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Forschungsartikel

Klinische Kohortenanalyse von miR-215-5p als diagnostischer Biomarker für Arthrose und dessen Mechanismus mittels EREG im IL-1β-induzierten Chondrozytenmodell

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DOI:

10.3791/72124

⸱

31. Juli 2026

 ,  ,  , 
1Fujian University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Orthopedics, Xianyou County General Hospital, 3Department of Rehabilitation, Xianyou County General Hospital, 4Department of Orthopedics, Putian 95th Hospital

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Diese Studie zielt darauf ab, das Serum-miR-215-5p als diagnostischen Biomarker für Arthrose zu bewerten und dessen regulatorischen Mechanismus in IL-1β-induzierten Chondrozyten zu untersuchen.

Zusammenfassung

Arthrose (OA) ist eine degenerative Gelenkerkrankung, die durch den Abbau des Gelenkknorpels und die Infiltration der Synovialentzündung gekennzeichnet ist. Diese Studie zielt darauf ab, das Serum miR-215-5p als diagnostischen Biomarker für OA zu bewerten und dessen regulatorischen Mechanismus in IL-1β-induzierten Chondrozyten zu untersuchen. 110 OA-Patienten und 105 gesunde Kontrollpersonen wurden rekrutiert. Serum-miR-215-5p und die EREG-Expression wurden durch quantitative Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion bestimmt. Der diagnostische Wert von miR-215-5p für OA wurde mittels einer Empfänger-Betriebscharakteristik berechnet. C28/I2-Chondrozyten wurden mit IL-1β stimuliert, um ein OA-Zellmodell zu erstellen. Zellviabilität, Migrationsfähigkeit und entzündliche Zytokinwerte wurden mittels Cell Counting Kit-8, Transwell-Assay und einem enzymgekoppelten Immunsorbent-Test (ELISA) bewertet. Die Verbindung zwischen miR-215-5p und EREG wurde mit einem Dual-Luciferase-Reporter-Test und einem RNA-Immunpräzipitations-(RIP)-Test validiert. Bei OA-Patienten war das Serum-miR-215-5p hochreguliert, während EREG herunterreguliert war. MiR-215-5p zeigte eine gute diagnostische Leistung für OA (Fläche unter der Kurve, AUC = 0,883). In interleukin-1β (IL-1β)-behandelten C28/I2-Zellen verbesserte die Hemmung von miR-215-5p die Lebensfähigkeit und Migration der Zellen sowie abgeschwächte IL-1β-, IL-6- und Tumornekrosefaktor-α (TNF-α)-Spiegel. EREG wurde als direktes Ziel von miR-215-5p bestätigt. Der Knockdown von EREG kehrte teilweise den fördernden Effekt der miR-215-5p-Downregulation auf die Lebensfähigkeit und Migrationsfähigkeit von IL-1β-behandelten C28/I2-Zellen um und schwächte dessen hemmende Wirkung auf entzündliche Faktoren ab. miR-215-5p trägt zur OA-Pathogenese bei, indem es EREG reguliert, und stellt einen vielversprechenden diagnostischen Biomarker sowie ein potenzielles therapeutisches Ziel für OA dar.

Einleitung

Arthrose (OA) ist eine degenerative Gelenkerkrankung, deren Pathologie durch Knorpeldegeneration mit Synovialentzündung 1,2 gekennzeichnet ist. Weltweit bleibt die Inzidenz von OA hoch, und relevante Studien haben einen Anstieg von Jahrzu Jahr 3,4 gemeldet. Es wurde festgestellt, dass Faktoren wie Fettleibigkeit, Alterung, genetische Anfälligkeit und Knochendichte mit der Entwicklung von OA5 in Verbindung stehen. Was die klinischen Symptome betrifft, so zeigen Patienten mit OA häufig Gelenkschmerzen, Schwellungen, eingeschränkte Mobilität und Steifheit, was die Lebensqualität der Patienten stark verschlechtert 6,7. Bemerkenswert ist, dass es verschiedene Phänotypen von OA gibt, die die Vielfalt der Pathogenese der Krankheit treffend widerspiegeln8. Derzeit konzentriert sich die Behandlung von OA weiterhin auf die Verbesserung der Symptome, und häufig verwendete klinische Medikamente umfassen Schmerzmittel und nichtsteroidale entzündungshemmende Medikamente, die nur Schmerzen lindern können und den Verlaufder Erkrankung nicht wirksam umkehren können. Daher ist die Erforschung neuer OA-Biomarker zu einem dringenden Bedarf für aktuelle Forschung geworden.

