Diese Studie untersuchte die Expressionsebenen von miR-3619-5p im Serum von Patienten mit Typ-2-Diabetes und analysierte die regulatorische Rolle dieses Moleküls bei der Funktion der pankreatischen β-Zellen. miR-3619-5p ist bei T2DM herunterreguliert und könnte an der Regulation der pankreatischen β-Zellfunktion durch gezielte Beeinflussung von MTA3 beteiligt sein.
Forschungsartikel
Klinische Bedeutung der miR-3619-5p-Expression bei Patienten mit Typ-2-Diabetes und deren Regulierung der Proliferation pankreatischer β-Zellen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Das zentrale pathologische Merkmal des Typ-2-Diabetes mellitus (T2DM) ist das Versagen der pankreatischen β-Zellen; daher ist die Identifizierung wirksamer zirkulierender Biomarker und molekularer Zielstrukturen, die die Homöostase der pankreatischen β-Zellen regulieren, von erheblicher praktischer Bedeutung. Als wichtige regulatorische Moleküle der Genexpression spielen miRNAs eine wichtige Rolle bei der Proliferation, Apoptose und Insulinsekretion pankreatischer β-Zellen. Ziel dieser Studie ist es, die Expressionsmuster und den klinischen Wert von miR-3619-5p im Serum von T2DM-Patienten zu untersuchen und seine regulatorische Rolle bei der Proliferation pankreatischer β-Zellen zu klären. Die Expression von miR-3619-5p und MTA3 wurde mittels RT-qPCR nachgewiesen. ROC-Kurven wurden zur Beurteilung der diagnostischen Leistung verwendet. Bioinformatische Analysen und Dual-Luciferase-Assays dienten der Validierung der Zielstruktur-Ligand-Beziehung. Die Zellproliferation wurde mittels CCK-8-Assay gemessen, während die Apoptose mittels Durchflusszytometrie untersucht wurde. Die Insulinsekretionsniveaus wurden mittels ELISA bestimmt. Die Ergebnisse zeigten, dass miR-3619-5p und MTA3 bei T2DM-Patienten sowie in pankreatischen β-Zellen herunterreguliert sind. miR-3619-5p könnte ein Biomarker für die Diagnose des T2DM sein; seine Überexpression fördert die Zellproliferation, hemmt die Apoptose und verstärkt die Insulinsekretion. miR-3619-5p bindet an MTA3 und reguliert es, wobei beide eine signifikant positive Korrelation aufweisen. Ein miR-3619-5p-Mimetikum kann die durch si-MTA3 verursachten Schäden an der Funktion pankreatischer β-Zellen umkehren. Kurz gesagt, miR-3619-5p ist beim T2DM herunterreguliert und besitzt diagnostischen Wert. miR-3619-5p könnte an der Regulation der Funktion pankreatischer β-Zellen durch gezielte Beeinflussung von MTA3 beteiligt sein.
Einleitung
Die chronische Stoffwechselstörung Typ-2-Diabetes mellitus (T2DM) manifestiert sich hauptsächlich als Insulinresistenz, begleitet von einem progressiven Verlust der insulinsekretorischen Funktion, und macht mehr als 80 % aller Diabetesfälle aus1. Ihre Pathogenese ist komplex und umfasst eine Kombination aus genetischen und umweltbedingten Faktoren sowie Störungen in der zellulären und molekularen Regulation2,3. Da pankreatische β-Zellen die primären Zellen für die Insulinsekretion sind, stellt eine abnormale Abnahme ihrer proliferativen Kapazität eine wesentliche Ursache für eine unzureichende Insulinsekretion beim T2DM dar4. Derzeit basiert die klinische Diagnose des T2DM hauptsächlich auf traditionellen Indikatoren wie Blutglukose und glykiertem Hämoglobin (HbA1c); deren Empfindlichkeit für das frühe Screening und die Vorhersage des Krankheitsverlaufs ist jedoch begrenzt5. Es besteht dringender Bedarf, empfindliche, spezifische Biomarker und zentrale regulatorische Ansatzpunkte zu identifizieren, um neuartige Strategien für die präzise Diagnose und Behandlung des T2DM bereitzustellen.
Unter dem Einfluss einer durch anhaltende Hyperglykämie induzierten Glukotoxizität ist die Proliferation der pankreatischen β-Zellen eingeschränkt und die Apoptose erhöht, was zu einem schleichenden Verlust der glucoseabhängigen Insulinsekretion führt; dieser Prozess ist ein entscheidender Faktor für das fortschreitende Fortschreiten der Erkrankung6,7. Mikro-RNAs (miRNAs) sind an vielfältigen physiologischen Prozessen in Zellen beteiligt8 und üben eine entscheidende regulierende Wirkung auf physiologische Vorgänge aus, darunter die Proliferation pankreatischer Inselzellen, die Apoptose und die Insulinsekretion9,10. Mehrere Studien haben gezeigt, dass verschiedene miRNAs bei Typ-2-Diabetes (T2DM) abnorm exprimiert werden und eng in die Pathogenese der Erkrankung involviert sind11,12,13. miR-3619-5p ist an biologischen Prozessen wie der Zellproliferation und Apoptose beteiligt, und die bisherige Forschung konzentrierte sich vorwiegend auf den Bereich der Onkologie14,15. Eine abnorme Expression von miR-3619-5p wurde bei malignen Tumoren beobachtet, darunter Plattenepithelkarzinom der Haut, Lungenkrebs, kolorektales Karzinom und Magenkrebs, wo es Zielgene reguliert und dadurch die Proliferation, Metastasierung und Apoptose von Tumorzellen beeinflusst16,17,18,19. Es besteht jedoch weiterhin eine deutliche Forschungslücke hinsichtlich der klinischen Expressionsmerkmale, der klinischen Relevanz und der Regulationsmechanismen der pankreatischen Funktion von miR-3619-5p bei T2DM.
Als wichtiges Mitglied der MTA-Familie vermittelt MTA3 Protein-Protein-Interaktionen und die transkriptionelle Genregulation und ist umfassend in wichtige physiologische Prozesse involviert, darunter Zellproliferation, Apoptose und Stoffwechsel20. Die aktuelle Forschung zu MTA3 konzentriert sich hauptsächlich auf die Onkologie21,22,23, wobei nur begrenzte Studien seine Rolle bei Stoffwechselerkrankungen, insbesondere bei T2DM, untersucht haben. Einige Studien haben gezeigt, dass MTA3 als diabetesassoziiertes Gen an der Regulation hyperglykämieinduzierter Leberfibrose beteiligt ist24. Dies legt nahe, dass MTA3 möglicherweise am Fortschreiten von T2DM beteiligt ist; ob es jedoch im Kontext von T2DM durch miR-3619-5p reguliert wird, bleibt unbestätigt.
