Assoziation von MIR30C rs928508 Polymorphismus mit epiduraler Geburten-Analgesie-Ergebnisse bei primiparen Frauen: Eine beobachtende Studie

Zusammenfassung

Diese Beobachtungsstudie untersuchte den Zusammenhang zwischen dem MIR30C rs928508-Polymorphismus und den Ergebnissen der epiduralen Wehen-Analgesie, Schmerzwerten, Wehendauer und Nebenwirkungen bei primiparen Frauen bei vaginaler Entbindung.

Zusammenfassung

Genetische Polymorphismen können die individuelle Variabilität in der Wahrnehmung von Wehenschmerzen und der analgetischen Wirksamkeit beeinflussen. MicroRNA-30c (MIR30C) spielt eine Rolle bei der Schmerztherapie, aber sein Zusammenhang mit der Geburtsanalgesie bleibt unklar. Diese Studie untersuchte den Zusammenhang zwischen dem MIR30C rs928508-Polymorphismus und der epiduralen Wehen-Analgesie bei primiparen Frauen. Insgesamt wurden 202 gesunde, primipare chinesische Han-Frauen eingeschrieben, die eine standardisierte epidurale Analgesie mit Ropivacain und Sufentanil erhielten. rs928508-Genotypen (GG, GA und AA) wurden mittels TaqMan-Tests nachgewiesen, und eine Hardy–Weinberg-Gleichgewichtsanalyse wurde durchgeführt, um die genetische Verteilung der Population zu bewerten. Die Schmerzintensität wurde mit der Visual Analogue Scale (VAS) zu Beginn vor der Analgesie, 30 Minuten nach der Analgesie, 1 Stunde nach der Analgesie und nach Absetzen der Analgesie bewertet. Faktoren, die die Ergebnisse der Geburtsanalgesie beeinflussen, wurden mittels Multivariable-Regressionsanalyse bewertet. Träger des GG-Genotyps zeigten signifikant höhere VAS-Werte vor der Analgesie, 30 Minuten nach der Analgesie und nach Absetzen der Analgesie, sowie eine verlängerte Geburtsphase im ersten Stadium im Vergleich zu GA- und AA-Trägern. Die Multivariable Regressionsanalyse identifizierte den GG-Genotyp als unabhängigen Faktor, der mit höheren VAS-Werten nach der Analgesie verbunden ist. Die neonatalen Ergebnisse und die meisten Nebenwirkungen waren zwischen den Genotypen vergleichbar, mit Ausnahme einer höheren Inzidenz von Schmerzen an der Stichstelle bei GG-Trägern. Das MIR30C rs928508 G-Allel war mit erhöhten Basisschmerzen, möglicherweise verringerter Wirksamkeit der epiduralen Wehen-Analgesie und einer verlängerten Geburtsdauer im ersten Stadium bei primiparen Frauen assoziiert. Diese Erkenntnisse unterstützen weitere Untersuchungen zur potenziellen pharmakogenomischen Relevanz der MIR30C-Genmutation bei der Geburtsanalgesie.

Einleitung

Wehenschmerzen, anerkannt als eine der intensivsten Formen menschlichen Schmerzes, verursachen nicht nur schwere physiologische Belastungen bei Geburten, sondern können auch die mütterlichen und neonatalen Ergebnisse durch neuroendokrine Mechanismen negativ beeinflussen. Dies kann zu Komplikationen wie abnormalen Gebärmutterkontraktionen, fetalem Stress und postpartaler Depression ^1,2 führen. Die Wehensanalgesie lindert effektiv mütterliche Schmerzen und Stressreaktionen, verbessert das Geburtserlebnis und zeigt bei angemessener Anwendung ein günstiges Sicherheitsprofil für Mutter und^Kind. Die epidurale Analgesie, die bevorzugte Methode für Geburtsanalgesie in der klinischen Praxis, hat gezeigt, dass sie die Schmerzwerte der Visual Analogue Scale (VAS) effektiv senkt. Darüber hinaus hat die Untersuchung kombinierter Medikamentenregime die analgetische Wirksamkeit verbessert und gleichzeitig die Nebenwirkungen reduziert⁴.