MikroRNAs (miRNAs) sind eine Kategorie von kurzsträngigen RNA-Molekülen, die nicht an der Proteincodierung10 beteiligt sind. Sie dienen als wichtige Genregulationsmoleküle in mehrzelligen Organismen und können die Expression zahlreicher proteinkodierender Genebeeinflussen. Zahlreiche Studien haben bestätigt, dass miRNAs einen bedeutenden Einfluss auf die Entwicklung vonOA-12 haben. Eine frühere Studie zeigte, dass miR-215-5p in Präeklampsie überexprimiert wurde und die Migration sowie invasive Kapazität der Trophoblasten durch die Regulierung der CDC6-Expression13 reduzierte. Eine Überexpression von miR-215-5p hat eine entzündliche Schädigung in H9c2-Zellen bei Sepsis14 abgeschwächt. miR-215-5p könnte eine schützende Wirkung auf die Pathogenese der Osteoporose ausüben, indem es die Expression von XIAP hemmt und die Differenzierung von hBMSCs15 fördert. Bemerkenswert ist, dass miR-215-5p hochreguliert wurde, als miRNA-Expressionsprofile von Synovialgeweben von OA-Patienten analysiert wurden16. Die Expression von miR-215-5p im Serum und ihr Potenzial als diagnostischer Biomarker für OA wurden jedoch noch nicht erforscht. Die Rolle von miR-215-5p in OA-Chondrozyten, insbesondere seine Auswirkungen auf die Zelllebensfähigkeit, Migration und die Entzündungsreaktion, bleibt unklar. Keine Studien haben berichtet, ob miR-215-5p seine regulatorische Funktion bei OA über spezifische nachgelagerte Ziele ausübt. Das Schließen dieser Lücken wird neue Einblicke in OA-molekulare Mechanismen liefern und neue therapeutische Kandidaten identifizieren.

EREG gehört zur Familie der epidermalen Wachstumsfaktoren und es wurde nachgewiesen, dass sie an Gewebereparatur und Entzündungsreaktionen beteiligt ist17,18. Die Studie von Chen et al. berichtete, dass die EREG-Expression im Knorpel- und Synovialgewebe bei OA-Patienten im Vergleich zur Kontrollgruppe19 signifikant reduziert war. Ob EREG jedoch als nachgelagertes Ziel von miR-215-5p in OA-Chondrozyten dient und welche Rolle diese regulatorische Achse bei der Pathogenese von OA spielt, bleibt derzeit unklar.

Auf Grundlage des obigen Hintergrunds vermuten wir, dass die Expression von miR-215-5p im Serum bei OA-Patienten hochreguliert ist und die entzündliche Chondrozytendysfunktion durch direkte Angriffe auf EREG antreibt, während die durch interleukin-1β (IL-1β)-induzierte Chondrozyten-Schädigung durch miR-215-5p gelindert wird. Diese Studie übernahm einheitliche messbare Endpunkte und Bewertungskriterien für klinische und zelluläre Validierung: Klinisch wurden 110 OA-Patienten und 105 gesunde Kontrollpersonen aufgenommen; Serum-miR-215-5p und EREG-Werte wurden mittels qRT-PCR quantifiziert, und ROC-Kurven wurden zur Bewertung der diagnostischen Leistung angewendet (gültig, wenn AUC 0,7 ≥, P < 0,05). Korrelationen wurden mittels Chi-Quadrat-Tests zwischen miR-215-5p und OA-klinischen Merkmalen analysiert, und multivariate logistische Regressionen identifizierten unabhängige OA-Risikofaktoren (angepasst P < 0,05). In vitro wurden C28/I2-Chondrozyten mit 10 ng/mL IL-1β für 24 Stunden behandelt, um ein OA-Modell zu etablieren, gefolgt von Transfektion mit miR-215-5p-Inhibitor/Mimic und si-EREG. CCK-8-, Transwell- und ELISA-Tests wurden verwendet, um die Lebensfähigkeit der Zellen, Migration und die Entzündungszytokinwerte zu bewerten. Kriterien für Rettungsexperimente: miR-215-5p-Inhibitor stellte die Lebensfähigkeit und Migration der Chondrozyten wieder her (P < 0,05), und das Abschalten von EREG beseitigte diesen Schutzeffekt teilweise (P < 0,05). Bioinformatische TargetScan-Vorhersage, Dual-Luciferase-Reporter-Assays und RIP-Assays bestätigten ihre direkte Bindung weiter: Eine signifikante Reduktion der WT-EREG-Luciferase-Aktivität nach miR-215-5p-Mimiktransfektion und eine deutlich erhöhte miR-215-5p/EREG-Anreicherung in Ago2-Ausfällungen im Gegensatz zur IgG-Kontrolle (beide P < 0,05) wurden als Kriterien für die Zielinteraktion definiert. Gemeinsam klärte diese Arbeit systematisch den diagnostischen Wert und den molekularen Mechanismus von miR-215-5p bei OA und identifizierte damit neuartige therapeutische Kandidaten.