Zusammenfassend war die bisherige Forschung zu miR-3619-5p weitgehend auf Tumor- und Entzündungsmodelle beschränkt; sein klinisches Expressionsprofil bei T2DM sowie seine Rolle bei der Homöostase der Pankreas-β-Zellen und bei Störungen des Glukosestoffwechsels sind bisher unerforscht geblieben. Daher zielt diese Studie darauf ab, die Zielbeziehung zwischen miR-3619-5p und MTA3 zu überprüfen, indem die Expression und klinische Bedeutung von miR-3619-5p im Serum von Patienten mit T2DM bewertet wird, sowie die regulatorische Rolle von miR-3619-5p bei der Proliferation von Pankreas-β-Zellen zu untersuchen, um damit eine neue theoretische Grundlage für die Erforschung der Pathogenese von T2DM sowie für die klinische Diagnose und Therapie bereitzustellen.
Protokoll
Diese Studie wurde vom Medizinischen Ethikkomitee des TongzhouBay People's Hospital genehmigt (Genehmigungsnummer 2024122001). Die in dieser Studie angewandten Verfahren entsprechen den Grundsätzen der Deklaration von Helsinki. Von allen an der Studie beteiligten Einzelpersonen wurde eine informierte Einwilligung eingeholt. Für die Veröffentlichung der in der Studie enthaltenen personenbezogenen Daten jeder einzelnen Person wurde eine Einwilligung zur Veröffentlichung eingeholt.
Forschungsteilnehmer
In die Studie wurden retrospektiv 102 Patienten mit Typ-2-Diabetes mellitus eingeschlossen, die zwischen Januar 2022 und Juni 2023 in unserem Krankenhaus diagnostiziert worden waren. Teilnahmeberechtigt waren Personen, die die diagnostischen Kriterien für einen Typ-2-Diabetes mellitus erfüllten, darunter ein nüchterner Blutzuckerspiegel ≥7,0 mmol/L und ein 2-Stunden-Postprandial-Blutzuckerspiegel ≥11,1 mmol/L, in den letzten 3 Monaten keine Behandlung mit Insulin oder Antidiabetika der neuen Generation erhalten hatten, keine schweren Komplikationen an Herz, Leber, Nieren oder anderen Organen aufwiesen und keine Vorgeschichte von malignen Tumoren, Autoimmunerkrankungen oder Infektionskrankheiten hatten sowie über vollständige klinische Unterlagen verfügten. Ausgeschlossen waren Patienten mit Typ-1-Diabetes oder anderen spezifischen Diabetesformen, Personen im Zustand einer Stressreaktion infolge schwerer Infektion, Trauma, Operation oder anderer Ursachen, solche, die in den letzten 3 Monaten Glukokortikoide, Immunsuppressiva oder ähnliche Medikamente eingenommen hatten, sowie schwangere oder stillende Frauen. Als Kontrollgruppe wurden zusätzlich 80 Probanden eingeschlossen, die im gleichen Zeitraum routinemäßige Gesundheitsuntersuchungen in unserem Krankenhaus durchlaufen hatten.
Probenentnahme
Alle Studienteilnehmer hatten mindestens 8–12 Stunden gefastet; 5 mL venöses Blut wurden morgens unmittelbar nach dem Aufstehen entnommen und in RNase-freie EP-Röhrchen abgefüllt, zentrifugiert (3000 × g, 10 min), um das Serum zu gewinnen, und bei -80 °C für spätere Untersuchungen gelagert.
Zellkultur und Behandlung
Die aus Inselzellen der Ratte stammende β-Zelllinie INS-1 wurde in RPMI 1640-Medium mit 10 % FBS und 1 % Penicillin-Streptomycin kultiviert. Die INS-1-Zellen wurden in Medium mit 25 mM Glukose kultiviert, um ein Modell für zelluläre Schädigung durch hohe Glukosekonzentration (HG) zu etablieren25. In der unbehandelten Gruppe wurden INS-1-Zellen in RPMI 1640-Medium (mit 11,1 mM Glukose) kultiviert.
Die Transfektion wurde mit dem Transfektionskit unter Verwendung von miR-3619-5p-Mimetika, einem miRNA-Leer-Kontrollpräparat (miR-NC), si-MTA3 und einer Leer-Kontrolle (si-NC) durchgeführt. Die miR-3619-5p-Mimetika, der miR-3619-5p-Inhibitor, die siRNA und die entsprechenden negativen Kontrollen wurden alle von RiboBio bezogen. Konzentration des miRNA-Mimetikums: 50 nM; Konzentration des miRNA-Inhibitors: 100 nM; Konzentration der siRNA: 50 nM. Die nachfolgenden Experimente wurden 48 h nach der Transfektion durchgeführt. Die entsprechenden Sequenzen sind in Supplementary Table 1 dargestellt.
Quantitative Reverse-Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktion (RT-qPCR)
Mit Reagenz TRIzol wurde die Gesamt-RNA aus Serum extrahiert, während zur Extraktion der Gesamt-RNA aus Zellen das miRNeasy Mini Kit verwendet wurde. Zur Detektion von miR-3619-5p wurde die Reverse Transkription mit einem Reverse-Transkriptionskit durchgeführt; nach der cDNA-Synthese kam ein miRNA-Quantifizierungskit zum Einsatz, wobei U6 als interne Kontrolle diente. Zur Detektion von MTA3 wurde die Reverse Transkription in cDNA mit einem mRNA-Reverse-Transkriptionskit durchgeführt, und die RT-qPCR wurde unter Verwendung eines mRNA-Quantifizierungskits mit GAPDH als interner Kontrolle durchgeführt. Die Änderungen in der Expression von miR-3619-5p und MTA3 wurden mit der 2-ΔΔCt-Methode analysiert. Die Primersequenzen sind in Ergänzungstabelle 1 dargestellt.
Dual-Luciferase-Reporter-(DLR)-Assay
Die Wildtyp-(WT)- und Mutanten-(MUT)-3'-UTRs von MTA3, die die Bindungsstelle für miR-3619-5p enthielten, wurden in den pmirGLO-Vektor kloniert. Der Vektor wurde zusammen mit dem miR-3619-5p-Mimetikum und dem miR-3619-5p-Inhibitor unter Verwendung von Transfektionsreagenzien in 293T-Zellen co-transfiziert. Zu den Transfektionskontrollgruppen gehörten: die Gruppe mit leerem Reportervektor (Control) und die Gruppe mit negativer miRNA-Kontrolle (miR-NC). Nach 48 h wurde die relative Luciferase-Aktivität mit einem Dual-Luciferase-Reporter-System gemessen, wobei die Renilla-Luciferase-Aktivität als interne Kontrolle diente. Jede Gruppe umfasst drei unabhängige biologische Replikate, wobei jedes biologische Replikat aus drei technischen Replikaten besteht.
