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Methodenartikel

Ein Modell der piroxicam-beschleunigten Enterokolitis bei Interleukin-10-Knockout-Mäusen zur Untersuchung entzündungsinduzierter metabolischer Veränderungen

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DOI:

10.3791/71448

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11. August 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll verwendet Piroxicam, um die Entwicklung der Kolitis im Interleukin-(IL-10)-Knockout-Mausmodell zu beschleunigen. Das Protokoll gewährleistet die Synchronisation der Kolitis, was zu rigorosen, reproduzierbaren Ergebnissen unabhängig von Geschlecht, Hintergrundbelastung oder Vivariumsbedingungen führt. Es dient als nützliches Modell zur Untersuchung von Stoffwechselveränderungen während der Darmentzündung.

Zusammenfassung

Entzündliche Darmerkrankung (IBD) ist eine chronisch entzündliche Erkrankung des Verdauungstrakts, die weltweit über 10 Millionen Menschen betrifft. Während umfangreiche Forschung sich auf die immunologischen Mechanismen und Folgen der IBD konzentriert hat, ist weniger darüber bekannt, wie die schleimhautige Entzündung zur metabolischen Dysregulation beiträgt, einschließlich Gewichtsverlust und vermindertem Appetit. Hier beschreiben die Autoren ein Mausmodell der piroxicam-beschleunigten Enterokolitis bei Interleukin-10-Knockout (IL-10-KO)-Mäusen, um eine entzündungsinduzierte metabolische Dysregulation zu untersuchen. IL-10-KO-Mäuse sind dafür bekannt, spontane Enterokolitis zu entwickeln und eine erhöhte Anfälligkeit für durch Infektionen oder Medikamente ausgelöste Enterokolitis zu haben. Allerdings wurden in diesem Modell Vivariumsbedingungen und Hintergrund als Störer bei der Entwicklung von Kolitis berichtet. Piroxicam, ein nichtsteroidales entzündungshemmendes Medikament (NSAID), wurde gezeigt, dass es in Tiermodellen eine Enterokolitis auslöst oder beschleunigt, indem es die schleimhautige Exposition gegenüber luminalen Bakterien erhöht. In diesem Protokoll wurden männliche und weibliche IL-10-KO-Mäuse anstelle einer regulären Futterdiät mit Piroxicam angereichert. Nahrungsaufnahme und Körpergewicht wurden täglich gemessen, um Veränderungen des gesamten Körperstoffwechsels sowie klinische Manifestationen der Enterokolitis wie Durchfall und rektale Blutungen widerzuspiegeln. Das Protokoll ist effizient und reproduzierbar, induziert gleichzeitig Enterokolitis bei mehreren Mäusen und ermöglicht die Beurteilung der metabolischen Dysregulation in einem entzündlichen Darmerkrankungsmodell. Weitere Studien mit diesem Protokoll könnten die Auswirkungen der Enterokolitis auf andere Komponenten der metabolischen Dysregulation untersuchen, wie Energieverbrauch und Körperzusammensetzung, und breitere Zusammenhänge zwischen entzündlichen Darmerkrankungen und Wirtsstoffwechsel aufzeigen.

Einleitung

Morbus Crohn und Colitis ulcerosa, zusammen bekannt als entzündliche Darmerkrankung (IBD), sind chronische Autoimmunerkrankungen des Magen-Darm-Trakts, die durch eine schleimhautige Entzündung gekennzeichnet sind, mit klinischen Manifestationen wie Bauchschmerzen, Gewichtsverlust, Hämatotezie und Durchfall. IBD betrifft weltweit Millionen von Menschen, mit der höchsten Prävalenz in westlich geprägten Gesellschaften1. In den USA wird geschätzt, dass über 3 Millionen Menschen betroffen sind. 2,3, mit einer steigenden Inzidenz und Prävalenz, insbesondere bei Kindern und Jugendlichen 4,5.

