Methodenartikel

Sammeln und Messen Nozizeptive und Entzündungsmediatoren in chirurgische Wunden

DOI:

10.3791/962

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29. Oktober 2008

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1Department of Anesthesiology, Stanford University School of Medicine

In diesem Artikel

Retraction Notice

This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice

Zusammenfassung

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Eine Technik zur Erfassung und Messung Operationswunde biochemischen Mediatoren zu bestimmten Zeitpunkten.

Zusammenfassung

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Die Ziele dieser Studie waren die Durchführbarkeit der Erhebung und Messung entzündlichen und nozizeptiven biochemischen Mediatoren an der Operationsstelle zu testen; die Beziehung zwischen Wunde und Serumspiegel zu bewerten; und zu Assoziationen zwischen Mediatorfreisetzung, Schmerzen und Schmerzmittel Verbrauch nach Kaiserschnitt bestimmen Lieferung. Zwanzig gesunde Frauen nach elektiven Kaiserschnitt mit Spinalanästhesie wurden eingeschlossen. Wundexsudat und Serum Mediatoren, Schmerz-Scores und Analgetika Konsum wurden nach 1, 6, 24 und 48 Stunden nach der Kaiserschnitt gemessen. In Wundexsudat, wurden 19 von 20 Mediatoren zuverlässig wie IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL erkannt -17, TNF, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 und MIP-1β, nerve growth factor (NGF), Prostaglandin E2 (PG-E2) und Substanz P. Wound PG-E2 und verschiedene Zytokine erreichte Anfang , wohingegen NGF zeigten eine verzögerte Freisetzung. Es gab keine Korrelation zwischen der Konzentration-Zeit-Profil von Wund-und Serum-Zytokine. Diese Studie zeigt die Machbarkeit der Erfassung und Messung von nozizeptiven und Entzündungsmediatoren in Operationswunden zu bestimmten Zeitpunkten. Das Fehlen von signifikanten Korrelationen zwischen Wunde und Serumspiegel betont die Bedeutung der Bestimmung ortsspezifische Freisetzung, wenn lokalisierten Erkrankungen untersucht werden sollen.

Protokoll

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Nozizeptiven und entzündlichen biochemischen Vermittler Sammlung

  1. Die On-Q ® PainBuster ® Pain Relief-System ist in die subkutane Schicht durch das OP-Team kurz vor dem Wundverschluss eingefügt. Das System liefert kontinuierlich physiologische Kochsalzlösung (oder örtliche Betäubung) subkutan in die Wunde mit einer Rate von 2 ml / h.
  2. Ein Drei-Wege-Hahn ist in dieses System integriert, um eine Aspiration von Wundexsudat zu bestimmten Zeitpunkten zu ermöglichen.
  3. Zu den Zeitpunkten durch das Protokoll (z. B. 1, 6, 24 und 48 Stunden nach Kaiserschnitt) angegeben, wird 1 ml Wundexsudat in eine Pfanne aus Polyethylen mit 30 ul Proteinase-Inhibitor zurückgezogen.
  4. Zur gleichen Zeitintervallen von 10 ml Blut in eine grüne Spitze Blutentnahmeröhrchen mit Lithium-Heparin gesammelt. 300 ul Proteinase-Inhibitor wird dann an den Blutproben aufgenommen.
  5. Innerhalb von 1 Stunde nach der Entnahme werden die Proben auf Eis gelegt und zentrifugiert bei 3000 rpm für 10 min.
  6. Die Serum-und Wunde supranate wird entfernt und in einem Standard-Mikrozentrifugenröhrchen und bei -20 ° C.

