Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Forschungsartikel
Dieses Protokoll zielt darauf ab, die anti-tumorale Wirksamkeit von Ruscogenin in nasopharyngealen Karzinomzellen zu bewerten. Es beschreibt umfassende Methoden – einschließlich Assays zur Zellviabilität, Migration, Apoptose und Ferroptose –, um systematisch aufzuklären, wie diese Verbindung eine doppelte Zelltodinduktion durch gezielte Hemmung und Downregulation von KDM1A auslöst.
Das nasopharyngeale Karzinom (NPC) ist eine hochaggressive maligne Erkrankung. Die natürliche Verbindung Ruscogenin (Rus) zeigt anti-karzinomartige Wirkung. Diese Studie klärt den spezifischen Wirkmechanismus bei nasopharyngealem Karzinom (NPC) auf, indem die Effekte auf NPC-Zellen und den zugrundeliegenden molekularen Signalweg untersucht werden. Die humane nasopharyngeale Karzinom-(NPC-)Zelllinie C666-1 wurde mit verschiedenen Konzentrationen von Rus behandelt. Eine Reihe von in vitro-Assays wurde durchgeführt, um Zellviabilität, Proliferation, Migration, Invasion, Apoptose und Ferroptose zu bewerten. Die Rolle der lysinspezifischen Demethylase 1A (KDM1A) wurde mittels Western Blot und molekularem Docking untersucht, und ihre vermittelnde Funktion wurde durch Überexpression-Rettungsversuche bestätigt. Ruscogenin verringerte dosisabhängig die proliferativen, klonogenen, migratorischen und invasiven Kapazitäten der C666-1-Zellen. Mechanistisch induzierte die Rus-Behandlung sowohl Apoptose, belegt durch die Aktivierung der Exekutionscaspase-3 und eine Verschiebung hin zu pro-apoptotischem Signalweg über das Bax/Bcl-2-Gleichgewicht, als auch Ferroptose, gekennzeichnet durch erhöhte Lipidperoxidation und intrazelluläres Eisen. Diese anti-tumoralen Effekte korrelierten stark mit der Downregulation von KDM1A. Entscheidend war, dass die erzwungene Überexpression von KDM1A die Rus-induzierte Apoptose und Ferroptose signifikant abschwächte und die Unterdrückung maligner Phänotypen umkehrte, wodurch die zentrale vermittelnde Rolle von KDM1A bestätigt wurde. Ruscogenin hemmt die maligne Progression des nasopharyngealen Karzinoms durch Downregulation von KDM1A und fördert dadurch Apoptose und Ferroptose. Diese Ergebnisse identifizieren die Rus-KDM1A-Achse als vielversprechendes therapeutisches Ziel für die Behandlung von NPC.
Das nasopharyngeale Karzinom (NPC) ist eine Krebserkrankung, die durch das Zusammenwirken genetischer und umweltbedingter Faktoren verursacht wird1. Obwohl die Strahlentherapie bei der Behandlung bemerkenswerte Fortschritte erzielt hat, bleibt das Gesamtüberleben von NPC-Patienten unbefriedigend. Dies liegt wahrscheinlich daran, dass sich NPC-Zellen schnell vermehren können und eine hohe Neigung zur Metastasierung in regionale Lymphknoten und ferne Organe aufweisen2. Daher ist es entscheidend, die molekularen Mechanismen zu erforschen, die die Progression des NPC fördern. Kürzlich wurde Ferroptose, eine neue Form des Zelltods, die auf eisenabhängige Weise durch Fe2⁺ und Lipidperoxide reguliert wird, als entscheidend für die Entstehung und Entwicklung des NPC identifiziert3. Vorliegende Befunde zeigen, dass Ferroptose eine wichtige Rolle beim NPC spielt und dass ihre Induktion die Strahlentherapie bei Krebserkrankungen verbessern kann4,5.