Die genauen Mechanismen, die der IBD-Pathogenese zugrunde liegen, sind noch unvollständig bekannt, aber die Krankheit wird weithin als Folge einer übertriebenen Immunantwort auf die Darmmikrobiota bei genetisch anfälligen Personen angesehen. Zytokine, die die Entzündungsreaktionen modulieren, spielen eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der Darmhomöostase und bei der Entwicklung von IBD. Unter diesen ist Interleukin-10 (IL-10) ein gut erforschtes antiinflammatorisches Zytokin, das hilft, die immunologische Homöostase beim Menschen aufrechtzuerhalten, indem es sowohl die angeborenen als auch die adaptiven Arme der Immunantwort 6,7 reguliert. Bemerkenswert ist, dass Polymorphismen in IL-10 und seinem Rezeptor (IL-10RA/B) bei Säuglingen mit sehr früh einsetzender IBD (VEO-IBD) identifiziert wurden, die klassisch innerhalb der ersten Lebensmonate eine perianale Erkrankungzeigen. Diese Verbindung wird weiter durch groß angelegte Exom-Sequenzierung erwachsener Patienten mit Morbus Crohn gestützt, die IL-10RA als Krankheitsanfälligkeitslocus im nicht-monogenen IBD9 identifizierte. Darüber hinaus wurde bei VEO-IBD-Patienten ein nicht-genetischer Signalweg beschrieben, der IL-10-neutralisierende Antikörper umfasst, was die Bedeutung dieses Weges für die Aufrechterhaltung der schleimhäusigen Immunhomöostase10 weiter unterstreicht.

Aufbauend auf Studien am Menschen, die IL-10 für IBD in Verbindung bringen, wurden Interleukin-10-Knockout (IL-10-KO)-Mäuse als Modell entwickelt, um die Rolle von IL-10 bei IBD zu untersuchen. IL-10-KO-Mäuse sind dafür bekannt, spontane Enterokolitis mit einer übertriebenen CD4+-Th1-Reaktion auf Reize zu entwickeln, typischerweise beginnend im Alter von 8–12 Wochen imAlter von 11 Jahren. Die Entwicklung einer spontanen Enterokolitis bei IL-10-KO-Mäusen kann jedoch ohne einen beschleunigten Erreger 12,13,14 unvorhersehbar sein, abhängig vom genetischen Stamm, der Zusammensetzung der Mikrobiota und den Wohnbedingungen 15,16. Der Einsatz eines zuverlässigen Protokolls zur Induzierung von Kolitis ist entscheidend, damit das IL-10-KO-Modell praktisch nützlich ist. Frühere Studien verwendeten nichtsteroidale entzündungshemmende Medikamente (NSAR) wie Piroxicam, um Enterokolitis bei IL-10-KO-Mäusen17,18 zu induzieren. Diese Studien konzentrierten sich jedoch hauptsächlich auf immunologische Veränderungen, mit relativ wenig Fokus auf die Auswirkungen der Enterokolitis auf den Stoffwechsel oder auf die Rolle des Geschlechts bei der Kolitis-Schwere19. Die Autoren beschreiben hier die Verwendung einer mit Piroxicam angereicherten Diät zur Induzierung einer Enterokolitis bei IL-10-KO-Mäusen und charakterisieren metabolische Dysregulation sowie mukosale entzündliche Reaktionen in diesem Modell sowohl mit männlichen als auch weiblichen Mäusen. Dieses Protokoll misst das Körpergewicht und die Nahrungsaufnahme, um die Stoffwechselveränderungen des gesamten Körpers sowie klinische Manifestationen von Kolitis und histologische sowie transkriptomische Veränderungen widerzuspiegeln, die eine schleimhautentzündung widerspiegeln. Dieses effiziente und reproduzierbare Modell bietet ein wertvolles Werkzeug zur Untersuchung des Zusammenhangs zwischen IBD und Wirtsstoffwechsel.

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Protokoll

Alle Tierversuche wurden gemäß dem vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) am University of Texas Southwestern Medical Center genehmigten Protokoll gemäß dem "Leitfaden für die Pflege und Nutzung von Labortieren" [Genehmigungsnummer: 2017-102011] durchgeführt. Die Euthanasie erfolgte gemäß institutionellen Leitlinien. Für die durchgeführten Eingriffe war keine Anästhesie erforderlich. Spezifische Details für Materialien sind in der Materialtabelle beschrieben.