Test zur Zellproliferation
Säen Sie die transfizierten Zellen in eine 96-Loch-Platte aus. Fügen Sie nach einer Kultivierung von jeweils 0 h, 24 h, 48 h und 72 h 10 μL CCK-8-Reagenz pro Loch hinzu, inkubieren Sie 2 h bei 37 °C und messen Sie die Absorption bei 450 nm mithilfe eines Mikroplattenlesegeräts.
Apoptose-Assay
Die Zellen dreimal mit PBS waschen, dann in 200 μL Bindungspuffer, der 10 μL Annexin V-FITC und 5 μL PI enthält, resuspendieren. 15 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubieren. 300 μL Bindungspuffer hinzufügen und die Zellen anschließend unverzüglich mit einem Durchflusszytometer analysieren, um die Apoptoserate zu bestimmen.
Enzyme-gekoppelte Immunosorbens-Assay (ELISA)
Transfizierte Zellen wurden in eine 96-Well-Platte ausgesät und über Nacht bei 37 °C verhungert. Das Kulturmedium wurde durch eine Lösung mit 25 mM Glukose ersetzt, und die Zellen wurden 1 h kultiviert; anschließend wurde das Kulturmedium der behandelten INS-1-Zellen gesammelt, um die Insulinsekretion zu messen. Die INS-1-Zellen wurden in saurem Methanol resuspendiert, beschallt, und der Überstand wurde gesammelt, um den gesamten Insulingehalt zu bestimmen. Es wurde das Rat Insulin ELISA Kit verwendet, und der Assay wurde gemäß den Herstelleranweisungen durchgeführt. Der Assay nutzt die mit dem Testkit bereitgestellten Referenzstandards, um eine Kalibrierungskurve aufzustellen; die absolute Konzentration von Insulin wird anhand der Absorptionswerte der Proben berechnet, wobei die Einheit der absoluten Konzentration μIU/mL beträgt. Schließlich wurde die Insulinsekretionskapazität bewertet, indem die in dem Kulturmedium gemessenen Insulinmengen anhand des gesamten intrazellulären Insulingehalts normalisiert wurden. Die Daten in den statistischen Grafiken werden als Faltungsänderungen dargestellt, berechnet relativ zur Kontrollgruppe.
Western-Blot
Transfizierte Zellen jeder Gruppe wurden gesammelt und mit RIPA-Lysispuffer versetzt. Die Gesamtproteinkonzentration wurde nach der BCA-Methode bestimmt. 50 μg Gesamtprotein wurden mit 5× Lade-Puffer vermischt und 10 min bei 100 °C denaturiert. Nach der 10%igen SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese wurden die Proteine auf eine Polyvinylidenfluorid-Membran übertragen. Die Membran wurde 1 h mit 5% magerer Milch blockiert; anschließend wurden die primären Antikörper gegen MTA3 (1:1000) und GAPDH (1:1000) hinzugefügt und über Nacht bei 4 °C inkubiert. Danach wurde die Membran mit TBST gewaschen, der mit HRP markierte sekundäre Antikörper (Ziege anti-Kaninchen IgG, 1:1000) zugegeben und 1 h bei Raumtemperatur inkubiert. Die Detektion erfolgte mittels ECL-Chemilumineszenzverfahren.
Statistische Analyse
Quantitative Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung angegeben. Vor der Durchführung der statistischen Analyse wurde mit dem Shapiro-Wilk-Test die Normalverteilung der Daten überprüft und mit dem Levene-Test die Varianzhomogenität beurteilt, um die Eignung parametrischer Tests zu bestimmen. Die Ergebnisse dieser Tests zeigten, dass alle quantitativen Daten in dieser Studie einer Normalverteilung folgten und die Annahme der Varianzhomogenität erfüllt war; daher kamen parametrische Tests für die statistische Analyse zum Einsatz. Zum Vergleich von zwei Gruppen wurde ein t-Test für unabhängige Stichproben verwendet, während für Vergleiche zwischen mehreren Gruppen eine einfaktorielle Varianzanalyse (ANOVA) mit Tukey’s Post-hoc-Test angewandt wurde. Streudiagramme dienten der Beurteilung linearer Zusammenhänge zwischen Variablen. Wo die Annahmen der Normalverteilung und Linearität erfüllt waren, wurde eine Pearson-Korrelationsanalyse durchgeführt. In die Pearson-Korrelationsanalyse gingen alle 102 Teilnehmer ein; keine Ausreißer wurden ausgeschlossen. Die beobachtete Punktewolke im Streudiagramm resultiert aus überlappenden Stichprobenbeobachtungen. Alle Experimente umfassten jeweils drei Wiederholungen, und jedes Experiment wurde dreimal unabhängig wiederholt. Ein p-Wert von <0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.
Ergebnisse
Vergleich der demografischen Merkmale und klinischen Stoffwechselparameter unter den Studienteilnehmern
Die Vergleichsergebnisse zeigten, dass die Konzentrationen von FBG und HbA1c bei Patienten mit T2DM deutlich erhöht waren (P < 0,001), während bei den anderen Parametern keine signifikanten Unterschiede festgestellt wurden (P > 0,05) (Tabelle 1).
Expression und klinische Bedeutung von miR-3619-5p
Die RT-qPCR-Analyse zeigte, dass die Expression von miR-3619-5p im Serum von T2DM-Patienten signifikant verringert war (P < 0,001; Abbildung 1A). Die ROC-Kurvenanalyse ergab für miR-3619-5p eine AUC von 0,871 (95 % CI: 0,820–0,922) bei der Diagnose von T2DM (Abbildung 1B). Darüber hinaus zeigte die Ergebnisse einer Pearson-Korrelationsanalyse an 102 T2DM-Patienten, dass die Expression von miR-3619-5p deutlich und umgekehrt mit dem FBG (Abbildung 1C) und HbA1c (Abbildung 1D) korrelierte.
