Die mikroskopische Beobachtung-Drug-Anfälligkeit (MODS) Test ist ein low-cost, low-tech Werkzeug für High-Performance-Nachweis von Tuberkulose (TB) und multiresistenter Tuberkulose (MDRTB). Dieses Video beschreibt die MODS flüssigen Medien Kultur-Methode.
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Methodenartikel
Der MODS Verfahren zur Diagnose von Tuberkulose und multiresistente Tuberkulose
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Patienten mit aktiver Lungentuberkulose (TB) infiziert 10-15 anderen Personen pro Jahr, was die Diagnose einer aktiven TB unerlässlich, sowohl Heilung des Patienten und die Verhinderung neuer Infektionen. Darüber hinaus bedeutet die Entstehung von multiresistenten Tuberkulose (MDRTB), die Detektion von Resistenzen ist notwendig für die Ausbreitung von resistenten Stämmen. Die mikroskopische Beobachtung-Drug-Anfälligkeit (MODS) Test ist ein low-cost, low-tech Werkzeug für High-Performance-Nachweis von TB und MDRTB. Der MODS Test basiert auf drei Prinzipien: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) wächst schneller in flüssigen Medien als auf festen Medien 2) mikroskopische MTB Wachstum kann früher in flüssigen Medien als das Warten auf das makroskopische Aussehen der Kolonien auf festen Medien erkannt werden, und dass das Wachstum ist charakteristisch für MTB, so dass sie von atypischen Mykobakterien oder Pilz-oder Bakterienbefall 3) unterschieden werden die Medikamente Isoniazid und Rifampicin in den MODS Test kann aufgenommen werden, um für den gleichzeitigen direkten Nachweis von MDRTB ermöglichen, so dass kein Bedarf für Subkultur zu erfüllen eine indirekte Sensibilitätstest testen. Konkurrierende aktuelle Diagnostik zeichnen sich durch geringe Empfindlichkeit mit Sputum, lange Wartezeiten bis zur Diagnose mit festen Medien Kultur, prohibitiv hohen Kosten mit vorhandenen flüssigen Medien Kultur Methoden und die Notwendigkeit, Subkultur für indirekte Drogen Empfindlichkeitsprüfung zu MDRTB erkennen Sie behindert. Im Gegensatz dazu hat die nicht-proprietäre MODS-Methode eine hohe Empfindlichkeit für TB und MDRTB, ist eine relativ schnelle Kultur-Methode ermöglicht die gleichzeitige Medikament Empfindlichkeitsprüfung für MDRTB, und ist zugänglich mit beschränkten Ressourcen knapp 3 $ für den Test für TB und MDRTB.
Protokoll
- Stammlösungen
- Phosphatpuffer Lager
- Mix 950ml Natrium dibasischen Lösung (9.47g von Natriumdihydrogenphosphat in 1000ml destilliertem Wasser gelöst) mit 950ml Kaliumphosphat einbasischen Lösung (9.07g Kaliumphosphat einbasischen in 1000ml destilliertem Wasser gelöst) und rühren; zurückzuhalten 50ml jeder Lösung anpassen pH ggf.
- Der pH-Wert auf 6,8 ± 0,2: add Natriumdihydrogenphosphat-Lösung auf pH-Wert anzuheben, fügen Kaliumphosphat einbasischen Lösung für niedrigeren pH-
- Autoklaven bei 121-124 ° C für 15 Minuten zu sterilisieren
- Platte eine 100 &mgr; Aliquot der Phosphatpufferlösung auf Nähragar Medium i....
- Phosphatpuffer Lager
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Diskussion
Der MODS Test ist mit beschränkten Ressourcen angestrebt. Zum ersten Mal bringt MODS die Fähigkeit zur schnellen flüssigen Kultur Erkennung von Tuberkulose und multiresistenten Tuberkulose mit beschränkten Ressourcen knapp 3 $ pro Test. MODS ist ein nicht-proprietäres, iterative Methodik und die MODS-Community ist immer in Verbesserungen, die andere Labors haben es geschafft, interessiert.
Ein immer wiederkehrendes Problem ist die Biosicherheit von flüssigen Medien Kultur der Tuberkulose, weil Flüssigkeiten verschüttet oder vernebel.......
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Danksagungen
Wir möchten Sean Fitzwater und Carmen Giannina Luna Colombo für die Tuberkulose-Wachstum Zeitraffer-Video-Segment zu bestätigen. Wir danken Marty Roper für ihre gründliche und sehr gutes Feedback während der Bearbeitung und Co-Autor der User Guide, von der die aktuelle Protokoll übernommen meist wörtlich wurde. Die Produktion dieses Video wurde von den NIH / Fogarty International Center finanziert http://www.fic.nih.gov/ David AJ Moore trug als Wellcome Trust Clinical Research Fellow in Tropenmedizin und Reader in Infectious Diseases am Imperial College London (Fellowship Auszeichnung Zahl 078067/Z/05). Mark F. Brady beigetragen als NIH / Fogarty Int....