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Protokoll

Die Studie wurde im Einklang mit den Grundsätzen der Helsinkier Erklärung durchgeführt. Das Ethikkomitee des Xianyou County General Hospital genehmigte die Studie vor Beginn (Genehmigung Nr. 202514 am 18. Juni 2025).

Eine Zusammenfassung des Protokolls findet sich in ergänzender Abbildung 1.

Exemplar

Insgesamt wurden 110 OA-Patienten in diesem Krankenhaus behandelt und 105 gesunde Kontrollpersonen für diese Forschung rekrutiert. Die Einschlusskriterien für die OA-Gruppe waren wie folgt: Diagnose der OA bestätigt gemäß den vom American College of Rheumatology festgelegten Klassifikationskriterien20. Alle Patienten unterzogen sich einer Röntgenbildgebung und einer Kellgren-Lawrence-(K-L)-Bildgebendbewertung; keine antibiotikabehandlung innerhalb von 3 Monaten vor der Aufnahme; vollständige klinische Daten; und eine schriftliche informierte Zustimmung wurde von allen Patienten eingeholt. Die Ausschlusskriterien für die OA-Gruppe umfassten Patienten, die eine relevante Behandlung erhalten hatten oder sich im Endstadium der Krankheit befanden; diejenigen, die an anderen Arten von Gelenkerkrankungen wie Gicht, rheumatoider Arthritis usw. leiden; solche mit einer Kombination aus Tumoren, schwerer Leber- und Niereninsuffizienz, Autoimmunerkrankungen, Infektionskrankheiten, neurologischen Erkrankungen oder schweren kardiorespiratorischen Erkrankungen; und diejenigen mit körperlichen Behinderungen, die sie daran hinderten, für sich selbst zu sorgen. Zum Zeitpunkt der Einschreibung wurden die Ausgangsdaten aller Teilnehmer erfasst, darunter Alter, Geschlecht, Body-Mass-Index (BMI), Rauchen, Alkoholkonsum, Familiengeschichte, Krankheitsverlauf, K-L-Note, Visual Analog Scale (VAS)-Score, Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index (WOMAC)-Score sowie Lesionsstelle. Die relevanten Daten wurden in Tabelle 1 analysiert und zusammengefasst. Alle Probanden erhielten 8 ml venöses Blut im Nüchternzustand abgenommen, die 3 Stunden bei 4 °C stehen ließen, dann bei 3000 × g für 15 Minuten bei 4 °C zentrifugierte, um das Serum zu isolieren. Das Serum wurde vorsichtig entnommen und bis zu weiteren Tests bei −80 °C gehalten.

Menschliches Blut/Serum (Kategorie B infektiöses biologisches Material) enthält menschliche Körperflüssigkeiten, die unbekannte infektiöse Krankheitserreger tragen können und durch Spritzen, Nadelstiche oder Kontakt mit beschädigter Haut perkutane oder schleimhäutige Infektionen verursachen können. Muss Einweg-Nitrilhandschuhe, Einweg-medizinische Isolationskittel, Schutzbrille oder Gesichtsmasken sowie chirurgische Masken tragen. Nach einer Hochdrucksterilisation wird es zentral von zertifizierten medizinischen Abfallentsorgungseinrichtungen gesammelt und verbrannt.