Assay-Analyse

  1. Nachdem alle Proben gesammelt werden, werden sie aufgetaut und analysiert gleichzeitig.
  2. Zytokine sind dann unter Verwendung a17-Multiplex-Bead-Immunoassay Platte. Multiplex Immuno-Assay-Technik ermöglicht Testen von bis zu 100 Analyten in Körperflüssigkeiten Proben so klein im Volumen von 50 ul und Ergebnisse vergleichbar mit denen bei ELISA erhalten. Diese Platte ist in der Lage Interleukin 1ß (IL-1ß), Interleukin 2 (IL-2), Interleukin 4 (IL-4), Interleukin 5 (IL-5), Interleukin 6 (IL-6), Interleukin 7 (IL -7), Interleukin 8 (IL-8), Interleukin (IL-10), Interleukin 12 (IL-12), Interleukin 13 (IL-13), Interleukin 17 (IL-17), Tumor-Nekrose-Faktor α (TNF) , Interferon α (INFα), Granulozyten-Kolonie stimulierender Faktor (G-CSF), Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF), Monozyten chemotaktische Protein 1 (MCP-1) und Makrophagen inflammatorisches Protein 1 (MIP-1β).
  3. Nerve growth factor ist mit NGF Antikörper DY256, indem Sie es der 17-plex-Platte mit Hilfe der Bio-Plex Amin-Kupplung-Kit gemessen.
  4. Jede Messung wird in Duplikate gefertigt und nach Angaben des Herstellers. Standard-Kurven für jeden Analyten werden mit dem Verweis Analyten von den Herstellern angegebenen Konzentrationen von 0,20, 0,78, 3,13, 12,5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml plus eine Null-Standard (normale Salzlösung nur) generiert. Standard-Kurven sind in jedem Durchlauf-und Probe-Konzentrationen wurden mit Bio-Plex Manager-Software berechnet.
  5. Prostaglandin E2 und Substanz P werden mit einem hoch Empfindlichkeit ELISA Kits Jeder Test in zweifacher Ausfertigung nach Angaben des Herstellers durchgeführt.

    Abbildung 1
    Abbildung 1

    Abbildung 1: Exsudat und Serumspiegel von verschiedenen pro-und anti-inflammatorischen Zytokinen (Interleukin 1ß (IL-1ß), Interleukin 2 (IL-2), Interleukin 4 (IL-4), Interleukin 5 (IL-5), Interleukin 6 (IL-6), Interleukin 7 (IL-7), Interleukin 8 (IL-8), Interleukin (IL-10), Interleukin 12 (IL-12), Interleukin 13 (IL-13), Interleukin 17 (IL -17), Tumor-Nekrose-Faktor α (TNF-α), Interferon γ (INFγ), Granulozyten-Kolonie stimulierender Faktor (G-CSF), Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF), Monozyten chemoattractant protein 1 (MCP-1 ) und Makrophagen inflammatorisches Protein 1 (MIP-1ß), nerve growth factor (NGF), Prostaglandin E2 (PG-E2) und Substanz P (SP)-Spiegel (pg / mL) zu Studienbeginn gemessen, 6 und 24 Stunden nach der Kaiserschnitt .

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Diskussion

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Die On-Q ® PainBuster ® Pain Relief-System sollte in der gesamten Einschnitt in subkutane Schicht eingefügt gerade vor dem Wundverschluss. Dies erleichtert die Aspiration über den Dreiwegehahn an der angegebenen Zeitintervallen. Die On-Q ®-System liefert kontinuierlich physiologische Kochsalzlösung subkutan in die Wunde mit einer Rate von 2 ml / h. Dies verhindert, dass der Katheter Blutgerinnung und verbessert die Zuverlässigkeit des Systems, um Exsudat Proben zu produzieren. Falls Aspiration von Exsudat ist schwer (ca. 5% der Fälle), in E...

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Offenlegungen

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

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Dr. Carvalho Arbeit wird von einem Gebäude Interdisziplinäre Karriere in der Frauenheilkunde Forschungsstipendium aus dem Office of Research auf Frauengesundheit und National Institute of Child Health and Human Development von den National Institutes of Health (5K12 HD043452) unterstützt. Dr. Angst erhielt liefert (die On-Q ® PainBuster ® Post-Op Pain Relief System) und die Finanzierung für die Durchführung der biochemischen Assays von I-Flow (Lake Forest, CA).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
On-Q® PainBuster® Post-Op-Schmerztherapiesystem I-Flow, Lake Forest, CA
Vollständiger Proteinaseinhibitor Roche Group
17-plex-Bead-Immunoassay-Bio-PlexTM-PlatteBio-Rad
Bio-Plex-Amin-Kupplungs-KitBio-Rad
NGF-Antikörper DY256R&D Systems
ELISA-Kits für Prostaglandin E2 und Substanz P Assay Designs

Referenzen

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  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

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Schlagwörter

Nozizeptive Mediatorenchirurgische WundkollektionAnalyse von WundexsudatZytokinmessungProstaglandin E2Substanz PNerve Growth FactorSchmerzscore BewertungAnalgetikaverbrauch