Diese Studie untersucht die therapeutischen Wirkungen der Formel Bushen-Jianpi-Qingchang und ihrer Teilformeln auf die Kolitis bei Ratten und enthüllt deren regulatorische Mechanismen, die über eine Multi-Omics-Analyse die Darmmikrobiota–Gallensäure-Metabolismus-Achse gezielt ansprechen.
Forschungsartikel
Bushen Jianpi Qingchang-Formel lindert Kolitis bei Ratten durch Regulierung des Gallensäurestoffwechsels und der Darmmikrobiota
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die traditionelle chinesische Medizin (TCM) wird aufgrund ihrer nachgewiesenen Wirksamkeit und ihres günstigen Sicherheitsprofils häufig zur Behandlung der Colitis ulcerosa (CU) eingesetzt. Die zentrale Pathogenese der chronisch therapieresistenten CU umfasst eine Schwäche von Milz und Niere, begleitet von einer Ansammlung von Feuchtigkeits-Wärme im Darm; die Rezeptur Bushen-Jianpi-Qingchang (BJQF) ist eine klinisch validierte Arzneikombination für diesen Zustand. Ziel dieser Studie war es, die therapeutischen Wirkungen von BJQF und ihrer drei aufgeteilten Teilrezepturen (Bushen-Formel, BSF; Jianpi-Formel, JPF; Qingchang-Formel, QCF) bei Dextran-Natriumsulfat (DSS)-induzierter Kolitis in Ratten zu untersuchen und deren regulierende Effekte auf das Profil der fäkalen Gallensäuren (BA) sowie auf die Darmmikrobiota zu charakterisieren. Die Zusammensetzung der fäkalen Bakterien und die Konzentrationen der Gallensäuren bei DSS-induzierter CU wurden mittels 16S-rRNA-Gen-Sequenzierung und Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) quantifiziert, und die mögliche Assoziation zwischen Darmmikrobiota und Gallensäurestoffwechsel wurde analysiert. BJQF verbesserte signifikant die kolonale Entzündung und Ulzeration im CU-Modell. Deutliche Unterschiede in der bakteriellen Diversität und Zusammensetzung zeigten sich zwischen den Kolitis-Ratten und gesunden Kontrollen. Die Assoziation zwischen differenziell auftretenden Bakterien und Gallensäuren konzentrierte sich auf 23-Deoxycholsäure (23-DCA) als zentrale metabolische Schnittstelle. Bemerkenswerterweise könnten Taurolithocholsäure-3-Sulfat (TLCA-3S) und Lithocholsäure-3-Sulfat (LCA-3S) als potenzielle Wirkstoff-Biomarker dienen. Die Teilrezeptur JPF zeigte eine Wirkung, die der der vollständigen BJQF am ähnlichsten war. Die Gabe von BJQF und ihren aufgeteilten Formeln besserte histopathologische Schäden, Entzündungen, Dysbiose der Darmmikrobiota und Störungen des Gallensäurestoffwechsels bei CU-Ratten wirksam und lieferte damit eine mechanistische Grundlage für die kombinierte TCM-Therapie.
Einleitung
Colitis ulcerosa (CU), eine Hauptform der entzündlichen Darmerkrankung (ED), zeichnet sich durch eine chronische, kontinuierliche unspezifische Entzündung aus, die auf die kolorektale Mukosa beschränkt ist. Patienten mit CU weisen klinische Symptome wie Durchfall, Bauchschmerzen, ungewollten Gewichtsverlust sowie blutige oder eitrige Stühle auf, die die Lebensqualität erheblich beeinträchtigen. Die Pathogenese der CU umfasst Umwelt-, Gen-, Mikroben- und Immunfaktoren. Die CU entwickelt sich typischerweise nach einem Ungleichgewicht der Darmmikrobiota, und diese Dysbiose kann den Krankheitsverlauf der CU deutlich beschleunigen1. Immer mehr Belege identifizieren die metabolische Achse zwischen Darmmikrobiota und Gallensäuren (GS) als zentrales Regulationsmodul in der Pathogenese der CU. Eine gestörte Gallensäuremetabolisierung ist ein weithin anerkanntes Merkmal einer Schädigung der intestinalen Mukosa bei ED. Sekundäre GS werden ausschließlich durch die Darmmikrobiota aus vom Wirt stammenden primären GS biosynthetisiert, wobei Schlüsselenzyme wie die 7α-Dehydroxylase für diese Biotransformation exprimiert werden. Daher eignet sich der fäkale Gallensäurepool als ideale funktionelle Messgröße, um die durch eine TCM-Behandlung hervorgerufene Umgestaltung des Mikrobioms widerzuspiegeln.
Diese sekundären Gallensäuren wirken als wichtige Signalmoleküle zur Aufrechterhaltung der intestinalen Immunhomöostase, der Integrität der Schleimhautbarriere und des Überlebens epithelialer Zellen2. Störungen dieses Achsenverlaufs, einschließlich einer durch mikrobielle Dysbiose verursachten Defizienz an sekundären Gallensäuren und einer gestörten Gallensäuresignalübertragung, lösen direkt proinflammatorische intestinale Reaktionen und eine Dysfunktion der Barriere aus und stellen somit ein vielversprechendes therapeutisches Ziel für die Behandlung von Colitis ulcerosa dar. Die Darmmikrobiota spielt eine entscheidende Rolle bei der Entstehung von Colitis ulcerosa und beeinflusst den Wirt über Stoffwechselprodukte wie durch Fermentationsreaktionen gebildete Gallensäuren. Abnorme Veränderungen der Darmmikrobiota und des Gallensäurestoffwechsels sind eng mit Colitis ulcerosa assoziiert3. Da die Darmmikrobiota die Produktion sekundärer Gallensäuren vermittelt, können Veränderungen in der mikrobiellen Zusammensetzung und Häufigkeit den Gallensäurestoffwechsel stören und zur Entstehung entzündlicher Darmerkrankungen beitragen4.
