Visualisierung von Bodenmikroorganismen mit dem Contact Slide Assay und Mikroskopie

1. Folie Mikrokosmos Bodenbearbeitung

1. Gartenerde zu sammeln, von der Oberfläche (0-6 "Tiefe), und wiegen 150 g Boden in zwei separaten Tassen.
   1. Wenn Boden hohen Dichte an organischer Substanz hat, wiegt 100 g.
2. Beschriften Sie eine Tasse "Behandlung" und die anderen "Kontrolle."
3. Berechnen Sie die Menge an Wasser benötigt, um Feuchtigkeit-Inhalt zu verändern.
   1. Feuchtigkeit-Inhalt ist oft in der Nähe von Feldkapazität.
      
4. Maßnahme Menge von destilliertem Wasser mit einem Messzylinder.
5. Zwei Fläschchen Gießen Sie Menge von destilliertem Wasser.
6. Label ein Fläschchen "Behandlung" und die anderen "Kontrolle."
7. Ändern Sie das Wasser in der "Behandlung" Durchstechflasche mit genügend Glukose für eine endgültige Boden Glukosekonzentration von 1 %, nach einer trockenen Gewicht-Basis im Boden "Behandlung".
8. 200 mg NH₄Nr.₃ in der "Behandlung" Fläschchen und rühren um die Änderungen zu lösen. Das Nitrat dient als Stickstoffquelle von Nährstoffen für die Bodenmikroben.
9. Ändern Sie das "Control"-Fläschchen nicht.
10. In kleinen Aliquote von etwa 50 mg Mischen der Inhalt der Durchstechflasche "Behandlung" in die "Behandlung"-Tasse. Rühren Sie mit einem Spatel nach jeder Aliquote Zugabe.
11. In kleinen Aliquote Mischen der Inhalt der Durchstechflasche "Control" in der "Control"-Tasse. Rühren Sie mit einem Spatel nach jeder Aliquote Zugabe.
12. Vier saubere Objektträger beschriften: zwei "Behandlung" und zwei "Steuern" Folien.
13. Stecken Sie die beiden Folien "Behandlung" in der "Behandlung" Boden-Cup, und stecken Sie die beiden "Control"-Folien in der "Control" Boden-Cup. Lassen Sie 2 cm auf jeder Folie über der Bodenoberfläche zu projizieren, und achten Sie darauf, eine Lücke zwischen den beiden Folien zu verlassen.
14. Die Tassen mit Plastikfolie abdecken und mit einem Gummiband befestigen.
15. Punktion der Wrap mehrmals, damit die Luft, aber nach wie vor übermäßiger Verdunstung zu verhindern.
16. Nehmen Sie das Gewicht der beiden Tassen.
17. 7 Tage inkubieren Sie die Erde gefüllten Tassen bei Raumtemperatur in einem dafür vorgesehenen Bereich/Inkubator.

2. Folie Färbung und Mikroskopie

1. Nehmen Sie das Gewicht der beiden Tassen.
2. Berechnen Sie die Bodenfeuchtigkeit zum Zeitpunkt der Folie entfernen.
3. Entfernen Sie die beiden Folien aus jede Tasse indem Sie auf jeder Folie in eine Schräglage und zurückziehen, so dass die obere Fläche der Folie nicht gestört wird.
4. Identifizieren Sie und markieren Sie die Seite des Schlittens gebeizt und beobachtet werden.
5. Klopfen Sie leicht die Folien auf der Bank-Oberseite, große Schmutzpartikel zu entfernen.
6. Mit einem feuchten Papiertuch reinigen Sie die untere Fläche der Folien. Trocknen Sie die Folien bei Zimmertemperatur.
7. Schutzbrille trägt und hält jede Folie mit der Pinzette, tauchen die Folien in 40 % (V/V) Essigsäure für 1-3 min unter einem Abzug.
8. Waschen Sie die überschüssige Säure unter einem sanften Strahl des Wassers.
9. Bedecken Sie mit Hilfe einer Tropfflasche, die Oberfläche der Folien mit phenolischen Rose Bengal. Unterstützen Sie die Folie auf einem Färbung Gestell über einen Behälter, den überschüssige Fleck zu fangen. Seien Sie vorsichtig, nicht mit Kraft, die Mikroorganismen von der Oberfläche der Folien entfernen kann waschen.
10. Fleck, die Folien für 5-10 min. nicht lassen Sie die Folie werden, trocken. Mehr Fleck nach Bedarf hinzufügen.
11. Waschen Sie vorsichtig die Folien um überschüssige Fleck zu entfernen.
12. Lassen Sie die Folien bei Zimmertemperatur trocknen.
13. Mit der Öl-Immersion-Ziel, beobachten Sie die Folie mit einem Mikroskop (Abbildung 1).

Abbildung 1. Eine Folie unter dem Mikroskop.