Alle lokalen, nationalen und internationalen Richtlinien und Gesetze wurden für die Verwendung von Pflanzen in dieser Studie eingehalten. Die Reagenzien und die verwendeten Geräte sind in der Materialtabelle aufgeführt.
Experimentelles Layout und Material
Ein Topfexperiment wurde auf dem Dach des Gebäudes der Abteilung für Agrartechnik der Khwaja Fareed University of Engineering and Information Technology, Pakistan (28,42° N, 70,30° E), organisiert, um die Rolle von Vermiculit und Azospirillum brasilense bei der Linderung der Cadmium-(Cd)-Toxizität in der Weizenernte während der Wintersaison 2023–2024 zu untersuchen. Für dieses Experiment wurde ein vollständig randomisiertes Design (CRD) mit drei Replikationen verwendet. Eine zugelassene Weizensorte "Dilkash-20" wurde von der Adoptive Research Farm Rahim Yar Khan bezogen, die für die lokale Region geeignet ist. Es wurde ein Topfmaß von 1 x 1 x 1 Fuß (30,48 cm × 30,48 cm × 30,48 cm) verwendet, der 12 kg Erde enthielt. Vor dem Experiment im Agronomielabor wurde die Saatgutsterilisation mit 70 % Ethanol durchgeführt. Die Samen wurden am 10. November 2023 gepflanzt. In jedem Topf wurden 8 Weizensamen gelegt, und 4 Pflanzen wurden in der Fräsphase gepflegt. Vermiculit wurde vom lokalen Markt gewonnen und während der Zugabe des Bodens mit einer Menge von 150 g/kg Boden aufgetragen. Azospirillum brasilense wurde vom Government College University Lahore (GCUL) in Lahore, Pakistan, erworben. Azospirillum brasilense wurde zusammen mit der Saatgutinokulation in der Weizenernte nach dem Standardverfahren angewendet, wie Zaheer et al.17 berichteten. Das Experiment bestand aus 9 Behandlungen (T0 = Kontrolle (keine Bodenverbesserung, keine CD-Toxizität), T1 = Cd-Toxizität 100 mg/kg Boden, T2 = Cd 100 mg/kg Boden + Vermiculit, T3 = Cd 100 mg/kg Boden + A. brasilense, T4 = Cd 100 mg/kg Boden + Vermiculit + A. brasilense, T5 = Cd Toxizität 200 mg/kg Boden, T6 = Cd 200 mg/kg Boden + Vermiculit, T7 = Cd 200 mg/kg Boden + A. brasilense, T8 = Cd 200 mg/kg Boden + Vermiculit + A. brasilense). Die durchschnittliche Monatstemperatur in °C und die Luftfeuchtigkeit in % am Versuchsgelände sind in Tabelle 1 dargestellt. Vor Beginn des Experiments wurde eine Bodenanalyse durchgeführt, und die Bodeneigenschaften sind in Tabelle 2 dargestellt. Die Bewässerung wurde je nach Bedarf bei Bearbeiten, Streu, Anthesie und Getreidefüllung angewendet, und Dünger wurden gemäß den Empfehlungen gleichmäßig aufgebracht. Die Bewässerung erfolgte manuell mit einem Wassergefäß und hielt 70 % Bodenfeuchtigkeit in jedem Topf, ohne Dürrestress. Dünger wurden gemäß den Empfehlungen des Landwirtschaftsministeriums aufgetragen (120-80-60 kg NPK ha-1). Die Dünger wurden entsprechend der Größe jedes Topfes berechnet. Volle Dosen von P und K sowie eine halbe Dosis N wurden beim Aussaat aufgebracht, und die verbleibende halbe Dosis N wurde in der Tillering-Phase aufgebracht. Zerstörerische Probenahmen für Wurzel- und Trieblängenmessungen (30 Tage nach der Aussaat) wurden an separaten Töpfen durchgeführt, die für die frühe Erntephase vorgesehen waren; Diese Töpfe wurden nicht für die Endertragsmessungen verwendet, sodass frühe destruktive Probenahmen spätere Ertragsdaten nicht beeinflussten. Ein schematischer Zeitplan des Experiments lautet wie folgt: Tag 0 (Bodenvorbereitung, CD-Spiking, Vermiculitmischung, Samenimpfung, Aussaat), Tag 10–30 (Wurzelprobenentnahme für qPCR), Tag 30 (Wurzel- und Trieblänge), Tag 85 (Anthesie: physiologische Messungen) und Tag 120 (Ernte: Ertragsparameter). Pflanzenproben wurden an drei Zeitpunkten entnommen. 10, 20 und 30 Tage nach der Aussaat (DAS) wurden die Wurzeln aus separaten Töpfen gesammelt. Bei 30 DAS wurden separate Töpfe destruktiv für Wurzel- und Trieblänge geerntet. Bei 85 DAS (Anthesis) wurden physiologische Parameter nicht-destruktiv gemessen. Bei 120 DAS wurden die endgültigen Ertragsparameter erfasst. Pots, die für frühe destruktive Probenahmen (10–30 DAS) verwendet wurden, wurden nicht für Ausbeutemessungen verwendet.
