Mehrere Video-Clips zeigen, Phasenkontrast und DIC-Mikroskopie wurden von einem anderen Video-Artikel entnommen, mit dem Titel <a href="details.stp?ID=197">Schichten Symbiose</a> . JoVE gnädig erkennt dieses Beitrags durch die Leadbetter Labor hergestellt.

Der vollständige Text Protokoll für diesen experimentellen Ansatz ist in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Current Protocols in Cell Biology.</a>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

phasenkontrast und differential interferenz kontrast (dic) mikroskopie

Die Phasenkontrast-Mikroskopie wird häufig verwendet, um den Kontrast für eine transparente, nicht lichtabsorbierenden, biologischen Proben zu produzieren. Die Technik wurde von Zernike, im Jahre 1942, der den Nobelpreis für seine Leistung erhielt entdeckt. DIC-Mikroskopie, in den späten 1960er Jahren eingeführt wurde, wurde in der biomedizinischen Forschung beliebt, weil es Kanten der Probe strukturelle Details Highlights, bietet hochauflösende optische Schnitte von dicken Proben einschließlich Gewebezellen, Eier und Embryonen und nicht aus der Phase-Halos typischen leiden der Phasen-Kontrast-Bildern. Dieses Protokoll zeigt die Grundlagen und praktische Anwendungen dieser Mikroskopie-Techniken.

Dieses Protokoll zeigt die Grundlagen und praktische Anwendungen der Phase und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

Phasenkontrast und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Die Lichtmikroskopie ist eines der, wenn nicht sogar das leistungsfähigste Werkzeug auf dem Gebiet der biomedizinischen Forschung. Abhängig von Ihrer Anwendung sind unterschiedliche Beleuchtungsarten für die Probenbetrachtung wünschenswert. In diesem Video werden zwei optische Modi der Durchlichtbeleuchtung demonstriert: Phasenkontrast und DIC oder differentielle Interferenzkontrastmikroskopie.Hallo, ich bin Victoria San Frolic von der Kerneinrichtung für optische Bildgebung am Health Science Center der University of Texas in San Antonio. Heute zeige ich Ihnen, wie Sie Proben mit Hilfe des Phasenkontrasts und der differentiellen Interferenzkontrastmikroskopie richtig betrachten. Also lasst uns loslegen.Die Standard-Hellfeldmikroskopie ist nicht geeignet, um transparente und farblose Proben zu betrachten. Die Phasenkontrastmikroskopie wird häufig verwendet, um Kontrastmittel für transparente, nicht lichtabsorbierende biologische Proben zu erzeugen. Die Technik wurde 1942 von Zürich entdeckt, der für seine Leistung den Nobelpreis erhielt.Das Phasenkontrastmikroskop ist ein Hellfeld-Lichtmikroskop mit speziellen Phasenkontrastobjektiven, die eine Phasenplatte oder einen Phasenring und einen Kondensorring anstelle einer Membran enthalten. Der Ringraum befindet sich in der Regel im Kondensatorrevolver, und die Größe des Ringraums muss für verschiedene Ziele gewählt werden. Wählen Sie nach dem Einrichten der Kohler-Beleuchtung das richtige Phasenobjektiv aus und drehen Sie dann den entsprechenden Phasenring in Position im Kondensor.Sobald der Phasenring und der Kondensatorring richtig ausgerichtet sind, so dass sie konzentrisch und überlappend sind, können wir die Probe betrachten und den Fokus richtig einstellen. Lassen Sie uns also zeigen, wie der Phasenkontrast durch das Mikroskop aussieht. Hier ist ein Blick auf eine Scheibe Rattenleber.Unter Phasenkontrast. Diese Methode verbessert das Erscheinungsbild von biologischem Material, indem der Kontrast von verschiedenen Grautönen zu Schwarz- und Weißtönen verändert wird. Sie werden jedoch feststellen, dass die Exemplare von einem Halo umgeben sind, der die feine Struktur verdeckt.Dieser Halo ist ein Artefakt der Beleuchtung durch den Phasenring. Wenn wir auf Hellfeld umschalten, werden Sie feststellen, dass dieses Exemplar sehr schwer zu betrachten ist. Wenn wir zurück zum Phasenkontrast wechseln, können wir deutlich die Struktur und Form der Zellen in der Rattenleber erkennen Gewebe Seit seiner Einführung in den späten 1960er Jahren.Die differentielle Interferenzkontrast- oder DIC-Mikroskopie ist in der biomedizinischen Forschung beliebt, da sie hochauflösende Bilder von feinen Strukturen erzeugt, indem sie die kontrastierenden Grenzflächen verstärkt, das erzeugte Bild ist von einem sehr dünnen optischen Abschnitt. Die Fähigkeit des DIC, optische Schnitte zu erzeugen, hat es zu einem nützlichen Modus der Durchlichtbeleuchtung für die konfokale Mikroskopie eines Unternehmens gemacht. Das DIC-Mikroskop ist ein Hellfeld-Lichtmikroskop mit den folgenden Elementen, einem Polarisator zwischen der Lichtquelle und dem Kondensor.Ein DIC-Strahlteilerprisma in der Kondensatortorte, ein DIC-Strahlkombinationsprisma direkt hinter dem Objektiv und ein Analysator im Unendlichkeitsraum vor den beiden Mischungen. Um die beste Leistung der DIC-Optik zu erzielen, ist es wichtig, das Lichtmikroskop zuerst auf die Kohler-Beleuchtung auszurichten und dann die DIC-Elemente im Strahlengang zu platzieren. Das Licht von der Quelle durchläuft einen Polarisator und wird dann durch das erste Prisma gespalten.Diese gepaarten Balken bewegen sich nahe beieinander. Wenn beide Paare in der Probe durch das gleiche Material gegangen sind, dann kollidieren sie nicht miteinander, wenn sie durch das zweite Prisma rekombiniert werden, und erscheinen daher grau. An einer Kante einer Struktur verläuft jedoch ein Balken der Birne durch ein anderes Material als sein Partner und wird verändert.Wenn diese Strahlen durch das zweite Prisma rekombiniert werden, interferieren sie entweder konstruktiv und erzeugen einen hellen Fleck oder destruktiv einen dunklen Fleck. Hier ist ein Blick auf Kieselalgen unter DIC-Kontrast. Sie werden feststellen, dass feine Details der Kieselalgenstruktur gut sichtbar sind.Wird jedoch die DIC-Optik entfernt, verschwinden diese Details. Der Kontrast über das Exemplar ist auf der einen Seite hell und auf der anderen dunkler. Das erweckt den Eindruck von Topographie, ist aber in Wirklichkeit eine Illusion.Die Richtung des Schattenwurfeffekts kann umgekehrt werden, indem der Polarisator um einen Kreuzungspunkt auf den entgegengesetzten Kontrast gedreht wird. Wir haben gerade die optischen Modi Phasenkontrast und DIC besprochen. Zur Erinnerung: Die Eliminierung des Phasenkontrasts verbessert die kontrastierenden Proben von Schwarz zu Weiß und ist nützlich für die Betrachtung von Exemplaren, die sowohl farblos als auch transparent sind.DIC erzeugt auch Kontrast in der Probe. Dies geschieht durch die Erstellung eines hochauflösenden Bildes eines dünnen optischen Schnitts. Das war's also.Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihrer Mikroskopie.

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Biology

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

University of Texas Health Science Center at San Antonio (UTHSCSA).  Dieses Protokoll zeigt die Grundlagen und praktische Anwendungen der Phase und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

Phasenkontrast und Differential Interferenz Kontrast (DIC) Mikroskopie

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