Erhebliche Belege deuten darauf hin, dass genetische Polymorphismen als eine bedeutende Form genetischer Variation die Ergebnisse der Geburtsanalgesie beeinflussen können. Eine Studie zeigte, dass Gebärende mit dem G-Allel des μ-Opioid-Rezeptor-Gens (OPRM1)-Polymorphismus rs1799971 signifikant höhere Opioiddosen für Geburtsanalgesie benötigten als Personen mit dem AA-Genotyp und eine geringere Zufriedenheit der Schmerzmittel meldeten. Mutationen an diesem Locus können die Rezeptormembranexpression reduzieren und dadurch die Wirksamkeit von Opioid-Analgetikum verringern⁵. Darüber hinaus können Polymorphismen im Katechol-O-Methyltransferase-(COMT)-Gen das Ausmaß der zentralen Schmerzsensibilisierung beeinflussen, indem sie den Dopaminstoffwechsel modulieren, wodurch die mütterliche Schmerzschwelle und die Empfindlichkeit auf Schmerzmittel während^{der Geburt} verändert werden. Polymorphismen im Cytochrom-Gen P450 3A4 (CYP3A4) wurden ebenfalls berichtet, die analgetische Ergebnisse zu modulieren, indem sie den Stoffwechsel^{von Medikamenten 7,8} beeinflussen. Darüber hinaus berichteten Zhang et al., dass Patienten mit dem MDR1 1236C>T TT-Genotyp nach Kaiserschnitt signifikant mehr Fentanyl benötigten als solche mit dem CC- oder CT-Genotyp⁹. Zusammen geben diese Ergebnisse Einblicke in die genetische Grundlage der interindividuellen Variabilität der Schmerzwahrnehmung¹⁰.

Mit Fortschritten in der epigenetischen Forschung wurde die Rolle nicht-kodierender RNA-Genpolymorphismen bei der Schmerzmodulation zunehmend anerkannt. MikroRNAs (miRNAs) modulieren als zentrale epigenetische Regulatoren die Genexpression, indem sie die Boten-RNA (mRNA) für translationale Repression oder Abbau anvisieren und spielen so eine entscheidende Rolle bei der Schmerzsignalübertragung und der Entwicklung der Schmerzsensibilisierung¹¹. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass miRNAs bei neuropathischen Schmerzen, entzündlichen Schmerzen und anderen Schmerzerkrankungen unterschiedlich exprimiert werden und an der zentralen Schmerzsensibilisierung durch Regulation mehrerer Signalwege beteiligt sind^12,13. Polymorphismen in miRNAs können deren Expressionsniveaus oder die Bindungseffizienz an Zielgene beeinflussen und so schmerzbedingte Signalkaskaden¹⁴ modulieren. Frühere Forschungen haben miRNA-Polymorphismen mit der phänotypischen Heterogenität des komplexen regionalen Schmerzsyndroms (CRPS) und pathologischen Schmerzen bei Brustkrebs in Verbindung gebracht.^15,16. Unter den vielen schmerzbedingten miRNAs hat die miR-30-Familie zunehmend Aufmerksamkeit erregt, weil sie an der Regulierung neuropathischer Schmerzen^{beteiligt ist.} Insbesondere wurde die regulatorische Rolle von miR-30c-5p umfassend untersucht. Tierstudien zeigten, dass die Expression von miR-30c-5p in schmerzbedingten neuronalen Strukturen nach einer Ischias-Verletzung deutlich hochreguliert wurde, während die Verabreichung eines synthetischen Inhibitors die neuropathische Schmerzüberempfindlichkeit bei Ratten dauerhaft umkehrte. Weitere mechanistische Studien zeigten, dass miR-30c-5p die Boten-RNAs der DNA-Methyltransferase 3a (DNMT3a) und DNMT3b anspricht, die DNA-Methylierungswerte in neuronalen Zellen durch epigenetische Regulation beeinflusst und zur langfristigen Aufrechterhaltung von Schmerzen^beiträgt. Klinische Studien zeigten außerdem eine Korrelation zwischen miR-30c-5p-Spiegeln und neuropathischer Schmerzintensität bei^{Patienten 20,21}. Bemerkenswert ist, dass aktuelle Forschungen berichteten, dass das G-Allel in miR-30c rs928508 das Schmerzrisiko bei Personen erhöht, die Mobbing am Arbeitsplatz^ausgesetzt waren. Eine weitere Studie zeigte, dass das G-Allel die Expression von miR-30c reduzierte, indem es die Verarbeitung von primärem miR-30c (pri-miR-30c) in reife miR-30c beeinflusste. Ob miR-30c-Polymorphismen die Schmerzempfindlichkeit bei den Wehen oder die Ergebnisse der epiduralen Wehen-Analgesie beeinflussen, bleibt jedoch unklar.