Cadmium wurde als Cadmiumchlorid (CdCl₂•2,5H₂O, analytischer Gehalt, ≥98 % Reinheit) aufgetragen. Die erforderlichen Mengen für Zielkonzentrationen von 100 mg Cd kg⁻1 Boden und 200 mg Cd kg⁻1 Boden wurden anhand des Trockengewichts des Bodens (12 kg pro Topf) berechnet. CdCl₂ wurde pro Topf in 500 ml deionisiertem Wasser gelöst und mit einem mechanischen Mischer 15 Minuten lang gründlich mit dem Boden vermischt, um eine homogene Verteilung zu gewährleisten. Nach dem Mischen wurde der mit Stacheln ausgekleidete Boden in mit Kunststoff ausgekleidete Töpfe gelegt und 14 Tage lang bei Raumtemperatur (25 ± 2 °C) mit regelmäßigem Mischen alle 3 Tage ausgeglichen lassen, um die Sed-Artbildung zu stabilisieren und das Altern zu ermöglichen. Die Bodenfeuchtigkeit wurde während der Gleichgewichtsphase bei 70 % der Feldkapazität gehalten. Nach dem Gleichgewicht wurden repräsentative Bodenproben (10 g pro Topf) entnommen, an der Luft getrocknet, mit HNO₃/HClO₄ (4:1, v/v) verdaut und mit einem atomaren Absorptionsspektrophotometer auf die Gesamtkonzentration der Cd analysiert, um die tatsächlichen CD-Werte zu überprüfen. Die gemessenen CD-Konzentrationen betrugen 98,4 ± 3,2 mg kg⁻1 für die 100 mg kg⁻1 Behandlung und 197,6 ± 5,1 mg kg⁻1 für die 200 mg kg⁻1 Behandlung, was bestätigt, dass die Zielwerte erreicht wurden. Die physikalisch-chemischen Eigenschaften und der Schwermetallgehalt des in dieser Studie verwendeten Vermiculits sind in Tabelle 3 dargestellt.
| Monat | Temperatur (°C) | Luftfeuchtigkeit (%) |
| November 2023 | 28 | 56 |
| Dezember 2023 | 18 | 62 |
| Januar 2024 | 17 | 63 |
| Februar 2024 | 18 | 32 |
| März 2024 | 21 | 25 |
| April 2024 | 24 | 20 |
Tabelle 1: Durchschnittstemperatur und Luftfeuchtigkeit des Versuchsgeländes im Zeitraum 2023–2024.
| Parameter | Werte (2023–24) |
| Organische Substanz | 0.56% |
| pH | 7.42 |
| EC | 227 μS/cm |
| T.S.S. | 0.54% |
| Verfügbar-P | 5,21 ppm |
| Verfügbar-K | 119 ppm |
| Sättigungsprozentsatz | 34 |
| Bodentrennungen: Sand, Schluff, Ton (%) | 36%, 40 %, 24 % |
Tabelle 2: Bodeneigenschaften des Bodens, der für das Experiment vor der Aussaat der Ernte verwendet wurde.