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Kühlschrank/Gefrierschrank | Gerät | zur Lagerung von vorbereiteter Brühe und Antibiotikastämmen | ||
| Vortex | Gerät | zur Unterstützung der Sputum-Entkontaminierung | ||
| Zentrifuge | Gerät | zur Sputum-Konzentrierung; muss 3000 g erreichen können; d–s muss nicht gekühlt sein, muss jedoch biosicher sein (Behälter können verschlossen werden) | ||
| Brutschrank (37 Grad C) | Gerät | für die Kultur; muss nicht CO2-angereichert sein | ||
| Invertiertes Lichtmikroskop | Mikroskop | zum Auslesen der MODS-Platten | ||
| Autoklav | Gerät | zur Sterilisation von Medien, PBS und verwendeten Platten | ||
| Waage | Gerät | zum Wiegen von Isoniazid, Rifampicin und NALC | ||
| Middlebrook 7H9 Brühe (Difco) | Reagenz | Fisher Scientific | DF0713-17-9 | 500 g/Flasche; Kulturmedien-Grundlage |
| Casitone (pankreatischer Casein-Digest) | Reagenz | Fisher Scientific | DF0259‐17‐9 | 500 g/Flasche; Kulturmedien-Grundlage |
| Glycerin (glycerin) lyophilisiert | Reagenz | Sigma-Aldrich | G‐33‐500 | 500 ml/Flasche; Kulturmedien-Grundlage |
| PANTA (antibiotische Mischung lyophilisiert BD) | Reagenz | Fisher Scientific | B4345114 | 6 Flaschen/Packung; antibiotische Medienzusatzlösung |
| OADC (Middlebrook OADC Anreicherung BD) | Reagenz | Fisher Scientific | B11886 | 10 x 20 ml/Packung; nährstoffreiche Medienzusatzlösung |
| Dimethylsulfoxid (Hibri-Max) | Reagenz | Sigma-Aldrich | D-2650 | 100 ml/Flasche; zur Herstellung von Rifampicin-Stämmen |
| Antibiotikastämme: Isoniazid | Reagenz | Sigma-Aldrich | I-3377 | 50 g/Flasche; direkte Empfindlichkeitsprüfung |
| Antibiotikastämme: Rifampicin | Reagenz | Sigma-Aldrich | R-3501 | 1 g/Flasche; direkte Empfindlichkeitsprüfung |
| Natriumhydroxid (Pellets) | Reagenz | Sigma-Aldrich | 221465 | 500 g/Flasche; Sputum-Entkontaminierung |
| Natriumcitrat (Trinatriumsalz Dihydrat) | Reagenz | Sigma-Aldrich | S-4641 | 500 g/Flasche; Sputum-Entkontaminierung |
| N-Acetyl-L-cystein | Reagenz | Sigma-Aldrich | A-7250 | 50 g/Flasche; Sputum-Entkontaminierung |
| Monobasische Kaliumphosphat-Kristalle. KH2PO4 | Reagenz | Sigma-Aldrich | P0662 | 500 g/Flasche; Sputum-Entkontaminierung |
| Dibasische Natriumphosphate, wasserfrei. Na2HPO4 | Reagenz | Sigma-Aldrich | S0876 | 500 g/Flasche; Sputum-Entkontaminierung |
| Natriumhypochlorit | Reagenz | Haushaltsbleiche | zur Entsorgung kontaminierten Abfalls | |
| 15 ml Zentrifugenröhrchen (Polypropylen 15 ml Falcon 35‐2096) | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | 14‐959‐49B | 500 Stück/Karton; für Sputum-Entkontaminierung und -Konzentrierung |
| 24-Loch-Platten (Platten Gewebe 24 Löcher BD Falcon 35‐3047) | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | 08-772-1 | 50 Platten/Karton; für Kultur und Auslesen |
| verschließbare Polyethylenbeutel 6 x 6 “ (Ziplock) | Verbrauchsmaterial | für Bio-Sicherheit, um 24-Loch-Platten zu enthalten | ||
| Glasröhrchen mit Deckel (16 x 100 mm und 18 x 145 mm) | Verbrauchsmaterial | VWR international | 47729-583 | 500 Röhrchen/Karton; zur Lagerung von Aliquots der vorbereiteten Brühe |
| Schraubverschluss-Mikrozentrifugenröhrchen (1,5 ml) | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | 05‐669‐22 | 1000 Stück/Karton; zur Lagerung von Aliquots der Antibiotikastämme |
| 0,22μm-Filter (wässrige Lösungsmittel) Spritzenfilter Millex blau | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | SLGL 025 OS | 50 Einheiten/Karton; zum Filtern der Antibiotikastämme |
| 0,22μm-Filter (organische Lösungsmittel) Spritzenfilter Millex gelb | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | SLGV 033 RS | 50 Einheiten/Karton; zum Filtern der Antibiotikastämme |
| Einweg-Pasteurpipetten aus Borosilikatglas 9″ | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | 13‐678‐20C | 720 Stück/Karton; zum Mischen von PANTA mit Medienmischung |
| Aerosol-Barrieretipps 1000‐1300μl | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | 02‐707‐51 | 1000 Stück/Packung; zum Abgeben von Medien in die Platte |
| USA Scientific Tips One 1‐200μl gelbe Tipps | Verbrauchsmaterial | Fisher Scientific | 1111‐0006 | 1000 Tipps/Beutel; zum Verdünnen der Antibiotikastämme |
Referenzen
- Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
- Caviedes, L.
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Nachdrucke und Genehmigungen
