Ultraschall-Extraktion von Lipid-Biomarkern aus Sediment

(1) die notwendigen Materialien zu sammeln.

1. Proben (Blätter, Schmutz, Pilzen, Rinde, Gewebe), in der Regel eingefroren, gefriergetrocknet, zerkleinert und homogenisiert vor Extraktion, extrahiert in Gruppen um die Effizienz zu maximieren. Drei Proben zu extrahieren.
2. Abhängig von der Größe der Stichprobe können mit einem Volumen von 4-60 mL Fläschchen verwendet werden. Für dieses Experiment Borosilikat Glasvials (40 mL) und Lösungsmittel sicher Kappen verwendet. Fläschchen, Borosilikatglas Pipetten und mit einem Gewicht von Dosen sollten verbrannt bei 550 ° C 6 h vor der Entfernung der möglichen organischen Verunreinigungen gewährleistet werden.
3. Dichlormethan und Methanol sind häufig in den meisten organischen Geochemie Laboratorien. Sie werden einzeln zur Lab-Tools und Glaswaren vor Gebrauch abspülen. Eine Mischung von Dichlormethan (DCM) in Methanol (MeOH; 9:1) ist in vielen Labors verwendet, um effizient Biomarker mit einer breiten Palette von Polaritäten zu extrahieren. Lösungsmittel sollte frei von organischen Verunreinigungen sein.
4. Verwenden Sie ein Wasserbad Beschallung bei Raumtemperatur. Eine Reihe von Sonikator Größen und Beschallung mit oder ohne Hitze sind wichtige wissenschaftliche Ausrüstung Handel erhältlich.
5. Vial-Racks, die wasserdicht sein sollte, werden in Beschallung Bad platziert werden.
6. Lösungsmittel genehmigte chemische Haube.

2. Vorbereitung der Probe

1. Legen Sie ein mit einem Gewicht von Zinn auf den Labormaßstab und dann Tara verbrannt.
2. Spülen Sie die Labor-Spachtel mit Lösungsmittel, dann verwenden Sie, um eine entsprechende Masse der Probe in das mit einem Gewicht von Zinn zu übertragen, und zeichnen Sie die Masse.
   1. Die Masse der Probe variiert je nach seinen Gehalt an organischer Substanz. Schlanke Material relativ organischer Substanz (marine Schlamm) erfordern mehrere Gramm, während organische Substanz Reiches Material (Blattgewebe) viel weniger erfordern.
3. Übertragen Sie das gesamte Material in der Waage Dose in einer verbrannt, vorher gewogen und etikettiert Fläschchen. Verschließen Sie das Fläschchen, dann verwerfen Sie mit einem Gewicht von Zinn zu.
4. Führen Sie Schritte 2.1-2.3 für jede Probe extrahiert werden.

3. Gewinnung

1. Mit einem Pre-verbrannt-Pipette und Birne, ~ 20 mL der DCM:MeOH (9:1) Mischung in jedes Fläschchen zu übertragen (Fläschchen sollte etwa halb voll sein). Rekapitulieren Sie Fläschchen, bevor ich auf nächste Probe, so dass die flüchtige Lösungsmittel nicht verdunsten.
   1. Die Volatilitäten der DCM und MeOH sind unterschiedlich. Verdunstung der Lösungsmittel Extraktion durch entdeckelte Probenfläschchen hat die Fähigkeit, seine Polarität, und somit die Extraktion zu ändern.
2. Legen Sie die Probengefäße in einem wasserdichten Vial Rack.
3. Überprüfen Sie, dass das Niveau des Wassers in der Beschallung Badewanne nur tief genug, um die Probengefäße bis an die Spitze des Lösungsmittels Extraktion zu versenken. Zuviel Wasser kann dazu führen, dass die Fläschchen zu schweben; zu wenig Wasser reagiert die Proben aus wird richtig aufgeregt.
4. Legen Sie das Fläschchen-Rack mit den Proben in es direkt in die Anwendung von Ultraschall-Bad.
5. Beschallen Sie für 30 min bei Raumtemperatur.
6. Entfernen Sie Probenrack aus Sonikator. Wenn Sedimente zu extrahieren, lassen Sie es für 30 min erlauben absetzen auftreten. Wenn eine andere Gruppe von Proben zu extrahieren, geben Sie Sonikator zu diesem Zeitpunkt.
7. Entfernen Sie die DCM:MeOH Mischung aus der Extraktion-Durchstechflasche mit einem Pre-verbrannt-Pipette und Birne, und Einfügen in ein anderes vorab gewogen, Pre-verbrannt, und mit der Bezeichnung 40-mL-Fläschchen.
8. Wiederholen Sie die 3.1-3.7 3 X für alle Proben.
9. Lassen Sie entnommene Proben in ihre Flaschen, Kappen, und in der Kapuze, locker mit Folie bedeckt trocknen. Als "extrahierten Rückstand" beschriften und speichern.
10. Beschriften Sie die kombinierten Extrakte für jede Probe als 'TLE'.