1. Etablierung des piroxicam-beschleunigten Enterokolitis-Modells bei IL-10-KO-Mäusen

  1. Pflege von IL-10-KO-Mäusen in einer speziellen pathogenfreien (SPF) Einrichtung in einem 12-Stunden-Lichtzyklus mit ad libitum-Zugang zu Futter und Wasser.
  2. Individuel werden 7–8 Wochen alte, geschlechtsgleiche Mäuse in Mikroisolatorkäfigen untergebracht. Lassen Sie Mäuse sich mindestens eine Woche vor Beginn des Experiments an Einzelunterkünfte und tägliche Handhabung gewöhnen.
    HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass das Körpergewicht bei Männchen >20 g oder bei Weibchen >17 g beträgt und dass Mäuse frei von Kampfverletzungen sind.
  3. Teilen Sie Mäuse einer Versuchsgruppe und einer Kontrollgruppe zu. Für die Versuchsgruppe ersetzen Sie das Standardchow durch mit Piroxicam verstärktes Chow. Für die Kontrollgruppe sollten Sie frisches Standardessen bereitstellen. Gib 50 g Futter zu jedem Käfigbehälter.
    HINWEIS: Weisen Sie jeder Gruppe mindestens fünf Mäuse pro Geschlecht zu. Das mit Piroxicam angereicherte Chow (200 ppm) wurde von Teklad mit Piroxicam zubereitet, das von den Forschern bereitgestellt wurde, um eine maßgeschneiderte Futter für Labortiere herzustellen. Um die Variabilität von Charge zu Charge zu minimieren, wird empfohlen, dass alle Tiere eines Experiments Futter aus derselben Produktionscharge erhalten. Wenn möglich, sollte dieselbe Charge auch in verschiedenen Experimenten verwendet werden, um die Reproduzierbarkeit zu verbessern.

2. Überwachung des Körpergewichts und des Ernährungsverhaltens

  1. Mit einer analytischen Waage wird das Körpergewicht jeder Maus erfasst. Wiegen Sie jede Maus einzeln zur gleichen Zeit, täglich für 7 aufeinanderfolgende Tage. Berichte das tägliche Körpergewicht als Prozentsatz des Grundgewichts am Tag 0 (auf 100 % gesetzt).
    HINWEIS: Ein Gewichtsverlust von mehr als 20 % deutet auf übermäßigen Stress und ein Risiko eines unmittelbaren Todes hin. Mäuse sollten eingeschläfert werden, wenn diese Schwelle erreicht wird.
  2. Mit einer analytischen Waage wird das Anfangsgewicht des mit Piroxicam verstärkten Chows und das Standardfutter in jedem Käfig erfasst.
  3. Dann misst man die verbleibende Mahlzeit in jedem Käfigbehälter zur gleichen Zeit, täglich für 7 aufeinanderfolgende Tage.
  4. Berechnen Sie den täglichen Essenskonsum, indem Sie das tägliche Essensgewicht vom restlichen Essen des Vortages abziehen.
    HINWEIS: Überprüfen Sie regelmäßig die Menge an Futter und füllen Sie nach, wenn sie unter 10 g liegt. Die Schmackhaftigkeit von Piroxicam-Chow beeinflusst nicht die Aufnahme und sollte der von Standardessen sehr ähneln.