Aufgrund der geringen Toxizität und weniger Nebenwirkungen werden chinesische Kräuterformeln seit Tausenden von Jahren zur Behandlung von Krebserkrankungen eingesetzt6,7. Als eine Art mehrkomponentige, mehrzielgerichtete Arzneimittel mit synergistischer Wirkung werden Rezepturen der traditionellen chinesischen Medizin (TCM) erfolgreich als komplementäre Therapie zur Vorbeugung und Behandlung von Krebs, einschließlich NPC8,9,10, eingesetzt. Radix ophiopogonis (RO), die Wurzel der ausdauernden krautigen Pflanze Ophiopogon japonicus, wurde als adjuvante Therapie zur wirksamen Linderung von NPC beschrieben11,12. Ruscogenin (Rus), die Hauptkomponente in RO, besitzt nachweislich starke anti-karzinogene Effekte13. In Mausmodellen des kolorektalen Karzinoms kann Rus Verletzungen der Tight Junctions verbessern und die Tumormigration hemmen14. Wichtig ist, dass Rus auch die Vitalität von Pankreaskrebszellen durch Induktion von Ferroptose verringern kann. Die Wirkung von Rus auf NPC ist jedoch bisher noch unklar.
Die Epigenetik ist das zentrale Forschungsgebiet zur Pathogenese von Krebserkrankungen und bietet zahlreiche wirksame Behandlungsansätze15. Als eine gut erforschte epigenetische Modifikation ist die Histonmethylierung an der Krebsentwicklung beteiligt und stellt zudem ein wichtiges Ziel in der Arzneimittelentwicklung dar16. Die dynamische Regulation der Histonmethylierung erfolgt durch Methyltransferasen und Demethylasen17. KDM1A ist eine Histon-Lysin-Demethylase, die aufgrund ihrer Rolle in der epigenetischen Modulation als entscheidend an der Karzinogenese beteiligt gilt18. Außerdem wurde festgestellt, dass KDM1A ein Onkoprotein ist, das in mehreren Krebsarten wie Lungen- und Pankreaskarzinom stark überexprimiert wird19. Guo et al. berichteten, dass eine Erhöhung von KDM1A die Expression von Phosphatase und Tensin-Homolog (PTEN) unterdrücken und die Proliferation und Migration von NPC-Zellen fördern kann, während die Apoptose gehemmt wird20. Gleichzeitig wurde auch beobachtet, dass eine Hochregulierung von KDM1A die Ferroptose bei Lungenkrebs hemmen kann21. Die Analyse mittels der Super-PRED-Datenbank zeigte, dass KDM1A ein potenzielles Zielmolekül von Rus darstellt.
Trotz des anerkannten antitumoralen Potenzials von Rus bei anderen Krebserkrankungen bleibt seine spezifische Rolle und molekulare Wirkungsweise beim nasopharyngealen Karzinom vollständig ungeklärt, was eine bedeutende Forschungslücke darstellt. Zudem wurde zwar in früheren Berichten separat ein Zusammenhang zwischen KDM1A und Tumorzellproliferation sowie Ferroptose-Resistenz beschrieben, jedoch wurde bisher nicht untersucht, ob die gezielte Beeinflussung von KDM1A in NPC gleichzeitig mehrere Zelltodwege auslösen kann. Daher liefert diese Studie eine fundierte Begründung für die Hypothese, dass Rus die maligne Progression von NPC-Zellen durch direkte Herabregulierung von KDM1A unterdrücken könnte.