Obwohl die Techniken der Geburtsanalgesie kontinuierlich optimiert wurden, sind die regulatorischen Mechanismen von miRNAs bei der Schmerzmodulation immer deutlicher geworden. Darüber hinaus wurde miR-30c-5p als wichtiger regulatorischer Faktor bei neuropathischen Schmerzen identifiziert, und seine Polymorphismen wurden mit schmerzbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht. Ob miR-30c-Polymorphismen jedoch an der Regulation der Arbeitsanalgesie beteiligt sind, bleibt noch zu klären. Daher konzentrierte sich die vorliegende Studie auf den MIR30C rs928508-Polymorphismus, um dessen Zusammenhang mit den Ergebnissen der Geburtsschmerz bei primiparen Frauen mit epiduraler Analgesie zu untersuchen. Die Ergebnisse könnten theoretische Unterstützung für zukünftige Untersuchungen zur möglichen Rolle genetischer Variation bei individualisierten Laboranalgesie-Strategien liefern.

Protokoll

Diese Studie wurde gemäß den ethischen Standards des Medizinischen Ethikausschusses des Shijiazhuang Sechsten Krankenhauses durchgeführt und vom Komitee unter der Genehmigungskennung Nr. 2022111709 genehmigt. Vor der Einschreibung wurde von allen Teilnehmern eine schriftliche informierte Zustimmung eingeholt. Ein schematischer Überblick über das Studiendesign und den experimentellen Arbeitsablauf ist in Abbildung 1 dargestellt.

Abbildung 1. Workflow-Schema des Studiendesigns und wichtige Erkenntnisse. Die Abbildung fasst den Gesamtablauf der Studie zusammen, die den Zusammenhang zwischen dem MIR30C-RS928508-Polymorphismus und den Ergebnissen der epiduralen Wehen-Analgesie bei primiparen Frauen untersucht. Der Arbeitsablauf umfasst Teilnehmerrekrutierung, MIR30C rs928508 Genotypisierung, genotypbasierte Stratifizierung, Verabreichung standardisierter epiduraler Geburtenanalgesie, Ergebnisbewertung und statistische Analyse. Bewertete Ergebnisse umfassten Visual Analogue Scale (VAS) Schmerzwerte, Geburtsphasendauer, neonatale Ergebnisse und analgesiebedingte Nebenwirkungen. Der Schaltplan hebt auch die wichtigsten Ergebnisse hervor, darunter höhere Schmerzwerte, verlängerte Geburtsphase im ersten Stadium und eine erhöhte Inzidenz von Schmerzen an der Stichstelle bei Trägern des GG-Genotyps. VAS, visuelle analoge Skala; SNP, Einzelnukleotid-Polymorphismus. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.

Klinische Daten
Im Shijiazhuang Sixth Hospital wurden nullipare Frauen, die zwischen Januar 2022 und Januar 2025 entbunden hatten, nacheinander als Studienpersonen über das elektronische Krankenaktensystem des Krankenhauses eingeschrieben, insgesamt 202 Fälle wurden eingeschlossen. Während der Schwangerschaftsbesuche zwischen der 28. und 36. Schwangerschaftswoche wurden berechtigte nullipare Frauen in die Studie eingeführt und eine schriftliche vorab informierte Zustimmung abgegeben. Die letztlich in die Analyse eingeschlossenen Patienten waren solche, die in der 37. bis 41. Schwangerschaftswoche entbunden, eine Einzelschwangerschaft hatten und mit einer cephalischen Präsentation präsentiert wurden.

Die Einschlusskriterien waren wie folgt: 1) gesunde, primipare Frauen im Alter von 20–35 Jahren; 2) Chinesische Han-Ethnie; 3) Singleton-Schwangerschaft in Cephalic-Präsentation mit Gestationsalter zwischen 37 und 41 Wochen; und 4) geplante spontane oder assistierte vaginale Geburt mit Indikationen für epidurale Analgesie. Die Indikationen für epidurale Analgesie waren: (a) mütterlicher Wunsch mit unterschriebener informierter Einwilligung; (b) aktive Wehen (zervikale Erweiterung ≥2 cm mit regelmäßigen Gebärmutterkontraktionen); und (c) eine geburtshilfliche Begutachtung, die die Eignung für die vaginale Geburt bestätigt.

