Kultivierung und Auflisten von Bakterien aus Bodenproben

1. Vorbereitung des Bodens Verdünnungen

1. Um den Vorgang zu starten, 10 g Bodenprobe Abwiegen und 95 mL entionisiertem Wasser hinzufügen. Die Suspension gut schütteln, und als "A" zu kennzeichnen.
2. Bevor der Boden absetzt, 1 mL der Suspension mit einer sterilen Pipette entfernen und überträgt es auf 9 mL deionisiertes Wasser leer. Vortex gründlich, und Label als "B".
3. Diese Verdünnungsschritt dreimal wiederholen, jeweils mit 1 mL der vorherigen Suspension und eine 9-mL entionisiertem Wasser leer. Beschriften Sie diese nacheinander, wie Rohre, C, D und E. Dies führt in Verdünnungsreihen 10^-1 bis 10^-5 Gramm Erde pro mL

2. Ausbreitung Platten für Bakterienkultur

1. Um bakterielle Kolonien wachsen, nehmen Sie drei vorbereiteten Pepton-Hefe Agarplatten und Label als C, D und E. Vortex Proben C, D und E und Pipette 0,1 mL auf jeder Platte. Dies erhöht die Verdünnung Wert weiter, um den Faktor zehn (C = 10^-3, D = 10^-4, E = 10^-5).
2. Tauchen Sie als nächstes eine Glas-Streuer in Ethanol. Legen Sie die Streuer in eine Flamme für ein paar Sekunden zu entzünden und das Ethanol verbrennt. Dies wird den Streuer sterilisieren.
3. Den Streuer über die erste Platte zu halten, bis die Flamme erloschen ist. Öffnen Sie die Platte schnell, halten den Deckel in der Nähe. Tippen Sie auf den Streuer zu Agar entfernt das Inokulum (Inokulum = Zellen verwendet, um eine Kultur zu beginnen) abkühlen lassen und dann die Tropfen des Inokulums um die Oberfläche des Nährbodens zu verbreiten, bis Spuren der freien Flüssigkeit verschwinden. Die Platte Deckel.
4. Re Flamme den Streuer und wiederholen Sie den Vorgang mit der nächsten Platte schnell arbeiten um nicht verunreinigen das Agar mit zerstreute Organismen
5. 1 Woche inkubieren Sie die Bakterien-Platten bei Raumtemperatur. Stellen Sie sicher, dass die Platten während der Inkubation, Tropfen Feuchtigkeit durch Kondensation der Luftfeuchtigkeit auf die Agar-Oberfläche fallen zu verhindern invertiert werden.

3. machen Platten für Aktinomyceten verbreiten

1. Zum wachsen Aktinomyceten, nehmen drei vorbereiteten Glycerin-Kasein-Platten und beschriften Sie sie als B, C und D. unter Verwendung der zuvor gezeigten Techniken verbreiten Sie Platte 0,1 mL aus Suspensionen, B, C und D. Die niedrigeren Verdünnungen werden verwendet, da Actinomyceten in der Regel als 1/10^th von der Bakterienpopulation vorhanden sind (B = 10^-2, C = 10^-3, D = 10^-4).
2. Inkubieren Sie die gelangte Platten (invertiert) bei Raumtemperatur für 2 Wochen.

4. bakterielle und gelangte zählt

1. Prüfen Sie nach der Inkubation aller Bakterien Platten sorgfältig, und beachten Sie die Unterschiede in Form und Koloniegröße. Wenn auf Agar gewachsen, produzieren Bakterien schleimige Kolonien von farblos bis leuchtend Orange, gelb oder Pink. Im Gegensatz dazu gelangte Kolonien sind kalkig, feste, ledrige, und bricht unter dem Druck, wo andere Bakterienkolonien verschmiert werden. Dadurch können Kolonien durch Berührung mit einer sterilen Schleife unterschieden werden.
2. Zählen Sie und erfassen Sie die Anzahl der Bakterienkolonien, einschließlich alle Actinomyceten. Zählen Sie nur Platten mit 30-200 Kolonien pro Platte.

(5) Isolierung von Reinkulturen

1. Wählen Sie eine der Platten individuelle Bakterienkolonien. Weitere Kolonien können ausgewählt werden, ist besonders interessant im Boden. Verwenden Sie eine hohe Verdünnung Platte, da es dazu neigt, reine Kolonien haben, die auch getrennt sind. Wählen Sie nur die Kolonien, die aus den benachbarten Kolonien gut getrennt sind und Aussehen morphologisch voneinander.
2. Sterilisieren Sie die Schleife durch Eintauchen in Alkohol und brennen es. Schnelles Öffnen Sie der Petrischale von Interesse, und berühren Sie die Schleife zu einem bloßen Punkt im Agar es abkühlen. Entfernen Sie dann eine kleine Menge einer Kolonie von Interesse auf die Schleife.
3. Eine Hefe Pepton-Platte machen einen Streifen ein paar Zentimeter lange auf einer Seite. Sterilisieren Sie und wieder abkühlen lassen Sie, dann machen Sie eine Ader, die den ersten Streifen nur auf dem ersten Pass überquert. Wiederholen Sie diesen Vorgang noch zweimal auf die gleiche Weise. Diese Schlieren "Verdünnung" ergibt sich in den Zellen auf der Schleife von einander getrennt zu sein. Legen Sie die Platte in einen dunklen Bereich für zwei Wochen bei Raumtemperatur inkubieren.