Die TCM wurde aufgrund ihrer Wirksamkeit und Sicherheit bei der Langzeitbehandlung zur Therapie von Colitis ulcerosa weit verbreitet als Alternative oder Ergänzung zu entzündungshemmenden oder immunsuppressiven Wirkstoffen übernommen5. Die Stärkung von Milz und Niere, die Reinigung des Darms sowie die Beseitigung von Feuchtigkeit sind zentrale therapeutische Prinzipien bei Colitis ulcerosa6. Laut der TCM-Theorie liegt der zentrale Krankheitsmechanismus der chronischen Colitis ulcerosa in einer Schwäche der Milz und Niere (Fu-Zheng, Stärkung der vitalen Lebenskraft) in Kombination mit einer Ansammlung von feuchter Hitze im Darm (Qu-Xie, Beseitigung pathogener Faktoren), und die synergistische Anwendung dieser beiden Strategien ist entscheidend für eine wirksame Behandlung der Colitis ulcerosa.
Frühere experimentelle Studien haben bestätigt, dass JPF und QCF, zwei zentrale Teilformeln von BJQF, therapeutische Wirkungen gegen UC entfalten. JPF verbessert die Schleimhautentzündung und die Dysfunktion der intestinalen Epithelbarriere über den NF-κB/HIF-1α-Signalweg7, während QCF die Homöostase von Darmmikrobiota und Metabolismus wiederherstellt, die intestinale Epithelbarriere schützt und den NLRP3/IL-1β-Signalweg reguliert8. Um die spezifischen biologischen Beiträge der funktionellen Module Fu-Zheng und Qu-Xie zur Darmmikrobiota–BA-Achse zu untersuchen, wurde diese Studie so konzipiert, dass sie die vollständige BJQF-Formel sowie drei zerlegte Teilformeln umfasst: BSF (Bushen-Formel, Stärkung von Milz und Niere, reines Fu-Zheng), JPF (Jianpi-Formel, Milz stärkend, zentrales Fu-Zheng) und QCF (Qingchang-Formel, Beseitigung von Feuchtigkeitswärme im Darm, reines Qu-Xie). Dieser experimentelle Ansatz ermöglicht die Aufschlüsselung der synergistischen und unabhängigen Effekte jedes funktionellen Moduls bei der Behandlung von UC, was entscheidend ist für die Übertragung komplexer TCM-Rezepturen in eine evidenzbasierte Therapie.
Die Arbeitshypothese lautet, dass BJQF die DSS-induzierte Kolitis durch eine Umgestaltung der Zusammensetzung der Darmmikrobiota und eine Normalisierung des Gallensäurestoffwechsels verbessert und dass das Jianpi-Modul als zentrale funktionelle Komponente die regulatorischen Effekte auf die Darmmikrobiota–Gallensäure-Achse vermittelt. Diese Studie wurde konzipiert, um den „Verbindung-zu-Modul“-Mechanismus von BJQF systematisch zu untersuchen. Durch die Bewertung der vollständigen Rezeptur und der entsprechenden gezielten physiologischen Teilmodule soll die biologische Synergie dieser TCM-Verbindung aufgeklärt und eine moderne pharmakologische Grundlage für die Behandlung von IBD durch Regulation der Darmmikrobiota–Gallensäure-Stoffwechselachse bereitgestellt werden. Hier werden die therapeutischen Wirkungen der vollständigen BJQF-Rezeptur und ihrer drei abgeleiteten funktionellen Formulierungen gegen DSS-induziertes UC systematisch verglichen. Angesichts der zentralen Rolle der Darmmikrobiota–Gallensäure-Stoffwechselachse bei der Entstehung von UC analysiert diese Arbeit den synergistischen Mechanismus von Verbindung zu Modul bei BJQF, klärt die spezifischen regulatorischen Beiträge der Bushen-, Jianpi- und Qingchang-Module auf und charakterisiert die umgestaltenden Effekte jedes Moduls auf die Zusammensetzung der Darmmikrobiota sowie auf das Profil der fäkalen Gallensäuren. Die zentralen Zielsetzungen bestehen darin, die moderne biologische Grundlage von BJQF bei der Linderung von UC offenzulegen, wichtige mikrobielle und metabolische Zielstrukturen für TCM-Interventionen zu identifizieren und einen mechanistischen Referenzrahmen für die rationale Anwendung und translationsmedizinische Forschung zusammengesetzter TCM-Rezepturen bei IBD bereitzustellen.
Protokoll
Für die Studie wurden 44 gesunde männliche Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gewicht von 200 ± 20 g verwendet. Alle Tiere wurden unter spezifisch pathogenfreien Bedingungen gehalten, hatten freien Zugang zu einer Standard-Pellets-Nahrung und Wasser und wurden vor dem Experiment eine Woche lang akklimatisiert. Alle Maßnahmen zum Tierschutz und experimentellen Verfahren wurden gemäß den Richtlinien für die Pflege und Nutzung von Labortieren, herausgegeben vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie von China, durchgeführt. Die Studie wurde vom Tierversuchsausschuss der Nanjing-Universität für Chinesische Medizin unter der Genehmigungsnummer 2023DW-029-01 genehmigt. Vollständige Angaben zur Herkunft der Tiere und zur Tierhaltungsausrüstung finden sich in der Tabelle der Materialien.
Zubereitung der TCM-Formel
Die vollständige Bushen-Jianpi-Qingchang-Formel (BJQF) setzte sich aus neun pflanzlichen Inhaltsstoffen in vordefinierten Dosierungen zusammen: 15 g Astragali Radix, 10 g geröstetes Atractylodis Macrocephalae Rhizoma, 10 g Scutellariae Radix, 4 g Coptidis Rhizoma, 10 g Sanguisorbae Radix, 6 g Aucklandiae Radix, 5 g Glycyrrhizae Radix, 15 g Psoraleae Fructus und 15 g Alpiniae Oxyphyllae Fructus. Alle pflanzlichen Rohstoffe wurden eine Stunde lang in physiologischer Kochsalzlösung eingeweicht und anschließend eine Stunde lang ausgekocht, um ein Endvolumen von 1500 mL zu erhalten. Drei zerlegte Teilformeln wurden nach identischem Auskochprotokoll hergestellt. Die Bushen-Formel (BSF) enthielt 15 g Psoraleae Fructus und 15 g Alpiniae Oxyphyllae Fructus und wurde auf ein Endvolumen von 500 mL ausgekocht. Die Jianpi-Formel (JPF) bestand aus 15 g Astragali Radix, 10 g geröstetem Atractylodis Macrocephalae Rhizoma und 5 g Glycyrrhizae Radix und ergab ein Endvolumen von 500 mL. Die Qingchang-Formel (QCF) setzte sich aus 10 g Scutellariae Radix, 4 g Coptidis Rhizoma, 10 g Sanguisorbae Radix und 6 g Aucklandiae Radix zusammen und wurde ebenfalls auf ein Endvolumen von 500 mL eingestellt. Vollständige Herstellerangaben und Chargennummern für alle pflanzlichen Materialien sind in der Tabelle der Materialien enthalten. Im Haupttext wird durchgängig eine allgemeine pflanzliche Nomenklatur verwendet, während herstellerspezifische Angaben ausschließlich in der Tabelle der Materialien aufgeführt sind.