3. Überwachung der Krankheitsaktivität

  1. An den Tagen 0 und 7 werden die Kotpellets einzelner Mäuse visuell untersucht und das Vorhandensein von Blut im Stuhl festgestellt.
  2. Wenn kein Blut sichtbar ist, führen Sie einen Test auf okkultes Blut im Stuhl durch, indem Sie eine Kugel auf die Testkarte auftragen und dann das mitgelieferte Entwicklerreagenz hinzufügen. Punktzahlen gemäß Tabelle 1.
  3. An den Tagen 0 und 7 sollten frisch entleerte Kotpellets visuell untersucht werden, um die Konsistenz des Stuhls zu prüfen. Verwenden Sie eine flache Pinzette, um die Konsistenz zu verbessern. Punktzahlen gemäß Tabelle 1.
  4. An den Tagen 0 und 7 bestimmen Sie den Ausmaß des rektalen Prolaps, indem Sie den perianalen Bereich untersuchen. Punktzahlen gemäß Tabelle 1.
  5. Missen Sie das Körpergewicht wie oben beschrieben. Punktzahlen gemäß Tabelle 1.
    HINWEIS: Die Bewertung des Disease Activity Index (DAI) sollte vom selben Forscher während des gesamten Experiments blind durchgeführt werden, um Konsistenz sicherzustellen, Beobachterverzerrungen zu minimieren und die Zuverlässigkeit der Bewertung zu verbessern.

4. Entnahme von Darmgewebe

  1. Euthanasie Mäuse durch CO-2-Erstickung und zervikale Verrenkung, wie anderswo berichtet20.
  2. Legen Sie die Maus in Rückenlage und sprühen Sie 70 % Ethanol auf den ventralen Bauch.
  3. Heben Sie die Haut mit der Pinzette an und schneiden Sie mit einer chirurgischen Schere entlang der Mittellinie. Legen Sie die Bauchhöhle frei und lokalisieren Sie den Dickdarm.
  4. Legen Sie den Dickdarm und das Fäderum mit stumpfer Dissektion frei. Entfernen Sie den Colon-en-bloc, einschließlich des Felskörpers und der Analmanschette.
  5. Legen Sie den Dickdarm auf eine ebene Fläche und entfernen Sie jegliches Bindegewebe.
  6. Messen und notieren Sie die Dickdarmlänge.
  7. Nach der Messung der Dickdarmlänge entfernen Sie das Blinddarm durch Schneiden an der Kekokolonialverbindung.
  8. Bereiten Sie eine 10-ml-Spritze vor, gefüllt mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) und einer angebrachten 22-Gauge-Kugelspitze wiederverwendbaren Stahl-Gavage-Nadel. Führe die Nadel in den Dickdarm ein und spüle den Darminhalt aus.
  9. Geben Sie den gespülten Dickdarm in eine Petrischüssel mit PBS und spülen Sie den Restinhalt ab. Sobald sie freigegeben ist, verwenden Sie sie für nachgelagerte Assays.

5. Histologieanalyse

  1. Lege den Dickdarm flach auf einen Glasrutschen. Verwenden Sie eine Pinzette, um das Gewebe am distalen Ende um sich herum zu wickeln, um eine "Schweizer Rolle" zu formen. Dabei bleibt das distale/anale Ende in der inneren Rolle, während die näheren Regionen zur äußeren Rolle hinausgehen.
  2. Mit einer 27-Gauge-Nadel steckt man den gerollten Dickdarm fest, um die Rolle zu halten, und legt sie in eine Einbettungs-Gewebekassette.
  3. Zur Reparatur von Geweben tauchen Sie Gewebekassetten für 16 Stunden bei 4 °C in eine 10%ige Formalinlösung ein.
    VORSICHT: 10 % Formalin sind schädlich, wenn es mit der Haut in Kontakt kommt, und kann schwere Hautverbrennungen und Augenschäden verursachen. Führen Sie vorsichtig mit Schutzhandschuhen und medizinischen Schutzbrillen. Restformalin sollte ordnungsgemäß gemäß institutionellen Richtlinien entsorgt werden.
  4. Nach der Formalinfixierung werden Gewebe für die Paraffineinbettung verarbeitet und für die Montage auf Glasobjekten geschnitten.
    HINWEIS: Die Proben sollten an ein histologisches Labor mit der notwendigen Ausrüstung für die Verarbeitung von Gewebekassetten in Paraffin, Scrollschnitt, Objektträgerbefestigung sowie Hämatoxylin- und Eosinfärbung eingereicht werden.
  5. Färbungsgewebe-Folien mit Hämatoxylin und Eosin (HE) gemäß den festgelegten Protokollen21.
  6. Mit dem in Tabelle 2 beschriebenen histologischen Bewertungssystem werden in jedem Abschnitt folgende histologische Merkmale bewertet: Gewebeschäden durch Enterokolitis, lamina-propria-inflammatorische Zellinfiltration und Prozentsatz der betroffenen Fläche. Kombinieren Sie die Punktzahlen in jedem Abschnitt, um eine Gesamtpunktzahl zu erhalten (Tabelle 2).
    Gesamtpunktzahl = Merkmale × Beteiligung (Gewebeschädigung) + Merkmale × Beteiligung (Lamina Propria entzündliche Zellinfiltration) (1)
  7. Repräsentative histopathologische Bilder von Gewebeschäden und Zellinfiltration finden sich in der Veröffentlichung von Erben et al.22.
    HINWEIS: Die histologische Bewertung sollte blind durchgeführt werden, vorzugsweise von einem ausgebildeten Pathologen, um die Konsistenz und Zuverlässigkeit der Beurteilung zu gewährleisten.