Ausschlusskriterien umfassten: 1) Schwangerschaftskomorbiditäten wie Schwangerschaftshypertonie, Diabetes mellitus oder schwere Herz-Kreislauf-Erkrankungen; 2) Mehrlingsschwangerschaft; 3) Umstellung auf Kaiserschnitt nach Beginn der Wehenanalgesie; 4) strukturelle Auffälligkeiten der Wirbelsäule; und 5) Kontraindikationen für die Geburtsschmerzlinderung. Kontraindikationen für die Wehensanalgesie waren: (a) mütterliche Weigerung oder Unfähigkeit zur Kooperation; (b) erhöhter intrakranieller Druck, Wirbelsäulendeformität oder lokale Infektion an der Stichstelle; (c) Gerinnungsstörungen (Thrombozytenzahl von <70 × 10⁹/L oder bekannte Koagulationsfaktor-Anomalien); (d) unkorrigierte Hypovolämie oder Schock; (e) Allergie gegen lokale Anästhetika oder Opioide; und (f) geburtshilfe (z. B. fetale Belastungen, die einen sofortigen Kaiserschnitt erfordern, Nabelschnurprolaps oder placenta previa mit aktiver Blutung).

Die post-hoc statistische Stärke wurde mit 0,91 berechnet, was darauf hindeutet, dass die Stichprobengröße ausreichend war, um Unterschiede in Genotyp- und Allelhäufigkeiten zwischen der Studienpopulation und der Referenzpopulation zu erkennen.

Analgesie und Anästhesie
Vor der epiduralen Anästhesie wurden alle primiparen Frauen kontinuierlich überwacht. Atemdepression wurde definiert als eine Atemfrequenz <10 Atemzüge/min oder eine Sauerstoffsättigung (SpO₂) <90 %, Hypotonie bei systolischem Blutdruck <90 mmHg oder eine Abnahme von >20 % gegenüber dem Ausgangswert, und Harnretentation als die Unfähigkeit, innerhalb von 6 Stunden nach der Geburt spontan zu entleeren, was eine Katheterisierung erfordert. Die Zervikalerweiterung wurde durch eine digitale vaginale Untersuchung beurteilt, die vom behandelnden Geburtshelfer oder einer diensthabenden zertifizierten Hebamme durchgeführt wurde. Alle Prüfer durchliefen eine standardisierte Ausbildung in der Zervikaldilatationsbewertung mit einem Cervikaluntersuchungssimulator sowie regelmäßige Qualitätskontrollbewertungen, um die Konsistenz zwischen den Gutachtern sicherzustellen. Gebärmutterhalsuntersuchungen wurden routinemäßig alle 2 Stunden während der aktiven Geburt oder häufiger durchgeführt, wenn Auffälligkeiten im Wehenverlauf vermutet wurden. Die epidurale Analgesie wurde eingeleitet, als die dokumentierte Zervikalerweiterung ≥2 cm erreichte, wie von der behandelnden Geburtshilfe festgestellt.

Ein standardisiertes Protokoll zur epiduralen Analgesie wurde befolgt. Mit dem Parturienten in der linken lateralen Dekubitusposition wurde der epidurale Raum über den L3–L4-Zwischenwirbelraum mit der Methode des Widerstandsverlusts gegen salzhaltige Mittel zugänglich. Ein epiduraler Katheter wurde 3–4 cm in den PDA-Raum vorgeschoben. Vor der Verabreichung eines Medikaments wurde eine sanfte Aspiration durch den Katheter durchgeführt. Das Fehlen von Großhirnflüssigkeit oder Blut bestätigte die korrekte Katheterplatzierung und schloss eine intrathekale oder intravaskuläre Position aus. Anschließend wurde eine Testdosis von 5 ml 1 % Lidocainhydrochlorid epidural verabreicht.

Darauf folgte eine 10-minütige Beobachtungsphase, in der die Geburt nach vorgegebenen Sicherheitskriterien genau überwacht wurde. Zu diesen Kriterien gehörten das Fehlen von Anzeichen lokalanästhetischer systemischer Toxizität (z. B. periorale Taubheit, metallischer Geschmack, Tinnitus oder Unruhe), das Fehlen von Anzeichen einer hohen oder vollständigen Wirbelsäulenblockade (z. B. schneller Fortschreiten der motorischen Blockade, Aspinnoe, Dysphonie oder veränderter geistiger Zustand) sowie die Aufrechterhaltung der hämodynamischen Stabilität, definiert als Herzfrequenz und Blutdruck, die innerhalb von 20 % der Ausgangswerte bleiben. Nach Bestätigung, dass alle Sicherheitskriterien erfüllt waren, wurde eine Ladedosis von 10 ml mit 0,1 % Ropivacain-Hydrochlorid und 0,4 μg/mL Sufentanilcitrat verabreicht.