Induktion der Kolitis und experimentelle Gruppierung
Die Ratten wurden zufällig in sechs experimentelle Gruppen eingeteilt: Kontrollgruppe (n = 6): normales Trinkwasser + intragastrische Gabe von physiologischer Kochsalzlösung. UC-Modellgruppe (n = 6): 3,5 % (Gewicht/Volumen) DSS-Trinkwasser + intragastrische Gabe von physiologischer Kochsalzlösung. BJQF-Behandlungsgruppe (n = 8): 3,5 % DSS-Trinkwasser + intragastrische Gabe von BJQF (0,6 g/kg Körpergewicht). BSF-Behandlungsgruppe (n = 8): 3,5 % DSS-Trinkwasser + intragastrische Gabe von BSF (0,6 g/kg Körpergewicht). JPF-Behandlungsgruppe (n = 8): 3,5 % DSS-Trinkwasser + intragastrische Gabe von JPF (0,6 g/kg Körpergewicht). QCF-Behandlungsgruppe (n = 8): 3,5 % DSS-Trinkwasser + intragastrische Gabe von QCF (0,6 g/kg Körpergewicht).
Die experimentelle Kolitis wurde durch 3,5 % DSS im Trinkwasser über 10 aufeinanderfolgende Tage ausgelöst; die Kontrollgruppe erhielt destilliertes Wasser ohne DSS. Die Dosierung jeder TCM-Formel (0,6 g/kg) wurde aus der klinisch wirksamen Erwachsenendosis in die äquivalente Rattendosis unter Verwendung der Normalisierungsmethode der Körperoberfläche (Meeh-Rubner-Formel) umgerechnet. Da es sich um eine Studie in der Entdeckungsphase mit Fokus auf Formelvergleich handelte, wurde eine einzelne klinisch äquivalente Dosis gewählt. Ab Tag 1 erhielt jede TCM-Formel täglich eine einmalige intragastrale Gabe. Die Kontroll- und Modellgruppen erhielten das gleiche Volumen an physiologischer Kochsalzlösung (10 mL/kg). Am Tag 11 wurden die Ratten durch Halsdislokation getötet. Serum-, Fäkalproben und Kolon-Gewebe wurden zur Analyse entnommen. Das Körpergewicht wurde täglich gemessen. Alle Gruppen waren ursprünglich mit n = 8 geplant. Während der DSS-Induktion starben jeweils 2 Ratten in der Kontroll- und Modellgruppe aufgrund einer schweren Kolitis, sodass sich eine endgültige Gruppengröße von n = 6 für diese beiden Gruppen ergab. Eine post-hoc-Power-Analyse bestätigte, dass die endgültige Stichprobengröße eine statistische Power von ≥ 0,8 für alle primären Endpunkte (histologische Bewertung, Schlüsselzytokine, Körpergewicht) erreicht und somit den standardmäßigen statistischen Anforderungen genügt.
Bestimmung der Konzentrationen entzündungsfördernder Zytokine
Die Serumspiegel von IL-1β, IL-10 und TNF-α wurden mithilfe kommerzieller ELISA-Kits quantifiziert, wobei streng den Herstellerprotokollen gefolgt wurde. Die Extinktionswerte wurden mit einem automatischen Mikroplattenlesegerät ermittelt. Statistische Analyse: einfaktorielle ANOVA zur Beurteilung der Gesamtgruppenunterschiede, gefolgt von der FDR-Korrektur nach Benjamini-Hochberg für post-hoc paarweise Vergleiche, im Einklang mit der Analyse von Omics-Daten.
Die histopathologische Bewertung
Kolonproben wurden in 10 % Formalin fixiert, dehydriert, in Paraffin eingebettet, geschnitten und mit Hämatoxylin und Eosin (HE) gefärbt. Die histologische Bewertung erfolgte mithilfe des modifizierten Cooper-Kolitis-Bewertungssystems, einer validierten semiquantitativen Skala für experimentelle Kolitis9. Die Bewertung umfasst vier Dimensionen: entzündliche Infiltration, Schädigung der Kryptenstruktur, Schleimhautödem und Ausmaß der Ulzeration (Gesamtpunktzahl 0–12). Blindversuchserklärung: Alle Objektträger wurden vor der Bewertung durch numerische Codes anonymisiert. Zwei unabhängige Pathologen, die über die Gruppenzugehörigkeit nicht informiert waren, bewerteten jeden Objektträger unabhängig voneinander. Die endgültige Punktzahl ergab sich als Mittelwert der beiden Bewertungen; Differenzen von ≥ 2 Punkten wurden durch einen dritten, erfahrenen Pathologen aufgelöst. Einfaktorielle ANOVA mit Benjamini-Hochberg-FDR-Korrektur für paarweise Vergleiche, konsistent mit anderen phänotypischen Daten.
Probenahme und DNA-Extraktion
Frische Ratten-Fäkalproben wurden in 1 mL sterilen Zentrifugenröhrchen gesammelt, sofort bei −80 °C eingefroren und auf Trockeneis transportiert. Die genomische DNA von fäkalen Bakterien wurde aus 250 mg Fäkalien unter Verwendung des DNA-Isolationskits gemäß den Herstelleranweisungen extrahiert. Die DNA-Konzentration wurde mittels Spektrophotometer quantifiziert und die Integrität durch Gelelektrophorese in 0,8%iger Agarose überprüft. Während der Extraktion und Quantifizierung wurde eine negative Pufferkontrolle mitgeführt. Die Extrakte wurden vor der Verwendung bei -20 °C gelagert.