Zellkultur und OA-Zellmodellkonstruktion

Humane C28/I2-Chondrozyten wurden in einem DMEM/F12-Medium mit 10 % fetalem Rinderserum (FBS) bei 37 °C in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO₂ aufrechterhalten. Alle Experimente wurden mit Zellen an den Passagen 3–6 durchgeführt, um einen stabilen zellulären Phänotyp aufrechtzuerhalten. Nachfolgende experimentelle Manipulationen wurden durchgeführt, sobald die Zellkonfluenz 80 % erreichte. Die Zellen der Versuchsgruppe wurden mit 10 ng/mL IL-1β bei 37 °C für 24 Stunden behandelt, um ein in vitro OA-Modell21 herzustellen, während die Zellen der Kontrollgruppe unbehandelt blieben.

Zelltransfektion

Negativ-Kontroll-Inhibitor (Inhibitor-NC), miR-215-5p-Inhibitor, Mimic-NC, miR-215-5p-Mimic, Negative Control Small Interfering RNA (si-NC) und si-EREG wurden kommerziell synthetisiert. Transfektionstests wurden in 6-Well-Platten mit einem Transfektionsreagenz während der logarithmischen Wachstumsphase der Zellen durchgeführt. Konkret wurden 50 nM der Inhibitor-/Mimik- oder Negativkontrolle in 125 μL Opti-MEM-Medium pro Bohrloch verdünnt, mit 5 μL Transfektionsreagenz, gelöst in 125 μL Opti-MEM, kombiniert und 15 Minuten bei Raumtemperatur aufbewahrt, um einen Komplex zu bilden. Die Mischung wurde dann in die Zellen gegeben. Die Zellen wurden 48 Stunden nach der Transfektion für weitere Experimente entnommen.

Quantitative Reverse-Transkriptase-Kettenreaktion (qRT-PCR-Assay)

Die Gesamt-RNA wurde mit TRIzol-Reagenz nach den Protokollen des Herstellers isoliert, und die Proben enthielten Serum und Zellen. Für die Reverse-Transkription wurde in jeder Reaktion 1 μg Gesamt-RNA verwendet, gemäß dem Herstellerprotokoll der PrimeScript Reverse Transcriptase. Nach Abschluss der Reverse-Transkription wurden Verstärkungsreaktionen auf einem Echtzeit-PCR-Instrument durchgeführt, wobei SYBR-Green Real Master-Mix als Reaktionsreagenz verwendet wurde. Die thermischen Zyklusparameter waren wie folgt: eine erste Denaturierung bei 95 °C für 30 Sekunden, dann 40 Zyklen von 95 °C für 5 Sekunden und 60 °C für 30 Sekunden. qRT-PCR wurde für alle Proben in technischem Dreifach durchgeführt. Für den quantitativen Nachweis von miRNA- und mRNA-Spiegeln wurden die Zyklus-Schwellenwerte (Ct) unter Verwendung von U6 und β-Aktin als endogene Referenzen normalisiert, und die endgültige Datenanalyse wurde mit der 2-ΔΔCT-Methode quantifiziert. Die für qRT-PCR verwendeten Primer-Sequenzen sind in ergänzender Tabelle 1 dargestellt.

Trizol-Reagenz ist eine gefährliche Chemikalie. Sie ist hochgradig korrosiv; Direkter Kontakt kann schwere Verbrennungen an Haut und Augen verursachen, und seine flüchtigen Dämpfe können die Atemwege reizen. Es ist notwendig, chemikalienresistente Nitrilhandschuhe, Laborkittel und chemie-spritzsichere Schutzbrillen zu tragen; Er kann nur in einer Abzugshaube verwendet werden. Die Abfallflüssigkeit wird in versiegelten Kunststoffbehältern mit Etiketten aufbewahrt und gemäß den örtlichen Vorschriften ordnungsgemäß entsorgt.