Ergebnismaße
Grundlegende demografische und geburtsbegleitende Merkmale der primiparen Frauen wurden erfasst, darunter Alter, Body-Mass-Index (BMI), Schwangerschaftsalter, Körpertemperatur zum Zeitpunkt des Analgesie-Abbruchs, Dauern der ersten, zweiten und dritten Geburtsphasen sowie Gesamtgeburtsdauer. Die Körpertemperatur wurde mit einem standardisierten digitalen Axillarthermometer gemessen, das von geschultem Pflegepersonal zum Zeitpunkt der Analgesie-Absetzung 5 Minuten lang in die rechte Achselhöhle eingesetzt wurde. Die Dauer der Geburtsphase wurde prospektiv von der behandelnden Hebamme oder Geburtshelferin gemäß vordefinierten standardisierten geburtshilflichen Kriterien erfasst. Die erste Geburtsphase wurde als das Intervall von regelmäßigen Gebärmutterkontraktionen mit Zervikalerweiterung ≥4 cm bis zur vollständigen Zervikalerweiterung (10 cm) definiert; Die zweite Phase erstreckte sich von der vollständigen Zervikaldilatation bis zur fetalen Entbindung; und die dritte Phase erstreckte sich von der fetalen Geburt bis zur vollständigen Plazentageburt. Die gesamte Arbeitsdauer wurde als Summe der drei Phasen berechnet. Alle Messungen wurden in Echtzeit im Partogramm und in der elektronischen Krankenakte aufgezeichnet. Alle klinischen Mitarbeiter, die im Arbeitsmanagement tätig sind, erhielten vor Studienbeginn eine einheitliche Schulung in diesen Definitionen.

Die Schmerzintensität wurde mit einer Visual Analogue Scale (VAS) bewertet. Jede Geburtstagerin meldete ihren Schmerzpegel selbst, indem sie eine 10-cm-Linie markierte, woraufhin geschultes Forschungspersonal den Wert maß und aufzeichnete. Die Gutachter waren gegenüber Genotypinformationen blind, da die Genotypisierung nach der Sammlung aller klinischen Endpunktdaten, einschließlich VAS-Scores, durchgeführt wurde. Die Schmerzwerte wurden zu vier Zeitpunkten erfasst: vor Beginn der Analgesie (wenn die Zervikaldilatation 2 cm erreichte), 30 Minuten nach Beginn der Analgesie, 1 Stunde nach Beginn der Analgesie und 30 Minuten nach der Geburt (entsprechend dem Zeitpunkt des Absetzens der Analgesie). Um Korrelationen innerhalb der Probanden durch wiederholte VAS-Messungen zu berücksichtigen, wurde eine zweiseitige Varianzanalyse (ANOVA) über die vier Bewertungszeitpunkte durchgeführt. VAS-Werte reichten von 0 bis 10, wobei Werte von 0–3 auf leichte Schmerzen, 4–6 auf moderate Schmerzen und 7–10 auf starke^{Schmerzen auf 23} hindeuteten.

Das primäre Ergebnis der Analgesie wurde 30 Minuten nach Beginn der Analgesie bewertet. Die Schmerzintensität wurde mit dem VAS gemessen, wobei 0 keinen Schmerz und 10 den schlimmsten vorstellbaren Schmerz bedeutete. Basierend auf einer a priori-Definition wurde ein VAS-Score >3 als schlechter analgetischer Effekt (binäre abhängige Variable kodiert als 1) eingestuft, während ein VAS-Wert ≤3 als angemessener analgetischer Effekt (kodiert als 0) eingestuft wurde. Diese Definition wurde während der gesamten Analyse konsistent angewendet, und das primäre logistische Regressionsmodell verwendete dieses binäre Ergebnis als abhängige Variable.

Die neonatalen Ergebnisse wurden mit Apgar-Scores 1 und 5 Minuten nach der Geburt bewertet. Werte von 8–10 galten als normal, Werte von 5–7 zeigten leichte Erstickung und Werte von 0–4 zeigten schwere Erstickung²⁴. Die Apgar-Bewertungen wurden gemäß dem Neonatal Resuscitation Program (7. Ausgabe) durchgeführt, das gemeinsam von der American Academy of Pediatrics und dem American College of Obstetricians and Gynecologists veröffentlicht wurde, sowie den standardisierten Bewertungsrichtlinien der Abteilung für Neonatologie des Krankenhauses. Alle Untersuchungen wurden von ausgebildeten Neugeborenenpflegekräften oder Assistenzärzten durchgeführt, die für die Studiengruppenzuweisung blind waren.