Abbildung 1: Expression und klinische Bedeutung von miR-3619-5p. (A) RT-qPCR-Analyse der Expression von miR-3619-5p im Serum von Patienten mit T2DM. (B) ROC-Kurve zur Diagnose von T2DM unter Verwendung von miR-3619-5p. (C) Pearson-Korrelationsanalyse zwischen der relativen Expression von miR-3619-5p und dem nüchternen Blutzucker (FBG). (D) Pearson-Korrelationsanalyse zwischen der relativen Expression von miR-3619-5p und HbA1c. Die Fehlerbalken repräsentieren die Standardabweichung (SD); Kontrolle, n = 80; T2DM, n = 102. ***P < 0.001 Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
Die Wirkung von miR-3619-5p auf die Funktion der pankreatischen β-Zellen
Wir führten zelluläre Funktionsanalysen an INS-1-Pankreas-β-Zellen durch, die mit HG behandelt wurden, um das Fortschreiten des T2DM zu imitieren. Die Ergebnisse zeigten, dass die Expression von miR-3619-5p nach HG-Behandlung signifikant verringert war (P < 0,001), während die Transfektion mit einem miR-3619-5p-Mimetikum die Expression deutlich hochregulierte (P < 0,01; Abbildung 2A). Hinsichtlich der Zellproliferation und Apoptose hemmte die HG-Behandlung die Zellproliferation signifikant und förderte die Apoptose (P < 0,001), während das miR-3619-5p-Mimetikum die Proliferation förderte und die Apoptose nach HG-Behandlung inhibierte (P < 0,01; Abbildung 2B,C). Die ELISA-Ergebnisse zeigten, dass die Insulinsekretion nach HG-Behandlung signifikant reduziert war (P < 0,001), während das miR-3619-5p-Mimetikum die Insulinsekretion nach HG-Behandlung erhöhte (P < 0,01; Abbildung 2D).
Abbildung 2: Wirkung von miR-3619-5p auf die Funktion der pankreatischen β-Zellen. Pankreatische β-Zellen des INS-1 wurden mit HG behandelt, um den Verlauf von T2DM zu simulieren. (A) Die Expression von miR-3619-5p in den Zellen wurde mittels RT-qPCR nachgewiesen. (B) Die Zellproliferation wurde mit dem CCK-8-Assay bewertet. (C) Die Zellapoptose wurde mittels Durchflusszytometrie analysiert. (D) Die Insulinsekretionsniveaus wurden mittels ELISA gemessen (bezogen auf den gesamten intrazellulären Insulingehalt). Die Fehlerbalken stellen die Standardabweichung (SD) dar, n = 3. ***P < 0,001; **P < 0,01 Bitte klicken Sie hier, um eine vergrößerte Version dieser Abbildung anzusehen.
Validierung der Zielstrukturen von miR-3619-5p
Bioinformatische Vorhersagen ergaben insgesamt 174 Zielgene über vier Datenbanken hinweg (Abbildung 3A), und die MTA3-Bindungsstelle weist einen hohen Grad an Konservierung auf (Context++-Score: -0,31; Context++-Score-Perzentil: 98). Eine komplementäre Bindungsstelle zwischen miR-3619-5p und der 3'-UTR-Region von MTA3 (Abbildung 3B) wurde identifiziert. DLR-Ergebnisse zeigten, dass die relative Luciferase-Aktivität von MTA3 WT in der Gruppe mit miR-3619-5p-Mimetikum signifikant erhöht war, was darauf hindeutet, dass miR-3619-5p an MTA3 binden kann (Abbildung 3C).
Die Expression von MTA3 war im Serum von T2DM-Patienten deutlich verringert (Abbildung 3D); ihre Expression war ebenfalls signifikant in HG-behandelten INS-1-Zellen reduziert, während das miR-3619-5p-Mimetikum die Expression von MTA3 hochregulierte (Abbildung 3E). Die Western-Blot-Ergebnisse zeigten, dass das miR-3619-5p-Mimetikum die Proteinspiegel von MTA3 erhöhte, während der miR-3619-5p-Inhibitor die Expression signifikant herunterregulierte (ergänzende Abbildung 1). Die Pearson-Korrelationsanalyse ergab eine signifikante positive Korrelation zwischen den Spiegeln von miR-3619-5p und MTA3 im Serum von 102 Patienten mit T2DM (Abbildung 3F). Diese Ergebnisse bestätigen weiterhin die positive regulatorische Rolle von miR-3619-5p auf MTA3.
Abbildung 3: Validierung der Zielgene von miR-3619-5p. (A) Gemeinsame Zielgene von miR-3619-5p, die in den vier Datenbanken identifiziert wurden: TargetScan, miRWalk, StarBase und miRDB. (B) Bindungsstelle von miR-3619-5p an die 3’-UTR von MTA3. (C) DLR-Assay (n = 3). (D) RT-qPCR-Analyse der MTA3-Expression im Serum von Patienten mit T2DM (Kontrolle, n = 80; T2DM, n = 102). (E) RT-qPCR-Analyse der MTA3-Expression in Zellen (n = 3). (F) Pearson-Korrelationsanalyse der Expression von miR-3619-5p und MTA3 im Serum von Patienten mit T2DM (Kontrolle, n = 80; T2DM, n = 102). Die Fehlerbalken repräsentieren die Standardabweichung (SD). ***P < 0.001; **P < 0.01 Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.
Die Auswirkungen von MTA3 auf die Funktion der pankreatischen β-Zellen
Die Ergebnisse zeigten, dass si-MTA3 die MTA3-Expression nach HG-Behandlung weiter verringerte, während eine Cotransfektion mit dem miR-3619-5p-Mimetikum diesen Effekt umkehrte (Abbildung 4A). si-MTA3 hemmte die Proliferation der mit HG behandelten Zellen weiter, förderte die Apoptose und verschärfte die Beeinträchtigung der Insulinsekretion; hingegen kehrte die Cotransfektion mit dem miR-3619-5p-Mimetikum die durch si-MTA3 vermittelten zellulären Phänotypen um, indem sie die Zellproliferation wiederherstellte, die Apoptose verringerte und die Hemmung der Insulinsekretion abschwächte (Abbildung 4B–D).
Abbildung 4: Wirkung von MTA3 auf die Funktion der pankreatischen β-Zellen. si-MTA3 und ein miR-3619-5p-Mimetikum wurden in Zellen transfiziert, um die Wirkung von MTA3 auf die Funktion der pankreatischen β-Zellen weiter zu untersuchen. (A) RT-qPCR-Analyse der MTA3-Expression in Zellen. (B) Die Zellproliferation wurde mittels CCK-8-Assay bewertet. (C) Die Apoptoserate wurde durchflusszytometrisch bestimmt. (D) Die Insulinsekretion (bezogen auf den gesamten intrazellulären Insulingehalt) wurde mittels ELISA gemessen. Die Fehlerbalken stellen die Standardabweichung (SD) dar, n = 3. ***P < 0,001; **P < 0,01; *P < 0,05 Bitte klicken Sie hier, um eine vergrößerte Version dieser Abbildung anzusehen.