Diese Studie hatte zum Ziel, diese Lücke zu schließen, indem systematisch der Einfluss von Rus auf die Proliferation, Migration und Invasion von NPC-Zellen evaluiert wurde. Die zentrale Neuheit dieser Forschung liegt in der Aufdeckung einer Doppelwirkmechanismus-Strategie. Der Fokus lag auf der Fähigkeit von Rus, gleichzeitig klassische Apoptose und eisenabhängige Ferroptose auszulösen. Durch die Validierung der neuartigen Rus-KDM1A-Signalachse trägt diese Studie erheblich zum aktuellen Wissensstand bei, indem sie zeigt, wie ein einziger natürlicher Wirkstoff Tumorresistenz durch gleichzeitige Blockade mehrerer Signalwege überwinden kann, was eine vielversprechende präklinische Grundlage für eine gezielte NPC-Therapie bietet.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Zellkultur, Behandlung und Transfektion
Die humane nasopharyngeale Karzinom-(NPC-)Zelllinie C666-1 (RRID: CVCL_M597) und die nicht maligne humane nasopharyngeale epitheliale Zelllinie NP69 (RRID: CVCL_F755) wurden von einem kommerziellen Anbieter bezogen. Beide Zelllinien wurden mittels Short-Tandem-Repeat-(STR-)Profilierung authentifiziert und vor der Verwendung auf Mykoplasmenkontamination getestet und als frei davon bestätigt. Zur routinemäßigen Kultur wurden C666-1-Zellen in RPMI-1640-Medium, ergänzt mit 10 % fetalem Kälberserum (FBS) und 1 % Penicillin-Streptomycin, kultiviert. NP69-Zellen wurden in keratinozytenfreiem Medium, ergänzt mit 10 % FBS, 10 ng/mL rekombinantem epidermalem Wachstumsfaktor und 1 % Penicillin-Streptomycin, kultiviert. Ruscogenin (Rus; Reinheit ≥ 98 %) wurde von einem kommerziellen Anbieter bezogen. Beide Zelllinien wurden in einem befeuchteten Inkubator bei 37 °C unter 5 % CO₂ gehalten. Für Behandlungen wurden die Zellen 24 h lang Ruscogenin (Rus) in variierenden Konzentrationen (10, 20, 50 µM) ausgesetzt22. Für die Transfektion wurden Plasmide, die die lysinspezifische Demethylase 1A für die Überexpression (oe-KDM1A) und einen entsprechenden negativen Kontroll-Vektor ohne Insert (oe-NC) enthielten und von einem kommerziellen Anbieter bezogen wurden, in C666-1-Zellen transfiziert, sobald die Zellkonfluenz 70–80 % erreicht hatte. Konkret wurden 2,5 µg Plasmid-DNA und 5 µL eines lipidbasierten Transfektionsreagenzes jeweils in 150 µL Medium mit reduziertem Serumanteil verdünnt, vorsichtig gemischt, 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und anschließend gemäß Herstellervorschrift jeder Vertiefung einer 6-Loch-Platte zugegeben. Die Zellen wurden 48 h bei 37 °C inkubiert, und die Transfektionseffizienz wurde anschließend überprüft.
Cell-Counting-Kit-8 (CCK-8)-Test
Die Zellviabilität nach Rus-Behandlung wurde mittels CCK-8-Assay quantifiziert. Hierzu wurden Zellen zunächst in 96-Well-Platten ausgesät und über Nacht kultiviert. Der Assay wurde durch Zugabe von 10 µL CCK-8-Lösung gestartet, und nach 2-stündiger Inkubation wurde die resultierende farbige Veränderung als optische Dichte (OD) bei 450 nm mithilfe eines Plattenlesegeräts gemessen.
Koloniebildungs-Assay
Zur Beurteilung der klonogenen Überlebensfähigkeit wurden C666-1-Zellen in 6-Loch-Platten ausgesät und 14 Tage lang kultiviert. Nach der Inkubationszeit wurden die entstandenen Kolonien 10 min mit 100 % Methanol fixiert und anschließend 30 min mit 0,5 % Kristallviolett angefärbt. Die Anzahl der gefärbten Kolonien wurde dann durch mikroskopische Bildaufnahme und Zählung quantifiziert.