16S-rRNA-Gen-Sequenzierung und bioinformatische Analyse
Die PCR-Amplifikation zielte auf die hypervariablen V3–V4-Bereiche (338F–806R) des 16S-rRNA-Gens ab. Die PCR-Produkte wurden gereinigt und auf der Illumina-MiSeq-Plattform mit 2 × 300-bp-Paired-End-Sequenzierung sequenziert. Nach der Qualitätsfilterung wurden pro Probe durchschnittlich 68.450 ± 28.297 qualitativ hochwertige, bereinigte Reads erhalten (Maximum 158.361, Minimum 28.294). Die Sequenzen wurden bei einer Ähnlichkeit von 97 % in OTUs gruppiert. Sättigungskurven, Artenreichtumsindizes und Diversitätsindizes wurden berechnet. Die taxonomische Annotation erfolgte mithilfe des RDP-Klassifizierers. Die PCoA basierend auf UniFrac-Distanzen sowie eine hierarchische Clusterung wurden in R durchgeführt, um die Gemeinschaftsähnlichkeit zu bewerten. Die LEfSe-Analyse wurde auf der Galaxy-Plattform durchgeführt, um taxonomische Gruppen mit signifikant unterschiedlicher Häufigkeit zu identifizieren (Schwellenwerte: LDA > 3, Kruskal-Wallis p < 0,05, post-hoc Wilcoxon p < 0,05). Für multiple Vergleiche der mikrobiellen Häufigkeiten wurde eine FDR-Korrektur nach Benjamini-Hochberg angewandt; p(FDR) < 0,05 galt als signifikant.
LC-MS/MS-Analyse von fäkalen Gallensäuren
Eine 20 mg Probe von Fäzes wurde mit 200 µL Methanol homogenisiert. Nach der Zentrifugation wurde der Überstand eingeengt, in 100 µL 50%iger wässriger Methanollösung rekonstituiert und mittels LC-MS/MS analysiert. Das Detektionssystem bestand aus einem Shimadzu-UPLC-System und einem Applied Biosystems 6500 QTRAP MS/MS-System. Qualitative und quantitative Analysen erfolgten anhand von Kalibrierungskurven mit Gallensäure-Standards. PCA wurde zur Beurteilung der Trennung des metabolischen Profils verwendet. Differenzielle Gallensäuren wurden definiert als VIP ≥ 1 und Fold-Change ≥ 2 oder ≤ 0,5. Violin-Plots dienten der Visualisierung der Verteilung differenzieller Gallensäuren. Bei multiplen Vergleichen wurde eine FDR-Korrektur nach Benjamini-Hochberg angewandt, analog zur Analyse mikrobieller Daten.
Statistische Analyse
Die Spearman-Korrelation wurde mithilfe der cor-Funktion in R berechnet. Die Signifikanz der Korrelation wurde mit der Funktion corPvalueStudent aus dem WGCNA-R-Paket getestet. Die phänotypischen Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung (Mittelwert ± SD) angegeben. Für alle Vergleiche mit mehreren Gruppen (phänotypisch, mikrobiell, metabolisch) wurde eine einfaktorielle ANOVA mit Benjamini-Hochberg-FDR-Korrektur für Post-hoc-Tests angewandt. Ein korrigierter p < 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet. Alle Analysen wurden in GraphPad Prism 7.00 und R 4.2.0 durchgeführt. Die post-hoc-Stichprobenumfangs-Teststärkeberechnung erfolgte mit G*Power 3.1.
Ergebnisse
TCM-Formeln verbessern Entzündungen und kolonische Schäden bei DSS-induzierter Kolitis
Die schützende Wirksamkeit von TCM-Formeln wurde zunächst anhand von Körpergewichtsveränderungen bewertet. Im Vergleich zu den Kontrollen zeigte die UC-Modellgruppe einen anhaltenden Gewichtsverlust. BJQF, BSF, JPF und QCF verminderten alle signifikant den DSS-induzierten Gewichtsverlust (Abbildung 1A). Die HE-Färbung zeigte intakte kolonische Mukosa und keine Entzündungen in den Kontrollen. Im Gegensatz dazu wiesen die Kolonproben der Modellgruppe schwere epitheliale Veränderungen, Zerstörung der Krypten sowie umfangreiche Infiltration von Entzündungszellen in Mukosa und Submukosa auf. Alle TCM-Behandlungen förderten die Geweberegeneration und verringerten die Entzündung, wobei BJQF die deutlichste Verbesserung zeigte (Abbildung 1B–C). Die quantitative histologische Bewertung bestätigte, dass TCM die histopathologischen Schäden signifikant verbesserte (p < 0,05).
BJQF, BSF, JPF und QCF senkten das Serum-IL-1β (Abbildung 1D) und TNF-α (Abbildung 1F) in unterschiedlichem Ausmaß. Die IL-10-Spiegel in den Behandlungsgruppen erreichten zwar nicht die Kontrollwerte, waren jedoch signifikant höher als in der Modellgruppe (Abbildung 1E). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass TCM-Formulierungen die DSS-induzierte intestinale Entzündung hemmen.
Abbildung 1: Therapeutische Wirkungen von BJQF und seinen zerlegten Teilformeln auf DSS-induzierte Kolitis bei Ratten. (A) Dynamische Veränderungen des Körpergewichts im Verhältnis zum Ausgangswert in jeder Gruppe über den 10-tägigen Versuchszeitraum; (B) Quantitative histologische Bewertung der Kolon-Gewebeproben aller experimentellen Gruppen; (C) Repräsentative mit Hämatoxylin-Eosin (HE) gefärbte Kolon-Gewebeschnitte jeder Gruppe (Maßstab = 200 µm); (D–F) Serumkonzentrationen entzündungsfördernder Zytokine in jeder Gruppe: (D) IL-1β, (E) IL-10, (F) TNF-α. Die Daten sind als Mittelwert ± SD angegeben. *p < 0,05, **p < 0,01, ****p < 0,0001. Bitte klicken Sie hier, um eine vergrößerte Version dieser Abbildung anzusehen.
