Machen Patch-Pipetten und Sharp Elektroden mit einem programmierbaren Puller

Summary

Dieses Video zeigt, wie eine programmierbare Abzieher verwenden, um Patch-Pipetten und scharfen Elektroden für die Elektrophysiologie zu machen. Das gleiche Verfahren kann verwendet werden, um eine Vielzahl von Glas-Tools, einschließlich Injektionsnadeln zu machen.

Abstract

Glas-Mikroelektroden (auch als Pipetten) haben ein Arbeitspferd der Elektrophysiologie seit Jahrzehnten. Heute sind solche Pipetten von Glaskapillaren erfolgt über eine programmierbare Abzieher. Solche Instrumente Wärme der Kapillare entweder mit einem Metallfaden oder einem Laser und zeichnen sich aus dem Glas mit der Schwerkraft, einen Motor oder beides. Pipetten für Patch-Clamp-Aufzeichnung werden unter Verwendung nur Hitze und Schwerkraft, während scharfe Elektroden für die intrazelluläre Aufnahme verwenden eine Kombination von Wärme, Schwerkraft und einem Motor. Das Verfahren zur intrazellulären Aufnahme Pipetten machen, ist ähnlich, die zur Injektionsnadeln für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich cRNA Injektion in Xenopus Oozyten zu machen. Im Allgemeinen, Kapillar-Glas <1,2 mm im Durchmesser wird verwendet, um Pipetten für Patch-Clamp-Aufnahme zu machen, während engeren Glas für die intrazelluläre Aufnahme (Außendurchmesser = 1,0 mm) verwendet wird. Für jedes Werkzeug ist der Abzieher programmiert etwas anders. Dieses Video zeigt, wie man beide Arten von Aufnahmen Pipetten mit vorher festgelegten puller Programme machen.

Protocol

Pulling Pipetten

Mit einer Mikroelektrode puller wie Sutter P-97 Flaming / Brown, ziehen eine Reihe von etwa 10-20 Pipetten.

1. Wählen Sie Ihre Kapillare aus Glas. Wir verwenden Borosilikat Kapillaren (Sutter BF150-110 bis 10 mm, 1,5 mm Außendurchmesser, 1,1 mm Innendurchmesser, 10 cm lang). Bewahren Sie das Glas vorsichtig damit es sauber und staubfrei bleibt.
2. Entwerfen Sie ein Ziehen Programm. Wir verwenden einen 5-Schritte-Programm, mit absteigender Hitze und Geschwindigkeit bei jedem Schritt, und ein kleiner Zug auf den letzten Schritt. Sutter ist Pipette Kochbuch ist eine hervorragende Referenz für die Entwicklung ge....

Discussion

Das Protokoll dargestellt ist hier im täglichen Einsatz in der Elektrophysiologie Labor und wird auch zur Injektionsnadeln für Zellen und Tieren zu machen. Mit einer programmierbaren Abzieher, ist es leicht, Pipetten für eine Vielzahl von Anwendungen zu machen. Mit Aufmerksamkeit und Pflege, wird das Filament auf Ihren Abzieher für ein Jahr oder länger dauern. Viel Glück mit Ihrer Experimente.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mikropipetten-Abzieher	Instrument	Sutter Instrument Co.	P-97	oder ähnliches Instrument (z.B. Sutter P-87 oder P-2000)
Glaskapillaren	Reagenz	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Oder, ähnliches Kapillarglas. Um das Befüllen der Pipette zu erleichtern, verwenden Sie eine Kapillare mit einem Glasfilament.