Western Blot
Für die Western-Blot-Analyse wurde zunächst Gesamtprotein mit RIPA-Puffer aus Zellen extrahiert, und die resultierenden Lysate wurden zentrifugiert (12.000 × g), um den Überstand zu gewinnen. Zur Quantifizierung der Proteinkonzentration wurde ein BCA-Assay verwendet. Gleichmäßige Mengen an Gesamtprotein (30 µg pro Lane) wurden geladen und mittels 10%iger Natrium-Dodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) getrennt. Nach der Trennung wurden die Proteine bei konstanter Spannung von 100 V für 90 min auf Eis auf Polyvinylidenfluorid- (PVDF-)Membranen übertragen. Die Membranen wurden anschließend 2 h bei Raumtemperatur in 5%iger Rinderserumalbumin (BSA) in Tris-gepufferter Salzlösung mit 0,1% Tween 20 (TBST) blockiert. Danach wurden die Membranen über Nacht bei 4 °C mit den folgenden primären Antikörpern im Blockierpuffer (alle 1:1000 verdünnt) inkubiert: Ki67, PCNA, MMP2, MMP9, Bcl-2, Bax, KDM1A, SLC7A11, GPX4, ACSL4, TFR1 und β-Aktin. Schließlich wurden nach einer 2-stündigen Inkubation mit HRP-konjugierten sekundären Antikörpern die immunreaktiven Banden mittels eines verbesserten Chemilumineszenz-(ECL-)Nachweismittels sichtbar gemacht, und eine dichtometrische Analyse wurde mit Bildanalyse-Software durchgeführt.
Wund-Scratch-Assay
Für den Wundheilungs-Assay wurden C666-1-Zellen in 6-Well-Platten bis zu einer Konfluenz von 80 % kultiviert. Eine einheitliche Wunde wurde durch Abkratzen mit einer 200-µL-Pipettenspitze in die Zellschicht eingeführt. Abgelöste Zellen wurden durch eine PBS-Waschung entfernt, anschließend wurde das Kulturmedium durch serumfreies Medium ersetzt und die Zellen 24 Stunden inkubiert. Bilder des Wundbereichs wurden mit einem Lichtmikroskop nach 0 h und 24 h aufgenommen, um die Zellmigration zu beurteilen.
Transwell-Assay
Die Zellinvasion wurde mithilfe von Transwell-Kammern (8-µm-Porengröße), die zuvor mit 50 µL Basalmembran-Matrix beschichtet worden waren, bewertet. Die invasive Kapazität von C666-1-Zellen wurde unter Verwendung von Transwell-Kammern untersucht. Die oberen Einsätze wurden mit in serumfreiem Medium suspendierten Zellen besiedelt, während die unteren Kammern DMEM mit 10 % FBS enthielten. Nach einer 24-stündigen Inkubation wurden die auf der apikalen Seite der Membran verbliebenen Zellen vorsichtig entfernt. Zur Quantifizierung wurden die Zellen auf der basolateralen Oberfläche mit Methanol fixiert, mit 0,1 % Kristallviolett angefärbt und anhand von Bildern, die per Lichtmikroskopie aufgenommen wurden, gezählt.
Durchflusszytometrie
Die Apoptose wurde mittels Durchflusszytometrie quantifiziert. Zur Probenvorbereitung wurden C666-1-Zellen gesammelt, mit eiskaltem PBS gewaschen und anschließend in 100 µL Bindungspuffer resuspendiert. Die Zellen wurden dann gleichzeitig mit Annexin-V-FITC (20 µg/mL) und Propidiumiodid (PI) gefärbt. Die Färbung erfolgte 15 Minuten lang auf Eis und lichtgeschützt. Unmittelbar danach wurden die Daten auf einem Durchflusszytometer erfasst, um den Prozentsatz apoptotischer Zellen zu bestimmen.