Zellviabilitätstest

Die Zelllebensfähigkeit wurde mit dem Cell Counting Kit-8 (CCK-8) bewertet. Die Zellen wurden in 96-Well-Platten mit 5 × 103-Zellen pro Bohrloch plattiert. Nach 0, 24, 48 und 72 Stunden Inkubation wurden 10 μL CCK-8-Lösung zu jedem Bohrloch hinzugefügt. Nach der Inkubation der Zellen bei 37 °C für 1 Stunde wurde die optische Dichte jedes Bohrlochs mit 450 nm gemessen.

Transwell-Assay

Die Zellmigrationskapazität wurde mit einer Transwell-Kammer mit 8 μm porengroßen Membranen bewertet. Kurz gesagt wurden 5 × 10 4-Zellen/Bohrloch in die oberen Einlagen mit serumfreiem Medium eingeführt, während die unteren Einsätze anschließend mit vollständigem Medium ergänzt wurden. Die Kammern wurden bei 37 °C für 24 Stunden inkubiert. Zellen, die nicht wanderten, sondern auf der oberen Membranoberfläche verblieben, wurden vorsichtig mit einem Wattestäbchen abgewischt. Zellen, die auf die untere Oberfläche wanderten, wurden 10 Minuten mit 4 % Formaldehyd fixiert und 20 Minuten mit 0,1 % Kristallviolett gefärbt. Schließlich wurden die Zellen, die die Membran durchdrangen, mit einem optischen Mikroskop beobachtet und gezählt (×200). Für jedes Modell wurden fünf nicht überlappende Sichtfelder zufällig zum Zählen ausgewählt. Die durchschnittliche Anzahl der wandernden Zellen in jeder Versuchsgruppe wurde berechnet und aufgezeichnet.

Formaldehyd (Karzinogen, Haut-/Atemreizstoff, flüchtige, toxische organische Verbindung). Sein flüchtiges Gas kann schleimhautreizungen, Dermatitis und allergische Reaktionen verursachen. Alle Operationen müssen in einer gut belüfteten Abzughaube durchgeführt werden. Tragen Sie chemikalienresistente Handschuhe, einen Laborkittel, eine Anti-Nebel-Brille und ein Aktivkohle-Atemschutzgerät. Abfall, der PFA enthält, sollte gemäß den Vorschriften für gefährliche Abfälle behandelt werden. Abfall sollte gemäß den örtlichen Vorschriften entsorgt werden.

Kristallviolett ist ein biologischer Fleck. Es ist giftig, wenn es über die Haut aufgenommen wird; Es hat langfristig schädliche Auswirkungen auf die Umwelt. Vermeiden Sie direkten Hautkontakt und zufälligen Ausfluss. Tragen Sie Einweg-Nitrilhandschuhe und einen Laborkittel.

Enzymgekoppelter Immunsorbent-Test (ELISA)

IL-1β, IL-6 und die Tumornekrose-Faktor-α (TNF-α)-Spiegel wurden mit humanen ELISA-Kits gemäß den im Produkthandbuch festgelegten Betriebsrichtlinien gemessen.

Dualer Luciferase-Reporter-Gen-Test

Die TargetScan-Datenbank wurde genutzt, um Kandidaten-Zielgene von miR-215-5p vorherzusagen. Die Wechselwirkung von miR-215-5p mit dem Zielgen EREG wurde über das duale Luciferase-Testkit analysiert: Die Wildtyp- und Mutantensequenzen von EREG wurden amplifiziert und in den pGL3-Vektor geklont. Anschließend wurden konstruierte rekombinante Plasmide mit Mimic-NC bzw. miR-215-5p-Mimik in C28/I2-Zellen ko-transfiziert. Die Luciferase-Aktivität wurde nach 48 Stunden Inkubation nachgewiesen.

RNA-Immunpräzipitation (RIP)

Die Wechselwirkung zwischen miR-215-5p und EREG wurde mittels EZ-Magna RIP Kit validiert. Die Schritte waren wie folgt: Die Zellen wurden zunächst mit RIP-Lysat lysiert. Anschließend wurden Zelllysate zusammen mit magnetischen Perlen inkubiert, die mit Anti-Argonaute 2 (Ago2) oder Anti-Immunglobulin G (IgG) Antikörpern (menschlich) im RIP-Puffer konjugiert waren. Anschließend wurde die RNA mit Proteinase K behandelt und gereinigt. Schließlich wurden miR-215-5p- und EREG-Werte mittels qRT-PCR gemessen.