Die TCM-Behandlung verändert die Struktur der mikrobiellen Gemeinschaft im Darm von UC-Ratten
Nach der Qualitätsfilterung wurden pro Probe durchschnittlich 68.450 ± 28.297 hochwertige, saubere Reads erhalten. Die TCM-Behandlung veränderte die bakterielle α-Diversität (Chao1-Index, Abbildung 2A). BJQF senkte die erhöhte α-Diversität bei UC-Ratten signifikant (p(FDR) < 0,05). Unter den Teilformeln verringerte JPF die Diversität signifikant (p(FDR) < 0,05), während BSF und QCF keine signifikante Wirkung zeigten. Bezüglich der β-Diversität zeigte die ungewichtete PCoA der UniFrac-Distanzen eine klare Trennung zwischen den Gruppen, was darauf hinweist, dass die TCM die gesamte mikrobielle Zusammensetzung veränderte (Abbildung 2B). Die hierarchische Clusterung zeigte zudem deutlich getrennte Cluster zwischen Modell- und Behandlungsgruppen (Abbildung 2C).
Insgesamt wurden 13 Stämme, 22 Klassen, 36 Ordnungen, 65 Familien und 158 Gattungen nachgewiesen. Auf Stammebene dominierten Firmicutes, Bacteroidetes, Actinobacteria, Verrucomicrobia und Proteobacteria (>99 % Gesamtanteil, Abbildung 2D). Firmicutes dominierten in den Kontrollen (86,98 %), nahmen bei Colitis ulcerosa (CU) signifikant ab (p(FDR) < 0,05) und wurden durch TCM wiederhergestellt (p(FDR) < 0,05), wobei BJQF den stärksten Effekt zeigte. Bacteroidetes und Proteobacteria waren bei CU signifikant erhöht und wurden durch alle TCM-Formulierungen umgekehrt. Auf Gattungsebene (Anteil >1 %, Abbildung 2E) dominierte Lactobacillus in den Kontrollen (59,77 %), war bei CU deutlich reduziert (3,57 %, p(FDR) < 0,05) und wurde durch TCM wiederhergestellt (p(FDR) < 0,05). BJQF und JPF zeigten stärkere Effekte auf die Wiederherstellung von Lactobacillus. CU erhöhte außerdem Bacteroides, Ruminococcus_2, Bifidobacterium und Blautia und verringerte Enterorhabdus und Corynebacterium_1 – vieles davon wurde durch TCM umgekehrt. Insgesamt besserten alle Formulierungen die mit CU assoziierte mikrobielle Dysbiose, wobei BJQF und JPF die ausgeprägtesten Effekte zeigten.
Abbildung 2: Zusammensetzung der Darmmikrobiota in den Gruppen. (A) Index der bakteriellen α-Diversität, bewertet mittels Chao 1 (p(FDR) < 0,05 gegenüber Modell); (B) PCoA der UniFrac-Distanzen basierend auf der OTU-Zusammensetzung und -Häufigkeiten in verschiedenen Gruppen; (C) Hierarchische Clusteranalyse basierend auf der Distanzmatrix; (D) Relative Häufigkeit auf Phylum-Ebene (p(FDR) < 0,05 gegenüber Modell); und (E) Relative Häufigkeit auf Gattungsebene (p(FDR) < 0,05 gegenüber Modell). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
LEfSe identifiziert mit Colitis ulcerosa und Traditioneller Chinesischer Medizin assoziierte differentielle Taxa
Die LEfSe-Analyse wurde durchgeführt, um taxonomische Gruppen zu identifizieren, die in den verschiedenen Gruppen unterschiedlich angereichert sind (LDA > 3, p < 0.05, Abbildung 3). Zu den UC-angereicherten Taxa gehörten Bacteroidaceae, Bacteroides, Clostridiales, Clostridia, Bacteroidia, Bacteroidales, Bacteroidetes, Faecalibaculum und Ruminococcaceae hauptsächlich von Bacteroidetes und Firmicutes. Nach der TCM-Behandlung gehörten die meisten BJQF-angereicherten Taxa zu Firmicutes, wobei lediglich Bifidobacteriaceae, Bifidobacterialesund Bifidobacterium von Actinobakterien. BSF-angereicherte Taxa waren ebenfalls hauptsächlich Firmicutes. JPF-angereicherte Taxa wie Turicibacter und Dorea gehörte zu Firmicutes. QCF wies die stärkste Anreicherung von Verrucomicrobia (einschließlich Akkermansia), was auf eine hohe Empfindlichkeit dieses Phylums gegenüber der QCF-Intervention hinweist. Im Allgemeinen Firmicutes war der am stärksten ansprechende Phylum auf BJQF, BSF und JPF.
Abbildung 3: LEfSe identifizierte die am stärksten unterschiedlich abundanten OTUs in verschiedenen Gruppen. Signifikante Unterschiede in den LDA-Scores (p < 0,05) ergaben sich zwischen Klassen (Kruskal-Wallis-Test) und zwischen Unterklassen (Wilcoxon-Test). Unterschiedliche Taxa wurden basierend auf einem LDA-Schwellenwert von > 3 und einem statistischen Signifikanzniveau von 0,05 bestimmt. (p: Stamm c: Klasse o: Ordnung f: Familie g: Gattung). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
Die TCM-Intervention normalisiert das Profil der fäkalen Gallensäuren bei UC-Ratten
Angesichts der gestörten Gallensäureabsorption bei entzündlichen Darmerkrankungen (IBD) verwendeten die Autoren LC-MS/MS, um fäkale Gallensäuren (BAs) zu quantifizieren. Die Hauptkomponentenanalyse (PCA) zeigte eine deutliche Trennung zwischen Kontroll- und Modellgruppen, während sich alle Behandlungsgruppen näher an den Kontrollen gruppierten, was auf eine teilweise Normalisierung des Gallensäurestoffwechsels hindeutet (Abbildung 4A). Die stärksten Veränderungen in der Modellgruppe waren erhöhte LCA-3S und verminderte GDCA (Abbildung 4B). Nach der Behandlung waren die stärksten Anstiege bei ILCA (BJQF), GCDCA (BSF), DLCA (JPF) und GCDCA (QCF) zu verzeichnen; die stärksten Abnahmen zeigten sich bei TLCA-3S (BJQF), LCA-3S (BSF), LCA-3S (JPF) und TLCA-3S (QCF) (Abbildung 4C–F). Violin-Diagramme veranschaulichten gemeinsame differentielle Gallensäuren über alle Gruppen hinweg (Abbildung 5). Bemerkenswerterweise erhöhten alle TCM-Formulierungen 23-DCA, 3-oxo-DCA und DLCA und verringerten HCA, LCA-3S, TCA sowie TLCA-3S.