Die Häufigkeit von Nebenwirkungen nach Beginn der Analgesie wurde erfasst. Zu den Nebenwirkungen gehörten Atemdepression, Hypotonie, Harnverschluss, Schmerzen an der Stichstelle, Schwindel, Übelkeit oder Erbrechen sowie Pruritus. Atemdepression wurde definiert als eine Atemfrequenz von <10 Atemzügen/min oder SpO₂ von <90 %; Hypotonie als systolischer Blutdruck <90 mmHg oder eine Abnahme von >20 % gegenüber dem Ausgangswert; Harnverhalt bedeutet, dass innerhalb von 6 Stunden nach der Geburt nicht spontan entleert wird, was eine Katheterisierung erfordert; Schmerzen an der Stichstelle als vom Patient berichtete Schmerz an der Stichstelle mit einem Numeric Rating Scale (NRS)-Wert ≥4; Übelkeit und Erbrechen als Anwesenheit von Übelkeit oder mindestens einer Erbrechensepisode; und Pruritus als patientenberichteter Hautjuckreiz ohne eine weitere erkennbare Ursache. Unerwünschte Ereignisse wurden von Beginn der epiduralen Analgesie bis zur Entlassung im Krankenhaus überwacht und vom behandelnden klinischen Team prospektiv erfasst.

Blutprobenentnahme und Genotypisierung
Während der pränatalen Untersuchungen wurde peripheres venöses Blut (2 ml) von jeder rekrutierten primiparen Frau unter Nüchternbedingungen (minimale Fastenzeit von 8 Stunden) und zu einer standardisierten Abnahme zwischen 08:00 und 10:00 Uhr in Ethylendiaminetetraessigsäure (EDTA)-Antikoagulantenröhrchen für die anschließende Nukleinsäureextraktion entnommen. Alle Proben wurden sofort bei −80°C bis zur Analyse gelagert. Die Lagerzeit vor der DNA-Gewinnung lag zwischen 1 und 6 Monaten. Um den DNA-Abbau zu minimieren, wurden Proben vor der Lagerung aliquotiert und die Frost-Tau-Zyklen während der gesamten Studie minimiert. Gefrorene Proben wurden vor der Verarbeitung langsam auf Eis aufgetaut.

DNA wurde mit einem genomischen DNA-Reinigungskit aus Vollblut extrahiert. Vor der Genotypisierung wurden DNA-Konzentration und Reinheit mittels ultravioletter Spektrophotometrie mit dem A260/A280-Verhältnis bewertet, und die DNA-Integrität wurde mittels Agarosegel-Elektrophorese bewertet. Nur Proben, die vordefinierte Qualitätskontrollkriterien erfüllten, wurden in nachfolgende Analysen einbezogen.

Die Genotypisierung des rs928508-Polymorphismus wurde mit TaqMan-Single-Nucleotid-Polymorphismus-(SNP)-Genotypisierungs-Assays durchgeführt (Cat. Nr. 4351379). VIC-markierte Sonden wurden zur Detektion von Allel A (5′-CAGGCCTGAGAGGCATGATGTTTGG-3′) verwendet, und FAM-markierte Sonden für den Nachweis von Allel G (5′-TAGCATCTCTTCCCAACACTTGCAATT-3′). Das gesamte Volumen der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) betrug 10 μL und bestand aus 5,0 μL 2× TaqMan Genotyping Master Mix, 0,25 μL vorformuliertem TaqMan SNP Genotyping Assay (Primer-Probe-Mischung), 10–20 ng genomischer DNA-Schablone und nukleasefreiem Wasser bis zum finalen Reaktionsvolumen.

Die Amplifikation erfolgte mit einem quantitativen PCR-Instrument gemäß den Standardverfahren des TaqMan-Tests. Die thermischen Zyklusbedingungen bestanden aus einem anfänglichen Enzymaktivierungsschritt bei 95 °C für 10 Minuten, gefolgt von 40 Denaturierungszyklen bei 95 °C für 15 Sekunden und Glühen/Verlängerung bei 60 °C für 60 Sekunden. Nach der Verstärkung wurden automatisch die Aufnahme von Fluoreszenzsignalen und die Allel-Diskriminierungsanalyse mithilfe der Instrumentensoftware durchgeführt, um die Probengenotypen zu bestimmen.

Alle Proben wurden doppelt analysiert. Für dissonante Ergebnisse wurde eine dritte unabhängige Analyse durchgeführt, und das konkordante Ergebnis wurde übernommen. Die SNP-Anrufrate betrug ≥95 %, und 10 % der zufällig ausgewählten Stichproben zeigten bei Wiederholungstests eine 100 % Übereinstimmung. Positive Kontrollen, Negativkontrollen und No-Template-Kontrollen waren auf jeder Prüfplatte enthalten. Die Genotypzuweisung erfolgte blind, und alle an der Genotypisierung beteiligten Labormitarbeiter blieben während der gesamten Studie auf klinische Ergebnisdaten blind.