Statistiken

Datenanalyse und Bildplotting wurden mit SPSS und GraphPad Prism durchgeführt. Der Shapiro-Wilk-Test wurde angewandt, um die Normalität der Verteilung vor der statistischen Analyse zu bewerten. Messungen nach einer Normalverteilung wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) angegeben. Der t-Test des Studenten wurde für Zweigruppenvergleiche verwendet, während die Varianzanalyse (ANOVA) gefolgt vom Post-hoc-Test von Tukey für Mehrgruppenanalysen verwendet wurde. Nicht-normalverteilte kontinuierliche Variablen wurden als Medianen und Interquartilbereiche (IQR) angegeben und mit dem Mann-Whitney-U-Test verglichen. Kategoriale Variablen wurden als Prozentsätze (n (%)) angegeben, und Intergruppenunterschiede wurden mittels Chi-Quadrat-Test untersucht. Die diagnostische Wirksamkeit von miR-215-5p bei OA wurde anhand der Receiver Operating Characteristic (ROC)-Kurven bewertet. Der Zusammenhang zwischen miR-215-5p und klinischen Merkmalen von OA-Patienten wurde mittels des Chi-Quadrat-Tests bewertet. Risikofaktoren für die Entwicklung von OA wurden mittels multivariabler logistischer Regression untersucht. Der Zusammenhang zwischen miR-215-5p und EREG wurde mittels Spearman-Korrelationsanalyse bewertet. P < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.

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Ergebnisse

Basismerkmale

In der Kontrollgruppe wurden 105 Patienten eingeschlossen, darunter 58 (55,24 %) Männer und 47 (44,76 %) Frauen, mit einem Durchschnittsalter von 52,81 ± 12,57 Jahren und einem BMI von 24,25 ± 2,71 kg/m². Die OA-Gruppe umfasste 110 Patienten, 69 (62,73 %) Männer und 41 (37,27 %) Frauen, mit einem Durchschnittsalter von 54,42 ± 12,33 Jahren und einem BMI von 24,88 ± 3,51 kg/m². Zusätzliche Basisinformationen ...

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Diskussion

OA, eine weit verbreitete Gelenkerkrankung in klinischen Einrichtungen, ist nach Diabetes und Demenz zur drittwichtigsten Ursache organischer Behinderunggeworden. Die Pathogenese von OA ist jedoch komplex, und ihre Diagnose erfordert oft eine Kombination aus klinischen Symptomen, bildgebenden Untersuchungen und anderen Methoden, wobei der lange Diagnosezyklus die rechtzeitige Behandlung der Patientenerheblich ve...

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Offenlegungen

Die Autoren haben an keinem in diesem Artikel behandelten Material finanzielle oder eigentumsrechtliche Interessen.

Danksagungen

Die Autoren erhielten für dieses Werk keine konkrete Finanzierung.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
96-well platesCorning/USA3903
Anti-Ago2Abcam/USAAB_867543
RRID: ab186733
Anti-IgGAbcam/USAAB_10673832
RRID: ab133470
C28/I2 chondrocytesMerck Millipore/USASCC043
CCK-8 KitBeyotime/ChinaC0038Zelllebensfähigkeits-Assay-Kit
Crystal violetSigma-Aldrich/USAV5265
DMEM/F12 mediumGibco/USA11320033
Dual-Luciferase Reporter Assay KitPromega/USAE1910
EZ-Magna RIP KitMerck Millipore/USA17701
FBSThermo Fisher Scientific/USA26010074
FormaldehydeSigma-Aldrich/USAF8775
Graphpad Prism 9.0GraphPad Software Inc. /USAhttps://www.graphpad.com/features
IL-1βSigma-Aldrich/USASRP3083
IL-1β  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH002-1-2
IL-6  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH007-1-2
IncubatorThermo Fisher Scientific/USABB150-2TCS-L
Inhibitor-NCGenePharma (kundenspezifisch) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Light Cycler 480Roche/Schweizhttps://lifescience.roche.com/global/de/article-listing/article/lightcycler-480-system-technology.htmlReal-Time PCR-Instrument
Lipofectamine 3000Invitrogen/USAL3000015Das für die Zelltransfektion verwendete Transfektionsreagenz
Microplate readerThermo Fisher Scientific/USAVA000010C
MikroskopieNikon/Japanhttps://www.nikon.com.cn/de_DE/
Mimic-NCGenePharma (kundenspezifisch) /Chinahttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p inhibitorGenePharma (kundenspezifisch) /Chinahttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p mimicGenePharma (kundenspezifisch) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Opti-MEMGibco/USA31985070
pGL3 vectorPromega/USAE1751
PrimeScript Reverse TranscriptaseTakara/Japan2680Reverse Transkriptase-Kit
Si-EREGGenePharma (kundenspezifisch) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Si-NCGenePharma (kundenspezifisch) /Chinahttps://www.genepharma.com/
SPSS 24.0IBM Corp/USAhttps://spssau.com/index.html
SYBR Green SupermixBio-Rad/USA1725121
TNF-α  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH052-1-2
Transwell chamberCorning/USA3422
TRIzol reagentThermo Fisher Scientific/USA15596026RNA-Isolierungsreagenz