Abbildung 4: TCM-Formulierungen regulierten DSS-induzierte Gallensäurestörungen im UC-Modell. (A) PCA-Plot der Gallensäuren der Gruppen Kontrolle, Modell, BJQF, BSF, JPF und QCF. (B) Balkendiagramm der Faltänderung Modell im Vergleich zu Kontrolle. (C) Balkendiagramm der Faltänderung BJQF im Vergleich zu Modell. (D) Balkendiagramm der Faltänderung BSF im Vergleich zu Modell. (E) Balkendiagramm der Faltänderung JPF im Vergleich zu Modell und (F) Balkendiagramm der Faltänderung QCF im Vergleich zu Modell. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
Abbildung 5: Violin-Plot der differentiellen BAs in jeder Vergleichsgruppe. (A) Differentielle BAs in BJQF im Vergleich zur Modellgruppe. (B) Differentielle BAs in BSF im Vergleich zur Modellgruppe. (C) Differentielle BAs in JPF im Vergleich zur Modellgruppe und (D) Differentielle BAs in QCF im Vergleich zur Modellgruppe. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
Korrelation zwischen fäkalen Gallensäuren und der Häufigkeit von Darmmikroben
Eine Spearman-Korrelationsanalyse wurde zwischen differenziellen Stämmen und differenziellen Gallensäuren durchgeführt (Abbildung 6A–F, Abbildung 7A–D). Chord-Diagramme zeigen Korrelationen mit |r| ≥ 0,8 an (Abbildung 6B, 6D, 6F). Beim Vergleich Modell vs. Kontrolle zeigte 23-DCA eine positive Korrelation mit Saccharibacteria und Firmicutes sowie eine negative Korrelation mit Proteobacteria und Bacteroidetes (Abbildung 6B). Beim Vergleich BJQF vs. Modell war Proteobacteria assoziiert mit TLCA-3S, LCA-3S, TCA, α-MCA, 6,7-DKLCA, HCA, CDCA und THCA (Abbildung 6D). Beim Vergleich BSF vs. Modell waren Proteobacteria positiv korreliert mit TDCA, 6,7-DKLCA und LCA-3S; Saccharibacteria waren positiv korreliert mit GUDCA und 23-DCA (Abbildung 6F).
Abbildung 6: Korrelationen zwischen differentiellen Gallensäuren (BAs) im Stuhl und der Häufigkeit differentieller Bakterien auf Ebene der Phyla. (A, C, E) Spearman-Korrelationsanalysen für die Gruppen Kontrolle vs. Modell, BJQF vs. Modell und BSF vs. Modell, jeweils. (B, D, F) Entsprechende Sehnendiagramme, die starke Korrelationen (|r| ≥ 0,8) für die Gruppen Kontrolle vs. Modell, BJQF vs. Modell und BSF vs. Modell veranschaulichen, jeweils. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
Chord-Diagramme zeigen Korrelationen mit |r| ≥ 0,8 an (Abbildung 7B, 7D). Beim Vergleich JPF vs. Modell war Saccharibacteria negativ assoziiert mit TLCA-3S, LCA-3S und HCA sowie positiv korreliert mit 23-DCA (Abbildung 7B). Beim Vergleich QCF vs. Modell war Saccharibacteria negativ korreliert mit HCA, CA, LCA-3S, THCA und TLCA-3S sowie positiv korreliert mit 23-DCA (Abbildung 7D). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass unterschiedliche TCM-Formeln das Bakterien–BA-Interaktionsnetzwerk über spezifische Muster modulieren.
Abbildung 7: Korrelationen zwischen differentiellen Gallensäuren (BAs) im Stuhl und der Häufigkeit differentieller Bakterien. (A, C) Spearman-Korrelationsanalysen für die Gruppen JPF vs. Modell und QCF vs. Modell, jeweils. (B, D) Entsprechende Sehnendiagramme, die starke Korrelationen (|r| ≥ 0,8) für die Gruppen JPF vs. Modell und QCF vs. Modell veranschaulichen. Rote Farbe zeigt positive Korrelationen an, blaue Farbe negative Korrelationen. p < 0,05, p < 0,01. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
VERFÜGBARKEIT VON DATEN:
Alle Rohdaten wurden in der NCBI Sequence Reads Archive (SRA)-Datenbank hochgeladen (Zugriffsnummer: PRJNA749732). https://www.ncbi.nlm.nih.gov/bioproject/PRJNA749732
Diskussion
Diese Studie untersucht den therapeutischen Wirkmechanismus von BJQF und seiner zerlegten Teilformeln bei der Linderung von DSS-induziertem UC über die Darmmikrobiota–Gallensäure-Stoffwechselachse. Diese Multi-Omics-Analyse legt nahe, dass BJQF entzündungshemmende Wirkungen entfaltet, indem es das mit UC assoziierte mikrobielle Dysbiosis wiederherstellt und den fäkalen Gallensäurepool normalisiert. Die Teilformeln zeigen unterschiedliche, modulspezifische regulierende Effekte, wobei JPF die dem Vollpräparat am ähnlichsten wirkende Wirksamkeit aufweist und damit die zentrale Rolle der Jianpi-Strategie offenbart. Die Autoren identifizieren außerdem 23-DCA als zentrale Gallensäure-Verbindung, die mikrobielle Umgestaltung und Verbesserung des UC miteinander verknüpft, sowie TLCA-3S/LCA-3S als potenzielle Wirkstoff-Biomarker.
Die durch BJQF vermittelte Wiederherstellung einer mikrobiellen Dysbiose ist möglicherweise mit einer Normalisierung des Gallensäurepools und einer Verringerung der Entzündung verbunden. Die Colitis ulcerosa wird durch eine Dysregulation des Immun-Mikrobiota-Stoffwechsel-Netzwerks verursacht, wobei ein Ungleichgewicht der Kernphyla ein typisches Merkmal sowohl bei Patienten als auch in Tiermodellen darstellt10. Diese Ergebnisse bestätigen, dass DSS-induzierte UC-Ratten eine verminderte Besiedlung mit Firmicutes und Lactobacillus sowie eine erhöhte Besiedlung mit Bacteroidetes und Proteobacteria aufweisen – im Einklang mit klinischen UC-Profilen11. BJQF und JPF kehrten diese Anomalien am wirksamsten um, während BSF und QCF moderat wirksam waren. Da bekannt ist, dass Firmicutes-Taxa wie Lactobacillus und Clostridium über die zentralen enzymatischen Apparate für die Biosynthese sekundärer Gallensäuren verfügen12, legt dies einen möglichen assoziativen Zusammenhang nahe: BJQF, insbesondere sein Jianpi-Modul, stellt Firmicutes mit gallensäuresynthetischer Kapazität wieder her, was die biotransformation sekundärer Gallensäuren fördern und metabolische Störungen korrigieren könnte. Auf Gattungsebene kehrten BJQF und JPF außerdem UC-bedingte Veränderungen bei Bacteroides, Ruminococcus_2, Enterorhabdus und Corynebacterium_1 um und trugen so zur weiteren Reparatur der Dysbiose und funktioneller Abläufe im Zusammenhang mit der Gallensäuresynthese bei.