Nachweis der Caspase-3-Aktivität
Die Aktivität von Caspase-3 wurde mit einem kommerziellen Testkit gemäß den Herstelleranweisungen gemessen. Kurz gesagt, wurden C666-1-Zellen lysiert und die Überstände nach einer Zentrifugation bei 14.000 × g gesammelt. Nach einer zweistündigen Inkubation mit dem bereitgestellten Reagenz wurde die Absorption jedes Überstands bei 405 nm quantifiziert.
RT-qPCR
Gesamt-RNA wurde aus C666-1-Zellen unter Verwendung eines kommerziellen RNA-Extraktionsreagenz isoliert. Die erhaltene RNA wurde anschließend mit einem kommerziellen Kit gemäß Herstellervorschrift in cDNA erster Strang umgeschrieben. Die Genexpressionsanalyse erfolgte im Anschluss mittels quantitativer PCR (qPCR) an einem Echtzeit-PCR-System unter Verwendung einer auf SYBR Green basierenden Master-Mix-Lösung. Zur Bestimmung der relativen Transkriptmengen wurde die comparative-Ct-Methode (2⁻△△Ct) angewandt. Die für die Amplifikation verwendeten Primersequenzen lauteten: β-actin (Forward: 5'-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3'; Reverse: 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3') und KDM1A (Forward: 5'-TGACCGGATGACTTCTCAAGA-3'; Reverse: 5'-GTTGGAGAGTAGCCTC AAATGTC-3').
Test auf thiobarbitursäurereaktive Substanzen (TBARS)
Zur Messung der Lipidperoxidation wurden zunächst Supernatanten aus C666-1-Zellen durch Präzipitation (15 % TCA, 500 mM BHA) und Zentrifugation für 10 min bei 10.000 × g gewonnen. Diese Supernatanten wurden anschließend mit 0,375 % Thiobarbitursäure umgesetzt und 10 min bei 100 °C erhitzt, um das MDA-TBA-Addukt zu bilden. Der Gehalt an diesem Addukt, ein Indikator für Lipidperoxidation, wurde durch Messung der Absorption bei 532 nm in einem Mikroplattenreader bestimmt23.
Nachweis von lipidreaktiven sauerstoffhaltigen Spezies (ROS)
Die Lipidperoxidation wurde mithilfe eines fluoreszierenden Probes für Lipidperoxidation nachgewiesen. C666-1-Zellen wurden in 6-Well-Platten ausgesät, über Nacht kultiviert und anschließend der fluoreszierenden Sonde (2 µM) ausgesetzt. Diese Sonde zeigt bei Oxidation eine Fluoreszenzverschiebung von rot nach grün. Das Verhältnis der grünen zu roten Fluoreszenz wurde mittels eines Laser-Scanning-Konfokalmikroskops und einer Bildanalyse-Software analysiert. Das dargestellte Verhältnis der grünen zu roten Fluoreszenz war deutlich definiert und diente als quantitativer Indikator für die Lipidperoxidationsniveaus24.
Nachweis von Fe2+
Der intrazelluläre Gehalt an zweiwertigem Eisen (Fe2⁺) wurde mithilfe eines fluoreszierenden intrazellulären Eisenprobes bestimmt. C666-1-Zellen wurden 10 Minuten lang mit einer 10 µM fluoreszierenden Probe inkubiert. Nach dem Waschen mit PBS zur Entfernung überschüssiger Probe wurden die Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie analysiert.
Molekulare Docking-Analyse
Das molekulare Docking ist eine entscheidende computergestützte Methode, die die Entwicklung neuer Wirkstoffe ermöglicht, indem sie die Bindungsaffinität und Wechselwirkung zwischen einem Liganden und seinem Zielprotein durch die Bewertung ihrer Bindungsmodi vorhersagt25. Über die RCSB PDB-Webseite (https://www.rcsb.org/) wurde die dreidimensionale Struktur von KDM1A (PDB-ID: 6NQU) bezogen. Zur Vorbereitung der KDM1A-Proteinstruktur wurden Wasser entfernt und irrelevante kleine Liganden beseitigt. Die molekulare Docking-Simulation wurde mithilfe von Docking-Software unter Anwendung des Lamarck’schen genetischen Algorithmus durchgeführt, und die Visualisierung erfolgte unter Nutzung von Molekülvisualisierungssoftware26.