Zusammenfassend zeigen die Ergebnisse aus klinischen Proben, dass die Expression von serumgebundenem miR-3619-5p bei Patienten mit T2DM signifikant herunterreguliert ist und dass miR-3619-5p signifikant mit FBG und HbA1c korreliert; zellbasierte Experimente bestätigten, dass miR-3619-5p spezifisch MTA3 regulieren kann, wodurch die Vitalität und insulinsekretorische Funktion von INS-1-Ratten-Pankreas-β-Zellen beeinflusst wird. Insgesamt legen diese Ergebnisse nahe, dass miR-3619-5p in die Regulation der Pankreas-β-Zellfunktion involviert ist und damit vorläufig das Forschungsziel dieser Studie erfüllt, die Rolle von miR-3619-5p bei Typ-2-Diabetes und deren potenzielle regulatorische Mechanismen zu untersuchen.
VERFÜGBARKEIT VON DATEN:
Alle rohen und verarbeiteten Datensätze, die die Schlussfolgerungen dieser Studie unterstützen, sind als Zusatzdatei 1 hochgeladen.
| Indikatoren | Kontrollgruppe (n = 80) | T2DM-Gruppe (n = 102) | P-Wert |
| Alter (Jahre) | 51,41 ± 9,70 | 52,29 ± 7,03 | 0,478 |
| Geschlecht (männlich/weiblich) | 43/37 | 54/48 | 0,914 |
| BMI (kg/m2) | 24,04 ± 3,10 | 24,81 ± 3,04 | 0,093 |
| TC (mmol/L) | 4,60 ± 0,64 | 4,78 ± 0,65 | 0,068 |
| TG (mmol/L) | 1,61 ± 0,18 | 1,67 ± 0,26 | 0,093 |
| HDL-C (mmol/L) | 1,43 ± 0,13 | 1,38 ± 0,18 | 0,085 |
| LDL-C (mmol/L) | 2,55 ± 0,29 | 2,63 ± 0,31 | 0,067 |
| FBG (mmol/L) | 4,96 ± 0,97 | 7,16 ± 1,64 | <0,001 |
| HbA1c (%) | 4,42 ± 0,49 | 6,77 ± 1,16 | <0,001 |
Tabelle 1: Vergleich klinischer Parameter zwischen den Probanden. T2DM, Typ-2-Diabetes mellitus; BMI, Body-Mass-Index; TC, Gesamtcholesterin; TG, Triglycerid; HDL, hochdichte Lipoproteine; LDL, niedrigdichte Lipoproteine; FBG, nüchternes Blutglukose; HbA1c, glykosyliertes Hämoglobin.
Ergänzende Tabelle 1: Primer- und Reagenzsequenzen, die in dieser Studie verwendet wurden.Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.
Abbildung 1, Zusatzmaterial: Proteinausdruck von MTA3. Western-Blot-Analyse der MTA3-Proteinkonzentrationen. (A) MTA3-Proteinkonzentrationen. (B) Rohe Western-Blot-Bilder von MTA3. (C) Rohe Western-Blot-Bilder von GAPDH. Die Fehlerbalken repräsentieren die Standardabweichung (SD), n = 3. ***P < 0,001; **P < 0,01Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.
Zusatzdatei 1: Rohdaten.Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.
Diskussion
Die zentralen pathologischen Merkmale des Typ-2-Diabetes sind Insulinresistenz und eine Dysfunktion der pankreatischen β-Zellen, wobei eine verminderte proliferative Kapazität und eine geringere Anzahl pankreatischer β-Zellen die entscheidenden Faktoren für eine gestörte Insulinsekretion und die primären Triebkräfte des Krankheitsverlaufs darstellen26. Die Identifizierung zentraler Moleküle, die die Proliferation pankreatischer β-Zellen regulieren und deren Funktion verbessern können, ist von großer Bedeutung für die präzise Diagnose und Behandlung des Typ-2-Diabetes.
Als wichtige regulatorische Moleküle der Genexpression üben miRNAs eine entscheidende Funktion bei der Proliferation, Apoptose und Insulinsekretion von pankreatischen β-Zellen aus. Zahlreiche miRNAs sind eng mit der Pathogenese des T2DM27,28,29 assoziiert. Song et al. fanden heraus, dass die Herunterregulation von miR-3619-5p die Zellmigration beim kolorektalen Karzinom hemmt30. Andere Studien haben gezeigt, dass miR-3619-5p bei diabetischen Patienten unter peritonealer Dialyse herunterreguliert ist31. Die Rolle und die Mechanismen von miR-3619-5p beim T2DM wurden jedoch bisher noch nicht beschrieben. Diese Studie ergab, dass die Expression von miR-3619-5p im Serum von T2DM-Patienten signifikant niedriger war als in der gesunden Kontrollgruppe, was mit den Ergebnissen von Costa et al.31 übereinstimmt, und darauf hindeutet, dass eine verminderte Expression von miR‑3619‑5p eng mit der Initiation und Entwicklung des T2DM verknüpft sein könnte. Die Korrelationsanalyse zeigte, dass die Expression von miR-3619-5p negativ mit FBG und HbA1c korrelierte, was darauf hindeutet, dass eine niedrigere Expression von miR-3619-5p mit einer schlechteren glykämischen Kontrolle bei Patienten assoziiert ist. Dies bestätigt weiterhin, dass miR-3619-5p möglicherweise am metabolischen Regulationsverlust beim T2DM beteiligt ist und sein Expressionsniveau den Schweregrad der Erkrankung widerspiegeln könnte; dies steht im Einklang mit den Befunden von Chen et al., die berichteten, dass differentiell exprimierte RNAs an der Lipidmetabolisierung, Insulinsekretion und Glukoseregulation beteiligt sein könnten32. Die Ergebnisse der ROC-Kurvenanalyse legen nahe, dass miR-3619-5p ein Biomarker für die Diagnose des T2DM sein könnte und den Mangel an Sensitivität bei der Frühdiagnose herkömmlicher Blutglukoseindikatoren ausgleichen könnte.
Ein abnormer Rückgang der proliferativen Kapazität der pankreatischen β-Zellen ist ein zentraler Bestandteil des Versagens der pankreatischen Inseln bei T2DM; die Förderung der Proliferation pankreatischer β-Zellen und die Erhöhung der Zellzahl sind entscheidend, um die Insulinsekretionsfunktion zu verbessern33,34. Diese Studie zeigte anhand zellulärer Experimente, dass miR-3619-5p die Proliferation von INS-1-Zellen deutlich fördert und die Apoptose hemmt, wodurch die Insulinsekretion gesteigert wird. Dies legt nahe, dass miR-3619-5p die Insulinsekretionsfunktion verbessern kann, indem es die Proliferation pankreatischer β-Zellen fördert und die Apoptose inhibiert, und somit an der Pathogenese des T2DM beteiligt ist. Dies steht im Einklang mit den regulatorischen Mechanismen von miRNAs bei der Proliferation pankreatischer β-Zellen, wie sie in früheren Studien beschrieben wurden, beispielsweise miR-26a-5p und miR-765, die die Proliferation und Differenzierung pankreatischer β-Zellen durch Regulierung der Expression von Zielgenen fördern35,36.