| Eigentum | Wert | Metall | Konzentration (mg kg⁻¹) |
| Stufe | Gartenbau-Stufe | Cadmium (CD) | < 0,01 (unterhalb der Detektionsgrenze) |
| Partikelgröße | 2–4 mm | Lead (PB) | 2.1 |
| pH (1:5 in H₂O) | 7.2 | Kupfer (Cu) | 1.8 |
| Kationenaustauschkapazität (CEC) | 85,4 cmolc kg⁻¹ | Zink (Zn) | 5.3 |
| Wasserspeicherkapazität (WHC) | 450% (w/w) | - | - |
| Volumendichte | 0,12 g cm-3 | - | - |
| Bewerbungsrate | 150 g kg⁻¹ Boden (15 % W/W) | - | - |
| Menge pro Topf (12 kg Erde) | 1,8 kg | - | - |
Tabelle 3: Physikalisch-chemische Eigenschaften und Schwermetallgehalt von Vermiculit, die in dieser Studie verwendet wurden.
Untersuchte Merkmale
Alle pflanzenwachstumsbezogenen Parameter wie Pflanzenhöhe, Spitzenlänge, Anzahl der Ährchen pro Spitze, Körner pro Spitze, 1000-Korn-Gewicht und Getreideertrag pro Pflanze wurden manuell mit einer Meterstange und einer Gewichtsbilanz nach einem Standardverfahren erfasst. Biochemische Analysen (Bestimmung der antioxidativen Enzymaktivitäten) und physiologische Analysen (Photosyntheserate, Spaltöffnungsleitfähigkeit, Chlorophyllgehalt, Elektrolytleckage (EL), Wachstumsrate der Pflanzen (CGR) und Blattflächenindex (LAI)) wurden in der Anthesephase nach 85 Tagen Aussaat durchgeführt. Die Wurzel- und Trieblänge wurde nach 30 Tagen Weizenwachstum festgestellt, wenn die Pflanzen entfernt wurden, um nach 20 Tagen Aussaat vier Pflanzen im Topf zu halten. Ein Infrarot-Gasanalysator (Cl-340) und ein Chlorophyllmessgerät (CL-1) wurden verwendet, um die Photosyntheserate, die Spaltöffnungsleitfähigkeit bzw. den Chlorophyllgehalt zu beobachten. Die Elektrolytleckage (EL) wurde gemessen, wobei die von Mussell und Staples18 beschriebene Gleichung nach dem Standardverfahren von Zaheer et al.14 gemessen wurde. EL wurde berechnet als: EL (%) = (Initial EC / Final EC) × 100, wobei Initial EC die elektrische Leitfähigkeit ist, gemessen nach 24 Stunden Inkubation bei 25 °C, und Final EC die Leitfähigkeit ist, die nach dem Autoklavieren der Proben bei 121 °C für 20 Minuten gemessen wird.
Gelöster organischer Stickstoff (DOC), gelöster organischer Kohlenstoff (DOC) und organischer Bodenkohlenstoff (SOC) wurden nach dem Standardverfahren19 gemessen. LAI und CGR wurden gemäß demVerfahren 20 festgestellt. Die Aufnahme von N, P und K durch die Weizenpflanze wurde festgestellt, wie im Verfahren des vorherigen Berichts21 beschrieben.
Statistische Analyse
Alle Daten für diese Forschung wurden aus drei Replikationen gesammelt, zusammengestellt und gemittelt. Die Daten wurden statistisch mit Hilfe von Statistic 8.1 und Microsoft Excel 2010 analysiert. Die Daten wurden mittels Einweg-ANOVA analysiert, gefolgt vom Fisher'schen Least Significant Difference (LSD)-Test bei p ≤ 0,05 für die mittlere Trennung. Verschiedene Buchstaben, die mit den Daten/Ergebnissen angezeigt werden, zeigen den statistischen Unterschied zwischen den einzelnen Behandlungen.