6. Immunfluoreszente Färbung von formalinfixiertem, paraffin-eingebettetem Gewebe

  1. Legen Sie die Folien in ein Slide-Gitter und in einen 55 °C Slide-Trockner für 1 Stunde, um Paraffin zu schmelzen.
  2. Platziere die Objektträger in ein Beichtgestell und tauche das Gestell nacheinander für 3 Minuten in Färbeglaser mit Xylen. Wiederhole diesen Schritt dreimal.
  3. Tauchen Sie das Beichtgestell für 3 Minuten in Färbegläser mit 100 % Ethanol. Wiederhole diesen Schritt dreimal.
  4. Tauchen Sie das Beichtgestell für 3 Minuten in das Farbglas mit 95 % Ethanol ein.
  5. Tauchen Sie das Färbergitter für 3 Minuten in das Färbeglas mit 80 % Ethanol.
  6. Tauchen Sie das Färbergestell für 5 Minuten in Färbungsgläser mit deionisiertem (DI) Wasser.
    HINWEIS: Alle vorherigen Schritte müssen aufgrund der Xylengampe in einer belüfteten Haube durchgeführt werden. Führen Sie vorsichtig mit Schutzhandschuhen und medizinischen Schutzbrillen. Residuales Xylol sollte gemäß institutionellen Richtlinien ordnungsgemäß entsorgt werden.
  7. Die Objektträger auf ein Objektträgergestell übertragen und in ein Färbeglas mit 1× Citrat-Entnahmelösung untertauchen.
  8. Stellen Sie das Färbeglas in die Halterung der Färbeschüssel.
  9. Stelle die Halterung der Fleckschale in den Schnellkochtopf.
  10. Kochen Sie 15 Minuten in einem Schnellkochtopf.
  11. Holen Sie die Objektträger aus dem Schnellkochtopf und lassen Sie sie auf Zimmertemperatur abkühlen.
  12. Inkubieren Sie die Objektträger mit einem 300-μL-Blockpuffer (3,5 % Ziegenserum, verdünnt in PBS) für 1 Stunde in einer befeuchteten Kammer. Stellen Sie sicher, dass das Gewebe vollständig vom Blockpuffer bedeckt ist.
  13. Belichten Sie die Objektträger 300 μL primärer Antikörper, die in einem Blockpuffer verdünnt wurden, für 16 Stunden bei 4 °C in einer befeuchteten Kammer. Stellen Sie sicher, dass das Gewebe vollständig vom primären Antikörper bedeckt ist. Folgender primärer Antikörper wurde verwendet: Anti-S100A8/S100A9 (1:500).
    HINWEIS: Antikörperverdünnungen sind reagenzienspezifisch und sollten den Empfehlungen des Lieferanten folgen.
  14. Spülen Sie die Objektträger, indem Sie sie dreimal für 5 Minuten in PBS in ein Färbeglas tauchen.
  15. Belichte Objektträger 300 μL eines verdünnten fluoreszierenden Sekundärantikörpers im Blockpuffer für 1 Stunde bei Raumtemperatur in einer befeuchteten Kammer. Stellen Sie sicher, dass das Gewebe vollständig vom sekundären Antikörper bedeckt ist. Folgender fluoreszierender sekundärer Antikörper wurde verwendet: Ziegen-Anti-Rabbit Alexa Fluor 555 (1:150 Verdünnung).
    HINWEIS: Ab diesem Punkt sollten Objektträger vor Licht geschützt werden, um Photobleaching von Fluorophoren zu verhindern. Verdünnungen der sekundären Antikörper sind reagenzienspezifisch und sollten den Empfehlungen des Lieferanten folgen.
  16. Spülen Sie die Objektträger, indem Sie sie dreimal für 5 Minuten in PBS in ein Färbeglas tauchen.
  17. Setzen Sie Objektträger einer nuklearen Färbung aus, indem Sie sie für 20 Minuten in einer 1:5000 in PBS verdünnten Hoechst-Lösung in einem Färbeglas untertauchen.
  18. Spülen Sie die Objektträger, indem Sie sie dreimal für 5 Minuten in PBS in ein Färbeglas tauchen.
  19. Wischen Sie vorsichtig jegliches PBS von den Objektträgern mit einem nicht abrasiven Gewebe ab. Füge 50 μL Antifade-Montagemedium und einen Deckdecker hinzu.