Die Wiederherstellung einer mikrobiellen Dysbiose könnte zur Normalisierung des Gallensäurepools beitragen, einem zentralen Stoffwechselmechanismus der entzündungshemmenden Wirkung. Der Gallensäurestoffwechsel ist stark von der mikrobiellen Aktivität abhängig, und sekundäre Gallensäuren sind entscheidend für die Immunhomöostase und die Integrität der Barrierefunktion13. Die LC-MS/MS-Daten zeigen, dass UC-Ratten verminderte schützende sekundäre Gallensäuren (23-DCA, 3-oxo-DCA, DLCA) aufweisen und sulfatierte Gallensäuren (TLCA-3S, LCA-3S) anreichern – dies steht im Einklang mit früheren Berichten über eine UC-assoziierte Dysregulation des Gallensäurestoffwechsels14. Sulfatierte Gallensäuren weisen eine geringe intestinale Resorbierbarkeit auf und können nicht in den enterhepatischen Kreislauf eintreten15; ihre Anreicherung spiegelt einen gestörten Gallensäurestoffwechsel wider und ist mit der Aktivierung proinflammatorischer Signalwege verknüpft16. Alle Formulierungen kehrten diese Störung um, wobei BJQF und JPF die stärksten Effekte zeigten.
Die Korrelationsanalyse bestätigt 23-DCA als den zentralen BA-Knoten, der mit Veränderungen der Kernstämme assoziiert ist: positiv korreliert mit Firmicutes und negativ mit Proteobacteria. Als sekundärer BA mit entzündungshemmenden und barriereschützenden Wirkungen17 könnte die Hochregulierung von 23-DCA durch BJQF/JPF auf eine Anreicherung von Firmicutes und eine verstärkte Biosynthese zurückzuführen sein und korreliert mit reduzierten Zytokinen und verbesserter Histologie. Basierend auf diesen Korrelationsergebnissen schlagen die Autoren ein hypothetisches mechanistisches Modell vor: BJQF stellt die Abundanz von Firmicutes wieder her > verstärkt die mikrobielle sekundäre BA-Biosynthese > hochreguliert den schützenden 23-DCA > hemmt die intestinale Entzündung. Dieses Modell muss noch durch funktionelle Experimente validiert werden.
Diese Studie verbindet die TCM-Theorie mit der modernen Molekularbiologie, indem sie funktionelle Module von BJQF spezifischen mikrobiellen und metabolischen Veränderungen zuordnet. Das Jianpi-Konzept ist die zentrale Verbindung. In Übereinstimmung mit der TCM-Theorie der „gegenseitigen Verstärkung von Milz und Niere“18 zeigte BSF eine moderate Anreicherung von Firmicutes und eine Hochregulierung von 23-DCA. QCF reicherte hauptsächlich Verrucomicrobia (Akkermansia) an und regulierte den Fremdstoffmetabolismus, was dem Effekt der „Ausschaltung von Feuchtigkeits-Wärme“ entspricht. Die vollständige Rezeptur entfaltet synergistische Effekte, die über denen eines einzelnen Moduls liegen, und bestätigt damit die Rationalität des TCM-Verbunddesigns auf Grundlage der Syndromdifferenzierung.
Die Korrelationsanalyse zeigt zudem deutliche Bakterien-Gallensäure-Interaktionsnetzwerke auf, die jeweils durch eine bestimmte Rezeptur geprägt sind. Diese Unterschiede spiegeln modulspezifische regulatorische Eigenschaften wider und liefern eine Grundlage für individualisierte klinische Anwendungen: JPF bei Colitis ulcerosa (CU) mit überwiegender Milzschwäche und Dysbiose, die auf Firmicutes zentriert ist, QCF bei CU mit überwiegender Feuchtigkeits-Wärme und Schädigung der Schleimhautbarriere sowie die vollständige BJQF-Rezeptur bei dem klassischen kombinierten Syndrom. In Übereinstimmung mit diesen Ergebnissen unterstützen aktuelle Studien ebenfalls die Mikrobiota-Gallensäure-Achse als zentrales therapeutisches Ziel bei CU und der Behandlung mit traditioneller chinesischer Medizin19,20,21,22. Eine mikrobiell bedingte sekundäre Gallensäuredefizienz ist ein zentrales Merkmal aktiver CU, und die Wiederherstellung der Gallensäure-Homöostase kann Entzündungen und Schleimhautschäden wirksam lindern23.
Diese Studie weist mehrere Einschränkungen auf. Erstens beruhen alle Assoziationen zwischen mikrobiellem Remodeling und BA-Normalisierung auf einer korrelativen Multi-Omics-Analyse; kausale Zusammenhänge wurden nicht durch funktionelle Experimente wie die Fäkale Mikrobiota-Transplantation validiert. Zweitens ist die Stichprobengröße relativ moderat, was die statistische Aussagekraft und die Verallgemeinerbarkeit beeinträchtigen könnte. Drittens wurden nur fäkale BAs quantifiziert; die Profile von BAs im Serum und in der Mukosa, die den enterohepatischen Kreislauf widerspiegeln, wurden nicht gemessen. Viertens wurden die spezifischen aktiven Phytochemikalien, die für die Regulation von Mikrobiota und BA verantwortlich sind, noch nicht identifiziert. Künftige Arbeiten werden kausale Beziehungen mittels FMT und Versuchen an keimfreien Tieren validieren, die wichtigsten aktiven Komponenten von BJQF identifizieren und klinische Pilotstudien durchführen, um den translationalen Nutzen zu überprüfen.
Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
BEITRAG DER AUTOREN:
Hongyu Chen trug bei zur Konzeption, Methodik, Validierung, formalen Analyse, Untersuchung, Visualisierung und zur Erstellung des ursprünglichen Manuskriptentwurfs. Song Zhao trug bei zur Methodik, Projektleitung, Untersuchung, Visualisierung, Beschaffung der Finanzierungsmittel und zur Erstellung des ursprünglichen Manuskriptentwurfs. Luzhou Xu trug bei zur Konzeption, Bereitstellung von Ressourcen, Überprüfung und Bearbeitung des Manuskripts, Projektleitung und der gesamten Studienüberwachung.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch die Nationale Naturwissenschaftliche Stiftung Chinas (81774243) unterstützt.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 0,2-mL-PCR-Röhrchen | Axygen | PCR-02-C | Für 16S-rRNA-Gen-PCR-Amplifikationsreaktionen |
| 1,5-mL-sterile Zentrifugenröhrchen | Axygen | MCT-150-C | Sterile Behälter für Probenentnahme, -lagerung und -zentrifugation |
| 10 % neutral gepuffertes Formalin | Solarbio Science & Technology | 1008128 | Zur Fixierung von Kolon-Gewebeproben |
| 6500 QTRAP MS/MS-System | Sciex | 5009065 | Für MRM-basiertes quantitatives Profiling fäkaler Gallensäuren |
| -80 ºC Ultra-Tiefkühlfach | Thermo Fisher Scientific | 702-UR | Für die Kryokonservierung fäkaler Proben und biologischer Gewebeproben |
| Agarose | Sigma-Aldrich | A9539 | Für die Detektion der DNA-Integrität mittels Gelelektrophorese |
| Alpiniae Oxyphyllae Fructus | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230321 | Rohes pflanzliches Material, 15 g pro Dosis, verwendet in BJQF und BSF |
| Astragali Radix | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230312 | Rohes pflanzliches Material, 15 g pro Dosis, verwendet in BJQF und JPF |
| Aucklandiae Radix | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230217 | Rohes pflanzliches Material, 6 g pro Dosis, verwendet in BJQF und QCF |
| Standardmischung für Gallensäuren | Sigma-Aldrich | B4893 | Für qualitative und quantitative Kalibrierung fäkaler Gallensäuren |
| Coptidis Rhizoma | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230118 | Rohes pflanzliches Material, 4 g pro Dosis, verwendet in BJQF und QCF |
| Dextransulfatnatrium (DSS, 36–50 kDa) | MP Biomedicals | 160110 | Für die Induktion von Colitis ulcerosa bei Ratten, als 3,5 %ige (Gewicht/Volumen) Trinklösung über 10 aufeinanderfolgende Tage |
| Glycyrrhizae Radix | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230411 | Rohes pflanzliches Material, 5 g pro Dosis, verwendet in BJQF und JPF |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | v7.00 | Für statistische Analyse, Signifikanztests und wissenschaftliche Diagrammerstellung |
| Hämatoxylin-Eosin (H&E)-Färbekit | Beyotime Biotechnology | C0105S | Für die Färbung von Kolon-Gewebeschnitten, histopathologische Beurteilung und Entzündungsscore |
| Kühlschnellzentrifuge | Eppendorf | 5810R | Für die Zentrifugation von Proben bei der Nukleinsäure-Extraktion und Metabolomik-Vorbereitung |
| Methanol, HPLC-Reinst | Merck KGaA | 1.06007.4008 | Für die Probenvorbereitung in LC-MS/MS und die Herstellung der mobilen Phase |
| Illumina MiSeq Sequenzierplattform | Illumina Inc. | SY-410-1003 | Für die Hochdurchsatz-Sequenzierung des 16S-rRNA-Gens und das Profiling der Darmmikrobiota |
| KEGG-Datenbank | Kanehisa Laboratories | Version 107.0 | Für die Annotation mikrobieller Funktionswege |
| Männliche SPF-Ratten der SD-Linie | Shanghai Xipu-Bikai Experimental Animal Co., Ltd. | / | 44 Ratten mit einem Gewicht von 200 ± 20 g, für die Erzeugung des UC-Modells und nachfolgende Experimente |
| Multiskan™ GO Mikroplattenreader | Thermo Fisher Scientific Oy | 51119080 | Für die Messung der ELISA-Absorption und Quantifizierung von Zytokinen |
| NanoDrop 2000 Spektrophotometer | Thermo Fisher Scientific | ND-2000 | Für die Quantifizierung und Reinheitsbeurteilung genomischer DNA aus fäkalen Bakterien |
| Paraffineinbettungskassetten | Leica Biosystems | 3801520 | Für die Dehydrierung und Paraffineinbettung von Kolon-Gewebeproben |
| PowerFecal® DNA-Isolationskit | MoBio (Qiagen) | 12830-50 | Für die Extraktion und Reinigung genomischer DNA aus fäkalen Bakterien |
| Psoraleae Fructus | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230129 | Rohes pflanzliches Material, 15 g pro Dosis, verwendet in BJQF und BSF |
| R-Statistikumgebung | R Foundation for Statistical Computing | v4.2.0 | Für bioinformatische Analysen und statistische Berechnungen |
| Ratten-IL-10-ELISA-Kit | Lun Chang Shuo Biotech | YD-30194 | Für die quantitative Bestimmung der Serumkonzentration von IL-10 |
| Ratten-IL-1β-ELISA-Kit | Lun Chang Shuo Biotech | YD-30206 | Für die quantitative Bestimmung der Serumkonzentration von IL-1β |
| Ratten-TNF-α-ELISA-Kit | Lun Chang Shuo Biotech | YD-31063 | Für die quantitative Bestimmung der Serumkonzentration von TNF-α |
| Sanguisorbae Radix | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230309 | Rohes pflanzliches Material, 10 g pro Dosis, verwendet in BJQF und QCF |
| Scutellariae Radix | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230407 | Rohes pflanzliches Material, 10 g pro Dosis, verwendet in BJQF und QCF |
| Shim-pack UFLC UPLC-System | Shimadzu Corporation | CBM-20A | Für die chromatographische Trennung fäkaler Gallensäureproben |
| Geröstetes Atractylodis Macrocephalae Rhizoma | Nanjing TCM Co., Ltd. | Charge 20230225 | Rohes pflanzliches Material, 10 g pro Dosis, verwendet in BJQF und JPF |
Referenzen
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