Statistische Analyse
Alle Experimente wurden mit mindestens drei unabhängigen biologischen Wiederholungen durchgeführt, und die Ergebnisse werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt. Die statistische Analyse wurde mit statistischer Analyse-Software durchgeführt. Unterschiede zwischen mehreren Gruppen wurden mittels einfaktorieller Varianzanalyse (ANOVA) gefolgt von Tukeys Post-hoc-Test für multiple Vergleiche bewertet. Ein P-Wert von weniger als 0,05 wurde als Hinweis auf einen statistisch signifikanten Unterschied angesehen.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ruscogenin hemmt selektiv die Vitalität und Proliferation von nasopharyngealen Karzinomzellen
Die Studie untersuchte zunächst den Einfluss von Ruscogenin (Rus) auf die Vitalität sowohl normaler nasopharyngealer Epithelzellen (NP69) als auch von nasopharyngealen Karzinomzellen (NPC) (C666-1). Wie mittels CCK-8-Assay bestimmt wurde, zeigte eine Behandlung mit Rus in Konzentrationen von 10, 20 und 50 µM keine signifikante Toxizität gegenüber den normalen NP69-Zellen. Im Gegensatz...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Das nasopharyngeale Karzinom (NPC) ist eine schwere maligne Erkrankung mit hoher Metastasenprävalenz, was erklärt, warum dringend bessere therapeutische Maßnahmen erforderlich sind27. Hier wird gezeigt, dass Ruscogenin (Rus), ein Naturstoff, der als Derivat von Radix ophiopogonis gewonnen wird, starke antitumorale Wirkungen auf NPC-Zellen ausübt. Es wird außerdem gefolgert, dass Rus die Progression des NPC unterdrückt, indem es die Histon-Demethylase KDM1A hemmt, wodurch zwei verschiedene...
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Die Autoren erklären, dass keine konkurrierenden finanziellen Interessen bestehen. Die Autoren erklären, dass keine generativen KI-Tools bei der Konzeption der Studie, der Datenerhebung, der Datenanalyse oder der Erstellung von Abbildungen verwendet wurden. KI-gestützte Technologien kamen ausschließlich für geringfügige sprachliche Überarbeitungen und Grammatikkorrekturen während der Ausarbeitung dieses Manuskripts zum Einsatz. Die Autoren übernehmen die vollständige Verantwortung für Inhalt und Integrität der veröffentlichten Arbeit.