In dieser Studie wurden Bioinformatik-Vorhersagen und DLR-Assays verwendet, um zu bestätigen, dass MTA3 ein Zielgen von miR-3619-5p ist. Als metastasenassoziiertes Protein ist MTA3 umfassend in wichtige physiologische Prozesse wie Zellproliferation, Apoptose und Stoffwechsel involviert20. Untersuchungen haben gezeigt, dass MTA3 an der Regulation der durch hohes Glukoseangebot induzierten Leberfibrose beteiligt ist24. Die durch T2DM vermittelte Suppression von MTA3 steht in Verbindung mit erhöhtem oxidativem Stress in den Hoden37. In der vorliegenden Studie war MTA3 in mit HG behandelten Zellen herunterreguliert. Zusammen mit den Ergebnissen der Zellproliferationsassays wird die Hypothese aufgestellt, dass si-MTA3 zur Pathogenese von T2DM beitragen könnte, indem es die Proliferation von pankreatischen β-Zellen hemmt, während miR-3619-5p diese Hemmung durch die Regulation der MTA3-Expression abschwächen und somit die Funktion der pankreatischen β-Zellen verbessern könnte. Die Aufklärung dieses Mechanismus verfeinert das molekulare Netzwerk der miRNA-vermittelten Regulation der Proliferation pankreatischer β-Zellen weiter und eröffnet eine neue Perspektive für die Forschung zur Pathogenese von T2DM.
Die Ergebnisse dieser Studie haben ein potenzielles klinisches und translationales Anwendungspotenzial. Serum-miR-3619-5p kann im peripheren venösen Blut nachgewiesen werden; wenn dies in nachfolgenden großangelegten Kohortenstudien bestätigt wird, könnte es als ergänzender biologischer Marker dienen, der Ärzten bei der Identifizierung von Personen mit erhöhtem Risiko für eine Dysfunktion der pankreatischen β-Zellen hilft und somit eine frühere Risikostratifizierung ermöglicht. miR-3619-5p kann hyperglykämiebedingte Schäden an pankreatischen β-Zellen abschwächen, indem es den MTA3-Signalweg gezielt reguliert, um das Überleben der β-Zellen und die Insulinsekretion aufrechtzuerhalten. Dies legt nahe, dass die miR-3619-5p/MTA3-Achse als neues Ziel für den Schutz der Inselzellen bei Diabetes dienen könnte und grundlegende experimentelle Erkenntnisse für die spätere Entwicklung nukleinsäurebasierter Arzneimittel oder kleiner molekularer Inhibitoren zum Schutz der Inselzellfunktion liefert.
Mehrere Limitationen sollten in der vorliegenden Studie beachtet werden: Erstens wurde unsere Forschung an einem einzigen Zentrum durchgeführt; eine Selektionsverzerrung könnte vorliegen, und die interindividuelle Variabilität unter den Teilnehmern ist relativ begrenzt. Zukünftige Untersuchungen sollten die Stichprobengröße vergrößern und multizentrische Studien durchführen, um das Expressionsprofil und den klinischen Wert von miR‑3619‑5p zu bestätigen. Zweitens hat diese Studie die regulatorische Funktion von miR-3619-5p in Bezug auf die Proliferation von Pankreas-β-Zellen nur auf zellulärer Ebene validiert und keine weiteren Validierungen mittels Tierversuchen durchgeführt. Zukünftige Studien sollten ein T2DM-Tiermodell etablieren, um die Wirkmechanismen in vivo weiter zu untersuchen. Drittens weisen miRNAs im Allgemeinen multifunktionale Eigenschaften auf, und miR-3619-5p könnte auch eine Vielzahl verwandter Gene regulieren. Gleichzeitig unterliegen in-vitro-Transfektionssysteme, die miRNA-Mimics oder -Inhibitoren verwenden, potenziellen Off-Target-Effekten; künstliche Interventionen in hohen Dosen könnten mehrere Signalwege unspezifisch aktivieren oder hemmen, wodurch es schwierig wird, den unter physiologischen Bedingungen beobachteten Wirkmechanismus vollständig nachzubilden. Zukünftige Forschungsarbeiten erfordern ein umfassenderes, ganztranskriptomweites Target-Screening, um zwischen spezifischer Zielregulation und unspezifischen biologischen Effekten aufgrund von Off-Target-Effekten zu unterscheiden. Viertens verwendete diese Studie zwar eine 25 mM Glukose-Intervention im in-vitro-Hochglukose-Modell, richtete jedoch keine Mannitol-Osmolaritätskontrollgruppe ein; folglich war es nicht möglich, Glukose-spezifische Stoffwechselwirkungen vollständig von Effekten durch osmotischen Stress zu unterscheiden. Zukünftige Experimente sollten eine osmotische Kontrolle einbeziehen, um den Mechanismus, durch den hohe Glukosespiegel die INS-1-Zellen beeinflussen, weiter aufzuklären. Schließlich besteht eine Art-Diskrepanz zwischen klinischen Proben und in-vitro-Zellmodellen; obwohl INS-1-Zellen ein klassisches in-vitro-Modell zur Untersuchung der funktionellen Reifung von Pankreas-β-Zellen darstellen, können die an Rattenzellen beobachteten Regulationsmechanismen nicht direkt mit den tatsächlichen biologischen Prozessen beim Menschen gleichgesetzt werden. Daher sollte bei der Interpretation der in dieser Studie auf zellulärer Ebene in vitro identifizierten regulatorischen Beziehung zwischen miR-3619-5p und MTA3 im Hinblick auf klinische Anwendungen Vorsicht walten. Zukünftige Studien müssen menschliche Pankreas-β-Zellmodelle oder humane primäre Inseln nutzen, um die Art-Konservierung dieses Signalwegs weiter zu validieren.
miR-3619-5p ist im Serum und in den pankreatischen β-Zellen von Patienten mit T2DM herunterreguliert; durch die gezielte Beeinflussung von MTA3 kann miR-3619-5p die hyperglykämieinduzierte Dysfunktion pankreatischer β-Zellen lindern, die Proliferation pankreatischer β-Zellen fördern, die Apoptose hemmen und die Insulinsekretion verbessern. Diese Studie legt nahe, dass miR-3619-5p zur Risikostratifizierung bei Diabetes beitragen könnte und dass die miR-3619-5p/MTA3-Achse ein potenzielles Ziel für den Schutz der Inselzellen darstellt. In Zukunft werden wir eine umfangreichere Kohortenstudie durchführen, um den klinischen Nutzen zu validieren, und funktionelle Untersuchungen in vivo mithilfe von Tiermodellen des Diabetes durchführen; gleichzeitig werden wir die Signalwege downstream von MTA3, die Veränderungen der Inselzellfunktion vermitteln, detailliert analysieren und das translationale Potenzial dieses Targets für die Therapie des Inselzellenschutzes weiter bewerten.