Statistische Analyse
Das Hardy–Weinberg-Gleichgewicht (HWE) des rs928508-Allels wurde in der Studienpopulation bewertet. Die Normalität kontinuierlicher Variablen wurde mit dem Shapiro–Wilk-Test bewertet. Normal verteilte Daten wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt, während nicht-normal verteilte Daten als Median- und Interquartilbereich (IQR) angegeben wurden.

Für Vergleiche zwischen drei Gruppen wurde bei Erfüllung der Normalitätsannahmen eine Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) oder zweiwege-Repeated-Measures-ANOVA angewendet, gefolgt von Tukeys Honestly Significant Difference (HSD)-Test für Post-hoc-Mehrfachvergleiche. Wenn die Normalitätsannahmen nicht erfüllt wurden, wurde der Kruskal–Wallis-H-Test verwendet, gefolgt von Dunns Post-hoc-Test mit Bonferroni-Korrektur. Kategoriale Variablen wurden als Häufigkeiten und Prozentsätze zusammengefasst und mit dem Chi-Quadrat-(^χ-2)-Test analysiert. Die erwarteten Zellzahlen wurden vor der Analyse bewertet, und Fishers exakter Test wurde verwendet, wenn eine erwartete Zellfrequenz <5 betrug.

Wiederholte VAS-Messungen, die zu mehreren Zeitpunkten erhoben wurden, wurden mittels zweiseitiger wiederholter Messungen (ANOVA) analysiert, um Korrelationen innerhalb des Subjekts zu berücksichtigen. Post-hoc-Vergleiche wurden mit Bonferroni-angepassten Tests durchgeführt, um mehrere Vergleiche zu kontrollieren.

Eine binäre logistische Regressionsanalyse wurde durchgeführt, um Faktoren zu identifizieren, die mit schlechten Ergebnissen der Geburtsschmerz verbunden sind. Die primäre Endpunktsvariable wurde als analgetische Wirksamkeit 30 Minuten nach Beginn der epiduralen Analgesie definiert. VAS-Werte wurden mit einem vordefinierten Schwellenwert von 3 dichotomisiert, wobei VAS >3 als schlechter analgetischer Effekt und VAS von ≤3 als angemessener schmerzlindernder Effekt klassifiziert wurde. Variablen wurden basierend auf klinischer Relevanz in das Multivariablenmodell eingegeben. Die Multikollinearität wurde anhand des Varianzinflationsfaktors (VIF) bewertet, und potenzielle Wechselwirkungen zwischen den Variablen wurden untersucht. Die VIF-Werte für alle im Multivariablenmodell enthaltenen Variablen sind in Ergänzende Tabelle 1 angegeben. Die Modellkalibrierung wurde mit dem Hosmer–Lemeshow Goodness-of-Fit-Test bewertet.

Ein zweiseitiger P-Wert <0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen. Statistische Analysen wurden mit SPSS-Software (Version 23.0) durchgeführt.

Ergebnisse

Klinische Daten

Die Analyse des MIR30C rs928508 Polymorphismus bei den 202 eingeschriebenen primiparen Frauen zeigte, dass der GA-Genotyp am häufigsten vorherrschte (49,51 %, n = 100), gefolgt von GG (26,73 %, n = 54) und AA (23,76 %, n = 48). Die entsprechenden Allelfrequenzen betrugen 51,49 % für G und 48,51 % für A. Wie in Tabelle 1 gezeigt, stimmten die Genotyp- und Allelverteilungen im Allgemein...