Nicht zutreffend.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 7500 Fast Echtzeit-PCR-System | Applied Biosystems | 4351106 | RT-qPCR-Analyse |
| Annexin-V-FITC/PI-Apoptose-Kit | BD Biosciences | 556547 | Nachweis von Apoptose mittels Durchflusszytometrie |
| Antikörper gegen ACSL4 | Abcam | ab155282 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-Bax-Antikörper | Cell Signaling Technology (CST) | 5023 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-Bcl-2-Antikörper | Cell Signaling Technology (CST) | 15071 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Antikörper | |||
| Antikörper gegen GPX4 | Abcam | ab125066 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-KDM1A (LSD1)-Antikörper | Cell Signaling Technology (CST) | 2139 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Antikörper gegen Ki67 | Abcam | ab16667 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-MMP2-Antikörper | Abcam | ab92536 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-MMP9-Antikörper | Abcam | ab76003 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-PCNA-Antikörper | Cell Signaling Technology (CST) | 13110 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-Kanin-IgG, HRP-gekoppelt | Cell Signaling Technology (CST) | 7074 | Sekundärantikörper |
| Anti-SLC7A11 (xCT)-Antikörper | Abcam | ab175186 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-TFR1-Antikörper | Abcam | ab84036 | Primärantikörper für die Westernblot-Analyse |
| Anti-β-Actin-Antikörper | Cell Signaling Technology (CST) | 4970 | Primärantikörper für die Ladekontrolle |
| Assay-Kits | |||
| Autodock 4.2 | Scripps Research Institute | N/V | Molekulare Docking-Simulation |
| BCA-Protein-Assay-Kit | Beyotime Biotechnology | P0012 | Proteinquantifizierung |
| BODIPY 581/591 C11-Probe | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | D3861 | Nachweis von lipidperoxidationsbedingten ROS (2 μM) |
| C666-1-Zelllinie | iCell Bioscience Inc. | iCell-h378 | Humanes nasopharyngeales Karzinomzellinie |
| Caspase-3-Aktivitäts-Assay-Kit | Beyotime Biotechnology | C1115 | Bewertung der Apoptose |
| CCK-8-Assay-Kit | Dojindo Molecular Technologies | CK04 | Messung der Zellviabilität |
| Chemikalien & Reagenzien | |||
| CytoFLEX-Durchflusszytometer | Beckman Coulter | CytoFLEX | Analyse der Apoptose |
| ECL-Detektionsreagenz | MilliporeSigma | WBKLS0500 | Western Blot-Visualisierung (Immobilon) |
| Ausrüstung | |||
| Fötales Kälberserum (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 10099141 | Zellkulturzusatzstoff |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software | N/V | Statistische Analyse und Visualisierung |
| ImageJ-Software | NIH | N/V | Analyse der Bild-Densitometrie |
| Keratinozyten-Serumfreies Medium | iCell Bioscience Inc. | iCell-019 | Für die Kultivierung von NP69-Zellen |
| Laser-Scanning-Konfokalmikroskop | Carl Zeiss | LSM 880 | BODIPY C11-Fluoreszenzbildgebung |
| Licht-/Fluoreszenzmikroskop | Olympus | IX73 | Wund-Scratch, Transwell & Fe2+-Abbildung |
| LightCycler 480 SYBR Green I Master | Roche Diagnostics | 4887352001 | Quantitative Echtzeit-PCR |
| Lipofectamine 2000 Reagenz | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | 11668019 | Zelltransfektionsreagenz |
| Matrigel | Corning | 356234 | Basalmembran-Matrix für Invasionstest |
| Mikroplattenreader | Molecular Devices | SpectraMax M5 | Absorptionsmessung (405, 450, 532 nm) |
| NP69-Zelllinie | iCell Bioscience Inc. | iCell-h431 | Normale humane nasopharyngeale epitheliale Zelllinie |
| oe-KDM1A & oe-NC-Plasmide | Shanghai GenePharma Co., Ltd. | Maßgeschneiderte Synthese | Plasmide für die Überexpression von KDM1A |
| Phen Green SK (PGSK)-Sonde | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | P14312 | Nachweis von intrazellulärem Fe2+ (10 μM) |
| Pymol 3.0 | Schrödinger | N/V | Molekulares Docking-Visualisierung |
| Reverse-Transkriptions-Kit | Roche Diagnostics | 4379012001 | Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit |
| RIPA-Lysepuffer | Solarbio (Peking, China) | R0010 | Extraktion von Gesamtprotein |
| RPMI 1640-Medium | iCell Bioscience Inc. | iCell-0002 | Für die Kultivierung von C666-1-Zellen |
| Ruscogenin (Rus) | MedChemExpress (MCE) | HY-N0193 | Medikamentöse Behandlung, Reinheit ≥ 98% |
| Software | |||
| TBARS-Assay-Kit | Cayman Chemical | 10009055 | Messung der Lipidperoxidation |
| TRizol-Reagenz | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)* | 15596026 | Extraktion der gesamten RNA |
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.