Offenlegungen
Die Autoren haben keine relevanten finanziellen oder nichtfinanziellen Interessen offenzulegen.
Danksagungen
Diese Studie wurde unterstützt durch Präventionsstrategien für Patienten mit Diabetes und Harnwegsinfektionen (Nr. MSZ2025119).
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Annexin V-FITC/PI-Apoptose-Nachweiskit | Roche, Switzerland | 11684795910 | Färbung mit Annexin V-FITC (10 µL) und PI (5 µL); 15-minütige Inkubation im Dunkeln |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Dojindo, Japan | CK04 | Farbmessverfahren zur Bestimmung der Zellviabilität; 10 µL pro Vertiefung, 2-stündige Inkubation, Messung der Extinktion bei 450 nm |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | G7021 | Zugabe zum Kulturmedium bis 25 mM zur Erzeugung eines hochglukoseinduzierten Zellschädigungsmodells |
| Dual-Luciferase-Reporter-Assay-System | Promega, USA | E1910 | Nacheinander erfolgende Messung der Aktivitäten von Firefly- und Renilla-Luciferase |
| Fötales Rinderserum (FBS) | Gibco, USA | 10437028 | Zusatz in endgültiger Konzentration von 10 % |
| Durchflusszytometer | Beckman Coulter, USA | CytoFLEX | Durchflusszytometrische Analyse zur Berechnung der Apoptoserate |
| GAPDH-Antikörper | Abcam, UK | ab181602 | Western Blot |
| GAPDH-Primer | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | Hauskeeping-Gen zur mRNA-Normalisierung |
| Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG H&L (HRP) | Abcam, UK | ab6721 | Western Blot |
| HEK293T-Zelllinie | ATCC, USA | CRL-3216 | Menschliche embryonale Nierenzellen; hohe Transfektionseffizienz für Luciferase-Assays |
| INS-1-Zelllinie | Sunncell, China | SNL-332 | Ratten-Insulinom-Zelllinie; Kultivierung in RPMI 1640 mit 10 % FBS und 1 % Penicillin-Streptomycin |
| LightCycler 480 II Echtzeit-PCR-System | Roche, Switzerland | 5015278001 | Echtzeit-PCR-Amplifikation; Format mit 96- oder 384-Loch-Platten |
| Lipofectamine 3000 | Invitrogen, USA | L3000001 | Lipidbasiertes Transfektionsreagenz |
| Mikroplattenreader | BioTek, Agilent | Synergy H1 | Extinktionsmessung; Probenkonzentrationen aus Standardkurven interpoliert |
| miR-3619-5p-Inhibitoren | RiboBio, China | miR20017999-1-5 | Chemisch synthetisierte Einzelstrang-RNA zur Hemmung der miR-3619-5p-Funktion |
| miR-3619-5p-Mimics | RiboBio, China | miR10017999-1-5 | Chemisch synthetisierte Doppelstrang-RNA zur Überexpression von miR-3619-5p |
| miR-3619-5p-Primer | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | Spezifische Primer zum Nachweis von miR-3619-5p |
| miR-NC (miRNA-Blankokontrolle) | RiboBio, China | miR2N0000001-1-5 | Nicht-zielgerichtete negative Kontrolle für miRNA-Mimic-/Inhibitor-Experimente |
| miRNeasy Mini Kit | Qiagen, Germany | 217004 | Extraktion der Gesamt-RNA aus Zellproben |
| miScript II RT Kit | Qiagen, Germany | 218160 | Reverse Transkription für miRNA; verwendet Poly(A)-Anhängung und Oligo-dT-Priming |
| miScript SYBR Green PCR Kit | Qiagen, Germany | 218073 | SYBR Green-basierter qPCR für den Nachweis von miRNA |
| MTA3-Antikörper | Invitrogen, USA | PA5-100022 | Western Blot |
| MTA3-Primer | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | Spezifische Primer zum Nachweis von MTA3-mRNA |
| NanoDrop 2000-Spektrophotometer | Thermo Fisher Scientific, USA | ND-2000 | Bestimmung der RNA-Konzentration und -Reinheit |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco, USA | 15140122 | Antibiotikum-Lösung mit 1 % zur Verhinderung bakterieller Kontamination |
| pmirGLO Dual-Luciferase miRNA-Ziel-Expressionsvektor | Promega, USA | E1330 | Dual-Luciferase-Reporter-Vektor zur Validierung von miRNA-Zielen; enthält Firefly- und Renilla-Luciferase-Gene |
| PrimeScript RT Reagenzienkit mit gDNA-Eraser | TaKaRa, Japan | RR047A | Reverse Transkription mit Schritt zur Eliminierung genomischer DNA |
| Ratten-Insulin-ELISA-Kit | Invitrogen, USA | ERINS | Quantitativer Nachweis von von INS-1-Zellen ins Kulturmedium abgegebenem Insulin |
| RPMI 1640-Medium | Gibco, USA | 11875093 | Grundlegendes Kulturmedium; ergänzt mit 10 % FBS und 1 % Penicillin-Streptomycin |
| si-MTA3 | RiboBio, China | siB170209084646-1-5 | Kleiner interferierender RNA-Strang, der MTA3 gezielt zur Gen-Knockdown-Induktion abzielt |
| si-NC (Blankokontrolle für siRNA) | RiboBio, China | siB06525141922-1-5 | Nicht-zielgerichtete siRNA-Kontrolle |
| SYBR Green Master PCR Mix | TaKaRa, Japan | RR820A | SYBR Green-basierte qPCR-Amplifikation |
| TRIzol-Reagenz | Invitrogen, USA | 15596026 | Extraktion der Gesamt-RNA aus Serumproben |
| U6-Primer | Sangon Biotech, China | Custom synthesis | Endogene Referenz zur miRNA-Normalisierung |
Referenzen
- Wang L, et al. Associated factors and principal pathophysiological mechanisms of type 2 diabetes mellitus. Front Endocrinol (Lausanne). 2025;16:1499565.
- Wan Z, et al. The role of systemic inflammation in the association between serum 25-hydroxyvitamin D and type 2 diabetes mellitus. Clin Nutr. 2021;40(6):3661–7.
- Okamoto A, et al. Efficacy and safety of semaglutide in glycemic control, body weight management, lipid profiles and other biomarkers among obese type 2 diabetes patients initiated or switched to semaglutide from other GLP-1 receptor agonists. J Diabetes Metab Disord. 2021;20(2):2121–8.