Referenzen

  1. Jiang Y. Osteoarthritis year in review 2021: biology. Osteoarthritis Cartilage. 2022;30(2):207–215.
  2. Choi WS, et al. The CH25H-CYP7B1-RORalpha axis of cholesterol metabolism regulates osteoarthritis. Nature. 2019;566(7743):254–258.
  3. Lankhorst NE, et al. Incidence, prevalence, natural course, and prognosis of patellofemoral osteoarthritis: the Cohort Hip and Cohort Knee study. Osteoarthritis Cartilage. 2017;25(5):647–653.
  4. Nelson AE. Osteoarthritis year in review 2017: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2018;26(3):319–325.
  5. Herrero-Beaumont G, et al. Systemic osteoarthritis: the difficulty of categorically naming a continuous condition. Aging Clin Exp Res. 2024;36(1):45.
  6. Abramoff B, Caldera FE. Osteoarthritis: Pathology, Diagnosis, and Treatment Options. Med Clin North Am. 2020;104(2):293–311.
  7. Han D, et al. The emerging role of fibroblast-like synoviocytes-mediated synovitis in osteoarthritis: An update. J Cell Mol Med. 2020;24(17):9518–9532.
  8. Maroun G, Fissoun C, Villaverde M, Brondello JM, Pers YM. Senescence-regulatory factors as novel circulating biomarkers and therapeutic targets in regenerative medicine for osteoarthritis. Joint Bone Spine. 2024;91(2):105640.
  9. Zhang Y, Zhao P, Li S, Mu X, Wang H. CircSCAPER knockdown attenuates IL-1beta-induced chondrocyte injury by miR-127-5p/TLR4 axis in osteoarthritis. Autoimmunity. 2022;55(8):577–586.
  10. Song AF, Kang L, Wang YF, Wang M. MiR-34a-5p inhibits fibroblast‑like synoviocytes proliferation via XBP1. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(22):11675–11682.
  11. Lu X, Lin J, Jin J, Qian W, Weng X. Hsa-miR-15a exerts protective effects against osteoarthritis by targeting aggrecanase-2 (ADAMTS5) in human chondrocytes. Int J Mol Med. 2016;37(2):509–16.
  12. Yin CM, et al. Dysregulation of both miR-140-3p and miR-140-5p in synovial fluid correlates with osteoarthritis severity. Bone Joint Res. 2017;6(11):612–618.
  13. Yang X, Meng T. miR-215-5p decreases migration and invasion of trophoblast cells through regulating CDC6 in preeclampsia. Cell Biochem Funct. 2020;38(4):472–479.
  14. Yao Y, et al. MiR-215-5p inhibits the inflammation injury in septic H9c2 by regulating ILF3 and LRRFIP1. Int Immunopharmacol. 2020;78:106000.
  15. Yin Z, et al. miR-215-5p regulates osteoporosis development and osteogenic differentiation by targeting XIAP. BMC Musculoskelet Disord. 2022;23(1):789.
  16. Zhou Y, et al. Identification of differentially expressed miRNAs and mRNAs in synovial of osteoarthritis via RNA-sequencing. BMC Med Genet. 2020;21(1):46.
  17. Zhao YC, et al. Epiregulin enhances periodontal tissue regeneration by promoting bone marrow mesenchymal stem cell functions under inflammatory niches. World J Stem Cells. 2026;18(2):114032.
  18. Li PL, et al. Multiomic identification of senescent stem cell populations critical for osteoarthritis progression and therapy in subchondral bones. Sci Adv. 2025;11(29):eadu2294.
  19. Chen YJ, et al. Systematic Analysis of Transcriptomic Profile of Chondrocytes in Osteoarthritic Knee Using Next-Generation Sequencing and Bioinformatics. J Clin Med. 2018;7(12):535.