7. RNA-Extraktion

  1. Den gesamten Dickdarm oder ein Fragment in flüssigem Stickstoff einfrieren und dann bei -80 °C lagern. Alternativ sollte man in 1,5 mL RNALater-Konservierungslösung eintauchen und gemäß den Anweisungen des Herstellers lagern.
  2. Taue den zuvor gefrorenen Dickdarm auf und lege ihn auf eine ebene Oberfläche. Zerstören und homogenisieren Sie das Gewebe mit einem handgehaltenen Homogenisierer.
  3. Isoliere RNA mit dem Kit und folge den Anweisungen des Herstellers.
  4. Missen Sie die RNA-Konzentration mit einem Spektrophotometer. A260/A280 Verhältnisse > 1,8 und A260/A230 Verhältnisse von 2,0–2,2 deuten auf akzeptable RNA-Reinheit hin.
  5. Fahren Sie mit der Reverse-Transkription fort, gefolgt von qPCR mit SYBR-grünem interkalierendem Farbstoff.
  6. Analysieren Sie die Ergebnisse mit der Quantifizierungsplattform oder einem ähnlichen Instrument.

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Ergebnisse

Männliche und weibliche IL-10-KO-Mäuse entwickeln nach kurzer Exposition mit einer mit Piroxicam angereicherten Ernährung eine Enterokolitis (Abbildung 1A–E). Am zweiten Tag zeigten Piroxicam-exponierte Mäuse statistisch signifikant einen größeren Gewichtsverlust als ihre gleichgeschlechtlichen, regelmäßig gefütterten Kontrollpersonen, und vergleichbare Gewichtsverluste wurden über alle Geschlechter hinweg beobachtet (Ab...

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Diskussion

Entzündliche Darmerkrankungen sind eine komplexe polygene Störung, bei der präklinische Modelle als unschätzbare Werkzeuge dienen, um Signalwege zu analysieren, die zur IBD-Pathogenese beitragen, und neuartige diagnostische und therapeutische Strategien zu entwickeln. Derzeit basieren viele präklinische IBD-Modelle auf chemische Exposition, wie Dextransulfatnatrium (DSS), Oxazolon und Trinitrobenzol-Sulfonsäure (TNBS), da sie einfach zu bedienen sind. Genetische Modelle, die spontane Kol...

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Offenlegungen

Die Autoren erklären keine relevanten Offenlegungen.

Danksagungen

Wir möchten den Kerneinrichtungen an der UTSW danken, die zu der hier vorgestellten Arbeit beigetragen haben. Diese Arbeit wurde von folgenden Förderquellen unterstützt: NIH through K08DK127197 (LS-D), T32DK007745 (JW) und die Southwestern Foundation through Docstars Award (LS-D).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

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