- Aguayo-Mazzucato C, et al. β Cell Aging Markers Have Heterogeneous Distribution and Are Induced by Insulin Resistance. Cell Metab. 2017;25(4):898–910.e5.
- Goshrani A, Lin R, O'Neal D, Ekinci EI. Time in range-A new gold standard in type 2 diabetes research Diabetes Obes Metab. 2025;27(5):2342–62.
- Niu F, et al. β-cell neogenesis: A rising star to rescue diabetes mellitus. J Adv Res. 2024;62:71–89.
- Zhang Y, et al. THADA inhibition in mice protects against type 2 diabetes mellitus by improving pancreatic β-cell function and preserving β-cell mass. Nat Commun. 2023;14(1):1020.
- Ho PTB, Clark IM, Le LTT. MicroRNA-Based Diagnosis and Therapy. Int J Mol Sci. 2022;23(13).
- Poy MN, et al. A pancreatic islet-specific microRNA regulates insulin secretion. Nature. 2004;432(7014):226–30.
- Karagiannopoulos A, Cowan E, Eliasson L. miRNAs in the Beta Cell-Friends or Foes Endocrinology. 2023;164(5).
- Hu H, et al. Plasma miR-193b-3p Is Elevated in Type 2 Diabetes and Could Impair Glucose Metabolism. Front Endocrinol (Lausanne). 2022;13:814347.
- Benko J, et al. MiR-126 and miR-146a as markers of type 2 diabetes mellitus: a pilot study. Bratisl Lek Listy. 2023;124(7):527–33.
- Liu C, Gao Y, Wu J, Zou J. Exosomal miR-23a and miR-192, Potential Diagnostic Biomarkers for Type 2 Diabetes. Clin Lab. 2021;67(2).
- Liu Y, Li J, Wang S, Song H, Yu T. STAT4-mediated down-regulation of miR-3619-5p facilitates stomach adenocarcinoma by modulating TBC1D10B. Cancer Biol Ther. 2020;21(7):656–64.
- Ma J, et al. M2 macrophage facilitated angiogenesis in cutaneous squamous cell carcinoma via circ_TNFRSF21/miR-3619-5p/ROCK axis. Kaohsiung J Med Sci. 2022;38(8):761–71.
- Zhang M, Luo H, Hui L. MiR-3619-5p hampers proliferation and cisplatin resistance in cutaneous squamous-cell carcinoma via KPNA4. Biochem Biophys Res Commun. 2019;513(2):419–25.
- Ge L, Tan W, Li G, Gong N, Zhou L. Circ_0026134 promotes NSCLC progression by the miR-3619-5p/CHAF1B axis. Thorac Cancer. 2022;13(4):582–92.
- Sun Z, Li X, Shi Y, Yao Y. LncRNA PVT1 facilitates the growth and metastasis of colorectal cancer by sponging with miR-3619-5p to regulate TRIM29 expression. Cancer Rep (Hoboken). 2024;7(6):e2085.
- Wu C, et al. Long Noncoding RNA Plasmacytoma Variant Translocation 1 Regulates Cisplatin Resistance via miR-3619-5p/TBL1XR1 Axis in Gastric Cancer. Cancer Biother Radiopharm. 2020;35(10):741–52.
- Tang Y, et al. Mechanisms of MTA3 in cancer and related diseases and its clinical applications. Front Oncol. 2025;15:1731799.
- Lau P, et al. Sphingosine kinase 1 promotes tumor immune evasion by regulating the MTA3-PD-L1 axis. Cell Mol Immunol. 2022;19(10):1153–67.
- Du L, et al. MTA3 Represses Cancer Stemness by Targeting the SOX2OT/SOX2 Axis. iScience. 2019;22:353–68.
- Liu Y, et al. Discovery of Jaspamycin from marine-derived natural product based on MTA3 to inhibit hepatocellular carcinoma progression. Sci Rep. 2024;14(1):25294.
- Li Q, et al. High glucose promotes hepatic fibrosis via miR‑32/MTA3‑mediated epithelial‑to‑mesenchymal transition. Mol Med Rep. 2019;19(4):3190–200.
- Pu M, Kong L, Li J, Su L, Chen Y. LncRNA NBR2 affects pancreatic β-cell function in type 2 diabetes mellitus by targeting miR-646. Diabetol Metab Syndr. 2025;17(1):454.
- Galicia-Garcia U, et al. Pathophysiology of Type 2 Diabetes Mellitus. Int J Mol Sci. 2020;21(17).
- Wang J, et al. Extracellular vesicles mediate the communication of adipose tissue with brain and promote cognitive impairment associated with insulin resistance. Cell Metab. 2022;34(9):1264–79.e8.
- Rosado JA, Diez-Bello R, Salido GM, Jardin I. Fine-tuning of microRNAs in Type 2 Diabetes Mellitus. Curr Med Chem. 2019;26(22):4102–18.
- Taheri M, Eghtedarian R, Ghafouri-Fard S, Omrani MD. Non-coding RNAs and type 2 diabetes mellitus. Arch Physiol Biochem. 2023;129(2):526–35.
- Song B, et al. LINC00882 Plays a Tumor-promoter Role in Colorectal Cancer by Targeting miR-3619-5p to Up-regulate CTNNB1. Arch Med Res. 2022;53(1):29–36.
- Costa NA, et al. Peritoneal dialysis influences microRNA expression and pro-inflammatory response: results from a cross-sectional study. J Bras Nefrol. 2026;48(1):e20240218.
- Chen J, et al. Identification of the LncRNA PRNCR1/miR-642a-5p/SSTR3 CeRNA network and its diagnostic value in type 2 diabetes mellitus. Diabetol Metab Syndr. 2025;18(1):39.
- Elizabeth MM, et al. Pancreatic β-Cells and Type 2 Diabetes Development. Curr Diabetes Rev. 2017;13(2):108–21.
- Kerper N, Ashe S, Hebrok M. Pancreatic β-Cell Development and Regeneration. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2022;14(5).
- Yang F, Zhao S, Zhang X, Ding S, Xu Y. RNF6 Targeted by miR-26a-5p Protects Pancreatic β-Cell Function Against Type 2 Diabetes. Diabetes Metab Syndr Obes. 2022;15:93–102.
- Zheng L, et al. miR-765 targeting PDX1 impairs pancreatic β-cell function to induce type 2 diabetes. Arch Physiol Biochem. 2023;129(6):1279–88.
- Liu F, et al. T2DM-elicited oxidative stress represses MTA3 expression in mouse Leydig cells. Reproduction. 2022;163(5):267–80.