Diskussion

Diese Studie untersuchte den Zusammenhang zwischen dem miR-30c rs928508 Polymorphismus und den Ergebnissen der epiduralen Wehen-Analgesie in einer Kohorte von 202 gesunden chinesischen Han-Primiparen Frauen. Die Ergebnisse zeigten, dass der mütterliche Genotyp rs928508 mit Unterschieden in der Schmerzwahrnehmung während der Geburtsschmerz und mit der Dauer der ersten Geburtsphase assoziiert war. Darüber hinaus zeigte das in dieser Studie verwendete epidurale Analgesie-Regime ein allgemei...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Agarose	Sigma-Aldrich	A2929-250G	Bewertung der DNA-Integrität
Zervikaluntersuchungssimulator	Erler-Zimmer	R16160	Untersuchungstraining und Qualitätskontrolle
Digitales Achselthermometer	Terumo	ETC207S	Messung der Körpertemperatur
DNA-Gel-Färbemittel	Biotium	41020	Visualisierung von Nukleinsäuren
EDTA-Blutsammelröhrchen	Greiner Bio-One	22040161	Blutabnahme aus peripheren Venen
Elektronisches Krankenaktensystem	Shijiazhuang Sixth Hospital	N/A	Erfassung klinischer Daten
Epiduralkatheter-Kit	Teleflex (Arrow)	FlexTip Plus	Epiduralkatheterplatzierung
Epidural-Infusionsgerät / PCEA-Pumpe	Eitan Medical	17000-031-0035	Epidural-Analgesie-Verabreichung
Epiduralnadel (Tuohy)	Medline	N/A	17G × 3,5 Zoll Tuohy-Nadel für den epiduralen Zugang bei L3–L4
Gel-Imaging-System	Thermo Fisher Scientific	iBright FL1500	Visualisierung von DNA-Bändern
Genomische DNA-Reinigungskit	Thermo Fisher Scientific	K0512	DNA-Extraktion aus peripheren Vollblutproben
Horizontales Gelelektrophorese-System	Labmate	LMHES-A201	DNA-Qualitätskontrolle
Eiswanne und zerstoßenes Eis	Corning	N/A	Auftauen und Handhabung von Proben
Lidocain-Hydrochlorid-Injektion (1%)	Pfizer	0409-4713-65	Epidural-Testdosis
Mikrozentrifugenrohre (1,5 ml / 2 ml)	Corning	430909 (1,5 ml); 430915 (2 ml)	Probenaufbewahrung und -verarbeitung
Mikropipetten (variabler Volumenbereich)	Eppendorf	3125000044	PCR und Probenvorbereitung
Multiparameter-Patientenmonitor	Lepu Creative Medical	PC-3000	Überwachung von Blutdruck, Herzfrequenz und Sauerstoffsättigung
Nukleasenfreies Wasser	Promega	P1195	PCR-Reagenzzubereitung
Partogramm-Formulare oder elektronisches Partogramm-System	GrowthXP (PC PAL)	N/A	Dokumentation der Geburtsphasen
Personal Computer Workstation	Lenovo (ThinkStation)	P2	Datenverarbeitung und -analyse
PLINK-Software	Purcell Laboratory	Version 1.9	Hardy–Weinberg-Gleichgewichtsanalyse
Pulsoximeter	Microlife	OXY 500 BT	Überwachung der Sauerstoffsättigung
Quantitatives PCR-Instrument	Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems)	QuantStudio Dx (4470660)	Allelische Diskriminierung und Fluoreszenzdetektion
Kühlzentrifuge	Thermo Fisher Scientific (Heraeus)	Fresco 21 (75002425)	Probevorbereitung
Ropivacain-Hydrochlorid-Injektion	Hikma Pharmaceuticals (Naropin)	0143-9265-10	Epidural-Analgetikum
SPSS-Statistiksoftware	IBM Corp.	Version 23.0	Statistische Analyse
Sterile, aerosolresistente Pipettenspitzen	Thermo Fisher Scientific (ART)	2149P-05	Anwendungen in der Molekularbiologie
Sterile Kochsalzlösung	Baxter Healthcare Corporation	2B1301X	Technik des Verlustes des Widerstands
Sterile Spritzen (5 ml, 10 ml)	Becton, Dickinson and Company (BD)	309646; 309695	Arzneimittelzubereitung und -verabreichung
Sufentanil-Citrat-Injektion	Hospira, Inc. (Pfizer)	0409-3382-11	Opioidanalgetische Komponente
TaqMan Genotyping Master Mix (2×)	Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems)	4371353	PCR-Amplifikationsreagenz
TaqMan SNP Genotyping Assay (rs928508)	Thermo Fisher Scientific	4351379	Genotypisierung des MIR30C rs928508-Polymorphismus
Ultratieftemperatur-Gefrierschrank (-80 °C)	Thermo Fisher Scientific	FDE30086FV	Langzeitlagerung von Proben
UV-Spektralphotometer / NanoDrop-Spektralphotometer	Thermo Fisher Scientific (NanoDrop)	ND-1000	Bewertung der DNA-Konzentration und -Reinheit
Beurteilungsformular für die visuelle Analogskala (VAS)	N/A	N/A	Standardisiertes 10-cm-Visuelles Analogskalenformular zur Schmerzbewertung