Aktivitäten werden häufig als Indikatoren auf Organismusebene für den neuronalen und physiologischen Zustand verwendet. Über Taxa hinweg äußert sich neuronale Dysfunktion oft in veränderter Bewegungsstruktur, verminderter Explorationsmotivation, beeinträchtigtem sensorisch gesteuertem Entscheidungsverhalten und Veränderungen in der Verhaltensvorhersehbarkeit. Da diese Ausgaben auf Organismusebene neuronale, metabolische und physiologische Zustände integrieren, liefern sie skalierbare Anzeigen zur Erkennung krankheitsrelevanter Phänotypen.....

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Protokoll

Der erzwungene Schwimmtest wurde gemäß den Prinzipien der 3Rs (Ersatz, Reduktion und Verfeinerung) durchgeführt. Der Ersatz wurde durch die Verwendung von Drosophila melanogaster als Modell für wirbellose Tiere erreicht, wodurch Paradigmen des erzwungenen Schwimmens von Wirbeltieren vermieden wurden, die aus ethischen Gründen zunehmend eingeschränkt werden. Die Reduzierung wurde durch die hohe Durchsatznatur des Tests unterstützt, der robuste Verhaltensschlussfolgerungen aus relativ kleinen Kohorten ermöglicht und gleichzeitig die Nutzung von Tieren minimiert. Die Verfeinerung wurde durch die Begrenzung der Schwimmexposition ....

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Ergebnisse

Die Anwendung des Vibrations-Stress-Protokolls führte zu messbaren Verhaltensänderungen über mehrere Tests hinweg (Abbildung 1), die darauf ausgelegt sind, Aktivität, Bewältigungsverhalten und Entscheidungsfindung bei D. melanogaster zu erfassen.

Depressionsähnliche Induktion

Fliegen, die wiederholten mechanischen Schwingungen ausgesetzt waren (Abbildung 1A), zeigten im Vergleich z.......

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Diskussion

Das vorliegende Protokoll demonstriert einen multimodalen Ansatz zur Induzierung und Quantifizierung depressionähnlicher Verhaltenszustände bei D. melanogaster. Mit einem vibrationsbasierten Stressparadigma in Kombination mit komplementären Verhaltenstests zeigt diese Studie, dass depressionsähnliche Induktion über Maße wie Bewältigungsverhalten, Lokomotorik, explorative Dynamik, Entscheidungsfindung und Verhaltensvariabilität16 nachgewiesen werden kann. .......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte.

Danksagungen

Wir danken dem Fulbright US Student Program, dem lettischen Fulbright Post und dem US-Außenministerium. Dieses Projekt wurde durch einen Zuschuss (lzp-2024/1-0437) des Lettischen Wissenschaftsrats unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Anästhesiegeräte: z.B. Benchtop Flowbuddy, Komplettes System mit Ultimate FlypadGenesis Scientific, El Cajon, CA, USA59-122BCU
BioSan MSV-3500 Multigeschwindigkeits-VortexBiosan SIA, Riga, LettlandBS-010210-TAHMit allen Plattformen
Baumwollverschlüsse für schmale Fläschchen Flystuff von Genesee Scientific, El Cajon, CA 92020 USAKatalognummer: 51-101
Drosophila-Aktivitätsmonitor (DAM2)TriKinetics Inc, Waltham, MA, USADAM2; RRID: nicht verfügbar 32 Röhrchen
Drosophila melanogaster (Oregon-R-modENCODE)Drosophila melanogaster (Oregon-R-modENCODE)BDSC:25211; RRID:BDSC_25211
GraphPad PrismGraphPad Software, Boston, MA, USA;Katalogname: GraphPad Prism, RRID:SCR_002798Version 11.0.1
Logitech C920 HD Pro Webcam, HD 1080p ObjektivKatalogname: HD Pro Webcam C920Logitech Europe S.A., Lausanne, SchweizRRID: nicht verfügbarDie Overhead-Aufnahmekamera, die für FST verwendet wird
Schmales Fliegenglas, PolypropylenFlystuff von Genesee Scientific, El Cajon, CA 92020 USAKatalognummer: 32-120BF
Noldus EthoVision XT Noldus Information Technology, Wageningen, NiederlandeRRID: SCR_000441v. 15.0
Natriumdodecylsulfat (SDS, ≥99%) Merck KGaA (Sigma-Aldrich), Darmstadt, DeutschlandKatalogname: Natriumdodecylsulfat (ACS-Reagenz, ≥99% Reinheit); RRID: nicht verfügbar
ZEISS Stemi 508 Stereomikroskop Carl Zeiss AG, Oberkochen, Baden-Württemberg, Deutschland15634448

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Verhaltensph notypisierung von Drosophilaerzwungene SchwimmexpositionY Maze VerhaltenPhototaxis AssayFlyVac SystemOpen Field ExplorationLokomotions berwachungVerhaltensflexibilit tEntscheidungsfindung

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