  20. Altman R, et al. Development of criteria for the classification and reporting of osteoarthritis. Classification of osteoarthritis of the knee. Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee of the American Rheumatism Association. Arthritis Rheum. 1986;29(8):1039–49.
  21. Gan K, et al. Positive feedback loop of lncRNA FAM201A/miR‑146a‑5p/POU2F1 regulates IL‑1beta‑induced chondrocyte injury in vitro. Mol Med Rep. 2022;25(1):20.
  22. GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 2017;390(10100):1211–1259.
  23. Mandl LA. Osteoarthritis year in review 2018: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(3):359–364.
  24. Mobasheri A, et al. The role of metabolism in the pathogenesis of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2017;13(5):302–311.
  25. Xiong X, et al. MicroRNA miR-215-5p Regulates Doxorubicin-induced Cardiomyocyte Injury by Targeting ZEB2. J Cardiovasc Pharmacol. 2021;78(4):622-629.
  26. Cai C, Zhang R, Xu X, Li G, Gou H. Diagnostic values of NLR and miR-141 in patients with osteoarthritis and their association with severity of knee osteoarthritis. Exp Ther Med. 2021;21(1):74.
  27. Lai Z, Cao Y. Plasma miR-200c-3p, miR-100-5p, and miR-1826 serve as potential diagnostic biomarkers for knee osteoarthritis: Randomized controlled trials. Medicine (Baltimore). 2019;98(51):e18110.
  28. Qi K, et al. Long Non-Coding RNA (LncRNA) CAIF is Downregulated in Osteoarthritis and Inhibits LPS-Induced Interleukin 6 (IL-6) Upregulation by Downregulation of MiR-1246. Med Sci Monit. 2019;25:8019–8024.
  29. Platzer H, et al. The Impact of 45S5-Bioactive Glass on Synovial Cells in Knee Osteoarthritis-An In Vitro Study. Materials (Basel). 2023;16(24):7594.
  30. Ren T, et al. MiR-140-3p Ameliorates the Progression of Osteoarthritis via Targeting CXCR4. Biol Pharm Bull. 2020;43(5):810–816.
  31. Ying P, et al. Analysis of the regulatory role of miR-34a-5p/PLCD3 in the progression of osteoarthritis. Funct Integr Genomics. 2023;23(2):131.
  32. Fields JK, Gunther S, Sundberg EJ. Structural Basis of IL-1 Family Cytokine Signaling. Front Immunol. 2019;10:1412.
  33. Pratama DGK, Suyasa IK, Astawa P, Lestari AAW. High IL-6 level as a marker of lumbar osteoarthritis in patients older than 55 years with low back pain. Orthop Res Rev. 2019;11:17–21.
  34. Molnar V, et al. Cytokines and Chemokines Involved in Osteoarthritis Pathogenesis. Int J Mol Sci. 2021;22(17):9208.
  35. Ji W, Sun B, Su C. Targeting MicroRNAs in Cancer Gene Therapy. Genes (Basel). 2017;8(1):21.
  36. Chen X, et al. Cell membrane-camouflaged nanomedicines for enhanced thrombolysis and blood-brain barrier penetration in ischemic stroke therapy. Int J Pharm X. 2025;10:100404.
  37. Gupta T, et al. Enhancing Bioavailability and Stability of Curcumin Using Solid Lipid Nanoparticles (CLEN): A Covenant for Its Effectiveness. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:879.
  38. Liang Q, Cheng Z, Qin L. Advanced nanoparticles in osteoarthritis treatment. Biomater Transl. 2024;5(2):95–113.
  39. Shi Z, et al. Micro-nano integrated platforms for osteoarthritis therapy: From spatial manipulation to cellular reprogramming. Mater Today Bio. 2026;37:102963.

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